Se ha demostrado
Extracto
Las células madre del cáncer (CSC) para mediar la tumorigenicidad, la quimio-resistencia, radio-resistencia y la metástasis, que sugieren que tener en cuenta los objetivos terapéuticos. Debido a que sus células hijas diferenciadas ya no son tumorigénicas, para inducir la diferenciación de las células madre cancerosas puede ser una de las estrategias que se pueden erradicar células madre cancerosas. Aquí nos muestran que Atoh1 puede inducir la diferenciación de las células madre del cáncer gástrico (GCSCs). PCR en tiempo real y análisis de transferencia Western mostraron que Atoh1 fue inducida durante la diferenciación de GCSCs. Además, la sobreexpresión inducida por lentivirus de Atoh1 en GCSCs y en líneas celulares de cáncer gástrico inducida significativamente la diferenciación, proliferación y formación de esferas reduce, y reduce
in vivo la formación de tumores
en los modelos de inyección y el hígado de xenoinjertos metástasis subcutáneas. Estos resultados sugieren que tener en cuenta Atoh1 para el desarrollo de una terapia de diferenciación para el cáncer gástrico
Visto:. Han ME, Baek SJ, Kim SY, Kang CD, Oh So (2015) Atoh1 puede regular la tumorigenicidad de cáncer gástrico las células mediante la inducción de la diferenciación de las células madre del cáncer. PLoS ONE 10 (5): e0126085. doi: 10.1371 /journal.pone.0126085
Editor Académico: Gianpaolo Papaccio, Segunda Universidad de Nápoles, Italia
Recibido: 3 de septiembre de 2014; Aceptado: March 30, 2015; Publicado: May 7, 2015
Derechos de Autor © 2015 Han et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del papel excepto los datos de secuenciación de ARN que fueron depositados en el repositorio público. (GEO Número de acceso: GSE46597)
Financiación: Este trabajo fue apoyado por el Programa de Desarrollo Bio y Tecnología médica (2012M3A9C6050213) y la investigación científica básica Fundación (2012R1A1A3010521) de la Fundación de Investigación Nacional (NRF), financiado por el gobierno de Corea (MEST) y, una subvención del Plan Nacional de I & amp; D del Programa de control del cáncer, Ministerio de Sanidad, Bienestar Social y Asuntos de la Familia, República de Corea (0920050) . Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
Después de las células madre del cáncer (CSC) fueron inicialmente aisladas de pacientes con leucemia, que habían sido aislados de muchos tipos de cáncer, incluyendo el cáncer gástrico [1,2,3,4,5,6]. CSC se han sugerido para ser una diana terapéutica, ya que pueden mediar en la tumorigenicidad, la quimio-resistencia, radio-resistencia y metástasis [7,8,9]. terapia contra el cáncer convencional principalmente se dirige a la proliferación de células madre cancerosas no, lo que explica la frecuente recurrencia de cáncer [9]. El mal pronóstico de los pacientes con mayor población CSC, también fomenta el desarrollo de terapias que se dirigen a los CAC [10].
Una de las características de los CAC es que pueden diferenciarse en células hijas que ya no son tumorigénicos, por ejemplo, , células madre cancerosas de cáncer de colon y de estómago han sido inducidas a diferenciarse por el suero [5,6]. Esto significa que la hipótesis de CSC difiere fundamentalmente de la hipótesis tradicional de la expansión clonal. Además, la relación jerárquica entre células madre cancerosas y sus células hijas se puede explicar por los mecanismos epigenéticos que se pueden aplicar a las células madre normales [11,12]. Además, el microentorno puede afectar a la diferenciación de las células madre cancerosas [13], y estas características pueden ser explotadas para el desarrollo de la terapéutica
.
En consecuencia, la inducción de la diferenciación es una estrategia que se puede utilizar para erradicar células madre cancerosas. Se han sugerido los reguladores epigenéticos para inducir su diferenciación, por ejemplo, inhibidores de la histona deacetilasa (HDAC) han demostrado inducir la diferenciación de células madre cancerosas en la leucemia que fueron causadas por proteínas de fusión, tales como, AML1-ETO y PML-RAR [14,15 ]. Por otra parte, todo-trans del ácido retinoico (ATRA) puede inducir la diferenciación de células madre cancerosas en la leucemia promielocítica aguda (LPA) a través de los factores C /EBP [16,17], factores de transcripción de tipo salvaje, tales como, la diferenciación C /EBP, pueden inducida en humanos AML y en líneas celulares de cáncer de pulmón y en el ratón
en modelos in vivo [17,18,19,20]. En el cáncer gástrico, la suramina se ha demostrado que induce la diferenciación de líneas celulares de cáncer gástrico humano [21].
Atoh1 es una base hélice-bucle-hélice (bHLH) factor de transcripción homólogo a la atonal Drosophila [22]. Se activa la transcripción dependiente de E caja en colaboración con E47 [23]. HES1, una molécula en la vía de señalización de Notch, puede inhibir su expresión [24]. Knock-out estudios en ratones han demostrado que Atoh1 juega un papel crítico en la generación de neuronas del cerebelo gránulo, las células ciliadas del oído interno, las interneuronas de la médula espinal, las células de Merkel en la piel y las células secretoras intestinales [25]. Curiosamente, Atoh1 se ha asociado con varios tipos de cáncer incluyendo el cáncer de colon [25].
Para el desarrollo de una nueva terapia de diferenciación en el cáncer gástrico, se analizaron los cambios de expresión en los niveles de mRNA durante la diferenciación de células madre del cáncer gástrico células (GCSCs). Se encontró que durante la diferenciación de GCSCs, el nivel de expresión de Atoh1, que es importante para la diferenciación de las células epiteliales intestinales [26,27], se incrementó de manera significativa. Además, la inducción de Atoh1 en las líneas celulares de cáncer gástrico y, en GCSCs redujo significativamente su tumorigenicidad en modelos de metástasis de inyección y el hígado subcutáneos
Materiales & amp.; Métodos
cultivos celulares
tejidos de cáncer gástrico madre del cáncer gástrico se recuperaron después de obtener el consentimiento informado por escrito de los pacientes que fueron sometidos a resección quirúrgica en el Hospital de la Universidad Nacional de Pusan (PNUH) y el Hospital Yangsan Universidad Nacional de Pusan (PNUYH ). El protocolo de estudio fue aprobado por el Consejo Nacional de Pusan-Hospital Universitario de Revisión Institucional (IRB-PNUH) y Yangsan Junta de Revisión Nacional de Pusan Hospital Universitario-Institucional (PNUYH-IRB). Las células madre de cáncer gástrico se cultivaron como se ha descrito anteriormente [6], y fueron inducidas a diferenciarse mediante la adición de 5% de FCS a los medios de comunicación en lugar de factores de crecimiento.
Cultura de líneas celulares de cáncer gástrico
El cáncer gástrico células (snu1, SNU16, SNU216, SNU620, SNU638, NCI-N87) se cultivaron en RPMI 1640 suplementado con 10% de suero bovino fetal (FBS) y 100
g
/ml de penicilina /estreptomicina a 37 ° C en un 5% de CO
2 incubadora humidificada. Estas líneas celulares se obtuvieron a partir de la línea celular de Corea del Banco (Seúl, Corea).
Cultura de 293FT línea celular
se mantuvieron 293FT células en DMEM suplementado con suero bovino fetal al 10% y el MEM 0,1 mM no aminoácidos esenciales (AANE), 1 mM de piruvato de sodio MEM (ambos de Sigma, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE.UU.), 6 mM de L-glutamina (Life Technologies, Grand Island, NY, EE.UU.), y 1% Pen-Strep en un CO 5%
2 incubador humidificado.
secuenciación de ARN y análisis de datos
Biblioteca se preparó usando el kit de preparación de muestras de ARN IlluminaTruSeq y se secuenciaron usando el Illumina Genome analizador IIx (San Diego, CA, EE.UU.) para generar 76 pb final emparejado lee. Secuenciado dice estaban alineados en un genoma de referencia 19 humano usando Tophat 2 [PubMed ID 19289445]. la expresión de ARNm se midió como RPKM (lecturas por Kilobase por millón asignada lee) de mapeado de forma única lee mediante un modelo de RefSeq hg19 y el paquete HTSeq (http://www-huber.embl.de/users/anders/HTSeq/). archivos de cama se produjeron utilizando Tophat 2. Todos los datos de secuenciación de ARN fueron depositados en el repositorio público (GEO número de acceso: GSE46597)
PCR en tiempo real
La extracción de RNA y en tiempo real PCR se llevaron. a cabo utilizando un Poder SYBR Green PCR Master Mix 7500 y un detector de secuencias ABI Prism (ambos de Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.), tal como se describe anteriormente [28]. Las secuencias de los cebadores utilizados (directo e inverso, respectivamente) fueron los siguientes: marcadores de diferenciación; CA1, 5'-TCA GAG CAG CTG GCA CAA TTC CG-3 'y 5'-CCT TCA GAG GTT GGG TTG GGC G-3'; SSTR2, 5'-GGA CCA CAC CCA AAC GTC CG-3 'y 5'-CAG TGT GAC ATC TTT TTT GCT CCG C-3'; CHGA, 5'-ACG AAC CGC AGA CCA GAG GAC C-3 'y 5'-TGT CTC AGC CCC GCC GTA GT-3'; PGC2, 5'-TGG CAC AAC CTG CTC TGT CCG-3 'y 5'-GGA ACT CCA CCA GGT TGC TGA GG-3'; MUC5AC, 5'-TCA CAC GGT CCT GCC CAC AGA G 3 'y 5'-ACC CCT TCT GCA CAG CAG CCC-3'; ATP4B, 5'-GAA AGC CCA CCA CCG CTA CAG C-3 'y 5'-TGC TCC GCC ATG ACC TTG CAC-3'; marcadores stemness; CD44, 5'-CGC GGA TGG CTC CTC TGC GT-3 'y 5'-AGC CTT GCA GAG GTC AGC GG-3'; LGR5, 5'-GAG CTG AAC AAC TCC CTC AG-3 'y 5' CCC GCA AGA CGT AAC TCC TC-3 '; IMC1, 5'-TGG TTG CCC ATT GAC AGC GG-3 'y 5'-AAA AAT CCC GGA AAG AGC AGC CG-3'; y c-Myc, 5'-ACA CCC GAG CAA GGA CGC GA-3 'y 5'-CGC GGG AGG CTG CTG GTT TTC-3'; Atoh1, 5'-CCC CTT CCA GCA AAC AGG TG-3 'y 5'-ACG GGA TAA CAT TGC GCA GC-3'; GAPDH 5'-GAG TCC ACT GGC GTC TTC AC-3 'y 5'-ATG ACG ATG AAC GGG GCA TC-3'. GAPDH se utilizó para normalizar los niveles de entrada de ADNc
Western blot
Western blot se realizó como se describió anteriormente [24], utilizando los siguientes anticuerpos:. Atoh1 (LSBio, Seattle, WA, USA ); CD44, LGR5, ATP4B, CA1, PGC, MUC5AC (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE.UU.); c-Myc, caspasa-3 (Santa Cruz Biotechnology, CA, EE.UU.); caspasa-3 escindida, caspasa-9, se escindió de la caspasa-9 (Cell Signaling Technology, MA, EE.UU.); p21, anticuerpos β-actina (Abcam, Cambridge, MA, EE.UU.) y el anticuerpo secundario conjugado con HRP (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA, EE.UU.).
construcciones lentivirales y la generación de virus activo
Para crear un clon de expresión, se verificó la secuencia viral ORF clones (Atoh1, IOH34744; Life Technologies, Grand Island, NY) en los vectores de entrada de puerta de enlace se transfirieron a pLenti7.3-DEST vector (pLenti7.3/V5-DEST puerta de enlace Kit vector, Life Technologies, Grand Island, NY, EE.UU.) utilizando una reacción de recombinación LR (LR Clonase mezcla de enzimas II, Life Technologies, Grand Island, NY, EE.UU.). Para la transformación, se utilizó One Shot Stbl3 competentes de E. coli (Life Technologies). Después de la co-transfección del clon de expresión y el Packaging ViraPower Mix (Life Technologies) en la línea celular 293FT (Life Technologies) para producir lentivirus, se recogieron los sobrenadantes lentivirales. Estas poblaciones lentivirales se utilizaron para transducir GCSCs y líneas celulares de cáncer gástrico.
colección de virus y la propagación se realizaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Life Technologies). El virus de control se genera en paralelo sin la inclusión de Atoh1.
Construcción de líneas celulares RASSF4-reportero y ensayo de luciferasa
El gluc-ON Promotor Reportero clones, pEZX-PG02 (HPRM11834-PG02 , GeneCopoeia, Rockville, MD, EE.UU.) se utilizaron para construir líneas celulares reporteras RASSF4-luciferasa (NCI-N87 y SNU216 células) y puromicina (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE.UU.) se utilizó para la selección. El lentivirus se ha descrito anteriormente se utilizó para inducir Atoh1. Las actividades de luciferasa se midieron utilizando Secrete-Pair Gaussia luciferasa Kit de ensayo (GeneCopoeia, Rockville, MD, EE.UU.) según las instrucciones del fabricante a 72 horas después de la transducción.
xenoinjerto ensayo
Las células se diluyeron hasta una dosis de inyección adecuado (1x10
6 células), se mezcló con BD Matrigel (BD Biosciences, CA, EE.UU.) a una relación 1: 1, y se inyecta por vía subcutánea en la parte dorsal de cada flanco en la inmunodeficiencia combinada grave (SCID) (n = 5 /grupo). Para minimizar la variabilidad experimental debido a las diferencias individuales en los ratones receptores, las poblaciones celulares que iban a ser comparados fueron inyectados en los flancos opuestos de los mismos animales. Los tumores se recogieron después de 4 semanas y pesos de los tumores se midieron. Para el modelo de metástasis hepática, los ratones SCID se anestesiaron con una inyección intra-peritoneal de combinación de ketamina /xilazina. A continuación, los ratones se practicará una incisión de unos 10 mm en el subcostal izquierdo, el bazo se confirmó en el marco del peritoneo, el peritoneo fue abierto por alrededor de 8 mm y el bazo se expuso sobre el peritoneo. Las células (5x10
4 células /100
l
) se inyectaron lentamente en el bazo de los ratones a través de una aguja de calibre 27 (n = 5 /grupo) y luego el bazo fue devuelto a la cavidad abdominal , se suturó el peritoneo y la herida. 4 semanas después de la inoculación con las células, los ratones se sacrificaron [37]. Este estudio se llevó a cabo en estricta conformidad con las recomendaciones de la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio emitidos por el Instituto Nacional de Salud. Pusan Universidad Nacional-Institucional Cuidado de Animales y el empleo (PNU-IACUC) aprobaron todos los procedimientos experimentales con animales.
La proliferación celular ensayo
Cinco días después de la transducción con lentivirus, 10
l
de pre-mezclado soluble en agua la sal de tetrazolio-1 (WST-1, Roche, Indianapolis, IN, EE.UU.) se añadió a los pozos. Estas células se incubaron entonces durante dos horas y la viabilidad celular se determinó midiendo la absorbancia a 450 nm usando un lector de ELISA (TECAN, Männedorf, Suiza).
Esfera ensayo de formación de
Esferas se disociaron en células individuales y se sembraron en placas de 96 pocillos en volúmenes de 0,2 ml de medios de comunicación. Cada pocillo de la placa de 96 pocillos contenía menos de 10 células. Las células fueron cultivadas y monitoreados durante 5-7 días. Se comparó esferas más grande que 25 micras se contaron usando un microscopio invertido y la eficiencia de la formación de esferas.
Análisis de los datos
El no paramétrico de Mann-Whitney U-test o prueba t de Student (sin pareja comparaciones) se utilizaron para determinar las significaciones de las diferencias entre los valores medios de dos grupos, y el análisis de una vía de la varianza (ANOVA) seguido de comparaciones múltiples de Tukey se utilizó para determinar las significaciones de las diferencias entre los valores medios de tres o más grupos . * Indica un valor de P & lt; 0,05, que fue considerado el criterio de significancia. Los datos fueron analizados utilizando el software SPSS, versión 12.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU.). Los resultados se presentan como medias ± desviaciones estándar.
Resultados
Inducción de Atoh1 durante la diferenciación de GCSCs
La diferenciación de GCSCs por el suero se ha demostrado anteriormente [6]. Para identificar los factores asociados con la diferenciación, se compararon los perfiles de expresión de ARNm de células madre y células en estados celulares diferenciados por secuenciación del ARN. Se indujeron Muchos de los genes supresores de tumores durante la diferenciación (datos no mostrados). Curiosamente, Atoh1, un factor de transcripción esencial para la diferenciación de las células epiteliales intestinales, también se indujo. Para confirmar esta inducción de Atoh1 durante la diferenciación, se examinaron los cambios en el nivel de expresión de Atoh1 por PCR en tiempo real y análisis de Western blot. Encontramos como GCSCs acercaron etapas terminales de la diferenciación, la expresión de Atoh1 aumentó (figura 1).
La diferenciación de GCSCs se indujo mediante la adición de FBS. los niveles de expresión de ARNm se determinaron mediante PCR en tiempo real (A). Los resultados se expresan como la media ± DE de tres experimentos independientes. los niveles de expresión de proteínas se determinaron por Western blot (B).
La sobreexpresión de Atoh1 inducida por la diferenciación de GCSCs
Para determinar el papel de los Atoh1 durante la diferenciación GCSC, que sobreexpresa en GCSCs utilizando lentivirus. Para chequear el estatus de diferenciación, se examinaron los niveles de expresión de diversos marcadores de diferenciación o stemness. En particular, la sobreexpresión de Atoh1 en GCSCs aumentó el nivel de expresión de varios marcadores de diferenciación, pero disminuyó los niveles de expresión de diversos marcadores stemness (Fig 2).
Varios marcadores de diferenciación (A) o stemness (B) eran examinados tras la sobreexpresión de Atoh1 en GCSCs por PCR en tiempo real (a, B) y el análisis de transferencia Western (C). Los resultados se expresan como la media ± DE de tres experimentos independientes. *
P Hotel & lt; 0.01.
A continuación se investigó si Atoh1 podría regular la proliferación o la formación de esferas. Curiosamente, la sobreexpresión de Atoh1 disminuyó significativamente las proliferaciones de varios tipos de líneas celulares de cáncer gástrico y formación de esferas por GCSCs (figura 3).
Barra de escala = 100
micras
. Los resultados se expresan como la media ± DE de tres experimentos independientes *
P
& lt; 0.01.
sobreexpresión Atoh1 redujo
in vivo
tumorigenicidad
Para determinar si Atoh1 puede regular la
in vivo
tumorigenicidad de células de cáncer gástrico, se utilizó un modelo de metástasis de hígado producida por la inyección de células de cáncer gástrico en el bazo (células migran posteriormente a hígado). En particular, la sobreexpresión de Atoh1 redujo significativamente la formación de tumores en el hígado por GCSCs y por células de cáncer gástrico NCI-N87 (Fig 4). Por otra parte, cuando hicimos xenoinjertos subcutáneos, se observaron resultados similares (Figura 4)
.
Después de 4 semanas, se obtuvieron las masas tumorales y sus pesos medidos (C).
Atoh1 aumento de la actividad promotora RASSF4
Para confirmar si la diferenciación de GCSCs por Atoh1 está mediada a través de su actividad transcripcional, hemos examinado la actividad del promotor de un gen diana Atoh1 (RASSF4) usando ensayos de luciferasa [29]. Después de que el promotor RASSF4, que se acopló con el gen lucifease, fue introducido de forma estable en las líneas celulares de cáncer gástrico (NCI-N87 y células SNU216), se examinaron los efectos de Atoh1 sobre la actividad de luciferasa. La transducción con Atoh1 aumentó significativamente la actividad de la luciferasa del promotor de RASSF4. (Fig 5).
El promotor RASSF4 junto con el gen de la luciferasa se introdujo en NCI-N87 y SNU216 células. La transducción con Atoh1 aumentó significativamente la actividad de la luciferasa. Los datos son la media ± SD de tres experimentos independientes *
P Hotel & lt; 0.01.
La participación de la apoptosis y el ciclo celular en las vías de los efectos de Atoh1
informes previos han informado de la apoptosis y el ciclo celular vías están involucrados en los efectos de Atoh1 en tumores en la retina [30] y de colon [25]. Por lo tanto, se examinó si las proteínas relacionadas también están involucrados en los efectos de Atoh1 sobre la proliferación (Figura 3A) y la formación de la esfera (figura 3B) en el presente estudio. El cambio en la proliferación y la formación de esferas podría ser debido a un ciclo más lento celular, un aumento de la tasa de apoptosis, o ambos.
Encontramos la transducción con Atoh1 aumentó el nivel de escindido con la caspasa-3 y caspasa-9 en GCSCs y líneas celulares de cáncer gástrico (figura 6), lo que sugiere que la vía de apoptosis intrínseca podría estar involucrado. Por otra parte, también encontramos la sobre regulación de p21 en Atoh1 sobreexpresión (figura 6).
Total y formas escindidos de caspasa 3 y 9 fueron examinados 2 días después de la transducción con Atoh1 en las células NCI-N87, SNU216 células y GCSCs. La escisión de la caspasa 3 y 9, sobre regulación de p21 se observó en las células Atoh1-sobreexpresado.
Discusión
En el presente estudio, mostramos que Atoh1, un factor de transcripción HLH , puede inducir la diferenciación de GCSCs, y esto conduce a una pérdida de tumorigenicidad. sobreexpresión Atoh1 se ha demostrado previamente para inducir la diferenciación de células madre intestinales en células secretoras [24], y en ratones Atoh1-null, células secretoras no se han generado en el intestino [26]. Este efecto de la Atoh1 en la diferenciación también se ha observado en células de cáncer colorrectal, en la que actuó como un supresor de tumores. Por otra parte, en aproximadamente el 70% de los cánceres colorrectales, se ha informado de su expresión a ser afectado por mecanismos genéticos y epigenéticos [25,31]. En células de cáncer colorrectal, Atoh1 sobreexpresión reduce la proliferación y el crecimiento en agar blando y xenoinjertos [31], y la supresión de Atoh1 mejorada tumorigenicidad en ratones [25]. Estos resultados sugieren colectivamente que Atoh1 se puede utilizar como una terapia de diferenciación para los cánceres gastrointestinales.
En contraste con su efecto sobre la diferenciación, Atoh1 puede promover la proliferación de células progenitoras y la formación de tumores. Durante el desarrollo del cerebelo de ratones, se encontró Atoh1 para iniciar el programa de diferenciación de los precursores de gránulos de neuronas del cerebelo en una etapa temprana (P0). Sin embargo, en una etapa posterior (P5), que promovió la proliferación de precursores de [32,33,34]. eliminación Atoh1 en P0, inhibió fuertemente la diferenciación, pero su eliminación en una etapa posterior dio lugar a la salida del ciclo celular y la diferenciación [35]. Estos diferentes roles de Atoh1 en las diferentes etapas pueden explicarse por diferentes targetomes [35]. Atoh1 promovió la formación de meduloblastoma junto con la vía de señalización hedgehog Shh [36,37]. Además, se encontró su expresión significativamente elevados en el adenocarcinoma mucinoso, el carcinoma de anillo de sello y tumores neuroendocrinos intestinales [38]. Por lo tanto, para ser capaz de utilizar Atoh1 para la terapia de diferenciación, sus objetivos directos que inducen la diferenciación necesitan ser identificados.
A pesar de que los estados de expressional Atoh1 se han reportado en la mucosa gástrica normal y en el cáncer gástrico, sus funciones son mal caracterizado. Atoh1 se expresa en células epiteliales gástricas humanas normales a niveles bajos [39,40], pero su expresión no se observó en las células epiteliales gástricas normales en el estómago de ratón [26]. Además, el ratón y la mucosa gástrica humana metaplásico mostraron expresión Atoh1 [41], pero su expresión no se observó en líneas celulares de cáncer gástrico, incluyendo MKN74, MKN45, KATOIII, y HSC58 [40]. En algunos pacientes con cáncer gástrico, que se sobreexpresa [39]. Sus papeles fisiopatológicos nunca han sido exploradas en el cáncer gástrico. En el presente estudio, encontramos que la inducción de la expresión Atoh1 puede reducir la proliferación, invasión, y la tumorigenicidad de células de cáncer gástrico. También encontramos la posible implicación de p21 y vía de la apoptosis en los efectos de Atoh1.
Nuestras observaciones sugieren la posibilidad de que el gen Atoh1 debe ser visto como objetivo potencial para el tratamiento del cáncer gástrico. Las moléculas pequeñas que inducen su expresión terapia o de genes utilizando células de virus o madre podrían ser desarrolladas. En particular, Atoh1 se encontró para inducir la diferenciación de células madre de cáncer gástrico, y por lo tanto, agentes terapéuticos dirigidos Atoh1 podrían ser capaces de erradicar las células madre de cáncer.