proteínas
metilación de proteínas es una modificación posterior a la traducción que se produce principalmente en los residuos de arginina y lisina. Cuando methyltransferases son eliminados en ratones, puede dar lugar a letalidad embrionaria o muerte temprana, lo que indica el papel biológico de vital importancia a este grupo de enzimas. El registro del número de péptidos identificados metilado en un solo experimento es de 249 sitios de metilación de arginina.
A continuación, hemos desarrollado anticuerpos altamente específicos contra la arginina y la lisina metilación. Después del enriquecimiento de inmunoafinidad y el análisis de espectrometría de masas, se identificaron más de 1000 sitios de metilación de arginina en la línea celular de ratón y tejidos humanos, y 160 sitios de metilación de la lisina en la línea celular humana HCT116.
En primer lugar, hemos desarrollado anticuerpos contra lisina metilada, usando una biblioteca de péptidos que tenía una sola lisina modificado en una biblioteca de péptido que contiene aminoácidos en las posiciones de los alrededores.
a continuación, se tira hacia abajo del péptido y análisis con LC /MS /MS metilado. Y luego hemos clasificado la arginina metilación forma de patrón de cerebro de ratón y el embrión.
En el último, que hemos denominado la proteína total con dimethylation in vitro. Utilice este ejemplo artificial, se identificaron más de miles de péptido metilado, sin embargo, la muestra normal tiene menos de 100 sitios de metilación de lisina, lo que sugiere que esta modificación se limita a un pequeño subconjunto de proteínas.
La metilación de arginina y residuos de la proteína lisina ha sido conocido por muchos años, el reto para el campo se carece de herramientas y métodos para el estudio de estas modificaciones. Este estudio proporciona herramientas de gran alcance para conseguir la penetración en el campo de la metilación de proteínas.
MC4R es un receptor acoplado a proteína G que se une? -melanocyte Hormona estimulante (? MSH). En modelos murinos se han encontrado receptores MC4 estar involucrado en la conducta alimentaria, la regulación del metabolismo, el comportamiento sexual y la función eréctil masculina. Tanto en roedores como en humanos, los receptores de melanocortina-4 (MC4Rs) suprimen el apetito y prevenir la obesidad. La activación de los receptores de melanocortina-4 (MC4Rs) restringe la alimentación y evita la obesidad.
elimina y re-expresado MC4Rs de neuronas que expresan cre y observó el fenotipo. A medida que las neuronas que expresan clave MC4R son glutamatérgicas, es casi una certeza que la liberación de glutamato y excitan las neuronas objetivo abajo.
A continuación, se muestra que MC4Rs en glutamatérgica neuronas son necesarias para la prevención de la hiperfagia y la obesidad. Entonces, tenemos reconstruir MC4Rs sólo en neuronas SIM1 rescatado? 60% de la obesidad y el 100% de la hiperfagia de los ratones MC4R-nulo. Este resultado indica que MC4Rs sobre las neuronas SIM1 regulan la alimentación. Debido a que el factor de transcripción SIM1 se requiere para el desarrollo de PVH.
Para resumen, hemos demostrado que las neuronas que expresan MC4R que regulan la alimentación son SIM1 +, que se encuentra en el PVH, glutamatérgica y no GABAérgicas, y no expresan la oxitocina, corticotropina liberador de la hormona y la vasopresina. Identificamos las proyecciones descendentes de estas neuronas glutamatérgicas al núcleo parabrachial lateral, lo que podría mediar en el apetito suprimir efectos.