Los elementos de la Z 'para este análisis, como se basa en controles positivos y negativos, fueron de entre 0,62 y 0,67, mientras que la relación de señal a fondo tenía cinco años en ambos casos. Sin embargo, una escalada ~ dos veces fue provocada por algunos SMIPs en la fracción de células positivas Nkx3.1, el resultado era sencillo en comparación con los inhibidores del proteasoma y no será confirmada mediante transferencia de inmuno. También, una vez que la expresión de Nkx3.1 endógeno se evaluó en DU145, otra línea celular de cáncer de próstata que tienen niveles muy bajos de Nkx3.1, ninguno de los SMIPs obtiene positive.Nutlin-3a
Aunque los inhibidores del proteasoma llevaron a un aumento en la expresión de p27-luc, que era fácilmente perceptible por transferencia de inmuno y ensayo de luciferasa, ninguno de los SMIPs fueron eficaces. Este hallazgo indica un nivel específico de la especificidad de las acciones celltype SMIP. Aunque la estructura celular centrada-materiales que modulan la prueba robusta endpoint- los niveles de p27 nucleares comúnmente reveló - en células intactas, nuestra pantalla piloto también somete las deficiencias de este enfoque, a saber, que las dianas moleculares de SMIPs permanecen sin identificar, que el punto final de la prueba es modulada no necesariamente causal con los mejores móviles ramificaciones de los compuestos identificados. Por ejemplo, nuestra investigación mostró que la interferencia de ARN se requiere ninguna p21 p27 no por retraso G1 inducida por la pequeña y mediana industria en el tejido LNCaP-S14. Es imposible que la ineficiencia del pequeño ARN de interferencia mediada por la caída oculta este tipo de dependencia de las acciones SMIP, ya que carecen de p27 y de p21 disminuye la fracción de células en G1 que revela que las eficiencias logradas desmontables aquí eran funcionalmente consecuentes.
Además, los rangos de p21 y p27 en las células desmontables manejados-SMIP fueron sin embargo inferiores o iguales a los niveles en las células de control no tratadas, lo que indica la ligera acumulación de las CKI descubiertos sobre la supervisión SMIP para derribar las células que va a ser insuficiente para dar lugar a una ciclo celular arrest.Two información potencial podría ser ofrecido a racionalizar el prescindible de p21 y p27 en caso de retraso G1 inducida por SMIP inducida por SMIPs: en primer lugar, se ha establecido que los fibroblastos de embriones de ratón que carecen de p27 y p21 estancia competentes en dar una respuesta a las señales de propagación negativos con la detención del ciclo celular debido a que las proteínas de bolsillo p107 y p130, que tienen actividad CKI sí mismos, compensar su pérdida de la p27ANDp21. A continuación, SMIPs indujeron la regulación negativa de varios buenos reguladores del ciclo celular, incluyendo ciclinas E junto con una y CDK4, que se ha conservado en su totalidad a p27 y p21 ronda down.UNC1215
Por lo tanto, es concebible que el combinado effectation de la regulación de la inhibición de ciclina /CDK abajo andCDK por proteínas de bolsillo y otra CKI representa aproximadamente el retraso del ciclo celular mediada por SMIP dentro de la ausencia de p27 y p21. Aunque parece que los materiales identificados en la pantalla preliminar de hoy causadas upregulation p27 como un efecto secundario de retraso del ciclo celular, usando acumulación de p27 nuclear como un punto final de la prueba permite fácilmente la identificación de sustancias permeables celulares que tienen actividad antiproliferativa. Ya que provocan retraso del ciclo celular y la apoptosis en varios diferentes células de cáncer de próstata sin embargo no en fibroblastos humanos normales significativamente, tanto SMIPs exhiben selectividad de células de cáncer. Además, se consideran un sustituto rígido para el desarrollo de tumores in vivo e inhiben la formación de colonias en agar blando, que es realmente una característica del fenotipo alterado de tejido de cáncer.