Hur se conoce para localizar a polisomas y en los gránulos de estrés después de ciertos tipos de juguetes y lesiones de células. Nos dimos cuenta de un enorme desplazamiento de la proteína a las fracciones más pesadas polysomal siguiente remedio doxo, lo que indica que la proteína está participando activamente en la reacción celular al fármaco quizá se regula el ejercicio de traducción de los ARNm unidos. Hemos utilizado un chip ensayo RIP para establecer qué ARNm se une a Hur después del tratamiento doxo, para investigar la respuesta a Hur DOXO en términos de objetivos Hur.
Después de la inmunoprecipitación e hibridación en matrices de Agilent, a través de una tolerancia veces enriquecimiento, que filtra los diversos ARNm particular con destino a Hur. Descubrimos ARNm correspondientes a 822 genes anotados HGNC que se pueden unir a Hur y proporcional enriquecieron dentro del producto. Hemos presentado el expediente gen ligado 721 Hur a la evaluación de motivos funcionales en todo el 3UTR, para juzgar la estabilidad de nuestro proceso de enriquecimiento de ARNm. Desde Hur es bien conocido para unirse a Ares, que esperábamos que buscar una sobrerrepresentación sólida de opinión son vinculantes en los 3UTRs de estos genes.
El enriquecimiento de la ARE era grande y se preserva la importancia incluso si la eliminación de genes de manera constante con una menor veces enriquecimiento. Los primeros 50 genes son enriquecidos máximo ARE. De esta lista elegimos tres genes para verificar la consecuencia del análisis de todo el genoma mediante la comprobación de la cantidad relacionada acerca de la solución de inmunoprecipitación a través de PCR semicuantitativa de c-fos, c myc y SOCS3. Todos los mRNAs establecieron su relación con Hur después de DOXO gobierno, como se muestra en la Figura 5B.
Estos datos sugieren una implicación de Hur en el proceso de la activación de la apoptosis causada por DOXO en nuestro modelo de sistema celular que no se puede explicar por la formación del tipo truncado apoptogenic de Hur, y que como un Hur alternativa es unido a mRNAs y relocaliza específicas sobre polisomas después de la terapia DOXO. Desde Hur baja regulación promueve una disminución de la respuesta apoptótica inducida por DOXO y desde rottlerin antagoniza DOXO en la inducción de la pérdida de viabilidad, nos preguntamos si Hur podría estar implicado en la aparición de resistencia DOXO.
Colocamos MCF 7 células bajo DOXO colección aumentando constantemente la concentración de fármaco de 0 a 100 nM en una escala de tiempo mes. Hemos recibido una ciudadanía celular, llamado MCF 7 /doxoR, que mostró que aproximadamente 250 veces la resistencia a DOXO, en comparación con el tipo salvaje MCF 7 células, como se observa por el aumento de IC50 de aproximadamente 10 uM. La confirmación adicional del fenotipo de resistencia adquirida se originó en la expresión sobre-en MCF 7 /doxoR del transportador ABCG2, una señal media y la razón conocida para pharmacoresistance DOXO, como la permisividad a la apoptosis fue descubierto por la caspasa 7 frase. Og-L002
se observó una fuerte baja regulación de Hur, mientras que las células adaptadas a la presencia de doxo. Repetimos el procedimiento de recogida de doxo 3 x menudo adquieren la misma obvia Hur baja regulación, porque nos centramos en las poblaciones, intrínsecamente sometidos a variabilidad. Más encima, ponemos en virtud de selección diferentes líneas celulares de cáncer de mama con dos diferentes charachteristics de MCF-7 células MDA MB: 231, células malas triples, y SK BR 3, células HER2 positivos.
adquirió una población de MDAMB 231 células resistentes a DOXO pero no una población de SK BR 3 de acuerdo con los valores calculados. Curiosamente, hemos sido testigos Hur regulación a la baja en MDAMB 231 /doxoR pero no en SK BR 3 /NOdoxoR, lo que sugiere que las células de cáncer de mama regulan negativamente la expresión Hur sólo si un profundo genética re-programación hacia pharmacoresistance se está produciendo y no como resultado de la mera presencia de doxo.