tinción de la histona H3, un sustrato establecido Aurora B argatroban. En, nuestro costo argatroban completa, Tenofovir datasheetassessment implica que Aurora B fosforilación de la comunidad KMN no se involucra en una posición significativa en el montaje o mantenimiento del cinetocoro externo en las células humanas. La fosforilación de la Red KMN Resultados argatroban en Graded Los cambios en la acción de microtúbulos de Unión a continuación trató de esbozar la contribución de los sitios de fosforilación reconocidos en la red KMN a la regulación de su acción de unión a microtúbulos argatroban in vitro. Para estos experimentos, se utilizó C. elegans red KMN, en el que la subunidad hDsn1 humana de los MIS12 corresponde a complicadas C. elegans KNL y tres años, y que puede reconstituirse in vitro, que nos permite diseccionar las cualidades bioquímicas de la meta KMN comunidad.
hasta la fecha, no ha sido posible Tenofovir para reconstituir toda la longitud humana hKNL1, que es mayor que 265 kDa. Sin embargo, siempre que sea factible, se confirmó estos resultados usando las proteínas humanas correspondientes. Debido a la probada conducta unión a microtúbulos cooperativa de los constituyentes de la comunidad KMN, ensayos habían sido ejecutados con cincuenta nM entrar en proteínas para mejorar cualquier diferencia en la conducta argatroban vinculante. Nos anteriormente mostraron que la fosforilación in vitro de la Ndc80 avanzado por Aurora B redujo significativamente su afinidad de unión microtúbulos. Es importante destacar que la afinidad del mutante phosphomimetic NDC-80SD sofisticado para los microtúbulos se trata sólo de idéntica a la de avanzada NDC-ochenta que ha sido fosforilada in vitro por Aurora B, dando un instrumento fundamental para diseccionar el operar de esta fosforilación.
no obstante, a pesar de fosforilados Ndc80 pantallas sofisticadas insignificante Tenofovir microtúbulos vinculante actividad en su personal, esta fosforilación no es suficiente para evitar la unión de la red KMN a los microtúbulos. La red KMNSD que contiene NDC 80SD tiene una evidente afinidad de unión a microtúbulos de 1 mM, casi la mitad de la comunidad Tenofovir KMN-forma silvestre. Por lo tanto, mientras que la fosforilación Ndc80 lowers unión de la red KMN a los microtúbulos, esta afinidad se mantiene fisiológicamente apropiado cuando a diferencia de otros microtúbulos creados proteínas que interactúan. Dentro de la red KMN, KNL-1 contribuye también a la unión de los microtúbulos, pero el área responsable de este ejercicio era desconocido. Se encontró que los 68 aminoácidos en el extremo N de KNL-1 son esenciales y amplio para la unión a los microtúbulos.
Curiosamente, Tenofovir los sitios de fosforilación web Aurora B que hemos reconocido en KNL1 son existentes en esta región, lo que sugiere que podrían regular las interacciones de los microtúbulos. En verdad, los mutantes phosphomimetic abolieron la unión de la C. elegans mitoxantrona KNL-uno o hKNL1 fragmentos N-terminales humanos, o conjunto de longitud C. elegans KNL-uno, a los microtúbulos. Sin embargo, como con el Ndc80 intrincado, cuando la fosforilación de KNL-1 abolió su afinidad por los microtúbulos en su personal, la comunidad KSDMN compuestos de KNL-1SD muestra sólo una reducción media de la unión a los microtúbulos. Desde Ndc80 individuo o una KNL-fosforilación no se quitaron los microtúbulos vinculante, que posteriormente analizadas no importa si Aurora B fosforilación de las proteínas dentro de la red muchos KMN podría derogar la unión.
Sorprendentemente, la red KSDMNSD en el que los dos configurado partes de unión a microtúbulos son perturbados incluso ahora se une a los microtúbulos, aunque con muy baja afinidad evidente. Por último, dado que el SIG-12 avanzado también es fosforilada por Aurora B, examinamos la red KMN totalmente phosphomimetic. Para definir el daño en el ADN coMitoxantrone