Extracto
Las galectinas son proteínas que se unen azúcares β-galactósido y proporcionar un nuevo tipo de potenciales biomarcadores y dianas terapéuticas en el cáncer. La galectina-1, -3 y -9 se han convertido en el foco de los diferentes grupos de investigación, pero su expresión y función en el cáncer de cuello uterino sigue siendo poco clara. El objetivo de este estudio fue determinar el fenotipo de la galectina-1, -3 y -9 células y la asociación con los parámetros clínico-patológica en el cáncer de cuello de útero expresar. expresión galectina se anotó en las células tumorales, el epitelio tumor infiltración de células inmunes y las células del estroma en el cáncer cervical escamoso (n = 160). Las correlaciones con los parámetros clínico-patológicas y la supervivencia fueron estudiados de acuerdo con las recomendaciones OBSERVACIÓN. Estamos, además, investigamos si las galectinas fueron expresados por las células tumorales, fibroblastos, macrófagos y células T. La galectina-1 y -9 se expresaron tanto por las células tumorales en el 11% de las muestras, mientras que el 84% expresó galectina-3. Fuerte galectina-1 de expresión por las células tumorales fue un predictor independiente de supervivencia de los pobres (razón de riesgo: 8,02, p = 0,001) y correlacionado con el aumento invasión tumoral (p = 0,032) y la recepción de la radioterapia postoperatoria (p = 0,020). de células tumorales galectina-3 expresión débil y positivo se correlacionó con el aumento y la disminución de la invasión tumoral, respectivamente (p = 0,012). la expresión de las células tumorales de la galectina-9 mostró una tendencia hacia una mejor supervivencia (p = 0,087). El tipo predominante inmune de las células que expresan galectina-1, -3 y -9 fueron CD163
+ macrófagos. La galectina-1 y -3 se expresaron por una población menor de células T. La galectina-1 se expresa principalmente por los fibroblastos en el estroma del tumor. Para concluir, mientras que la expresión de células tumorales de la galectina-9 parecía representar una respuesta beneficiosa, galectina-1 expresión podría ser utilizado como un marcador para un tratamiento más agresivo anti-cáncer
Visto:. Punt S, Thijssen VL , Vrolijk J, CD de Kroon, Gorter a, Jordanova ES (2015) La galectina-1, -3 y -9 expresión y la importancia clínica en el cáncer escamoso de cuello uterino. PLoS ONE 10 (6): e0129119. doi: 10.1371 /journal.pone.0129119
Editor Académico: Pierre Busson, Gustave Roussy, Francia |
Recibido: 6 Febrero, 2015; Aceptado: May 4, 2015; Publicado: 12 Junio 2015
Derechos de Autor © 2015 Punt et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del apoyo de sus archivos de información en papel y
Financiación:. el holandés Cancer Society (http://www.kwf.nl) SP apoyo financiero (subvención UL2010-4801) y el VLT (subvención VU2009-4358) . Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
El cáncer cervical es causado por una infección de alto riesgo del virus del papiloma humano (VPH) [1]. La tasa de mortalidad se ha reducido en un 80% en el 20
siglo XX, principalmente por la introducción del cribado para la prevención y detección temprana de cáncer de cuello uterino [2]. A pesar de este progreso, cáncer de cuello uterino sigue siendo la segunda causa de muerte por cáncer en las mujeres jóvenes de todo el mundo. por lo tanto se requiere más investigación para seleccionar biomarcadores pronósticos y dianas terapéuticas. Posibles nuevos objetivos son galectinas, proteínas que se unen glicanos que contienen beta-galactósido-a través de uno o más dominios de reconocimiento de carbohidratos (CRD) [3]. En los últimos años se ha hecho evidente que las galectinas desempeñan un papel importante en la progresión tumoral mediante la regulación de la homeostasis celular inmune [4], metástasis tumoral [5], y la angiogénesis del tumor [6].
Los tipos galectina más estudiados hasta ahora son la galectina-1, -3 y -9. La galectina-1 se compone de una CRD homodimerizing que homodimerizes y se expresa en la mayoría de los órganos y por los macrófagos, T y células B [4]. Galectina-1 aumenta el crecimiento celular y la motilidad y la une a las células a la matriz extracelular (ECM), así como a otras células [7]. En el microambiente tumoral, galectina-1 induce la angiogénesis [4,8] y puede facilitar la metástasis de las células tumorales de unión a células endoteliales. Funcionando como una débil ligando del receptor de células T, apoptosis es inducida en las células T activadas [4,7]. La galectina-3 es una galectina quimérico que contiene un CRD y un dominio de no CRD N-terminal. La galectina-3 se expresa por las células macrófagos, fibroblastos, células T activadas, eosinófilos, epiteliales y tumorales, induciendo la señalización anti-apoptótica [4]. La expresión se asocia con una regulación fenotipo y ECM adherencia diferenciada [9]. Al igual que la galectina-1, galectina-3 también se ha relacionado con el aumento de la angiogénesis [10] y la metástasis [11]. Extracelular galectina-3 se puede unir células T, neutrófilos y macrófagos [9]. En las células T, la galectina-3 de expresión se ha demostrado para promover la supervivencia cuando se expresa intracelularmente, pero para inducir la apoptosis cuando está presente extracelularmente [12]. La galectina-9 contiene dos CRDs conectadas por un péptido conector de longitud variable. La galectina-9 puede ser expresado por las células epiteliales así como las células inmunes incluyendo las células T y neutrófilos [13]. La proteína actúa como un quimioatrayente de eosinófilos, mientras que la expresión intracelular se ha informado de inducir apoptosis en células T activadas, potencialmente a través de T inmunoglobulina de células mucina-3 (TIM-3), lo que lleva a la inhibición de T helper 1 (Th1) y las células Th17 y la estimulación de las células T reguladoras (Tregs) [14,15]. La galectina-9 expresión también se ha informado en las células endoteliales, pero el papel de esta proteína en la angiogénesis parece ser limitada [16].
La participación de las galectinas en diferentes procesos de la progresión del tumor está soportado por informes que alteraron la galectina expresión tiene valor diagnóstico o pronóstico en diferentes tipos de cáncer, incluyendo ovario, próstata, mama, cabeza y cuello y cáncer de pulmón de células no pequeñas [17-26]. En pacientes con cáncer de cuello uterino escamosas que recibieron radioterapia, un estudio reciente informó que la expresión de galectina-1 por el tumor fue un predictor independiente de recidiva local y supervivencia de los pobres [27]. La expresión de galectina-1 en el estroma de cáncer de cuello uterino también se ha correlacionado con un mayor grado histopatológico [28] y de los ganglios linfáticos metástasis [29]. Información sobre la galectina-3 y la expresión de galectina-9 en el cáncer de cuello de útero es limitado. Lee et al describieron una asociación inversa entre la galectina-3 [30] y el grado del tumor, mientras que la galectina-9 expresión se ha demostrado que se correlaciona positivamente con el grado de diferenciación tumoral en el cáncer de cuello de útero escamosas [31].
Para obtener pueda comprenderse mejor el papel de las galectinas en el cáncer de cuello de útero, el objetivo de este estudio fue determinar si la expresión de galectina-1, -3 y -9 se asocia con la supervivencia en una cohorte escamosas de cuello uterino cáncer (n = 160). La expresión de los diferentes tipos de galectinas por las células tumorales y por el epitelio tumoral y la infiltración de células del estroma se anotó. También se investigó el cual las células del estroma asociadas con el cáncer (CAS) (fibroblastos, macrófagos y células T) expresó estas galectinas.
Materiales y Métodos
materiales de pacientes
fijado en formol , (FFPE) escamosas muestras de cáncer de cuello uterino incluidos en parafina obtenidos de todos los pacientes que se sometieron a tratamiento quirúrgico primario para el cáncer de cuello uterino entre 1985 y 2005, con suficiente material disponible para el análisis como se describe anteriormente [32], fueron recuperados de los archivos del Departamento de Patología , Leiden University Medical Center (n = 160). Ninguno de los pacientes había recibido tratamiento contra el cáncer preoperatorio. libre de enfermedad y supervivencia específica de la enfermedad se define como el período de tiempo en meses desde la fecha de la cirugía a la fecha de recaída y muerte por cáncer de cuello de útero, respectivamente. Los pacientes que murieron por otras causas fueron censurados en los análisis de supervivencia. Las características del paciente y del tumor se enumeran en la Tabla S1. Las muestras de pacientes fueron manejados de acuerdo con las directrices éticas médicas descritas en el Código de Conducta para el Uso Secundario apropiado de Tejidos Humanos de la Federación Holandesa de Sociedades Científicas Biomédicas. Los pacientes reciben información sobre el uso secundario de la muestra de tejido para el diagnóstico y pueden oponerse activamente al uso secundario. De acuerdo con las directrices, todo el material humano utilizado en este estudio se ha anónima. Debido a la forma anónima, la investigación retrospectiva no requiere la aprobación ética de la Junta de Revisión Institucional y el consentimiento individual no es necesario.
tinciones de inmunofluorescencia
tinción de inmunofluorescencia triple se llevó a cabo en 4 micras de espesor de las secciones FFPE todas las muestras. Después de la recuperación de antígenos usando tampón de Tris-EDTA (Tris 10 mM, EDTA 1 mM pH 9,0), policlonal de conejo anti-galectina-1 (1: 1000, ab25138, RRID: AB 2.136.615, mucho GR127498-2, Abcam, Cambridge, Reino Unido) , rata monoclonal anti-3 galectina-(1:50, clon M3 /38, RRID: AB 1134237, lote B160878, BioLegend, Londres, Reino Unido) y de cabra policlonal anti-galectina-9 (1: 200, AF2045, RRID: AB 2137232, lote KNI0112011, R & amp; D Systems, Abingdon, Reino Unido) diluidas en 1% w /v albúmina de suero bovino (BSA) en solución salina tamponada con fosfato (PBS) se incubaron a temperatura ambiente durante la noche. Alexa Fluor etiquetados burro anti-conejo-A647 (A31573, RRID: AB 10561706, lote 1069817), burro anti-rata-A488 (A21208, RRID: AB 10562718, lote 1081955) y burro anti-cabra-A546 (A11056, RRID: AB 10584485, lote 997810; todo policlonal, 1: 200, Invitrogen, Life Technologies, Carlsbad, EE.UU.) se incubaron a temperatura ambiente durante una hora. Los portaobjetos se montaron utilizando medio de montaje Mowiol [33].
tinciones de doble inmunofluorescencia se realizaron en tres muestras con medio situado por encima y tres muestras con debajo mediana de expresión del estroma de la galectina-1, -3 y -9. Rabbit anti-galectina-1 y de rata anti-galectina-3 se combinaron con IgG1 de ratón anti-CD163 (1: 400, clon 10d6, RRID: AB 563510, lote 6002913, Leica Microsystems, Newcastle, Reino Unido) y de IgG1 de ratón anti-CD3 (1:25, clon F7.2.38, Dako, Glostrup, Dinamarca), seguido de Alexa Fluor etiqueta de cabra anti-conejo-A488 (A11008, RRID: AB 10563748, lote 828814) o de cabra anti-rata-A488 (A11006, RRID: 10561520 AB, lote 421559) y de cabra anti-ratón IgG1-A546 (A21123, RRID: 10562376 AB, lote 872637) o de cabra anti-ratón IgG1-A647 (A21240, RRID: 10565021 AB, lote 1248996). Cabra anti-galectina-9 también se combinó con IgG1 de ratón anti-CD163 y anti-CD3 y seguido de burro anti-cabra-A488 (A11055, RRID: AB 10564074, lote 55308A) y de burro anti-IgG de ratón-A647 ( A31571, RRID: 10584497 AB, lote 1069838; todo policlonal, 1: 200, Invitrogen). Los portaobjetos se montaron utilizando medio de montaje Vectashield que contiene DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, EE.UU.). cuello uterino normal y el tejido vulva se utilizaron como control positivo. La omisión de uno o más de los anticuerpos primarios o sustituyéndolas por anticuerpos de la misma clase de isotipo con una especificidad desconocida se utilizaron como controles negativos.
El análisis microscópico
Imágenes de las galectinas de triple tinción fueron digitalizados con un Pannoramic Midi automatizado escáner de diapositivas y se analizó usando Pannoramic Visor (3DHISTECH, Budapest, Hungría). Se determinó un tiempo de exposición fijo por diapositiva para cada uno de los tres marcadores fluorescentes. El brillo y el contraste se ajustaron para cada diapositiva basado en células no tumorales con una intensidad de tinción conocidos. Al menos tres pero generalmente cuatro o cinco imágenes al azar se tomaron con un aumento de 200x, el muestreo de un área total del tumor de 1,1 a 1,9 mm
2 de cada cremallera, que comprende tanto el epitelio y el estroma tumoral. Expresión de las células tumorales se marcó sin conocimiento de los parámetros clínico-patológicas como se describe por Ruiter et al [34]. La intensidad se puntuó como ausente (0), débil (1), moderada (2) o intensa (3). intensidad de la tinción moderada e intensa se considera fuerte. El porcentaje de células positivas se puntuó como 0% (0), 1 a 10% (1), 11 a 25% (2), 26-50% (3), 51 a 75% (4) y 76 a 100% (5). Una tinción con una puntuación combinada superior a 2 se consideró positiva.
Dado que las células tumorales no sólo, sino también CAS células en el epitelio y el estroma tumoral expresa la galectina-1, -3 y -9, la expresión total dentro del tumor epitelio y estroma se analizó mediante el programa de software de análisis de imágenes de la casa Apila versión 2.1 (Dr. J. Vrolijk, Ing W. Sloos, Departamento de Biología celular Molecular, Leiden University Medical Center, Leiden, Holanda;. de software sin publicar). umbrales de tinción positiva se determinaron mediante la comparación de la imagen de umbral con la tinción original en Pannoramic Visor. áreas del estroma fueron marcados y califican por separado a partir del epitelio. Los vasos sanguíneos, autofluorescencia y áreas necróticas se retiraron manualmente del análisis. Se obtuvieron la superficie total y el número de píxeles positivos individuales, dobles y triples. Diez muestras al azar fueron anotados manualmente para el porcentaje de células positivas individuales, dobles y triples en el epitelio y el estroma tumoral, que se correspondía con los análisis que utilizan pilas
.
La distribución de células positivas simples y dobles en los dobles coloraciones se anotó en las categorías: & lt; 5%, 5-50%, & gt; 50% o prácticamente todas las células positivas en al menos cuatro áreas por portaobjetos utilizando un microscopio confocal de barrido láser LSM700 equipado con un ICV plan-Neofluar 25x /0,8 Imm Korr DIC objetivo M27 (Zeiss, Göttingen, Alemania). Las imágenes fueron adquiridas mediante un C-Apocromático 40x /1,20 W objetivo Korr (Zeiss).
El análisis estadístico
Los análisis estadísticos se realizaron con el programa SPSS versión 20.0 (IBM Corp., Armonk, EE.UU.). Las correlaciones (R) entre la expresión de galectina puntajes por tanto con el análisis Ruiter y pilas fueron probados mediante la prueba rho de correlación de Spearman. Basado en los diagramas de dispersión, correlaciones con R & gt; 0,45 se consideraron positivos y correlaciones con R & gt; 0,67 fuerte. Las correlaciones entre la expresión de galectina y las variables clínico-patológicas fueron estudiadas a través de Pearson Chi-cuadrado y la prueba exacta de Fisher. correlaciones de supervivencia se sometieron a pruebas de los modelos de riesgos proporcionales de Kaplan-Meier y Cox, donde se consideraron estadísticamente significativos los valores de p inferiores a 0,05.
Resultados
La expresión de galectina tipos 1, 3 y 9 en escamosas cáncer de cuello uterino
galectina-1, -3 y -9 se expresaron en el citoplasma de diferentes tipos de células (Fig 1). La expresión de los diferentes tipos de galectina por las células epiteliales tumorales se cuantificó por la puntuación de Ruiter. Tumor células epiteliales en la mayoría de muestras no expresan la galectina-1 (89% de las muestras) o galectina-9 (89% de las muestras), véase la Fig 2A. Para evaluar todas las células que expresan galectina, la expresión de galectina se evaluó tanto en el epitelio tumoral y compartimiento del estroma utilizando los análisis de imagen Pilas de programa de software propio. La galectina-1 era generalmente presente en un alto número de células del estroma (Fig 2B). se observó expresión variable de la galectina-3, tanto en las células tumorales y las células del estroma. La expresión de galectina-3 se encontró en 84% de las muestras. Strong célula tumoral galectina-3 de expresión a menudo estaba presente ya sea en la frontera invasivo o centro de los campos tumorales. En células tumorales, la galectina-3 de expresión a menudo apareció mutuamente excluyentes con la expresión de la galectina-1 o -9, ya que su expresión se redujo cuando la expresión de otro tipo de la galectina estaba presente. Si este fuera el caso, la galectina-3 se expresa principalmente en el centro de los campos de tumores, mientras que la galectina-1 y -9 se expresaron en la frontera invasiva. Las células que expresan galectina-9 generalmente no eran abundantes en ya sea el epitelio tumor o las células del estroma. Cuando la galectina-9 se expresa en las células epiteliales tumorales, se encuentra principalmente en las fronteras invasivos.
Imagen representativa tinción triple en un escamosas muestra de cáncer de cuello uterino FFPE que contiene células epiteliales tumorales que expresan la galectina-1 (A, azul) , galectina-3 (B, verde) y la galectina-9 (C, rojo) a una magnificación de 200x. campos epiteliales tumorales están marcados por líneas discontinuas. Típicamente, se expresó la galectina-1 en un elevado número de células del estroma y podría expresarse débilmente por las células epiteliales tumorales. La galectina-3 se expresó en células del estroma y, a menudo, ya sea en los centros de campo epiteliales (como se muestra aquí) o en pequeños grupos de células epiteliales en la frontera invasiva. La galectina-9 también puede ser expresada tanto por las células estromales y epiteliales. Cuando la galectina-1 o -9 fueron expresadas por las células epiteliales, esto se observó típicamente en las fronteras de los campos de tumores, mientras que la galectina-3 se expresó en el centro, como se muestra en esta figura. Tumorales infiltrarse en las células que expresan CAS galectina-1, -3 y -9 fueron también observadas con frecuencia dentro de los campos epiteliales tumorales
La fracción de muestras en las que las células tumorales expresan galectina-1, -3 o. - 9 o una combinación se muestra en A. la fracción de muestras positivas para uno o ninguno de los tipos de galectina estudiados se muestra en la primera columna de porcentajes, mientras que las fracciones de muestras de expresar dos o más tipos de galectina se muestran en la segunda columna. Total de galectina-1, -3 y positivas píxeles individuales, dobles y triples -9 en el estroma del tumor y el tumor de epitelio está representado en B. Media y se muestran el error estándar de la media.
Correlación entre galectina-1, -3 y -9 expresión
Todo galectina expresando células positivas individuales, dobles y triples en el estroma tumoral se correlacionaron significativamente con las mismas células en el epitelio tumoral (0,57 & lt; R & gt; 0,72, p & lt ; 0,0001, S2 Tabla), a excepción de las células positivas individuales galectina-3, el único tipo galectina estudiados que se expresó por las células tumorales en la mayoría de las muestras. Este fue también el único tipo para el que la galectina puntuaciones positivas individuales epiteliales fueron fuertemente correlacionada con la puntuación Ruiter de la expresión de las células tumorales (R = 0,743, p & lt; 0,0001, S1 figura). galectina-1 único positivo, -3 y -9 no fueron significativamente correlacionado con los demás. correlaciones Se encontraron fuertes entre las células galectina-9 solo positivos y /9 células doble positivas tanto en el epitelio y en el compartimiento de tumor estromal 3 galectina-(R = 0,706, p & lt; 0,0001; r = 0,680, p & lt; 0,0001, respectivamente). Galectina-3 células positivas individuales fueron fuertemente correlacionados con /3 células doble positivas en el estroma tumoral (R = 0,693, p & lt; 0,0001) 1 galectina. células positivas triples fueron fuertemente correlacionados con células positivas dobles galectina-noveno en el epitelio tumoral (R = 0,682, p & lt; 0,0001). células positivas triples en el estroma se correlacionaron con la galectina-3/9 células doble positivas (r = 0,704, p & lt; 0,0001).
El fenotipo de las células que expresan galectina
Para estudiar si los macrófagos y T células expresan galectina-1, -3 y -9, se realizó dobles tinciones con el tipo 2 macrófagos marcador CD163 o marcador de células T CD3 (Fig 3). Las células que expresan galectina-1 no eran abundantes en el epitelio del tumor, pero cuando están presentes la mayoría era CD163
+. Una minoría de las células que expresan galectina-1 era CD3
+. La mayor parte del estroma galectina-1 células que expresan no expresaban CD163 o CD3 y se denominaron fibroblastos basado en la morfología celular.
Imágenes representativas de dobles tinciones de galectina-1 y CD163 (A) o CD3 (B), galectin- 3 y se muestran CD163 (C) o CD3 (D) y la galectina-9 y CD163 (e) o CD3 (F). Las imágenes que contienen ambas tinciones DAPI y se muestran en la columna de la derecha. Las flechas indican ejemplos de células dobles positivas.
Casi todas las células no epiteliales que expresan galectina-3 fueron CD163
+ macrófagos. A la inversa no era cierto, como también se observó un gran número de CD163
+ células que no expresan la galectina-3. Una población menor de la galectina-3 células que expresan CD3 era
+.
La mayoría de la galectina-9 células que expresan CD163 era
+ y CD163 casi todos
+ macrófagos fueron galectina-9
+. No se observó CD3
+ células que expresan galectina-9.
A pesar de que se han descrito correlaciones entre las galectinas y la angiogénesis, que no observó una tinción clara buque o una morfología similar comparado con una tinción para CD105 (S2 figura). Ya que tampoco se encontró una correlación con el número de CD105
+ barcos (datos no mostrados), la galectina-1, -3 y -9 no fueron abundantemente expresado por las células endoteliales en esta cohorte de estudio.
Correlación entre la expresión de galectina y los parámetros clínico-patológicas
pacientes con cáncer cervical escamosas en estadio TNM I (n = 110), II (n = 44), III (n = 4) y IV (n = 2) se incluyeron en este estudio. La mediana de edad fue de 45 años (rango 22-87) y veinte pacientes murieron de la enfermedad dentro de los tres años. Fuerte expresión de galectina-1 por las células tumorales se correlacionó significativamente con un mal libre de enfermedad (p = 0,0004) y la supervivencia específica de la enfermedad (p & lt; 0,0001, Figura 4A). La razón de riesgo para la supervivencia específica de la enfermedad en caso de fuerte expresión tumoral galectina-1 fue de 8,9 (IC del 95%: 2,961 a 26,717, Tabla 1). Tumor de células de expresión de galectina-1 también se correlacionó con el aumento de la profundidad invasión tumoral (p = 0,032, Tabla 2). Probablemente relacionado con esto, los pacientes con tumores que expresan galectina-1 con mayor frecuencia recibió radioterapia postoperatoria (p = 0,020). La radioterapia se administró a 16 de los 18 pacientes con cualquier expresión de galectina-1 y para los seis pacientes con fuerte expresión de galectina-1.
curva de supervivencia de Kaplan-Meier de fuerte en comparación con la ausencia de expresión débil de la galectina -1 por las células tumorales se muestra en A. se muestra un análisis de supervivencia de los pacientes comparando con el actual frente al tumor expresión ausente de la galectina-9 en B.
tumor expresión de galectin- 9 mostraron una tendencia hacia una mejor supervivencia (p = 0,087, figura 4B). Curiosamente, mientras débil expresión tumor galectina-3 se correlacionó con el aumento de profundidad de invasión, la expresión positiva se correlacionó con la disminución de la invasión del tumor (p = 0,012, Tabla 2). Tanto la galectina-3 y la expresión de galectina-9 se correlacionaron significativamente con la presencia de HPV de tipo 16 o 18. El tamaño del tumor y la presencia de vaso-invasión o la metástasis de los ganglios linfáticos no fueron significativamente diferentes entre las muestras con o sin expresión de galectina-1, -3 -9 o ya sea en el epitelio o estroma tumoral.
se realizó un análisis multivariado de la supervivencia específica de la enfermedad para el tumor de galectina-1 mediante la corrección de intensidad para el estadio FIGO, metástasis en los ganglios linfáticos y el vaso-invasión (Tabla 1 ). FIGO etapa se utilizó porque este tamaño tumoral cubierta y la profundidad de infiltración y era conocido por un mayor número de pacientes que las variables independientes. Metástasis en los ganglios linfáticos y el vaso-invasión son otros dos parámetros conocidos que influyen en el pronóstico del paciente de cáncer de cuello uterino. La galectina-1 intensidad tumoral independientemente correlacionada con la supervivencia pobre, con un riesgo relativo de 8,0. Cuando FIGO etapa y el estado de metástasis en ganglios linfáticos fueron reemplazados por el estadio TNM, la correlación se mantuvo estadísticamente significativa (razón de riesgo: 6,84; IC del 95%: 2,013 a 23,256, p = 0,002). Tumor de galectina-1 intensidad fue también un predictor independiente de mal supervivencia libre de enfermedad (razón de riesgo: 3,41; IC del 95%: 1,296 a 8,972, p = 0,013). Los datos estaban disponibles para 155 pacientes, incluyendo 41 recaídas y 30 muertes.
Discusión
El presente estudio investigó la correlación entre la expresión de galectina-1, -3 y -9 y supervivencia en un escamosas cohorte de cáncer de cuello uterino (n = 160) siguiendo las recomendaciones observación de estudios con marcadores de tumores de pronóstico [35]. la expresión de galectina por las células tumorales y en el epitelio tumoral y la infiltración de células del estroma fue evaluado utilizando dos sistemas de puntuación complementarias. También se investigó la que las células del estroma asociadas con el cáncer (CAS) (fibroblastos, macrófagos y células T) expresado estas galectinas.
Dado que la expresión de células tumorales de la galectina-1 y -9 fue en general baja o ausente, la galectina-1 y -9 en tumores epiteliales campos se expresan predominantemente por epitelio tumoral infiltración de células inmunes. Esto también explica la ausencia de una fuerte correlación entre la expresión y la puntuación total de Ruiter de la galectina-1 y -9, mientras que la galectina-3 epitelial positividad sencillo fue fuertemente correlacionada con la puntuación Ruiter de la galectina-3. Las correlaciones también indican que los dos métodos de calificación utilizados fueron no sólo complementario sino también validado entre sí.
galectina-1, -3 y -9 se esperaba que se expresa por los macrófagos, células T, células epiteliales y fibroblastos [4,13]. La mayoría de galectina-1 que expresan las células que se infiltran en el epitelio tumoral eran macrófagos, predominantemente CD163
+ Tipo 2 macrófagos. Una población menor constaba de galectina-1 que expresan las células T, aunque más 1 galectina-células T negativas estaban en estrecho contacto con las células positivas galectina-1. Esto se corresponde con la función propuesta de la galectina-1 en la inducción de apoptosis de las células T que resulta en la inmunosupresión [4,7]. La cantidad de galectina-3 de expresión por las células CAS fue muy variable entre los pacientes, pero este tipo galectina fue casi siempre expresado por CD163
+ tipo 2 macrófagos. Esto se corresponde con un
in vitro
estudio que muestra que la galectina-3 se expresa con mayor frecuencia en el tipo 2 de tipo 1 macrófagos y también a una mayor medida que la galectina-1 [36]. La galectina-3 fue así expresado predominantemente por macrófagos de tipo 2, lo que sugiere que las células que expresan tumor galectina-3 podría estar asociado con un tumor infiltrante promover microambiente. Esto se corresponde con sus funciones reportados en la promoción de la supervivencia celular [4] y la angiogénesis [10]. Dado que la galectina-1 prácticamente siempre fue expresada por el tumor infiltración de células inmunes y la galectina-3 entre las células no tumorales por CD163
+ macrófagos, se espera que los galectina-1/3 células dobles positivas para ser epitelio tumor infiltrante CD163
+ macrófagos. El contacto entre las células que expresan galectina-3 y las células T fue más evidente que para la galectina-1, que a su vez podría inducir apoptosis de las células T [12]. Un estudio realizado por Hirashima et al. ha descrito que la galectina-9 se expresa por las células T y neutrófilos [13]. En contraste, se ha demostrado que este galectina se expresa predominantemente por los macrófagos en el cáncer cervical. Además, casi todos CD163
+ macrófagos fueron galectina-9
+ y no observar las células T que expresan galectina-9. La función de la galectina-9 en los macrófagos asociados a tumores requiere más investigación.
La galectina-1 se ha descrito que se expresa con poca frecuencia por las células tumorales [19,27,28], lo cual fue confirmado por el estudio actual. Los pacientes con una fuerte célula tumoral galectina-1 de expresión habían aumentado la invasión tumoral y recibió tratamiento con radioterapia postoperatoria con más frecuencia. Tumor de galectina-1 fue un predictor independiente de mala supervivencia específica de la enfermedad. Esto sugiere que la expresión de galectina-1 se asocia con el crecimiento del tumor más agresivo. Esto se corresponde con un estudio realizado por Huang et al., Que informó sobre una correlación entre la expresión tumoral de la galectina-1 y pobre supervivencia en pacientes con cáncer de cuello uterino tratados con radioterapia con intención curativa [27]. De hecho, el aumento de expresión de galectina-1 se asocia generalmente con mal pronóstico en diferentes tipos de tumores [17,18,26,27]. La galectina-1 puede aumentar la progresión del tumor y la invasión [37]. El presente estudio, realizado en una cohorte consecutiva de pacientes con cáncer de cuello uterino escamosas, tumor muestra que la galectina-1 es un marcador para la supervivencia pobre.
Los resultados inconsistentes se han descrito para la galectina-3, que ha sido asociado con la buena pronóstico [17,38], así como un mal pronóstico en diferentes tipos de tumores [24,39]. En neoplasia cervical, galectina-3 se ha demostrado que se correlaciona inversamente con la progresión de [30]. Nuestros resultados sugieren que la fuerte expresión de galectina-3 se correlaciona con un menor crecimiento del tumor, mientras débil galectina-3 se puede correlacionar con el aumento de crecimiento del tumor. Tumor galectina-3 de expresión puede ser necesario para un fenotipo y ECM adherencia diferenciada [9]. La función de la galectina-3 en la promoción de la supervivencia celular [4] y, potencialmente, la inducción de quimio-resistencia [40] y T de células de la apoptosis [12] podría explicar la correlación entre la expresión y mal pronóstico. Debido a que las funciones y correlaciones con los parámetros clínico-patológicas y la supervivencia de la galectina-3 son tan diversos, que será un reto para utilizar este tipo de galectina como marcador pronóstico o de diagnóstico en el cáncer cervical
.
La expresión de galectin- 9 por las células tumorales en general se ha correlacionado con buenos marcadores de pronóstico en diferentes tipos de tumores [17,22,23,26,41]. El papel de los diferentes tipos de galectinas parece ser el tipo de tumor dependiente aunque [41], y la galectina-9 se ha correlacionado con una pobre supervivencia en células claras carcinoma de células renales [42]. En el cáncer de cuello de útero, una correlación con el grado de alta diferenciación se ha descrito para la galectina-9 expresión [31], de acuerdo con la tendencia hacia un mejor pronóstico se describe en nuestro estudio. Tumor galectina-9 expresión podría estar relacionado con la infección por VPH, ya que diferentes virus, incluyendo el citomegalovirus humano, el VIH y el virus de la gripe se ha demostrado que induce la galectina-9 expresión [43-45]. Hemos encontrado que la expresión de galectina-3 y la galectina-9 fueron ambos significativamente correlacionado con HPV16 o HPV18 expresión, el apoyo a esta hipótesis.
Para concluir, tumor galectina-1 expresión podría ser utilizado como un marcador para un contra más agresivo -tratamiento para el cáncer. La galectina-1 y -3 eran más probable es co-expresada por el epitelio del tumor infiltrante tipo 2 macrófagos. Tumor de galectina-3 podría tener una doble función, ya que la debilidad de expresión se correlacionó con un aumento de la invasión tumoral, mientras que la expresión positiva se correlaciona con una disminución de la invasión. tumor expresión de galectina-9 mostró una tendencia hacia una mayor supervivencia, lo que podría estar relacionado con la expresión inducida por el virus. Como el bloqueo de la galectina-1 de expresión ya se ha demostrado que inhibe la angiogénesis tumoral [8] e inducir células T de rechazo de tumores dependiente en ratones [46], nuestros datos apoyan más estudios sobre el potencial terapéutico de la orientación galectina-1 en los tumores positivos.
Apoyo a la Información
S1 Fig. Pilas epitelial frente puntuaciones de Ruiter
doi:. 10.1371 /journal.pone.0129119.s001 gratis (DOCX)
S2 Fig. Galectina recipiente de tinción y
doi:. 10.1371 /journal.pone.0129119.s002 gratis (DOCX)
S1 tabla. Las características del paciente y del tumor
doi:. 10.1371 /journal.pone.0129119.s003 gratis (DOCX)
S2 tabla. Las correlaciones entre las expresiones de galectina
doi: 10.1371. /Journal.pone.0129119.s004 gratis (DOCX)