general
Extracto
Los microARN son los ARN no codificantes que regulan múltiples procesos celulares durante la progresión del cáncer. Entre varios microARN, miR-630 se ha identificado recientemente estar implicados en muchos procesos críticos en tumores malignos humanos. El objetivo fue investigar la importancia y el valor pronóstico de miR-630 en el cáncer gástrico humano. Se recogieron muestras de cáncer gástrico y normales adyacentes de 236 pacientes de que no habían recibido quimioterapia neoadyuvante. La expresión de miR-630 se investigó mediante un ensayo cuantitativo en tiempo real PCR y su asociación con la supervivencia global de los pacientes se analizó por análisis estadístico. nivel de expresión miR-630 fue significativamente elevado en el cáncer gástrico en comparación con los especímenes normales adyacentes. También se ha demostrado que la expresión de miR-630 iba a ser asociada con la invasión gástrica cáncer, metástasis en los ganglios linfáticos, metástasis a distancia y el estadio TNM. Además, el análisis de supervivencia demostró que la expresión elevada miR-630 estaba asociado con una pobre supervivencia global de los pacientes. El análisis multivariado de la supervivencia también demostró que el miR-630 fue un marcador pronóstico independiente Al ajustar por factores pronósticos conocidos. El presente estudio demostró la sobreexpresión de miR-630 y su asociación con la progresión tumoral en el cáncer gástrico humano. También proporcionó la primera evidencia de que la expresión de miR-630 era un factor pronóstico independiente para los pacientes con cáncer gástrico, lo que podría ser un biomarcador potencial valioso para el cáncer gástrico
Visto:. Chu D, Zhao Z, Y Li, Li J, Zheng J, Wang W, et al. (2014) El aumento de la expresión de microARN-630 en el cáncer gástrico se asocia a peor supervivencia global. PLoS ONE 9 (3): e90526. doi: 10.1371 /journal.pone.0090526
Editor: Alfons Navarro, Universidad de Barcelona, España |
Recibido: 14 Septiembre, 2013; Aceptó 3 de febrero de 2014; Publicado: 12 Marzo 2014
Derechos de Autor © 2014 Chu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por becas de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Nº 81201927, 81272204 y 31270812) y la Fundación de Ciencias de China Postdoctoral (núm 2012M521862). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer gástrico es una de las enfermedades malignas más comunes en todo el mundo [1]. El pronóstico del cáncer gástrico es pobre y los pacientes se diagnostica generalmente en una fase bastante avanzada en la mayoría de los países [2], [3]. Por lo tanto, la tasa de supervivencia global a los 5 años es de aproximadamente 40%, y la de los pacientes con metástasis a distancia es inferior a 5% [4] - [8]. Aproximadamente 700.000 pacientes con cáncer gástrico mueren anualmente, por lo que es la segunda causa más común de muerte por cáncer en todo el mundo. Los datos mostraron que la tasa bruta de mortalidad de cáncer gástrico fue de 25,2 por 100.000 (32,8 por 100.000 en hombres y 17,0 por 100.000 en mujeres) [1]. Sin embargo, existen notables variaciones geográficas en la incidencia de cáncer gástrico para los países orientales como China y Japón tienen tasas más altas de cáncer gástrico que en los países occidentales [9], [10]. En China, el cáncer gástrico es el segundo cáncer más frecuentemente diagnosticado y la tercera causa de muerte por cáncer, con un estimado de 464 439 nuevos casos y 352 315 muertes por cáncer en 2008. La tasa de incidencia global estimada ajustada por edad en 2008 fue de 29,9 por cada 100.000 habitantes la gente en china [9]. Por lo tanto, el cáncer gástrico sigue siendo un problema importante en todo el mundo a pesar de una disminución de la incidencia no sólo en los países occidentales, sino también a China.
Los microARN (miRNA) son una clase de muy conservadas,, pequeñas moléculas de ARN no codificantes de cadena sencilla, que son conocido como reguladores endógenos de la expresión del gen post-transcripcional regulación de la expresión a través de la represión de traducción y ARN mensajero división [11]. Ellos pueden inhibir la expresión génica a nivel postranscripcional por su unión a la región no traducida 3 'de los ARNm diana puede dar lugar a la degradación del ARNm o inhibición de la traducción, en función del grado de apareamiento de bases complementarias [12], [13]. Ha sido ampliamente aceptado que miRNAs juegan papeles fundamentales en diversos procesos biológicos, incluyendo el desarrollo, la proliferación celular, la diferenciación, la apoptosis y el metabolismo [14]. La evidencia acumulada sugiere también que miRNAs participan en la angiogénesis tumoral, la invasión y la metástasis de tumores malignos humanos [15]. miARN expresión aberrante se ha asociado con la oncogénesis, y algunos miRNAs actuar como supresores de tumores, mientras que otros como oncogenes, en función de sus objetivos, que puede ayudar a determinar el diagnóstico y pronóstico de tumores malignos humanos [16]. Recientemente, evidencias han demostrado que la expresión de miRNAs está desregulado en varios tipos de tumores malignos humanos, tales como cáncer gástrico, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, cáncer de páncreas y leucemia linfocítica crónica [17] - [19]. En el cáncer gástrico humano, múltiples miRNAs con la expresión aberrante se han identificado, por ejemplo, el miR-21, miR-22, miR-23, miR-127, miR-148, miR-202 y miR-433, que jugaron oncogénico o supresora papel [20] - [25]. Estos resultados indican que los miRNAs pueden desempeñar diversos papeles cruciales y en tumores malignos humanos incluyendo el cáncer gástrico. Sin embargo, el perfil de expresión de miRNAs es altamente tejido y el tipo específico de cáncer y miRNA específico, lo que demuestra la importancia funcional y clínica de un miARN específico puede proporcionar información clínicamente relevantes en función de miRNA y la gestión eficaz contra el cáncer [12], [15]. Por lo que sabemos, hasta ahora, el significado clínico y pronóstico de la expresión de miR-630 en el cáncer gástrico no se ha informado todavía.
En el presente estudio, hemos investigado el nivel de expresión de miR-630 en la clínica gástrica muestras y tejidos normales adyacentes, así como analizar su asociación con la supervivencia global de los pacientes.
Materiales y Métodos
pacientes y muestras
el presente estudio ha sido aprobado por la Comité de ética de la Cuarta Universidad médica Militar. Todos los miembros implicados han dado su consentimiento informado por escrito. especímenes de cáncer gástrico frescas clínicos y tejidos normales adyacentes fueron recogidos de 236 pacientes que se sometieron a cirugía entre enero de 2007 y diciembre de 2008 en el Hospital Xijing de Enfermedades Digestivas, Cuarta Universidad Médica Militar. Ninguno de estos pacientes habían recibido quimioterapia antes de la cirugía. Además, se tomaron muestras de tejido normal de 18 pacientes que se sometieron a cirugía por razones distintas de la malignidad como muestras de control normal. La histomorfología de todas las muestras de tejido fueron confirmados por el Departamento de Patología de la Cuarta Universidad Médica Militar. Las muestras se pusieron inmediatamente en N líquido
2 después de la resección quirúrgica para 10 min, a continuación, en un -70 ° C ultra-congelador para el aislamiento de mRNA. la información clínica de los pacientes, tales como la edad, el sexo, el estado de diferenciación y el estadio TNM, se recogió y se almacena en una base de datos. Seguimiento completo fue puesto a disposición durante al menos 5 años. La supervivencia global se define como el tiempo transcurrido desde la cirugía hasta la muerte de los pacientes con cáncer gástrico. La información de seguimiento de todos los participantes se actualiza cada tres mes a las cartas visita telefónica y el cuestionario. La muerte de los participantes se determinó mediante la presentación de informes de la familia y verificado por la revisión de los registros públicos.
Cuantitativo PCR en tiempo real
ARN total fue purificado de todo el cáncer gástrico 236 y búsqueda de especímenes normales adyacentes por el fabricante utilizando el reactivo Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.). Sólo las muestras de ARN total con relación OD A260 /A280 cerca de valor de 2,0, lo que indica que el ARN es puro, se analizaron posteriormente. El ADNc específica de control interno de miR-630 y RNU44 se sintetizaron a partir del ARN total usando cebadores específicos del gen de acuerdo con el protocolo de ensayos TaqMan microARN (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.). Los productos de transcripción inversa se amplificaron y se detectaron por PCR en tiempo real utilizando Taqman MicroARN ensayo (Applied Biosystems) específico para HSA-miR-630. Cada muestra se examinó por triplicado y los datos en bruto se presenta como la cuantificación relativa de la expresión de miR-630 evaluadas por el método de ciclo umbral comparativo (CT), normalizada con respecto a RNU44. La media normalizada de expresión de miR-630 ± desviación estándar (SD) se calculó a partir del análisis por triplicado. PCR en tiempo real se realizó utilizando un sistema ABI 7500 (Applied Biosystems) y comparativo 2 Análisis
-ΔΔCt se realizó utilizando el software SDS 2.2.2 (Applied Biosystems).
Análisis estadístico
Las asociaciones entre la expresión de miR-630 y clinicopathological características se analizaron mediante la prueba de Mann-Whitney y Kruskal-Wallis, según el caso. Las curvas de supervivencia se estimaron utilizando el método de Kaplan-Meier y las diferencias en las distribuciones de supervivencia se evaluaron mediante la prueba de log-rank. modelo de riesgos proporcionales de factores potencialmente relacionados con la supervivencia de Cox se realizó con el fin de identificar los factores que podrían tener una influencia significativa en la supervivencia, y de controlar por edad, género y estado de diferenciación. Las diferencias con un
valor de P Red de 0,05 o menos fueron considerados estadísticamente significativos.
Resultados
miR-630 de expresión detectado en el cáncer gástrico
el ensayo de PCR en tiempo real, 236 casos de cáncer gástrico, búsqueda de especímenes normales adyacentes y 18 casos de muestras de control normales se investigaron. Se encontró que la expresión relativa de miR-630 normalizaron a RNU44 en el cáncer gástrico ser 8,51 ± 1,63 (media ± DE), mientras que en el juego normal adyacente fue de 3,25 ± 0,63. Resultados estadísticos demostraron que la expresión de miR-630 en el cáncer gástrico fue significativamente más alta que en las muestras de control adyacentes y normales (
P
& lt; 0,05). Estos resultados indicaron que el miR-630 podría desempeñar un papel oncogénico en el cáncer gástrico. Para facilitar un análisis más detallado sobre la asociación entre el miR-630 expresión y las características clínicas, hemos definido manualmente cáncer gástrico con miR-630 expresión inferior a 3,88 (media ± expresión SD de miR-630 en muestras adyacentes) tan bajo miR-630 expresión del grupo, mientras Las muestras con expresión de miR-630 no inferior a 3,88 se define como grupo de alta expresión de miR-630. De este modo, entre los 236 casos de cáncer gástrico, 98 casos fueron asignados al grupo de baja expresión, mientras que 138 casos fueron asignados al grupo de alta expresión.
Relación de miR-630 con las características clinicopatológicas del cáncer gástrico
a medida que nuestra investigación demostró que la expresión de miR-630 se incrementó en el cáncer gástrico, lo que indica que el miR-630 podría actuar como un papel oncogénico en el cáncer gástrico. Además, investigó la asociación de la expresión de miR-630 con características clínico-patológicas de los pacientes para explorar su posible papel en la progresión del cáncer gástrico. Análisis estadístico Los resultados, mostraron en la Tabla 1, demostró que el aumento de expresión de miR-630 se asoció con avanzada invasión del cáncer gástrico desde una alta expresión de miR-630 fue más frecuencia para ser detectado en tumores T3 y T4 (
P = 0,007
). En cuanto a la metástasis tumoral se consideró, la expresión elevada miR-630 estaba relacionada con ganglios linfáticos positivos y metástasis a distancia para alta expresión de miR-630 fue más frecuencia para ser detectados en los tumores con ganglios linfáticos positivos (
P
& lt; 0,001) o metástasis a distancia (
P
= 0,002). Además, cuando medimos las características clínicas de los pacientes por el sistema de estadificación TNM, se encontró que la expresión de miR-630 se asoció significativamente con el estadio TNM del cáncer gástrico debido a la alta expresión de miR-630 era más probable que se detecten en los tumores en estadio TNM avanzada (
P Hotel & lt; 0,001). Estos resultados sugieren que miR-630 podría desempeñar un papel oncogénico en la progresión del cáncer gástrico. Sin embargo, no se encontró la ración positiva de miR-630 que se asocia con el género de los pacientes (
P = 0,788
), la edad (
P = 0,471
), el estado de diferenciación (
P = 0,890
), sitio del tumor (
P = 0,835
) o clasificación de Lauren (
P = 0,160
).
La relación de miR 630 de la supervivencia global de los pacientes 'con cáncer gástrico
Durante todo el período de seguimiento, 130 de los 236 pacientes (55,1%) con cáncer gástrico habían muerto y el tiempo de supervivencia global media de todos los pacientes reclutados fue 48 meses. Se aplicó el análisis de Kaplan-Meier para examinar el valor pronóstico de la expresión de miR-630 a la supervivencia global de los pacientes con cáncer gástrico. Los resultados demostraron que los pacientes con cáncer gástrico de alta expresión de miR-630 tendían a tener una peor supervivencia global (log rank test:
P Hotel & lt; 0,001, Figura 1). El tiempo medio de supervivencia de los pacientes con baja expresión de miR-630 no puede estimarse, puesto que más del 50% de los pacientes sobrevivieron durante el período de seguimiento. Mientras que el tiempo medio de supervivencia postoperatoria de los pacientes con alta expresión de miR-630 fue de 34 meses (IC del 95%: 28,2-39,8). Cuando hazard ratio no ajustado (HR) se consideró con baja expresión de miR-630 como referencia (1.00), los pacientes con cáncer gástrico de alta expresión de miR-630 tenían un 2,28 veces mayor riesgo de muerte (IC del 95%: 1,57 a 3,32;
P Hotel & lt; 0,001). Por lo que se consideraron las características clínico-patológicos, metástasis a los ganglios linfáticos (log rank test:
P
= 0,002), metástasis a distancia (log rank test:
P Hotel & lt; 0,001) y el estadio TNM (log rank test:
P Hotel & lt; 0,001) fueron también demostrado estar asociados con la supervivencia global ya que los pacientes con cáncer gástrico de metástasis en los ganglios linfáticos, metástasis a distancia o grado avanzada tienden a tener peor supervivencia global y el mayor riesgo de muerte. Sin embargo, el género (log rank test:
P = 0,168
), la edad (log rank test:
P = 0,572
) estado de diferenciación (log rank test:
P =
0,156), sitio del tumor (log rank test:
P = 0,632
) o clasificación de Lauren (log rank test:
P = 0,573
) no tenían valor pronóstico en la supervivencia global de los pacientes con cáncer gástrico .
a medida que el miR-630 expresión se demostró que se asocia con la supervivencia global de los pacientes en el análisis de supervivencia univariante, se investigó más a fondo si el miR-630 podría servir como un marcador pronóstico independiente para los pacientes con cáncer gástrico. Debido a que la metástasis de los ganglios linfáticos y la información de metástasis a distancia se incluyen en los datos estadio TNM, se realizó un modelo de riesgos proporcionales de Cox, que se ajusta según el sexo, la edad y el estadio TNM. Los resultados mostraron que el HR ajustado del grupo alto expresión de miR-630 fue 3,51 (IC del 95%: 1,83 a 6,72;
P Hotel & lt; 0,001). Estos resultados demostraron que el miR-630 era un factor pronóstico independiente de la supervivencia global de los pacientes con cáncer gástrico. Por lo tanto, el aumento de expresión de miR-630 podría ser un indicador de la supervivencia general pobres y sin consideración de la edad, el sexo o el estadio TNM (Tabla 2).
Discusión
De acuerdo con estudios recientes, más de 1.900 miRNAs humanos se han identificado, que se estiman para regular más del 60% de los genes en los mamíferos [26]. Debido a su gran importancia en la regulación de la expresión génica, que ha sido ampliamente aceptado que los miRNAs están involucrados en varias funciones celulares incluyendo la proliferación, la apoptosis y la diferenciación, por lo tanto, se han implementado en diversos procesos fisiológicos y patológicos que van desde el desarrollo de cáncer [27 ] - [29]. investigación encuestados anteriores perfiles de expresión de los genes miARN en que el cáncer no microcítico de pulmón de células etapa para identificar patrones que podrían predecir la recurrencia después de la resección quirúrgica se encontró que el miR-630 fue uno de los más comúnmente miARN entre los 1.000 clasificadores identificadas [30]. Otro estudio sobre de pulmón de células no pequeñas encontró que miR-630 podría regular la muerte celular de cáncer inducida por cisplatino, indicando miR-630 era un modulador potencial de la respuesta de cisplatino en el cáncer de pulmón de células no pequeñas [31]. MiR-630 también fue encontrado para ser aumentada en la cabeza y el carcinoma de células escamosas del cuello después del tratamiento con cisplatino y puede modular la expresión de la proteína de ATG5, ATG6 /BECN1, ATG10, ATG12, ATG16L1 y UVRAG [32], [33]. Un estudio reciente demostró que la regulación positiva de miR-630 en las células de cáncer de páncreas podría inducir apoptosis por la orientación de IGF-1R [34]. Desde miRNAs individuales en diferentes tipos de cáncer pueden tener un gran número de diferentes objetivos de genes, por lo tanto, tienen diferentes funciones en diversos tumores malignos. Por lo tanto, el descubrimiento funcional de miRNAs individuales puede permitir visión más profunda de la regulación de la expresión y la complejidad de la progresión del cáncer de genes.
Expresión de miR-630 ARNm
En el presente estudio, hemos investigado por el ensayo de PCR en tiempo real en 236 casos de cáncer gástrico de los pacientes que no habían recibido quimioterapia neoadyuvante. cálculo de la expresión relativa basada, se analizó la asociación de miR-630 con características clínico-patológicas, así como el pronóstico de los pacientes. Los resultados mostraron que la expresión de miR-630 se incrementó en el cáncer gástrico en comparación con la de los tejidos de control adyacentes y normales para alta expresión de miR-630 era más probable que se detecte en especímenes de cáncer gástrico, lo que indica su posible participación en la carcinogénesis. También se encontró que la expresión de miR-630 estaba estrechamente relacionada con la invasión gástrica cáncer, metástasis ganglionares, metástasis a distancia y el estadio TNM para alta expresión de miR-630 fue más frecuente para ser detectada en los tumores con invasión profunda, metástasis de ganglios linfáticos, distante metástasis o el estadio TNM avanzada, lo que sugiere la posible participación de miR-630 en la invasión y la metástasis del cáncer gástrico. Junto con la evidencia anterior, se propone por lo tanto que el miR-630 puede desempeñar un papel importante en la carcinogénesis y la progresión del cáncer gástrico.
A medida que se encontró la expresión de miR-630 que se asocia con la invasión y la metástasis del cáncer gástrico, teniendo en cuenta la invasión de cáncer a los tejidos vecinos y metástasis a los tejidos distales son factores cruciales que afectan el pronóstico de los pacientes, el miR-630 podría ser un marcador pronóstico potencial para los pacientes con cáncer gástrico. Con el fin de investigar el papel pronóstico de miR-630 en el cáncer gástrico, se realizó un análisis de Kaplan-Meier de la supervivencia global. Los resultados mostraron que los pacientes con cáncer gástrico de alta expresión de miR-630 tienden a tener peor supervivencia global en comparación con los pacientes con tumor de baja expresión de miR-630, lo que sugiere que la expresión de miR-630 fue un marcador pronóstico de los pacientes con cáncer gástrico. A fin de evaluar el valor pronóstico de miR-630 en el cáncer gástrico, se realizó de riesgos proporcionales de Cox modelo que se ajustó para el género, la edad y el estadio TNM de los pacientes. Resultados demostraron que el aumento de expresión de miR-630 era un marcador de mal supervivencia global independiente de los factores ajustados, por lo tanto, miR-630 se podría utilizar para determinar el pronóstico de los pacientes con cabo teniendo en cuenta el estadio TNM. Estos resultados indicaron que el miR-630 podría constituir un aditivo marcador pronóstico molecular para el estadio TNM para los pacientes con cáncer gástrico, la identificación de individuos de alto riesgo que son más propensos a tener recidiva tumoral en la práctica clínica, por lo tanto, buenos candidatos para recibir un tratamiento más agresivo. Estos resultados están en consonancia con las investigaciones se centraron en el cáncer de pulmón de células no pequeñas, lo que indica la consistencia de la función de miR-630 en este tipo de tumor. Por lo tanto, la relación positiva entre el miR-630-expresión y de mal pronóstico puede no sólo ser utilizado para identificar a los pacientes con cáncer gástrico con un mayor riesgo de recidiva tumoral temprano, pero también para proporcionar pistas valiosas para comprender el posible mecanismo de invasión del cáncer gástrico y metástasis.
en conclusión, hemos demostrado que el miR-630 expresión se incrementó en el cáncer gástrico y se asocia con la progresión del tumor. El presente estudio también demostró por primera vez que la expresión de miR-630 era un factor pronóstico independiente de los pacientes con cáncer gástrico. Por lo tanto, es posible que miR-630 puede jugar un papel importante en la invasión y la metástasis de cáncer gástrico. También es posible que el miR-630 sirve como marcador de pronóstico en la práctica clínica, e incluso la inhibición de miR-630 utilizando inhibidores específicos pueden convertirse en un nuevo método terapéutico para el tratamiento del cáncer gástrico.