Extracto
El
TP53
mutaciones han demostrado ser predominado en el cáncer de ovario en un estudio de The Atlas del Genoma del Cáncer (TCGA). Sin embargo, las características moleculares de los cánceres de ovario recurrente después del tratamiento inicial han sido mal estimadas. Este estudio fue investigar el patrón de mutaciones puntuales somáticas en muestras pareadas emparejados de los cánceres ováricos epiteliales primarias y recurrentes, utilizando el protocolo de detección de mutaciones OncoMap. Hemos adaptado una plataforma de alto rendimiento del genotipo para determinar el estado de la mutación de un gran grupo de genes del cáncer conocidos. OncoMap V.4.4 se utilizó para evaluar el ADN genómico aislado a partir de un conjunto de 92 tumores fijados con formalina e incluidos en parafina (FFPE), que consiste en muestras pareadas emparejados de tumores inicialmente diagnosticados y recurrentes de 46 cáncer de ovario (EOC) de los pacientes epiteliales. No se observaron mutaciones en 33,7% de las muestras, con 29,3% de estas muestras que tienen una sola mutación y el 4,3% restante que tiene dos o más mutaciones. Entre los 41 genes analizados, 35 se encontraron mutaciones en cuatro genes, es decir,
CDKN2A gratis (2,2%),
KRAS gratis (6,5%),
MLH1 gratis (8,2% ) y
TP53 gratis (20,7%).
TP53
era el gen más frecuentemente mutado, pero no hubo correlación entre la presencia de mutación en cualquier gen y el pronóstico clínico. Por otra parte, las mutaciones somáticas no difirieron entre los carcinomas de ovario primarios y recurrentes. Cada mutación presente en las muestras recurrentes se detectó en la muestra primaria correspondiente. En conclusión, estos datos OncoMap de muestras de Corea del COE establecen que las mutaciones somáticas se encuentran en
CDKN2A
,
KRAS
,
MLH1
, y
TP53
. No se detectaron diferencias en el estado mutacional entre las muestras primarias y recurrentes. Para entender la biología de recurrencia tumoral en el cáncer de ovario epitelial, son necesarios más estudios, incluyendo las modificaciones epigenéticas o mutaciones adicionales en otros genes
Visto:. Kim YM, Lee SW, Chun SM, Kim DY, Kim JH, Kim KR, et al. (2014) Análisis y comparación de las mutaciones somáticas en la pareja de primaria y recurrente cáncer ovárico epitelial muestras. PLoS ONE 9 (6): e99451. doi: 10.1371 /journal.pone.0099451
Editor: Anthony W.I. Lo, la Universidad China de Hong Kong, Hong Kong
Recibido: 8 Febrero 2014; Aceptado: 14 de mayo de 2014; Publicado: 17 Junio 2014
Derechos de Autor © 2014 Kim et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyado por una beca del Programa de Reclutamiento Instituto de Investigación exterior Principales a través de la Fundación Nacional de Investigación de Corea (NRF), financiado por el Ministerio de Educación, Ciencia y Tecnología (MEST) (2011 a 0030105). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de ovario es la causa más común de muerte entre los tumores malignos ginecológicos [1]. El tratamiento estándar es la citorreducción quirúrgica seguida de quimioterapia basada en platino. Sin embargo, la mayoría de los pacientes sufren una recaída y finalmente mueren de la enfermedad resistentes a la quimioterapia. Por desgracia, los regímenes de rescate disponibles para el cáncer de ovario refractario al platino han dado resultados decepcionantes, ya que las tasas de respuesta son bajos (20-50%) y las respuestas son de corta duración. Por tanto, es necesario examinar nuevas estrategias de tratamiento para los pacientes recién diagnosticados, así como los pacientes con cáncer recurrente [2]. En particular, los nuevos medios de molecularmente y genéticamente que caracterizan el cáncer de ovario son necesarios con el fin de personalizar y mejorar el tratamiento [3].
Las mutaciones somáticas en oncogenes se han observado en muchos cánceres humanos, y se sabe que son predictivos de la droga sensibilidad o resistencia a los medicamentos [4]. Las mutaciones somáticas más de 30 oncogenes y genes supresores de tumor que han sido implicados en la oncogénesis de ovario se detectaron en las muestras de cáncer ovárico epitelial (EOC). Los cambios genéticos en coche de señalización alterado que induce la proliferación; inhibe la apoptosis; Bloques de anoikis; aumenta la motilidad, la adherencia y la invasión; y atrae los componentes del estroma, incluyendo células madre mesenquimales y células endoteliales de los vasos sanguíneos [5]. Esta dependencia oncogén proporciona la base para las terapias dirigidas a oncogenes, tales como el uso exitoso de imatinib y erlotinib en cánceres que albergan
BCL-ABL
y
EGFR
alteraciones, respectivamente. Sin embargo, el espectro mutacional en cáncer de ovario es sorprendentemente simple, como se muestra en un estudio del Genoma del Cáncer Atlas (TCGA). Las mutaciones en
TP53
predominaba, se producen en al menos el 96% de las muestras de cáncer de ovario seroso de alto grado; Por otra parte,
BRCA1
y
BRCA2
se encuentra mutado en el 22% de los tumores, debido a una combinación de la línea germinal y mutaciones somáticas. Se identificaron otros siete genes mutados de manera significativa, pero sólo en el 2-6% de las muestras de cáncer de ovario seroso de alto grado [6].
Hemos adaptado una plataforma de alto rendimiento del genotipo para determinar el estado de la mutación de un gran Panel de oncogenes conocidos para el cáncer con el fin de identificar subgrupos de pacientes con cáncer de ovario que podrían beneficiarse de la terapia dirigida relacionada con su estado de salud [7] - [10]. Esta plataforma de genotipado, llamado OncoMap, emplea la tecnología de espectrometría de masas basado en la determinación del genotipo (Sequenom) 471 para identificar mutaciones oncogénicas en 41 genes frecuentemente mutados (Tabla S1). Este estudio reporta el tipo y la frecuencia de mutaciones puntuales somáticas en muestras de EOC primarios y recurrentes asociados a través de OncoMap.
Métodos
Los pacientes
El Centro de ASAN del Genoma del Cáncer Descubrimiento (CCGD ), en colaboración con el Instituto de cáncer Dana-Farber (DFCI), ha desarrollado la plataforma de genotipado OncoMap [8]. OncoMap se utilizó V.4.4 para analizar un conjunto de 92 muestras, fijado en formol e incluidos en parafina (FFPE) EOC que consisten en pares de muestras coincidentes de los tumores recurrentes inicialmente diagnosticados y tratados de 46 pacientes en el Centro Médico Asan, Corea, entre enero de 2002 a diciembre de 2011. Todos los pacientes habían sido tratados con cirugía citorreductora seguida de quimioterapia basada en platino y recibió una segunda cirugía citorreductora debido a una enfermedad recurrente o metastásica. Todas las muestras tumorales se obtuvieron a partir de muestras tumorales FFPE en base a un punto de corte 80% de pureza de la muestra tumoral. Este estudio fue aprobado por el Centro Médico de la Junta de Revisión Institucional ASAN (AMC IRB), y se seleccionaron los pacientes que habían escrito el consentimiento informado para el uso de sus tejidos de archivos para las pruebas genéticas. se aplica el anonimato a todos los datos
Extracción de ADN
Revisión de todos los H & amp;. E diapositivas fue realizada por un patólogo para confirmar el tipo de tumor, y para asegurar que la muestra era representativa del tumor y que los tejidos circundantes normales no se incluyeron. ADN genómico fue extraído de 10-20 diapositivas 6-micras de espesor por bloque FFPE, dependiendo del tamaño del tumor. Purificación de ADN genómico se realizó utilizando el kit QIAamp DNA de tejido FFPE (# 56404; Qiagen, Hilden, Alemania) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. De-paraffinization con xileno y etanol se llevó a cabo como sigue. Después de incubar durante 5 min con xileno 1 ml, las muestras se centrifugaron durante 1 min a 12.000 rpm, y el sobrenadante se eliminó sin perturbar el sedimento. A continuación, las muestras se lavaron con 1 ml de etanol absoluto con el fin de eliminar el xileno restante, y el sedimento se secó al aire durante 10 min para permitir que el etanol residual se evapore. El sedimento se lisaron por incubación con 0,2 mg de proteinasa K durante la noche a 60 ° C después se sometió a purificación en columna. Cada muestra de ADN genómico se eluyó en 50 l de DNasa y RNasa libre de agua, cuantificó usando el kit de Quant-ITTM PicoGreen dsDNA de ensayo (Invitrogen /Life Technologies, Grand Island, NY), y se normalizaron a un 5 ng /l de concentración.
uso de Genotipado OncoMap_V4.4-Core Panel
perfiles de mutaciones somáticas para 41 genes críticos relacionados con el desarrollo de tumores se realizó utilizando la versión 4.4 OncoMap-Core (OncoMap_v4.4C) bajo la tecnología Sequenom MassARRAY plataforma (Sequenom, San Diego, CA). OncoMap_v4.4C es un panel de multiplex de 32 grupos de genes que en total abarcan 471 sitios de mutación únicos en 41 oncogenes y genes supresores de tumores (Tabla S1) que se sabe que son objetivos druggable. Este panel OncoMap es una versión mejorada del OncoMap_v1, que se describe en la literatura publicada [7], [8]. Se utilizó un total de 320 ng de ADN genómico purificado como plantilla para 32 diferentes piscinas de la amplificación multiplex usando química IPLEX (# 10134-2; Sequenom, San Diego, CA), con 10 ng por reacción. a continuación, se utilizó un 50 a 80 ng de DNA adicional para la validación homogénea Extensión de masas (HME) de candidatos de mutación que fueron identificados por la reacción IPLEX. amplificación Multiplex PCR se realizó en 10 ng de ADN genómico en un volumen final de 5 l en una placa de 384 pocillos con 0,5 U de HotStarTaq ADN polimerasa (Qiagen), 0,12 M de cada cebador de PCR, 500 mM de mezcla de dNTP, y 3,5 mM MgCl
2, el uso de un motor de ADN Dyad Cycler (Bio-Rad, EE.UU.). Multiplex PCR se realizó con el siguiente programa: 95 ° C durante 15 minutos; 45 ciclos de 95 ° C para 20 segundos, 56 ° C durante 30 seg, y 72 ° C durante 60 seg; luego 72 ° C durante 3 min. desoxinucleótidos residual en los productos de la PCR fueron inactivados por incubación durante 40 min a 37 ° C con 2 l de fosfatasa alcalina de camarón (SAP) del kit IPLEX-Pro (# 10142-2; Sequenom, San Diego, CA), seguido de una incubación adicional durante 10 minutos a 85 ° C para inactivar el SAP. A continuación, la extensión de una sola base (SBE) se realizó con un 2 ul adicional de mezcla IPLEX oro Chemistry (0.1 l de IPLEX mezcla terminación, 1,2 l de mezcla de sonda de extensión, y 0,0205 l de enzima IPLEX) como sigue: 94 ° C durante 30 segundos; 40 ciclos de 94 ° C durante 5 segundos y cinco ciclos internos de (52 ° C durante 5 segundos y 80 ° C durante 5 seg); y 72 ° C durante 3 min. Después de SBE, se añadieron 16 l de agua destilada libre de DNasa y desalado se realizó por incubación durante 25 minutos con 6 mg de resina de intercambio catiónico (Sequenom). Por último, el 10 nl del producto desalada fue descubierto en un formato de 384 SpectroCHIP II con la MassARRAY Nanodispenser (Sequenom). determinación de la masa se realizó con el espectrómetro de masas MassARRAY analizador compacto MALDI-TOF. Los genotipos fueron llamados usando un algoritmo de análisis de conglomerados desarrollado por el CCGD de DFCI, a continuación, revisado manualmente por dos investigadores independientes para eliminar cualquier llamada de incertidumbre debido a los artefactos de agrupamiento. calidad de la muestra se consideró adecuada para el análisis de si hay más de 80% de los intentos de los genotipos dio como resultado productos identificables. Para la validación de mutaciones candidatos, específica genotipado HME se realizó para las muestras enteras. piscinas de validación para HME fueron diseñados utilizando el software AssayDesigner en el paquete MassARRAY Typer (v4.0). SNPs proximales se filtraron, y la especificidad de la amplificación por PCR y la posterior reacción de extensión del cebador se confirmaron con un máximo de seis ensayos por grupo. amplificación y SAP tratamiento Multiplex PCR se llevaron a cabo de la misma manera que para la reacción IPLEX, excepto que se usó ADN 5 ng de la plantilla de PCR multiplex. La reacción HME se realizó con un 2 ul adicional de HME mezcla maestra (0,2 l de HME apropiado EXTIENDEN mezcla, 1 l de mezcla de cebadores MassEXTEND, y 0,025 l de enzima ThermoSequenase) como sigue: 94 ° C durante 2 min; 75 ciclos de 94 ° C durante 5 segundos, 52 ° C durante 5 segundos y 72 ° C durante 5 segundos; y 72 ° C durante 5 min. Los pasos restantes, incluyendo la adición de agua, la desalinización, la localización, y el análisis, se realizaron como se para la reacción IPLEX. Sólo se consideraron las llamadas concordantes tanto de la IPLEX y el análisis HME ser mutaciones validadas. Todas las mutaciones detectadas fueron confirmadas por secuenciación estándar, bidireccional Sanger
Análisis estadístico
El análisis de supervivencia se realizó mediante el método de Kaplan-Meier y la prueba de log rank, y la significación estadística se definió como p. & Lt; 0.05. SPSS v21.0 fue utilizado para todos los análisis estadísticos.
Resultados
En este estudio, 46 pares de muestras primarias recurrentes EOC (es decir, 92 muestras de EOC de los cuales 46 fueron de los sitios de cáncer primario y 46 eran de sitios recurrentes pares emparejados) fueron analizados. Todos los pacientes habían confirmado histológicamente EOC, de los cuales papilar adenocarcinoma seroso era más común (67,4%). Todos los pacientes excepto uno, recibieron quimioterapia basada en platino adyuvante entre enero de 2002 y diciembre de 2011. Las características basales de la población de pacientes se resumen en la Tabla 1.
De las 92 muestras analizadas FFPE, se identificaron 35 mutaciones y validado en 31 muestras (33,7%). Se detectó una sola mutación en 29,3% de las muestras, y el 4,3% restante tenía dos o más mutaciones. Las 35 mutaciones que fueron validados ocurrieron en cuatro genes, y 19 de estas mutaciones se encuentran en
TP53
(Tabla 2). Las mutaciones fueron validados en los genes
TP53 gratis (20,7%),
MLH1 gratis (8,7%),
KRAS gratis (6,5%), y
CDKN2A gratis ( 2.2%), con el gen supresor de tumores
TP53 Francia el gen más frecuentemente mutado en EOC (20,7% de las muestras). Esta conclusión está de acuerdo con dos informes recientes que demostraron que
TP53
mutaciones son las mutaciones genéticas somáticas más frecuentes en el cáncer de ovario seroso de alto grado [6], [10]. Sin embargo, no hubo correlación entre la presencia de una mutación en el
TP53
gen y pronóstico clínico un total de 46 pacientes. La media libre de la SLE (DFS) fue 20.1 (rango, 4,7-55,4) meses en el
TP53
grupo mutación negativa y 27,9 (rango, 5,1-40,6) meses en el
TP53
grupo de mutación positiva (P = 0,958). La mediana de supervivencia global (SG) fue de 47,9 (15.8-177.4) meses en el primero y 55.0 (37.7-97.1) meses en el último grupo (p = 0,433) (Fig. 1). El análisis de supervivencia entre los
TP53
tipo salvaje y
TP53
tipo mutante obtiene el mismo resultado cuando sólo se incluyen 31 muestras serosas (Fig. 1).
TP53
mutaciones y
MLH1
mutaciones apareció en el adenocarcinoma seroso papilar, y por lo demás
KRAS
mutaciones y
CDKN2A
mutaciones se manifestó sobre todo en el adenocarcinoma mucinoso (tabla 3).
Enfermedad-supervivencia libre y la supervivencia global no son diferentes entre TP53
TP53
grupo mutación negativa y
mutación positiva del grupo. A y B, libre de enfermedad, supervivencia y la supervivencia global en pacientes con EOC totales (n = 46, 36
TP53
mutación (-) frente a 10
TP53
mutación (+)). C y D, Enfermedad-supervivencia libre y la supervivencia global en el adenocarcinoma seroso (n = 35, 27
TP53
mutación (-) vs. serosa 8
TP53
mutación (+) serosa).
a continuación, los 46 pares de muestras de tumores primarios y recurrentes se compararon con el fin de evaluar la tasa de concordancia de mutaciones somáticas. La mayoría de los pacientes mostraron los múltiples metástasis y las muestras de tumores recurrentes ensayados se obtuvieron de la recurrencia local y metástasis a distancia (Tabla 3). Curiosamente, las mutaciones somáticas se produjeron en el único tumor recurrente no se había detectado en este análisis OncoMap de EOC (Tabla 4). Se observó una tasa de concordancia casi el 100% cuando se comparan las mutaciones entre los pares de tumores primarios y recurrentes. El único paciente (caso 12) mostró un
TP53
mutación en la muestra primaria, sin embargo, que no se detectó en la muestra recurrente. Además, la frecuencia de detección de mutaciones fue similar entre tumor primario y recurrente. En otras palabras, las mutaciones somáticas no se vieron afectados por la recurrencia local o metástasis en EOC.
Discusión
OncoMap es una mutación optimizado perfiles de plataforma desarrollada para analizar eficientemente mutaciones en oncogenes y tumorales conocidas genes supresores, muchos de los que son conocidos para predecir la respuesta o la resistencia a las terapias dirigidas [8]. Nuestra versión actual de OncoMap (V.4.4) interroga a 471 mutaciones en 41 genes que son relevantes para el cáncer. La plataforma OncoMap se puede utilizar para analizar el ADN derivado de tanto tejido fresco congelado y las muestras FFPE. La sensibilidad y especificidad de OncoMap eran 93,8% y 100%, respectivamente, en el ADN derivado de tejido fresco congelado, y 89,3% y 99,4%, respectivamente, en derivados de FFPE de ADN [8]. Cuando se utiliza el tejido FFPE, la sensibilidad y la especificidad de OncoMap son comparables con los resultados utilizando tejido fresco congelado. OncoMap no ha sido desarrollado para un tipo específico de cáncer, por lo que tiene la limitación de que contiene muchos genes no ser relevante para una biología específica de cada cáncer. Sin embargo, la más notable ventaja de OncoMap es que permite la detección de cientos de mutaciones de punto de acceso a partir de tejido FFPE a un costo razonable [8]; Por lo tanto, esta tecnología podría hacer más fácil para los médicos para la detección de mutaciones druggable en diversos tipos de cáncer. OncoMap ya se ha sido reportado como un método fiable para la detección de mutaciones somáticas en múltiples tipos de tumores sólidos [7], [9] - [12].
Un estudio se realizó en OncoMap EOC para identificar mutaciones que son druggable con agentes biológicos novedosos. Aunque EOC no se caracteriza por mutaciones genéticas específicas (a excepción de
TP53
, de acuerdo con los datos del TCGA) [6], es necesario investigar las mutaciones somáticas asociados con diferencias en estados de enfermedad. En general, 31 (33,7%) de 92 FFPE tejidos seleccionados utilizando OncoMap tenían mutaciones somáticas. De las muestras de EOC, el 20,7% tenían
TP53
mutaciones, y un menor número de muestras albergadas
MLH1 gratis (8,7%),
KRAS gratis (6,5%), o
CDKN2A gratis (2,2%) mutaciones.
TP53
es un gen supresor tumoral que codifica una proteína que media la apoptosis celular, y la mutación de pérdida de función de
TP53
es una de las características más comunes de los cánceres humanos [13]. Desde el primer mapa completo de la
TP53
tasa de mutación en un grupo homogéneo de pacientes con cáncer de ovario seroso de alto grado, el
TP53 general
tasa de disfunción se acercó al 100% de los 123 pacientes. Patógena
TP53
se identificaron mutaciones en el 96,7% de estas muestras mediante la secuenciación de los exones 2-11 y los límites intrón-exón en el ADN del tumor [14]. De acuerdo con estos resultados publicados,
TP53
fue mutado en 303 de 316 muestras (95,9%) en el estudio TCGA [6]. La frecuencia de
TP53
mutación fue menor en nuestro estudio (20,7%) en comparación a lo reportado en estudios anteriores. Desde OncoMap sólo investiga
TP53
mutaciones en siete loci y no detecta supresión eventos, la tasa más baja de
TP53
mutaciones observadas en este estudio está de acuerdo con los recientes trabajos de TCGA, como se menciona en otro estudio realizó utilizando OncoMap (Fig. 2) [10]. Este estudio OncoMap anterior se llevó a cabo en un conjunto de 203 FFPE en fase avanzada del cáncer seroso de alto grado de las muestras de ovario en el Instituto del Cáncer Dana-Farber, utilizando OncoMap v.3.0. Se utilizó una plataforma mejorada de OncoMap (V.4.4) incluyendo más genes y ensayos y se investigó el perfil de mutación sólo las mujeres coreanas; sin embargo, la mutación somática frecuente de EOC no era distintivo comparando anterior estudio OncoMap (Fig. 2). Numerosos estudios han evaluado la asociación entre el
TP53
mutaciones en el cáncer de ovario y el pronóstico. Nuestros datos no mostraron diferencias en la SSE ni en la SG con respecto a
TP53
estado de la mutación. Aunque ha habido muchos informes de que la presencia de
TP53
mutaciones se asocia con el pronóstico en el cáncer de ovario, ninguna asociación entre el
TP53 mutación y
o supervivencia sin progresión fue encontrado en una cartografía exhaustiva de
TP53
mutación en el presente estudio [14]. Es posible que el bajo número de pacientes con
TP53
mutaciones puede ser insuficiente para detectar diferencias en el pronóstico.
Este estudio V.4.4 OncoMap de las mujeres de Corea reveló la frecuencia similar de
TP53
mutación somática (20,7% vs. 22,7%) y el resultado distintivo de
MLH1
mutación (8,7% frente a 0%) comparando anterior estudio v.3.0 OncoMap realizado en el Instituto del cáncer Dana-Farber.
en este estudio, fue
MLH1 gratis (8,7%), que no se encontró el segundo gen más frecuentemente mutado en EOC mutado en los datos publicados en OncoMap de alto grado cáncer de ovario seroso. mutaciones germinales en genes de reparación, incluyendo
MLH1
,
MSH2
, y
MSH6
, se han identificado en pacientes con cáncer de ovario con cáncer colorrectal hereditario no asociado a poliposis (HNPCC) [15]. Un estudio que incluyó 1.893 mujeres con EOC sugerido que menos del 1% de las mujeres con cáncer de ovario albergan una mutación de línea germinal en los genes HNPCC, y los portadores de mutaciones patógenas tenido una media de edad anterior al momento del diagnóstico de cáncer de ovario, con una mayor probabilidad de un no histología -serous, y un mayor número de familiares con cáncer relacionados con HNPCC [15]. En un meta-análisis, las mutaciones somáticas en el
MLH1
y
se encontraron genes MSH2
ser frecuente en el cáncer colorrectal, además, una mayor prevalencia de mutaciones somáticas en el
MLH1
genes en relación con el
se observó MSH2
de genes en el grupo de Europa [16]. Sin embargo, no existen informes sobre
MLH1
mutaciones somáticas en EOC. Este es el primer informe de la detección de mutaciones somáticas en
Hoteles en MLH1 esporádica EOC; por lo tanto, no hay datos de validación independientes disponibles. Será necesario para interrogar si
MLH1
mutaciones somáticas están asociados con tipos específicos de cáncer de ovario.
KRAS
mutaciones (6,5%) y
CDKN2A
también se detectaron mutaciones (2,2%) en este estudio. Las mutaciones en el
KRAS
gen son una de las anomalías genéticas más frecuentes en el cáncer de ovario, y son más frecuentemente presentes en el carcinoma de una categoría inferior y la Federación Internacional de Ginecología y Obstetricia etapa (FIGO), y en lesiones de un histotype mucinoso [17].
KRAS
mutación se asocia con diferenciación mucinosa, debido a que estas mutaciones también se acumulan en carcinomas mucinosos de otros órganos [18], [19]. Tres pacientes tenían
KRAS
mutaciones, y que dos de ellos tenían tumores malignos mucinosos. Además, recientemente se ha demostrado que los tumores mucinosos de ovario pre-invasivos se caracterizan por 2A dependiente de ciclina inhibidor de quinasa (CDKN2A) y aberraciones vía Ras [20]. Cabe destacar que el paciente con un
CDKN2A
mutación en nuestro estudio también tenía un
KRAS
mutación. Este estudio es el más grande y de mayor resolución análisis de tumores benignos y borderline mucinoso llevadas a cabo hasta la fecha y proporciona un fuerte apoyo para la hipótesis de que estas lesiones son precursores de adenocarcinoma mucinoso de ovario primario.
Se investigaron las mutaciones genéticas en apareado muestras de tumores que inicialmente fueron diagnosticados y recurrentes de 46 pacientes con cáncer de ovario. Muchos oncólogos se han interesado por la heterogeneidad intratumoral, así como la heterogeneidad intertumoral entre muestras de tumores primarios y recurrentes de la misma paciente. Un estudio prospectivo de gran tamaño en el cáncer de mama identificó un cambio en el estado de los receptores de ER en el 10,2% de los pacientes, por PR en un 24,8%, y para HER2 en 2,9%; el interruptor en el estado del receptor llevó a un cambio en el plan de tratamiento subsiguiente para el 17,5% de los pacientes [21]. Los autores, por lo tanto, sugirieron que el tratamiento del cáncer de mama en recaída debe incluir muestras de tejido para identificar los interruptores en la condición de ER, PR, o HER2 en cáncer de mama metastásico o localmente recurrente, lo que puede influir en el tratamiento planificado. De hecho, algunos informes en el cáncer de pulmón han demostrado los patrones de mutación discordantes entre los tumores primarios y metastásicos y una distribución heterogénea del receptor del factor de crecimiento epidérmico (
EGFR
) mutaciones en tumores individuales [22] - [25]. Sin embargo, las mutaciones heterogéneas en
KRAS
y
TP53
son escasos debido a que estas mutaciones están asociadas con la patogénesis precoz de cáncer [26]. En un informe que examina muestras tumorales del Catálogo de mutaciones somáticas en el Cáncer de base de datos (cósmica) y el Centro de Cáncer de Aichi cohorte, no se detectaron patrones de mutación discordantes entre las 77 muestras del sitio primarios y metastásicos pareadas, o entre los 54 pares de tumores primarios y recurrentes [27 ]. Los autores concluyeron que la distribución heterogénea de
EGFR mutaciones
es poco frecuente, pero debido mutante
EGFR
alelos se amplifican selectivamente dentro de los tumores, las muestras analizadas por métodos de detección menos sensibles pueden aparecer erróneamente como heterogénea para
EGFR mutaciones
en el cáncer de ovario, algunos estudios han demostrado la expresión de los genes discordantes o biomarcadores de proteínas en muestras de tejido de cáncer de ovario en recaída primarias y pareadas, según lo medido por análisis inmunohistoquímico [28] -. [30 ]. Recientemente, sin embargo, los datos opuesto ha informado de que no hay nuevas mutaciones surgieron de diagnóstico a la recaída después de la quimioterapia mediante la secuenciación del exoma de diferentes muestras de un paciente, lo que sugiere que las mutaciones que ya están presentes en el tumor primario contribuyeron a la metástasis y la resistencia a la quimioterapia [31]. En nuestro estudio, se observó una tasa de concordancia casi el 100% de las muestras primarias y recurrentes pareadas. Aunque un paciente mostró discordancia, el
se detectó TP53
mutación en la muestra primaria, pero no en la muestra recurrente. Nuestros hallazgos sugieren que estos genes (
TP53
,
MLH1
,
KRAS, España y
CDKN2A
) están involucrados en el desarrollo tumoral precoz, como se mencionó anteriormente .
Este análisis reveló que OncoMap mutaciones somáticas eran raros en EOC.
TP53
mutaciones fueron más comunes, de acuerdo con los datos publicados OncoMap y TCGA, y las mutaciones somáticas en
CDKN2A
,
KRAS
, y
MLH1
eran también detectado, aunque a tasas mucho más bajas. Dado que no había discordancia entre las muestras primarias y recurrentes, no pudimos encontrar la mutación somática específica asociada a la recurrencia del tumor y la metástasis a distancia en el EOC, entre los oncogenes conocidos y genes supresores de tumores. Para entender la biología de la recurrencia del tumor en EOC, son necesarios más estudios, incluyendo las modificaciones epigenéticas o mutaciones adicionales en otros genes. Además, serán necesarios futuros estudios para correlacionar la presencia de
TP53
mutaciones con la actividad biológica y el pronóstico clínico del cáncer. Además, los tipos no serosas del COE deben analizarse, porque los eventos moleculares en esos tipos de cáncer pueden proporcionar una oportunidad para que los tratamientos dirigidos a las mutaciones y las vías específicas. la genética y funcionales mejores estadificación de la enfermedad en el cáncer de ovario harán novela, dirigidos dianas terapéuticas y tratamientos individualizados posible.
Apoyo a la Información sobre Table S1.
OncoMap_4.4C consta de 439 ensayos en 32 reacciones separadas diseñadas para detectar mutaciones en genes que 471 41critical
doi:. 10.1371 /journal.pone.0099451.s001 gratis (DOC)