Extracto
Antecedentes
alfa B-cristalina (CRYAB) es una proteína que funciona como "chaperona molecular" en la preservación de la arquitectura intracelular y la membrana celular. Además, es altamente CRYAB antiapoptótico. CRYAB expresión anormal es un biomarcador pronóstico para el cáncer oral, mientras que sus variaciones genómicas y la asociación con la carcinogénesis nunca han sido estudiados.
Metodología /Encontrar
Por lo tanto, la hipótesis de que
CRYAB
polimorfismos de nucleótido único pueden estar asociados con el riesgo de cáncer oral. En este estudio basado en el hospital, la asociación de
CRYAB
A-1215G (rs2228387), se investigó C-802G (rs14133) y intron2 (rs2070894) polimorfismos con cáncer oral en una población de Taiwán. En total, 496 pacientes con cáncer oral y 992 controles sanos por edad y sexo se genotipo y analizadas. Una distribución de frecuencias significativamente diferentes se encontró en
CRYAB
genotipos C-802G, pero no en A-1215G y genotipos intron2, entre los grupos de cáncer y de control orales. El
CRYAB
C-802G alelo G confiere un mayor riesgo de cáncer oral (
P = 1,49
× 10
-5). Los pacientes portadores de CG /GG a
CRYAB
C-802G eran de menor supervivencia a 5 años y la mayor tasa de recurrencia que los de CC (
P Hotel & lt; 0,05).
conclusión /Importancia
Nuestros resultados proporcionan la primera evidencia de que el alelo G de
CRYAB
C-802G se correlaciona con el riesgo de cáncer oral y de este polimorfismo puede ser un marcador útil para la recurrencia del cáncer oral y la supervivencia la predicción de remisión clínica
Visto:. Bau DT, Tsai CW, Lin CC, Tsai RY, Tsai MH (2011) Asociación de
alfa B-cristalina
Los genotipos con oral de susceptibilidad al cáncer, la supervivencia, y recurrencia en Taiwán. PLoS ONE 6 (9): e16374. doi: 10.1371 /journal.pone.0016374
Editor: Songtao Shi, Universidad del Sur de California, Estados Unidos de América
Recibido: 18 Septiembre, 2010; Aceptado: 18 de diciembre de 2010; Publicado: 7 Septiembre 2011
Derechos de Autor © 2011 Bau et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyado por becas de investigación del Consejo Nacional de Ciencia (NSC 98-2320-B-039-010-MY3) (https://nscnt12.nsc.gov.tw/RS09/Modules/Personal/Personal_Researcher_index.aspx). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer oral, que es una causa principal de muerte y desfiguración en todo el mundo [1] - [4], se ha clasificado en la 4
º cáncer en la población masculina de Taiwán [5]. Hay una necesidad urgente de desarrollar marcadores preoperatorios de rutina para evitar a los pacientes con mal pronóstico después de la cirugía u otro tratamiento y, por otro lado, identificar a los pacientes en riesgo de recurrencia temprana y justificar la disección cervical profiláctica y adyuvante quimiorradioterapia concomitante, así como los que podrían beneficiarse de diversos tratamientos, independientemente de su tamaño del tumor o puesta en escena. Los que se identifican en mayor riesgo de recurrencia del cáncer oral y /o metástasis se debe detectar más temprano y un seguimiento más frecuente para disfrutar de una vida más larga con el desarrollo de marcadores útiles para la predicción del pronóstico.
alfa B-cristalina (CRYAB ) es un miembro de la familia pequeña proteína de choque térmico (sHSP) y una chaperona molecular expresada en diversos tejidos [6], [7]. La evidencia reciente ha establecido que CRYAB presenta no sólo en el ojo, sino también en el corazón, la piel, el cerebro, la médula espinal y los tejidos pulmonares [6], [8]. En los mamíferos, hay tres clases de cristalinas alfa, beta y gamma, cada uno contribuyendo igualmente a la masa total de la lente. A partir de los estudios de proteómica o nivel de proteína, recientemente se ha reconocido que CRYAB puede tener un papel en el desarrollo del cáncer. En 2005, se informa de que
CRYAB
se había reducido regulado a nivel de ARNm a partir de pacientes con cáncer oral en comparación con la mucosa oral normal [9]. Sin embargo, a diferencia de la gran expresión en la mucosa oral normal, los pacientes con negativa o menor CRYAB detectado en sus sitios de tumor tuvieron mejores tasas de supervivencia libre de enfermedad que aquellos pacientes cuyos tumores teñido fuertemente. Por el contrario, se informó de que a partir de un examen de la proteómica en Taiwán, CRYAB fue significativamente hasta reguladas en el tejido primario de pacientes con cáncer oral [10]. En 2010, se informó de resultados similares en un modelo de cáncer oral, los ratones mediante el tratamiento concomitante de 8 semanas con 4-NQO (200 mg /ml) y arecolina (500 mg /ml) [11]. A pesar de las discrepancias planteadas entre los diferentes éticas y poblaciones investigadas, el estado genómica de
CRYAB
y el vínculo entre su genotipo y el resultado clínico son en gran parte desconocidos.
Con el fin de comprender el papel de la genómica
CRYAB
en el cáncer oral, hemos elegido tres polimorfismos de nucleótido único (SNP) de
CRYAB
, a-1215G (rs2228387), C-802G (rs14133), el intrón 2 (rs2070894), y se investigó su distribución genotípica en una gran población taiwanesa cáncer oral. Además, los dos resultados clínicos contribuyen a la mayor tasa de mortalidad del cáncer oral, la metástasis y la recurrencia, se analizaron de sus asociaciones con
CRYAB
genotipos.
Resultados
La características clínicas de los pacientes con cáncer bucal y controles se muestran en la Tabla 1. no se observaron diferencias significativas entre ambos grupos en su edad y sexo, mientras que los pacientes son mucho más altos y expuestos a los factores de riesgo ambientales para el cáncer oral en Taiwán, el tabaquismo, el alcohol hábitos de beber y mascar betel (Tabla 1). Las frecuencias de los genotipos y alelos para el
CRYAB
A-1215G, C-802G, y el intrón 2 para los participantes se muestran en la Tabla 2. Distribución de genotipos de varios polimorfismos genéticos de
CRYAB
C-802G es significativamente diferente entre los grupos de cáncer y de control orales (
P
& lt; 0,05), mientras que los de a-1215G o intrón 2 no fueron significativas (
P
& gt; 0,05) ( Tabla 2). Además, las distribuciones alélicas de la
CRYAB
C-802G (
P
= 1.49 * 10
-5, OR = 1,51, 95% CI = 1,25-1,83), no las de A-1215G (
P = 0,8593
, OR = 0,91, IC del 95% = 0,31-2,62) o intron2 (
P = 0,1366
, OR = 1,16; IC del 95% = 0.95- 1,41), se encuentra que es asociado con la susceptibilidad para el cáncer oral (Tabla 2). Para resumir, el alelo G y GG o CG genotipo de los
CRYAB
C-802G están asociados con el riesgo de cáncer oral y pueden ser biomarcadores para la detección del cáncer oral. Los análisis de restricción basada en PCR representativa de la
CRYAB
polimorfismos C-802G se muestran en la Figura 1.
M: marcador de tamaño de 100 pb de ADN, G /G: enzima homocigoto indigerible, C /G: heterocigoto, y C /C:. homocigoto enzima digerible
Para evaluar el valor pronóstico de
CRYAB
genotipos, las relaciones entre la supervivencia libre de enfermedad , recurrencia, metástasis y
CRYAB
se analizaron los genotipos C-802G. En primer lugar, los pacientes de cáncer oral que llevan el
CRYAB
C-802G CG tenía una tendencia significativa hacia la disminución de la supervivencia libre de enfermedad, y los pacientes portadores de
CRYAB
C-802G GG tenía la menor disease- período de supervivencia libre (Figura 2). El corto libre de la enfermedad puede reflejar principalmente la recidiva local. Más de 80% (30 de 37) de los pacientes que llevan
CRYAB
C-802G GG tenían recurrencia nodal sin una etapa avanzada N (N0-1) en el primer diagnóstico. Curiosamente, los pacientes tendrían frecuente recurrencia y las tasas de tumores primarios segunda altos dentro de los siguientes cinco años. En segundo lugar, en comparación con aquellos con genotipo CC, los pacientes llevar a
CRYAB
C-802G CG o genotipo GG tuvieron una mayor tasa de recurrencia dentro de los siguientes cinco años (
P = 0,228
, OR = 2,08 , IC del 95% = 1,11 a 3,92), pero no una mayor tasa de metástasis (Tabla 3).
el análisis estadístico se realizó mediante la prueba de log-rank.
discusión
el objetivo del estudio fue investigar la asociación de
CRYAB
genotipos y variaciones clinicopathopogical en pacientes con cáncer oral de Taiwán. Recientemente se ha reconocido que la proteína CRYAB puede jugar un papel en el desarrollo del cáncer oral. En la literatura anterior, se informó de que CRYAB fue significativamente sobreexpresado en el tejido primario de pacientes con cáncer oral en Taiwán [10]. En 2010, en una lengua los ratones con cáncer modelo lleva a cabo mediante el tratamiento concomitante de 8 semanas con 4-NQO (200 mg /ml) y arecolina (500 mg /ml) y retirar en las 20 semanas siguientes, las células de los sitios del tumor tuvo una mayor expresión de CRYAB que las células de contrapartida de los ratones tratados con placebo [11]. Sin embargo, también hubo algunos hallazgos desafían esta asociación sobre regulación [9], [12]. Esto puede ser debido a que las diferentes poblaciones de diferentes éticas, los antecedentes genéticos, las culturas y el medio ambiente de exposición fueron investigados. Desde los puntos de vista de los estudios basados en la línea celular, se demostró que la sobreexpresión de CRYAB en las células epiteliales transformadas inmortalizadas humanos mamarias demostró características neoplásicas y el crecimiento luminal y se inhibieron estos cambios cuando la expresión CRYAB fue silenciado utilizando ARN de interferencia [13]. La sobreexpresión de CRYAB en las células epiteliales mamarias humanas también formó carcinomas de mama invasivos en ratones desnudos, factor de crecimiento epidérmico inducido y el crecimiento independiente del anclaje, el aumento de la migración celular y la invasión, y se activa la proteína quinasa /quinasa regulada por señal extracelular activada por mitógenos (MEK /ERK ) vía, lo que sugiere que CRYAB podría considerarse una oncoproteína [14]. Sin embargo, todavía no existe ningún estudio realizado desde el nivel del ADN para investigar el importante papel de
CRYAB
en la carcinogénesis.
Con base en lo anterior evidencia la expresión diferencial, estábamos muy interesados y elegimos el tres SNPs de
CRYAB
, dos en la región promotora (a-1215G y C-802G) y uno en el intrón 2 (intron2), para investigar sus asociaciones con el riesgo de cáncer oral y pronóstico. Hemos encontrado que
CRYAB
C-802G polimorfismo, no A-1215G o intron2, se asoció con un mayor riesgo de cáncer oral (Tabla 2), y la tasa de recidiva local (Tabla 3). Además, los pacientes de cáncer oral que llevan GG o CG en el sitio polimórfico tuvieron una menor tasa de supervivencia a 5 años de los que llevan CC homóloga (Figura 2). Curiosamente, los pacientes portadores de GG a
CRYAB
C-802G fueron registrados a tener recurrencia mucho más frecuentes y segunda tasas primarias. Esto puede indicar que
CRYAB
C-802G podría ser un predicador para la dirección de progresión del cáncer oral. Posiblemente el polimorfismo genético afecta directamente a los patrones diferenciales de la proteína CRYAB, en la expresión y /o niveles funcionales e, indirectamente, los desequilibrios de las funciones normales de otros genes y proteínas relacionadas CRYAB-, que pueden resultar en la carcinogénesis oral. Al mismo tiempo, la alteración de la expresión de proteínas CRYAB en la matriz extracelular puede causar los sutiles cambios en el microambiente cerca del tumor por vía oral primaria, para la recurrencia, pero no para la metástasis. Esto puede estar justificado por el papel de CRYAB en la señalización de la tirosina quinasa, que podrían ser fácilmente alterada en las células cancerosas. La expresión reducida de CRYAB ha informado en primer lugar, que se asocia con un pronóstico negativo en 2003 [15].
Aproximadamente el 10% de la cabeza en fase inicial y pacientes con carcinoma de células escamosas del cuello desarrollar recurrencia locorregional y el 15% y el 25 % desarrollar segundos tumores primarios dentro de los 5 años del diagnóstico inicial [16], [17]. Como enfoques diagnósticos y terapéuticos continúan desarrollándose, la capacidad de predecir con exactitud segundo tumor /recurrencia en pacientes con cáncer primario orales en fase inicial que facilitaría la vigilancia intensiva o intervenciones específicas para los pacientes de alto riesgo y por lo tanto reducir la mortalidad y la morbilidad. En este estudio, los pacientes llevar a
CRYAB
C-802G CG o genotipo GG se encontró que tenían una mayor tasa de recurrencia dentro de los cinco años siguientes, pero no una mayor tasa de metástasis (Tabla 3).
la aparición de segundos tumores primarios puede ser debido a las alteraciones sutiles del microambiente que han sido acumulados para alcanzar el umbral de la tumorigénesis en los pacientes de los genotipos de riesgo, como GG a
CRYAB
C-802G. El estudio funcional de este SNP y cómo la proteína CRYAB interactúa con las proteínas en la matriz extracelular en la carcinogénesis oral también se necesitan más investigaciones. En el futuro, la evidencia colectiva de las cohortes más grandes y diferentes utilizando este SNP puede ayudar a la estadificación del cáncer oral, la predicción de la dirección de resultado, y la estrategia más eficaz e integradora.
Se encuentra en primer lugar, que el SNP en la región promotora de
CRYAB, España C-802G, está asociado con la susceptibilidad del cáncer oral, la recurrencia y la supervivencia libre de enfermedad a 5 años, pero no metástasis. Dado que el mal control locorregional y fácil de recurrencia son las principales causas de los fracasos del tratamiento en la terapia del cáncer oral, los resultados de este estudio puede proporcionar información de guía más predictiva, no sólo para la prevención, pero el cuidado, el tratamiento y el seguimiento de estos pacientes en mayor riesgo de recurrencia del cáncer y la menor tasa de supervivencia a 5 años.
Materiales y Métodos
Estudio de la población y la muestra recogida
Cuatrocientos noventa y seis pacientes con cáncer diagnosticado con orales cáncer fueron reclutados en las consultas externas de cirugía general entre 2005 a 2008 en el hospital de la Universidad médica de China, Taichung, Taiwán, República de China. Las características clínicas de los pacientes incluyen detalles histológicos fueron clasificados y definidos por cirujanos expertos. Todos los pacientes participaron voluntariamente, completaron un cuestionario autoadministrado y proporcionaron muestras de sangre periférica. Número doble de voluntarios sanos no cancerosas como controles fueron seleccionados, haciendo coincidir la edad, el género y algunas indulgencias después del muestreo aleatorio inicial de la Salud Examen de Cohorte del hospital. Los criterios de exclusión del grupo de control incluyen tumores malignos anterior, metástasis del cáncer de otra o de origen desconocido, y cualesquiera enfermedades familiares o genéticos. Ambos grupos terminaron un breve cuestionario que incluía algunas indulgencias y que se grabaron. Nuestro estudio fue aprobado por el Consejo del Hospital de la Universidad Médica de China de Revisión Institucional y el consentimiento informado escrito se obtuvo de todos los participantes.
ensayos de genotipado
El ADN genómico de control del cáncer y la salud oral fueron sujetos preparado a partir de leucocitos de sangre periférica utilizando un QIAamp Blood Kit Mini (flor, Taipei, Taiwán) y tratarse de acuerdo con estudios anteriores [18] - [24]. En resumen, los siguientes cebadores se utilizaron para
CRYAB
A-1215G (rs2228387): 5'-ACCTGTTGGAGTCTGATCTT-3 'y 5'-ATGCACCTCAATCACATCTC-3';
CRYAB
C-802G (rs14133): 5'-TTGACCATCACTGCTCTCTT-3 'y 5'-TTGGCAATGTGACACATACC-3';
CRYAB
intrón 2 (rs2070894): 5'-GTCTAGAAGACTAAGTTAGG-3 'y 5'-AGAGAAGTCACAACTCAAGT-3'; Se realizaron las siguientes condiciones de ciclos: un ciclo a 94 ° C durante 5 minutos; 35 ciclos de 94 ° C durante 30 s, 55 ° C durante 30 s, y 72 ° C durante 30 s; y una extensión final a 72 ° C durante 10 min. Los productos de PCR fueron estudiados después de la digestión con
I
Fau,
Fat I
, y
DPN I
, las enzimas de restricción para A-1215G (corte de 212 pb Un tipo en 67 + 145 pb tipo G), C-802G (corte de 363 pb de tipo G en 85 + 278 pb tipo C), y el intrón 2 (corte de 363 pb de tipo T en el 74 + 339 pb tipo C), respectivamente.
los análisis estadísticos
En nuestro estudio,
o
ólo se seleccionaron aquellos partidos con todos los SNPs de datos (caso /control = 496/992) en el análisis final. Para asegurar que los controles utilizados eran representativos de la población general y para excluir la posibilidad de error de genotipificación, la desviación de las frecuencias genotípicas de
CRYAB
SNPs en los sujetos de control de los previstos en virtud del equilibrio de Hardy-Weinberg fue evaluado mediante la prueba de bondad de ajuste. la prueba de Pearson de dos caras de Chi-cuadrado o la prueba exacta de Fisher (cuando el número esperado en cualquier celda era menos de cinco) se utilizó para comparar la distribución de los
CRYAB
genotipos entre los casos y controles.
El resultado primario fue la supervivencia libre de enfermedad. Los puntos finales fueron: recurrencia local del cáncer y la metástasis. La información de seguimiento estaba disponible para todos los pacientes en el punto de tiempo de 5 años. el tiempo de supervivencia libre de enfermedad se calculó a partir de la fecha del tratamiento hasta el momento de la recidiva, definida como la recurrencia de la enfermedad en el mismo sitio o la detección de metástasis, incluyendo recurrencia en los ganglios linfáticos del cuello. Los genotipos fueron codificados suponiendo una dosis-efecto alelo (CC de tipo salvaje = 0, CG portador heterocigoto del alelo mutado = 1, GG homocigotos portador del alelo mutado = 2). Las curvas de supervivencia libre de enfermedad fueron generados por el método de Kaplan-Meier y verificados por la prueba de log-rank. El nivel de significación se fijó en
P
. & Lt; 0,05