Extracto
molecular de detección en la mucosa lingual y en el tracto gastrointestinal desempeñar una papel en la detección de drogas y toxinas ingeridas. Por lo tanto, los polimorfismos genéticos que afectan la capacidad de iniciar estas respuestas pueden ser críticos para la eficiencia posterior de evitar y /o eliminar las posibles amenazas para el organismo. Mediante el uso de un enfoque de marcado en la región del gusto del receptor de 2R38 (
TAS2R38
) de genes, se investigó toda la variación genética común de esta región del gen en relación con el riesgo de cáncer colorrectal con un estudio de casos y controles en una población alemana (709 controles y 602 casos) y en una población Checa (623 controles y 601 casos). Se encontró que no hubo asociaciones significativas entre los SNPs de los
TAS2R38
gen y el cáncer colorrectal en la República Checa o en la población alemana, ni en el análisis conjunto. Sin embargo, cuando analizamos los diplotypes y los fenotipos se encontró que el grupo no catador tenían un mayor riesgo de cáncer colorrectal en comparación con el grupo de degustación. Esta asociación fue significativa en el límite de la población checa, (OR = 1,28, IC del 95%: 0,99 a 1,67; P
valor = 0,058) y estadísticamente significativa en la población alemana (OR = 1,36; IC del 95%: 1,06 a 1,75; P
valor = 0,016) y en el análisis conjunto (OR = 1,34, IC del 95%: 1,12 a 1,61; P
valor = 0,001). En conclusión, hemos encontrado una asociación entre el fenotipo sugerente sabor amargo humana y el riesgo de CCR en dos poblaciones diferentes de origen caucásico
Visto:. Carrai M, V Steinke, Vodicka P, B Pardini, Rahner N, Holinski-Feder E, et al. (2011) Relación entre la TAS2R38 polimorfismos genéticos e riesgo de cáncer colorrectal: un estudio de casos y controles en dos poblaciones independientes de Origen Europeo. PLoS ONE 6 (6): e20464. doi: 10.1371 /journal.pone.0020464
Editor: Yiqing Song, Brigham & amp; Hospital de la Mujer, y la Escuela de Medicina de Harvard, Estados Unidos de América
Recibido: 28 Febrero, 2011; Aceptado: April 25, 2011; Publicado: June 2, 2011
Derechos de Autor © 2011 Carrai et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este proyecto fue parcialmente apoyado por la Agencia de Concesión de la República Checa: CZ: GACR: GA310 /07/1430, por el área /Noruega Subvenciones económica europea y el presupuesto del estado República Checa mediante el Fondo de Apoyo a la Investigación: A /CZ0046 /2 /0012. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito. No se recibió financiación externa adicional para este estudio
Conflicto de intereses:. EHF y MM son empleados de Genética Médica Centro /Medizinisch Genetisches Zentrum, Munich. Esto no altera la adhesión de los autores a todas las políticas de PLoS ONE en los datos y materiales de uso compartido.
Introducción
El cáncer colorrectal (CCR) es el tercer cáncer más común en el mundo y el segundo en Europa [1], [2]. antecedentes genéticos se cree que desempeñan un papel en la modulación de riesgo individual [3]. El interés principal de la investigación de la susceptibilidad genética de CRC se ha centrado en los genes implicados en el transporte de xenobióticos y en el metabolismo [4], [5], [6], [7] ciclo, la reparación del ADN y la célula [8], [9 ], resistencia a la insulina, la obesidad y los niveles de glucosa [10], y la inflamación [11], [12]. Sin embargo, la posible asociación entre los receptores del sabor amargo, la detección y el riesgo de CCR se ha probado recientemente [13], [14], [15], [16]. El sistema gustativo, desarrollado durante la evolución, es un portero nutricional del cuerpo para determinar qué alimentos deben ingerirse, y que debe ser rechazada como potencialmente perjudiciales. En particular, la capacidad para discriminar sabor amargo se ha desarrollado como una señal de aviso central contra la ingestión de posibles sustancias tóxicas.
TAS2R38, España gen más estudiado que pertenece a esta familia, está implicado en gran medida en la capacidad de degustar los glucosinolatos, una gran familia de compuestos de sabor amargo, que están ampliamente distribuidos en las plantas y en particular en el
Brassica
sp. [17], [18]. La discriminación de sabor amargo puede influir en el consumo de vegetales que contienen estos ligandos y desde una ingesta de vegetales reducida puede aumentar el riesgo de cáncer de colon, capacidad de respuesta individual a los compuestos amargos podría modular el riesgo de la enfermedad [19], [20] [21], [22, ]. Por otra parte, los receptores del gusto amargo codificadas por la familia de genes TAS2R se expresan no sólo en la lengua, sino también en las células del tracto gastrointestinal (GI) [23], [24]. Los receptores del gusto pueden proporcionar, de esta manera, el organismo con dos líneas de defensa contra posibles agentes tóxicos. La primera puede estar en el nivel de sabor de la lengua, evitando la ingestión. La segunda línea de defensa, la detección molecular en el tracto gastrointestinal, podría ser responsable de la detección de drogas y toxinas ingeridas, iniciando de este modo respuestas crítico para la supervivencia. Es decir, el proceso de detección se inicia mediante el envío de mensajes al sistema nervioso para dar lugar a la respuesta apropiada de su neutralización y expulsión [23]. Además, la detección de sabor es un importante sistema para iniciar vías hormonales y /o neuronales que conducen a la regulación de la ingesta de calorías, la secreción de insulina pancreática, y el metabolismo de [23]. Aunque estos sistemas de control fundamentales se han conocido desde hace muchos años, las vías celulares y neuronales que median las respuestas biológicas a luminal estímulos en general, y los estímulos amargos, en particular, siguen siendo poco caracterizado, sin embargo, informes recientes están añadiendo rápidamente nueva información a este muy importante tema [25], [26], [27], [28]
TAS2R38
gen se caracteriza por tres codificación de SNPs no sinónimos (rs713598 - G145C, Ala49Pro;. rs1726866 - T785C, Val262Ala; rs10246939 - A886G, Ile296Val). Estos tres polimorfismos, que son también marcado SNPs y cubren toda la variabilidad genética común del locus del gen, dan lugar a varios haplotipos. Dos de estos haplotipos, Pro-Ala-Val (PAV) y Ala-Val-Ile (AVI) son, con mucho, el más comúnmente encontrado en las poblaciones humanas [29], [30], [31]. Los sujetos que poseen al menos una copia del alelo PAV son significativamente más sensibles a estimulantes del gusto amargos, como el PROP o PTC (fenotipo catador), que los que son homocigotos para el alelo AVI (fenotipo no catador). Desde los distintos fenotipos (catador
vs
no catador) reflejar una funcionalidad del receptor diferencial, la incapacidad para probar compuestos amargos también podría ser un marcador de una alteración de la función de los receptores en GI: los individuos no podrían reaccionar catador más lenta en la eliminación de xenobióticos en el intestino y por lo tanto estar en mayor riesgo de CCR
.
el objetivo de este estudio fue, usando un enfoque de etiquetado, para evaluar la posible correlación entre toda la variabilidad genética común de
TAS2R38 Opiniones y el consiguiente "capacidad de degustación" y el riesgo de CCR en un total de 1203 casos de cáncer colorrectal y 1332 controles de la población alemana y checa, que son conocidos por exhibir una de la mayor incidencia de CCR [32].
resultados
en este estudio de casos y controles se evaluó la variabilidad en el
TAS2R38
gen en un grupo de sujetos de origen caucásico alemán y checo. Los detalles relativos a las principales características de las dos poblaciones de estudio se presentan en la Tabla 1.
las tasas de éxito de Genotipado y de control de calidad
La distribución de genotipos en todos los loci estaban en equilibrio de Hardy-Weinberg en controles, con valores de cuadrados chi no significativas (p & gt; 0,05, datos no mostrados). duplicados de las muestras al azar (8%) también se incluyeron y la concordancia de sus genotipos fue mayor que 99%. La tasa media de las llamadas de los tres SNP fue del 97,9%.
Principales efectos de SNPs genotipo
La distribución de los genotipos y sus odds ratios (OR) para la asociación con el riesgo de CCR se muestran en la Tabla 2. Se evaluaron las RUP por separado y de forma conjunta para las dos poblaciones. Se encontró que no hubo asociaciones significativas entre los SNPs de la
TAS2R38
gen y el CRC ni en la República Checa, en los alemanes, ni en el análisis conjunto.
haplotipo, diplotype y el análisis de fenotipo
La distribución de los principales haplotipos (PAV y AVI) no fue significativamente diferente (p = 0,99) en las dos poblaciones. A pesar de que los haplotipos raros (AAV; PVV; AAI; PVI y PAI) representaron la misma frecuencia acumulada (4%) para ambos grupos, alemán y checo, aparecieron distribuidos de manera diferente según se informa en Figuras suplementarios S1 y S2. Realización de análisis de regresión logística de manera conjunta al alemán y las poblaciones Checa se observó una asociación estadísticamente significativa entre el
TAS2R38
diplotypes y el riesgo de CCR: portadores de la diplotype AVI /AVI presentan un mayor riesgo de CCR en comparación con el PAV /PAV portadoras con un OR de 1,33 (IC del 95%: 1,03 a 1,72; p = 0,027). País de origen y el género no modificó significativamente la asociación observada (p = 0,85 yp = 0,36, respectivamente) como se informa en la Tabla 3.
En la población checa los portadores de la diplotype AVI /AVI presentan una tendencia estadísticamente no significativa a un mayor riesgo de CCR, con una OR de 1,15. (95% IC 0,80 a 1,66; p = 0,44)
En la población alemana se encontró una asociación significativa entre los portadores diplotype AVI /AVI y un mayor riesgo de CCR con un OR de 1,52 (IC del 95% 1.5 a 2.21; p = 0,027) en comparación con los portadores APV /PAV
Finalmente, dividimos todos los diplotypes en dos grupos definidos por su fenotipo. , el catador (APV /PAV; APV /PVV; P _ * /A_ *)) de grupo y la no catador ((AVI /AVI; AAV /AVI) grupo no catadores se asociaron con un mayor riesgo de CCR en el. población alemana (OR = 1,36; IC del 95%: 1,06 a 1,75; p = 0,016). los no catadores también se asociaron con un mayor riesgo en la población checa, aunque no a un nivel estadísticamente significativa (OR = 1,28; IC del 95%: 0,99 -1,67; p = 0,0580. Analizando las dos poblaciones en conjunto la asociación fue más fuerte (OR = 1,34; IC del 95%: 1,12 a 1,61; p = 0,001 (Tabla 4)
Efectos del genotipo SNPs en diferentes estratos de la población
para la población checa hemos realizado estratificar el análisis de la condición de género y el hábito de fumar y también se realizó un análisis utilizando el IMC como factor de ajuste. para la población alemana que no disponemos de datos sobre el tabaquismo y el IMC. en nuestro estudio, no hubo diferencias en las distribuciones genotípicas en los diversos estratos, ni el IMC tenían ningún efecto sobre la asociación.
Discusión
en el presente estudio la variación genética común en
TAS2R38
fue capturado por completo. la enfoque de etiquetado SNP intensiva aplicada proporciona un cierre a un análisis exhaustivo de las asociaciones de riesgo de CCR con variantes polimórficas comunes conocidos para el locus de interés. por otra parte los análisis de haplotipos, diplotype y el fenotipo proporcionar una imagen completa de la variabilidad genética común de la
TAS2R38
gen en relación con el riesgo de CCR.
en este estudio hemos tenido suficiente potencia (más del 80% para un modelo codominante) para detectar OR = 1,30 en alfa = 0,05 para un SNP con un MAF de 0,33 (que es el alelo más raro presente estudió) si se considera solamente la población alemana. Para la población checa que teníamos el mismo poder para detectar asociaciones de OR = 1,27 o superior y poner en común las dos poblaciones que obtuvimos el poder suficiente para detectar las asociaciones más modestas (OR≥1.21).
El presente estudio proporciona interesante pruebas sobre el posible papel de TAS2R38 en el riesgo de CCR. El análisis de los tres SNPs por separado, no se encontró ninguna asociación con el riesgo de CCR. Sin embargo, cuando se analiza la distribución de los principales diplotypes entre los casos y los controles, se encontró que la combinación de AVI /AVI se asocia con un mayor riesgo de CCR. Esta asociación fue más fuerte cuando se considera la población de dos juntas (p para la prueba de la tendencia = 0,007). Los individuos que portan este diplotype se conocen como compuestos amargos "no-catadores", en lugar de "catador". Finalmente hemos considerado el fenotipo no catador contra todos los demás y nos pareció que estaba asociado con un mayor riesgo de CCR en ambas poblaciones, aunque la asociación fue más fuerte en la población alemana que en la República Checa. Esta asociación sugiere que los fenotipos distintos, que reflejan una funcionalidad receptor diferencial en la incapacidad de sabor compuestos amargos, podría ser también un marcador de una alteración de la función de los receptores en GI: individuos no catador podrían reaccionar más lento en xenobióticos eliminando en el intestino y por lo tanto estar en mayor riesgo de CCR.
las posibles limitaciones de este estudio incluyen el relativamente pequeño tamaño de la muestra y las posibles diferencias entre las dos poblaciones seleccionadas, sobre todo en el sentido de posibles factores de confusión tales como la dieta. Sin embargo, podemos excluir con seguridad un papel importante de las diferencias étnicas entre las dos poblaciones. En un estudio reciente Nelis y sus colegas investigaron la estratificación de la población subyacente en Europa muestran que había muy poca, o ninguna, las diferencias en la composición genética de los alemanes y checos [32]. Por otra parte, la República Checa y las poblaciones alemanas también tienen una incidencia de CCR comparables de acuerdo con Globocan [1]. Los hábitos alimentarios y la ingesta de alimentos no son radicalmente diferentes en los dos países (http://faostat.fao.org/site/609/DesktopDefault.aspx?PageID = 609). Sin embargo, encontramos una asociación más débil entre la variabilidad genética de la
locus
y el riesgo de CCR en la población checa. Una explicación puede estar relacionado con factores ambientales (por ejemplo, la dieta, fumar). Una segunda explicación podría ser diferente de la estrategia de la inscripción de los sujetos de estudio desde alemanes tenían una historia familiar de CRC o CRC diagnosticado bajo la edad de 50 años y la media de edad mediana es menor en la población alemana y esto puede reflejar el hecho de la causalidad de tumor podría tener un fuerte componente genético ya que el ambiente tenía menos tiempo para modificar el riesgo de cáncer para estos individuos. También es posible que las interacciones entre genes y el medio ambiente podrían ser la causa de la asociación más débil en la población checa de una manera que no hemos podido detectar dentro de este estudio. Por último, la asociación podría ser un hecho aislado, sino que tendería a excluir este por el hecho de que en las dos poblaciones de la asociación parece indicar el mismo grupo que el aumento de las personas de riesgo.
Las diferencias de género para los sabores amargos tienen ha explorado [33] y por estas razones que llevamos a cabo análisis estratificados en ambas poblaciones. Se encontró que el sexo no era un factor que modifique, en cualquiera de la población.
Se han publicado varios estudios de asociación de genoma completo (GWAS) sobre el riesgo de CCR [34], y en ninguno
TAS2R38
surgió como un posible locus de susceptibilidad. Sin embargo, es interesante observar que la región genómica en la que el
TAS2R38
radica está mal cubierto por los SNP arrays utilizados en publicada CRC GWAS. En particular, rs1726866 y rs10246939 no están presentes en esas plataformas (http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgGateway). Encontramos una asociación mediante el uso de las combinaciones de los tres genotipos en diplotypes, por lo tanto, no es sorprendente que los GWAS, donde dos de los tres SNP eran escasas, y los que no estudian habitualmente haplotipos /diplotypes /fenotipos, no detectó ninguna señal en este locus.
en conclusión, hemos encontrado una asociación entre el fenotipo sugerente sabor amargo humana y el riesgo de CCR en dos poblaciones diferentes de origen caucásico. Se necesita un estudio más amplio e independiente para investigar más a fondo este hallazgo.
Materiales y Métodos
Ética Declaración
Todos los participantes firmaron un consentimiento informado por escrito. El estudio fue aprobado por los comités de ética de las instituciones responsables de reclutamiento de sujetos en cada uno de los centros de reclutamiento
.
escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los participantes del estudio. Los comités de ética fueron los siguientes:
Ethik der Kommission Medizinischen Fakultät der Ruhr Universität Bochum [Reg.-Nr.:1514]; Ethik Kommission - Medizinische Fakultät Bonn [Lfd. Nr. 115/09]; Ethik der Kommission Medizinische Fakultät der Universidad Técnica; Dresde [Bearbeitungs- Nr. EK170102000]; Ethikkommission der Medizinische Fakultät der Universität Düsseldorf Heinrich Heine [Studiennummer: 1172]; Ethikkommission I der Universität - Medizinische Fakultät Heidelberg [Antrags- Nr .: 220/2002]; Ethikkommission II an der Fakultät für Medizin der Klinische Ruprechts-Universität Heidelberg Karl-(relativo a muestras de Mannheim) [Antrags- Nr .: 87/04] Ethikkommission der Universität München Medizinische Fakultät [Projekt Nr. 255/98]; Etická komise Ústravu experimentální Medici AV ČR Comité de Ética del Instituto de Medicina Clínica y Experimental y Hospital de la Facultad Thomayer [C. J. 786/09 (09/04/09)]
Las poblaciones de estudio
En el presente estudio de control de casos que hemos considerado un grupo de sujetos de dos poblaciones: Uno. De República Checa (601 casos, 623 controles) y la otra de Alemania (602 casos, 709 controles).
la población checa ha sido ampliamente descrito en otra parte [7]. En pocas palabras, los casos fueron pacientes con CRC que visitan nueve departamentos oncológicos (dos en Praga, uno en Benesov, Brno, Liberec, Ples, Pribram, Usti nad Labem, y Zlin) distribuidos en todas las regiones geográficas de la República Checa y ser representativa de la población de todo el país. Este estudio incluye pacientes que pudieron ser entrevistados y proporcionaron muestras biológicas de calidad suficiente para el análisis genético. Todos los casos tenían confirmación histológica del diagnóstico del tumor. En el grupo de los casos, las pruebas genéticas para hereditario sin poliposis CRC (HNPCC) se recomendó a cuatro pacientes, que pertenecían a familias que cumplen con los criterios de Ámsterdam II, y se excluyeron estos casos.
Los controles fueron seleccionados entre los pacientes ingresados a cinco grandes departamentos de gastroenterología (Praga, Brno, Jihlava, Liberec, y Pribram) en toda la República Checa, durante el mismo período que el reclutamiento de los casos. Sólo los sujetos cuyos resultados colonoscopia fueron negativos para malignidad, adenomas colorrectales o EII fueron elegidos como controles. Entre 739 controles de invitados, un total de 623 (84,3%) fueron analizados en este estudio (controles perdidos fueron similares a los incluidos con respecto a la distribución por sexos).
Los casos incluidos en este estudio tenían una edad media de 59,2 años (rango 27-74), mientras que los controles tenían una edad media de 55,3 años (rango 28-91).
los análisis genéticos no interferir con los procedimientos de diagnóstico o terapéuticos para los sujetos. Todos los participantes firmaron un consentimiento informado por escrito y el diseño del estudio fue aprobado por el Comité Ético del Instituto de Medicina Experimental, Praga, República Checa.
En la población alemana, como se describe en [35], [ ,,,0],36] los casos de CCR comprendían 602 pacientes índice (rango de edad 13-82 años, con una media de 43,2 años) reclutados por seis hospitales universitarios alemanes (Bochum, Bonn, Dresden, Düsseldorf, Heidelberg y Munich /Ratisbona). Los casos fueron recolectados como parte de un gran estudio sobre la susceptibilidad a HNPCC. Los criterios de inclusión para los casos fueron (i) antecedentes familiares de CCR o (ii) CRC diagnostica menores de 50. Análisis de inestabilidad de microsatélites se aplicó como una prueba de selección previa antes del análisis de mutación en el
MSH2
y
MLH1
genes. Todos los casos fueron evaluados para estar microsatélites estables.
La serie de control consistió en 709 donantes de sangre sanos, no relacionadas y según origen étnico, sexo y grupo de edad (26-64 años, con una media de 44,5 años) que fueron reclutados entre 2004 y 2006 por el Instituto de Medicina de Transfusión e Inmunología, Facultad de Mannheim, Alemania. Los intervalos de coincidencia para la edad fueron 'más joven de 30 años, grupos de cinco años (30-34, 35-39, 60-64, ...) y' más de 65 años '. La extracción de sangre se realizó durante la donación de sangre regulares según las directrices alemanas. El estudio fue aprobado por los Comités de Ética locales competentes, y el consentimiento informado por escrito se obtuvo de todos los individuos.
Los detalles relativos a las principales características de las dos poblaciones de estudio se presentan en la Tabla 1.
Selección de marcado SNPs
encaminado a examinar todo el conjunto de variantes genéticas comunes en
TAS2R38
. Con este fin, seguimos un enfoque híbrido marcado-funcional. Se utilizó el algoritmo descrito por Carlson y compañeros de trabajo [37] que fue desarrollado para seleccionar el conjunto máximamente informativo de etiqueta SNPs en un estudio de asociación del gen candidato. Todos los polimorfismos en la región de
TAS2R38
locus con una frecuencia menor alelo (MAF) ≥5% en caucásicos del Proyecto Internacional HapMap (versión 21a; http://www.hapmap.org) fueron incluidos. SNPs de marcado fueron seleccionados con el uso del programa Tagger dentro Haploview (http://www.broad.mit.edu/mpg/haploview/; http://www.broad.mit.edu/mpg/tagger/) [38 ], [39], utilizando el marcado por pares con un mínimo r
2 de 0,8. Teniendo en cuenta que la región genómica de
TAS2R38
se caracteriza por altos niveles de disquilibrium de ligamiento (LD), se postula que este tipo de SNPs son también propensos a etiquetar cualquier SNPs comunes hasta ahora no identificadas en el gen. Seleccionamos rs713598, rs1726866 y rs10246939 como etiquetado SNPs, ya que son todos funcionales [29], [30], [40], [41], [42], [43], [44], [45] no es sinónimo SNPs .
extracción de ADN y genotipado
se extrajo ADN de muestras de sangre con la digestión de proteinasa K estándar seguido por extracción con fenol /cloroformo y precipitación con etanol. El orden de los ADN de los casos y controles se asignó al azar sobre placas de PCR con el fin de asegurar que un número igual de casos y controles se podría analizar simultáneamente. Todos los genotipos se llevó a cabo utilizando el ensayo de Taqman. Las sondas y cebadores Taqman MGB se compraron de Applied Biosystems (Foster City, CA) como ensayos de pre-diseñadas. La mezcla de reacción incluía 10 ng de ADN genómico, 10 pmol de cada cebador, 2 pmol de cada sonda y 2,5 ml de 2x mezcla maestra (Applied Biosystems) en un volumen final de 5 l. El termociclado incluía 40 ciclos con 30 s a 95 ° C seguido de 60 s a 60 ° C. placas de PCR se leyeron en un instrumento ABI PRISM 7900HT (Applied Biosystems).
Todas las muestras que no dieron un resultado fiable en la primera ronda de genotipado se vuelven a enviar hasta dos rondas adicionales de genotipado. Los puntos de datos que aún no fueron llenadas después de este procedimiento se dejan en blanco.
haplotipo y diplotype reconstrucción
Los haplotipos y diplotypes fueron reconstruidos utilizando el software FASE [46]
Análisis estadístico.
La distribución de frecuencias de los genotipos fue examinada en los casos y los controles. Hardy-Weinberg fue probado en los casos y en los controles y en las dos poblaciones por separado mediante la prueba de chi cuadrado. Se utilizó la regresión logística para el análisis multivariado para evaluar los efectos principales del polimorfismo genético en el riesgo de CCR utilizando un co-dominante y un modelo de herencia dominante. El genotipo más común en los controles fue asignado como categoría de referencia. Todos los análisis se ajustaron por edad y género. En la población checa también ajustado por Max Índice Corporal (IMC) como una variable continua. Se analizaron las dos poblaciones por separado y juntos (ajustamos también para centro de reclutamiento en este último caso).
La regresión logística teniendo en cuenta el haplotipo reconstruida ajustada por edad (continua), sexo y centro de estudio se realizó para calcular el riesgo estimados. El (PAV) haplotipo "catador" se estableció como grupo de referencia. Finalmente creamos diplotypes para cada individuo y se agruparon y los dividimos en dos grupos fenotípicos, el grupo de degustación ((APV /PAV; APV /PVV; P _ * /A_ *) y el grupo no catador (AVI /AVI; AAV /AVI ). para el análisis diplotype el grupo "catador" se estableció como referencia.
también se realizó un análisis estratificado por sexo y hábitos de fumar. los fumadores fueron clasificados como fumadores actuales, ex fumadores (dejar de fumar durante más de 5 años ) o que nunca han fumado. Los fumadores se dividieron posteriormente en los fumadores pesados (más de 20 cigarrillos por día) y los no fumadores pesados (menos de 20 cigarrillos por día). Todos los análisis se realizaron utilizando Statgraphics
®
software XVI Centurion (© 2009 por StatPoint Technologies, Inc.www.STATGRAPHICS.com) y el software STATA (StataCorp, College Station, TX).
Apoyo a la Información
Figura S1.
distribución de los haplotipos en el población checa
doi:. 10.1371 /journal.pone.0020464.s001 gratis (DOC)
figura S2
distribución de los haplotipos en la población alemana..
doi: 10.1371 /journal.pone.0020464.s002 gratis (DOC)