niveles
Extracto
Antecedentes
La medición de ARN mensajero (ARNm) mediante la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa de transcripción inversa (RT-qPCR) es una práctica común en muchos laboratorios. Un conjunto específico de ARNm de genes de referencia como control interno es considerada como la estrategia preferida para normalizar los datos de RT-qPCR. La selección adecuada de los genes de referencia es un tema crítico, especialmente en las células de cáncer que se someten a diferentes
in vitro
manipulaciones. Estas manipulaciones pueden resultar en alteraciones dramáticas en los niveles de expresión génica, incluso de genes de referencia asumidos. En este estudio, se evaluaron los niveles de expresión de 11 genes de referencia utilizados comúnmente como controles internos para la normalización de 19 experimentos que incluyen el neuroblastoma, LLA-T, el melanoma, el cáncer de mama, cáncer de pulmón no microcítico (NSCL), la leucemia mieloide aguda (AML ), cáncer de próstata, cáncer colorrectal y cáncer cervical líneas celulares sometidas a diversas perturbaciones.
resultados
el algoritmo geNorm en el paquete de software qbase + se utilizó para clasificar los genes candidatos de referencia en función de su estabilidad de la expresión. Hemos observado que la estabilidad de la mayoría de los genes candidatos de referencia varía en gran medida en los experimentos de perturbación. Alu repite expresadas muestran una expresión relativamente estable, independientemente de la condición experimental. Estas repeticiones Alu se encuentran entre los mejores ensayos de referencia en todos los experimentos de perturbación y muestran valores de estabilidad de expresión promedio aceptables (M & lt; 0,5).
Conclusiones
Proponemos el uso de repeticiones Alu como referencia ensayo al realizar experimentos de perturbación celulares de cáncer
Visto:. Rihani A, Van Maerken T, Pattyn F, G Van Peer, Beckers A, De Brouwer S, et al. (2013) Alu eficaz repetición basada RT-qPCR Normalización de cáncer experimentos de perturbación de la célula. PLoS ONE 8 (8): e71776. doi: 10.1371 /journal.pone.0071776
Editor: Jörg D. Hoheisel, Deutsches Krebsforschungszentrum, Alemania