células CPE estándar podría ser caracterizadas por formas contraídas y esféricas, desprendimiento de una de la otra, si no es el desapego de la placa de cultivo de tejidos. culturas mammosphere de su línea celular 4T1 fueron reconocidos y afligidos por oncolítico HSV1 GFP. fluorescencia verde debido a la fuerte expresión de GFP constitutiva se encuentra en varias células de las esferas en comparación con el control infectados de forma simulada. Colectivamente, estos datos indican que ambos 4T1 monocapas y mammospheres pueden ser atacados por oncolítico HSV-1 GFP.
ALDHbr y células ALDHlo podrían estar infectados de manera uniforme por 4T1 células teñidas con aldefluor sustrato expuesto fluorescencia verde brillante, que podría tal vez no distinguirse de la expresión de GFP en células infectadas con HSV1 GFP. Sin embargo, la fluorescencia natural desapareció rápidamente de células enviar fijo ALDHbr porque no estaban en el tampón de aldefluor, que bloqueó transportadores ABC y se retiene el sustrato fluorescente en las células, pero eran como una alternativa en el método y la vaina de fluido cuando se reviste en las recetas.
Por esa razón, las células separadas se ALDHbr fluorescente libre y HSV1 drived frase GFP podría utilizarse para evaluar la infectividad de las células ALDHbr. ALDHbr células y ALDHlo fijos se infectaron con HSV1 GFP en diferentes MOI para diferentes momentos. Como se muestra en la Figura 4C, después de 10 horas, GFP término había aparecido en las dos subpoblaciones contaminados con HSV1 GFP en las MOI de 0. Después de contaminación durante 34 horas, cuando la diferenciación y crecimiento celular que había ocurrido, la expresión de GFP fue más evidente en las dos subpoblaciones. Por otra parte, el HSV-1 efectividad enfermedad GFP en células tanto ALDHlo y ALDHbr estaba relacionado.
Para ayudar a analizar la consecuencia de inhibidor de la quinasa Syk oncolítico en células 4T1 ALDHbr, las células 4T1 fueron manejados con doxorrubicina o LCR HSV1 hGM durante 24 horas y por lo tanto examinaron los cambios en la proporción de células ALDHbr por citometría de flujo. Debido a la fluorescencia entre el sustrato aldefluor activado y la expresión de GFP mediante citometría de flujo, oncolítico HSV1 hGMCSF se utilizó en su lugar. Hubo un aumento 3. 5 veces en la cantidad de células ALDHbr después del tratamiento con doxorrubicina frente al control correspondiente. Sin embargo, la presencia de HSV1 hGM CSF en el canal no alteró tanto el porcentaje de células ALDHbr en las células 4T1 en comparación con el control.
La frecuencia de células tumorales ALDHbr se evaluó in vivo después de varios tratamientos, para determinar si estas células tumorales ALDHbr también muestran resistencia a la quimioterapia doxorubicina o sensibilidad a HSV-1 hGM CSF in vivo. Inconsistente con la información in vitro, no hubo más escalada en la frecuencia de células tumefacción ALDHbr in vivo después de la quimioterapia tratamiento solo, que era similar a, o incluso ligeramente menor que, las de los tumores tratados con vehículo.
Por otro lado, oncolítico HSV-1 hGM CSF tratamiento de agente único como resultado una reducción sustancial en la información de la célula tumoral ALDHbr, y el volumen de las células tumorales ALDHbr también se redujo considerablemente en los tumores tratados con doxorrubicina siguieron de cerca por HSV1 hGM CSF frente al vehículo o la doxorubicina sola.