enzimoinmunoensayo Ensayo, ELISA, es un immunoeassay altamente sensible que se utiliza en lugar de radioinmunoensayo, ya que no se trata de procedimientos especiales de manipulación y eliminación requieren trabajo con sustancias radiactivas. El ELISA se basa en los anticuerpos para detectar la presencia de antígenos en muestras líquidas, cambiando así de un líquido claro para una de color. Debido a que son a base de anticuerpos, las pruebas ELISA son llamados inmunoensayos. ELISA puede detectar pequeñas cantidades de agentes patógenos en muestras de fluidos corporales tales como, antes de que el cuerpo había tenido la oportunidad de montar una respuesta inmune. Al experimentar usando un ELISA, los anticuerpos presentes en las muestras se unen a la placa de antígeno y después de la eliminación de exceso de anticuerpo, anticuerpo unido se puede detectar mediante la adición de segundo anticuerpo conjugado con enzima.
El objetivo de este estudio es examinar dos cosas: en primer lugar, hay unión en una placa que contiene dos anticuerpos diferentes específicos para los dos antígenos diferentes antígeno-anticuerpo: La lisozima de huevo de gallina (HEL) y albúmina de suero bovino ( BSA), y segundo, la cantidad de unión está presente en la placa? Para examinar estas cuestiones, utilizando un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas que ayudan a detectar los hibridomas que secretan anticuerpos, lo cual es altamente sensible y razonable realizar. El procedimiento de uso de un ELISA ha aumentado la comprensión de los enlaces de antígeno al anticuerpo de prueba tales como el VIH, drogas (marihuana), embarazos, etc.
El propósito de un ELISA es determinar si determinados enlaces de antígeno-anticuerpo están presentes en una muestra; si hay anticuerpos que se unen a antígenos presentes, un ELISA ayuda a determinar cuánto. Existen dos variantes principales con este método; uno es para que nosotros definimos la cantidad de unión antígeno-anticuerpo y el otro, se dijo anteriormente, es tan podemos ver la cantidad de anticuerpo presente en la muestra. En este experimento de laboratorio, hemos revestido una micro-placa con pocillos con antígenos. El antígeno es fuertemente absorbida por el plástico y permanece unido a la superficie bien durante todo el procedimiento. Después del revestimiento y la adición de los anticuerpos, hemos sido capaces de determinar la unión al antígeno-anticuerpo.
En la mayoría de los experimentos, los investigadores utilizan BSA y HEL como antígenos no relacionados con el control de la reactividad del antígeno no específico. Por ejemplo, pocillos recubiertos con antígeno HEL no deben mostrar signos positivos cuando los anticuerpos anti-BSA están presentes, y viceversa. Esto significa que la cantidad de anticuerpo conjugado con enzima unido en cada pocillo es capaz de hidrolizar un sustrato incoloro para producir un producto coloreado.
En conclusión, los resultados del uso de un ELISA debe concluir que los antígenos se unen a los anticuerpos, con los antígenos presentes previstas. El anticuerpo secundario se une a una enzima que cambia químicamente el sustrato de la enzima, convirtiéndola desde una solución incolora a una solución amarilla. Una nota al margen, sin embargo, no hay pozos en blanco con antígenos se van a restar de la placa de control, pero no forman una de las placas recubiertas con antígeno. Esto resulta en el anticuerpo secundario está unido covalentemente, conjugado, a una enzima que cataliza una reacción química cuando se añade el sustrato de la enzima. Esto produciría un cambio de color si la muestra de suero contenía anticuerpos frente a las bacterias, ya que la enzima unida anticuerpo secundario se uniría al anticuerpo primario ya unido al antígeno en los pocillos.