Extracto
Nuevas evidencias sugieren que DNAM-1 (CD226) juegan un papel importante en el reconocimiento de las células tumorales y su lisis por los linfocitos T citotóxicos ( CTL) y células NK. Aunque el DNAM-1 CD155 ligando se expresa de forma ubicua en diversos tejidos, muchos tumores humanos upregulate significativamente la expresión de CD155; DNAM-1 en las células CTL y NK puede estar implicada en la inmunidad tumoral. Sin embargo, a diferencia de los de los ratones, los tejidos humanos también expresan isoformas solubles de CD155 (sCD155) que carecen de la región transmembrana. Aquí, se muestra que los niveles de sCD155 fueron significativamente mayores en los sueros de 262 pacientes con cáncer de pulmón, gastrointestinal, de mama y cánceres ginecológicos que en los sueros de donantes sanos. Además, los niveles sCD155 fueron significativamente mayores en los pacientes con estadios iniciales (1 y 2) el cáncer gástrico que en los donantes sanos, y fueron significativamente mayores en los pacientes con estadio avanzado (etapas 3 y 4) la enfermedad que en los pacientes en los que tienen principios enfermedad en estadio y donantes sanos. Además, los niveles sCD155 se redujo significativamente después de la resección quirúrgica de los cánceres. Por lo tanto, el nivel de sCD155 en el suero puede ser potencialmente útil como un biomarcador para el desarrollo y progresión del cáncer
Visto:. Iguchi-Manaka A, Okumura G, H Kojima, Cho Y, Hirochika R, Bando H, et al. (2016) El aumento de CD155 soluble en el suero de pacientes con cáncer. PLoS ONE 11 (4): e0152982. doi: 10.1371 /journal.pone.0152982
Editor: Hiroshi Shiku, Mie University Graduate School of Medicine, JAPÓN
Recibido: 24 Agosto, 2015; Aceptado: 22 Marzo de 2016; Publicado: 6 Abril 2016
Derechos de Autor © 2016 Iguchi-Manaka et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. Todo relevante los datos están dentro del apoyo de sus archivos de información en papel y
Financiación:. Esta investigación fue financiada en parte por subvenciones proporcionadas por el Ministerio de Educación, Cultura, Deportes, Ciencia y Tecnología de Japón (Grant número 26861038, 24249021 y 25114701 de AI-M, AS, y KS). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
vigilancia inmune de los tumores suprime el desarrollo del cáncer para proteger al huésped. Actores clave en la inmunidad mediada por células a los tumores, los linfocitos T citotóxicos (CTL) y células NK [1, 2], mediar reconocimiento tumor y la activación a través de sus receptores de antígenos y una variedad de adhesión y moléculas coestimuladoras [2, 3]. Las interacciones de los receptores de la superficie celular con sus ligandos expresados en las células tumorales inducen la actividad citotóxica de CTL y las células NK contra los tumores [4].
DNAM-1 (CD226) es un miembro de la superfamilia de la inmunoglobulina y se expresa en NK células, células T, monocitos, macrófagos y plaquetas [5, 6]. Sus ligandos en los seres humanos y los ratones son el receptor CD155 poliovirus y su miembro de la familia CD112 (PPR-2 [familia relacionada PVR-2], también llamado nectin-2) [7-9]. CD155 y CD112 humano se distribuyen ampliamente en las células epiteliales y endoteliales en muchos tejidos [10, 11]; en particular, que se sobreexpresa en varios tumores, incluyendo colorrectal [12, 13], gástrico [12], y los cánceres de ovario [14]; neuroblastoma [15]; leucemias mieloides [16]; mieloma múltiple [17]; y melanoma [18]. Las interacciones entre CD155 y CD112 en las células tumorales y DNAM-1 sobre las células NK y T aumentan la citotoxicidad y la producción de citoquinas mediada por células [7, 8]; DNAM-1 es probable que participan en la inmunidad contra los tumores malignos CD155- y CD112-expresión. De hecho, en un modelo de tumores inducidos químicamente en ratones DNAM-1-deficiente, DNAM-1 es importante para la vigilancia inmune contra los tumores que expresan CD155-[19]. Por lo tanto, CD155 sobre los tumores es crucial para la inmunidad tumoral mediada por DNAM-1.
Sin embargo, además de CD155 unida a membrana (mCD155, CD155α), tejidos humanos (a diferencia de los de los ratones) expresan CD155 solubles (sCD155 ) (CD155β y CD155γ) codificada por isoformas de empalme de
CD155 Windows que carecen de la región transmembrana [20, 21]. A continuación, se examinaron los niveles séricos de sCD155 en 262 pacientes con cáncer de variables y mostrar que sCD155 puede ser útil como un biomarcador para el desarrollo y progresión del cáncer.
Materiales y Métodos
Se utilizó la siguiente líneas celulares humanas obtenidas a partir de ATCC: HeLa (carcinoma cervical), HOS (osteosarcoma), RD (rabdomiosarcoma), U87MG (glioma), Jurkat (leucemia de células T), y Colo 205 (carcinoma colorrectal) . MethA (sarcoma inducido por metilcolantreno de ratón BALB /c) fue proporcionado por el Dr. Eiichi Nakayama (Universidad de Okayama).
Muestras
Las muestras de tejido se obtuvieron de los pacientes de cáncer primario que se sometieron a resección quirúrgica la Clínica Universidad de Tsukuba, Japón. Las muestras de suero se obtuvieron de los pacientes de cáncer primario en la Universidad de Tsukuba y el Hospital de la Prefectura de Ibaraki central, Japón, y de voluntarios sanos. escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes y voluntarios sanos. Este estudio fue aprobado por el comité de ética de la Universidad de Tsukuba y el Hospital Central de la Prefectura de Ibaraki (Número de autorización 531-5 y 307). estadio de la enfermedad se clasifica de acuerdo a la Unión Internacional contra el Cáncer (UICC) Clasificación TNM de tumores malignos.
Ratones
ratones Balb /c fueron comprados de Charles River (Yokohama, Japón). Todos los animales fueron alojados y criados en condiciones libres de patógenos específicos en el Centro de Recursos Animales de la Universidad de Tsukuba. ratones experimentales se utilizaron a 7-10 semanas de edad. Todos los experimentos con ratones fueron aprobados por el Comité Experimental Animal de la Universidad de Tsukuba (Número de autorización 09-390 y 10-237) y realizaron de acuerdo con las directrices del Comité Experimental Animal de la Universidad de Tsukuba.
PCR
ARN total fue extraído de las líneas celulares y tejidos con reactivo de Isogen (Nippon gene). Por RT-PCR, se utilizó de alta capacidad de cDNA de transcripción inversa Kits (Applied Biosystems). El análisis por PCR de
CD155
variantes de corte y empalme se llevó a cabo, como se ha descrito anteriormente [21].
Cuantitativo PCR en tiempo real
ARN total fue extraído a partir de tejidos mediante el uso de reactivos Isogen ( Nippon gene). QRT-PCR análisis de
CD155
variantes de empalme se realizó con ensayos de expresión TaqMan Gene (Applied Biosystems) y Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System. Se utilizaron los siguientes ensayos de expresión genética TaqMan: Hs1050633_m1 (
CD155α
), Hs1050636_m1 (
CD155γ
), y Hs99999903_m1 (
ACTB
). Para
CD155β
, hemos utilizado los ensayos de expresión génica TaqMan personalizados con los siguientes cebadores y reportero: cebador directo 5'-AAAGAGGGACCTCCCAGTGA-3 ', el cebador inverso 5'-GAATAGGAGACATGCCCATTAGCT-3' y 5'-reportero CACTCAGGTACAGAGCATG- 3 '. Mediante el uso de un Agilent 2100 Bioanalyzer, se analizó la calidad de RNA total para QRT-PCR para un número integridad del ARN & gt; 7. Todos los valores se determinaron por triplicado.
ELISA para CD155 humano soluble
niveles sCD155 en el suero se midieron por ELISA sándwich utilizando el ratón anti-humano CD155 mAb (TX24) y de conejo anti-humana CD155 policlonal Ab (pAb) como la captura y detección de Abs, respectivamente, seguido de unido a HRP anti-IgG de conejo (GE Healthcare) y el sustrato fluorogénico QuantaBlu peroxidasa (Pierce Biotechnology). placas de negro de 96 pocillos (Greiner Bio-One) se recubrieron con el ratón CD155 mAb anti-humana (TX24, tampón de bloqueo 2 mg /ml, 100 l /pocillo) para la captura durante la noche a 4 ° C, se bloquearon con tampón de bloqueo (10% FBS, 200 l /pocillo) durante 1 h a temperatura ambiente, y se lavó tres veces con tampón de lavado (0,05% Tween 20). proteína humana CD155-Fc de fusión (como estándares) y muestras de suero se sembraron a 100 l /pocillo, se incubaron durante 1 h a temperatura ambiente, y se lavó con tampón de lavado. Después de la incubación en las mismas condiciones con 100 l de conejo anti-humano CD155 pAb (5 mg /ml en tampón de bloqueo), las placas lavadas se incubaron en las mismas condiciones con 100 l de anti-IgG de conejo-HRP (1: 2000 en el lavado buffer), se lavó, y se hizo reaccionar con 100 l de solución de trabajo QuantaBlu (Pierce Biotechnology) durante 30 min a temperatura ambiente. Dejamos de las reacciones con 100 L de QuantaBlu solución de parada (Pierce Biotechnology) y se midió la unidad de fluorescencia relativa (RFU) de cada pocillo a longitudes de onda de 320 nm para la excitación y 420 nm para la emisión usando un lector de Spectra Max M2e (Molecular Devices). Todos los valores se determinaron por triplicado. El CD155 mAb de ratón anti-humano (TX24) y proteína de fusión CD155-Fc humana se generaron en nuestro laboratorio como [8] se describe anteriormente. El conejo anti-humano CD155 pAb fue generado en nuestro laboratorio por métodos estándar.
Establecimiento de MethA transfectante que expresa sCD155 ratón
El ADNc que codifica la región extracelular de CD155 de ratón se subclonó en el p3 × FLAG -CMV-13 vector de expresión (Sigma-Aldrich) y transducidas en las células MethA para generar transfectantes que expresan establemente sCD155 bandera de etiquetado usando el reactivo de transfección DMRIE-C (Invitrogen). El transfectante fue seleccionado por G418 (Sigma-Aldrich) y se pasaron en la cavidad peritoneal de ratones.
ELISA para ratón CD155-3 × proteína de fusión FLAG
sCD155 bandera de etiquetado en el líquido ascítico de ratón y en suero se midieron por ELISA sándwich utilizando una rata anti-ratón de CD155 mAb (TX56) y de ratón anti-FLAG BioM2 mAb (Sigma-Aldrich) como captura y detección mAbs, respectivamente, seguido por estreptavidina-HRP conjugado (GE Healthcare) y QuantaBlu Fluorogenic sustrato de peroxidasa (Pierce). placas de negro de 96 pocillos (Greiner Bio-One) se recubrieron con la rata anti-ratón de CD155 mAb (TX56, 2 mg /ml en tampón de bloqueo (FBS 10% en PBS), 100 l /pocillo) durante la noche a 4 ° C, tratados con el tampón de bloqueo (200 l /pocillo) durante 1 h a temperatura ambiente, y se lavó tres veces con un tampón de lavado (0,05% Tween 20). Las muestras se colocaron en placas a 100 l /pocillo, se incubaron durante 1 h a temperatura ambiente, y se lavó con el tampón de lavado. Después de la incubación en las mismas condiciones con 100 l de anti-FLAG BioM2 (Sigma-Aldrich, tampón de bloqueo 1 mg /ml), las placas se incubaron en las mismas condiciones con 100 l de estreptavidina-HRP (GE Healthcare, 1: tampón 2000 de lavado ), se lavó, y se hizo reaccionar con 100 l de solución de trabajo QuantaBlu (Pierce Biotechnology) durante 30 min a temperatura ambiente. Después de parar las reacciones con 100 l de solución de parada QuantaBlu (Pierce Biotechnology), que mide las unidades relativas de fluorescencia de cada pocillo a longitudes de onda de 320 nm para la excitación y 420 nm para la emisión usando un Spectra Max M2e (Molecular Devices). Todos los valores se determinaron por triplicado. Rat anti-CD155 de ratón MAB (TX56) fue generada en nuestro laboratorio como se describe anteriormente [8].
El crecimiento del tumor ensayo
Los ratones fueron inoculados por vía subcutánea en la parte posterior con 8 × 10
4 células sCD155-MethA. Los ratones fueron monitorizados para el tamaño del tumor (el largo (L) y S) dimensiones cortas () mediante el uso de pinzas de una vez a la semana, y se calcularon los volúmenes de tumor mediante la ecuación: volumen = (L × S
2) /2, como se describe anteriormente [22]. Los ratones fueron sacrificados por CO2 o la anestesia después de que el final del experimento.
Estadísticas
Los análisis estadísticos se realizaron mediante el uso de la prueba de Mann-Whitney de dos colas y la prueba t de Student de dos colas .
resultados
Expresión de CD155α y CD155β en los tejidos tumorales fue mayor que en los tejidos no tumorales
Aunque sCD155 es altamente expresado en el cáncer de colon [12], su perfil de expresión en otros tipos de cáncer no está claro. Por RT-PCR, se analizó la expresión de
CD155
mRNA en varias líneas celulares de tumores de cuello uterino y primaria, ovario y cáncer de endometrio; todas las líneas celulares de cáncer y expresaron tanto unida a la membrana (
CD155α
) y soluble (
CD155β
y
CD155γ
)
CD155
mRNA (Fig 1). Entonces, por cuantitativa en tiempo real PCR (QRT-PCR), se comparó la expresión de
CD155
isoformas entre colorrectal, gástrico, y los cánceres de mama y sus tejidos no tumorales adyacentes; las expresiones de
CD155α
y
CD155β
, pero no
CD155γ
, fueron significativamente mayores en los tipos de cáncer que en los tejidos no tumorales (P & lt; 0,05) (Fig 2).
PCR se realizó usando los conjuntos de cebadores ubicados a cada lado de los diferentes sitios de empalme. Tres bandas de tamaño previsto (α: 273 pb, 138 pb: beta, gamma: 114 pb) se observan en los productos de PCR. ARNm para unida a la membrana (α) y soluble
CD155 gratis (β,
γ
) fue expresada por varias líneas celulares de cáncer humano (A) y de cuello uterino, de ovario, de endometrio y cáncer de los tejidos (B ).
tejidos no tumorales
tumor y adyacentes fueron tomados de especímenes de resección quirúrgica de colorrectal (adenocarcinoma, n = 9), gástrico (adenocarcinoma, n = 4) y de mama (carcinoma ductal invasivo, n = 3) tipos de cáncer. QRT-PCR de
CD155
variantes de corte y empalme de ARN se realizó, y se calculó el factor de cambio de la expresión relativa del tejido tumoral en comparación con el tejido no tumoral adyacente. La expresión de membrana (α) y soluble (β)
CD155
ARN en los tejidos tumorales fue significativamente mayor que la de los tejidos no tumorales (P & lt; 0,05).
sCD155 niveles fueron más altos en el suero de pacientes con cáncer que en las de donantes sanos
Debido a que la expresión de
sCD155
en tejidos de cáncer se reguló, se estableció un ELISA para medir sCD155 (S1 figura) y se cuantificó sCD155 en los sueros de 262 pacientes con diversos tipos de cáncer, incluyendo cáncer de pulmón, de esófago, gástrico, colorrectal, de los conductos biliares, páncreas, mama, ovario, endometrio y cáncer de cuello uterino (Tabla 1). En comparación con donantes sanos (n = 60), los sueros de pacientes con cáncer tenían niveles sCD155 significativamente mayores (media = 15,6 ng /ml y 28,3 ng /mL, respectivamente, P & lt; 0,0001) (Tabla 1, Fig 3A), que eran no se ve afectado por la edad del paciente o de género (datos no mostrados). La curva ROC ilustra el poder del nivel sCD155 para discriminar entre pacientes con cáncer y donantes sanos; el valor para el área bajo la curva fue de 0,718 (Fig 3B).
(A) los niveles de CD155 soluble en sueros de donantes sanos (n = 60) y pacientes con cáncer (n = 262) fueron analizados por ELISA sándwich . En comparación con donantes sanos, los sueros de pacientes con cáncer tenía niveles significativamente más altos sCD155 (P & lt; 0,0001). barra roja: media, barra de negro: SD. (B) del receptor de funcionamiento característico de la curva que ilustra la potencia de nivel de CD155 soluble para discriminar entre donantes sanos y pacientes de cáncer.
En comparación con los de las muestras de control sanos, los niveles sCD155 en sueros de pacientes con cada tipo de cáncer, excepto el cáncer de cuello uterino fueron significativamente mayores (pulmón: P & lt; 0,05, esófago: P & lt; 0,001, gástrico: P & lt; 0,0001, colorrectal: P & lt; 0,001, de los conductos biliares: P & lt; 0,0001, páncreas: P & lt; 0,0001, de mama: P & lt; 0,05, de ovario: P & lt; 0,01, endometrial: P & lt; 0,01) (Tabla 1, Fig 4A). Cabe destacar que, en comparación con donantes sanos, pacientes con estadio temprano (etapas 1 y 2) el cáncer gástrico tenía niveles significativamente más altos sCD155 (P & lt; 0,01). Además, los niveles sCD155 fueron significativamente mayores en los pacientes con estadio avanzado (etapas 3 y 4) el cáncer gástrico que en los pacientes en etapas tempranas (P & lt; 0,05) y controles sanos (P & lt; 0,001) (Fig 4B). Aunque los niveles de sCD155 no cambiaron o incluso aumentó en ciertos pacientes después de la resección quirúrgica de los cánceres y esto podría ser dependiente de cada paciente con cáncer diferente, el análisis estadístico para la población total demostró que los niveles sCD155 se redujo significativamente (P & lt; 0,05) (Fig 4C )
(a) los niveles de CD155 soluble en el suero de acuerdo con los diversos tipos de cáncer (pulmón:. n = 52, de esófago: n = 8, gástrico: n = 49, colorrectal: n = 12, los conductos biliares : n = 25, de páncreas: n = 18, de mama: n = 32, de ovario: n = 23, endometrial: n = 16, cervical: n = 15) se analizó por ELISA de tipo sándwich. barra roja: media, barra de negro: SD. (B) los niveles de CD155 soluble en el suero de pacientes con cáncer gástrico estratificados por estadio de la enfermedad. Las etapas 1 y amp; 2: n = 24, las etapas 3 y amp; 4: n = 25. (C) los niveles de CD155 soluble en sueros de pacientes con cáncer que se sometieron a cirugía (n = 73) fueron analizados para el cáncer de antes y después. nivel de CD155 soluble disminuyó significativamente después de la operación. parcela Rojo: media y media preoperatoria: 26.529 ng /ml, media postoperatoria: 22.390 ng /ml, P & lt; 0.05. días del postoperatorio: 69.30 ± 61.95
sCD155 niveles en suero eran dependientes de la carga tumoral en un modelo de ratón
A partir de los resultados descritos anteriormente, la hipótesis de que los niveles de sCD155 en el suero. de cáncer de pacientes asocian con la carga tumoral. Para hacer frente a esta hipótesis, transfectadas línea celular de fibrosarcoma MethA, que expresa sólo mCD155 endógeno, con un vector de retrovirus que contiene ya sea de ADNc que codifica la porción extracelular de CD155 de ratón o con un vector de control simulado. Inoculamos los transfectantes (sCD155-MethA o Mock-meta) en la cavidad peritoneal de ratones y, 10 días después, la ascitis se recogió. Para cuantificar el nivel sCD155, establecimos un sistema ELISA. Aunque sCD155 apenas se detectó en las ascitis de ratones que habían sido inoculados con Mock-MethA por ELISA, se detectó una cantidad significativa de sCD155 en la ascitis de ratones que habían sido inoculados con sCD155-MethA (Fig 5A). Estos resultados demostraron que sCD155-MethA produjo sCD155
in vivo
. A continuación, por vía subcutánea ratones inoculados con sCD155-MethA y medimos ambos niveles séricos sCD155 y el tamaño del tumor. Hemos observado que los niveles de sCD155 en el suero se correlacionaron con sCD155-MethA el tamaño del tumor (Fig 5B). Estos resultados sugieren que los niveles séricos sCD155 asocian con la carga tumoral.
(A) MethA transfectantes que secretan sCD155 (sCD155-meta) o la proteína de control (Mock-meta) se inocularon en la cavidad peritoneal y después se recogió la ascitis. niveles sCD155 en ascitis de ratones que habían sido inoculadas con estos transfectantss se midieron por ELISA. ratones (B) BALB /c fueron inoculados por vía subcutánea con sCD155-MethA transfectante. niveles de tamaño del tumor y sCD155 en suero se midieron y se calculó el coeficiente de correlación.
Discusión
Aunque sCD155 fueron identificados hace más de 25 años [20], se sabe poco sobre su expresión y función. Aquí, demostramos que la expresión de sCD155 (
CD155β
), así como mCD155 (CD155
a
) mRNA en tejidos tumorales fue significativamente mayor que en los tejidos no tumorales. Además, los pacientes con diversos tipos de cáncer mostraban niveles significativamente más altos de sCD155 suero, en comparación con muestras de control sanos. Por otra parte, los niveles de sCD155 en el suero se correlacionaron con la progresión de la enfermedad en pacientes con cáncer gástrico y el tamaño del tumor en ratones. Nuestros resultados sugieren que los niveles sCD155 en el suero de pacientes con cáncer dependen posiblemente en la carga tumoral. informe anterior mostró que la sobre regulación de CD155 de ratón está mediada por la vía de señalización de Raf-MEK-ERK-AP-1 [23], lo que sugiere que la expresión de ambos mCD155 y sCD155 está regulado a través de esta vía también en humanos, aunque aún se requieren estudios para determinar cómo sCD155 está regulada positivamente en los cánceres. Sin embargo, nuestros resultados sugieren que el nivel sérico sCD155 es potencialmente útil como un biomarcador de la progresión del cáncer.
Aunque mCD155 expresa en los tumores ha sido cree que participan en la inmunidad tumoral DNAM-1-mediada, se han reportado resultados contradictorios . Por ejemplo, la sobreexpresión de mCD155, determinada por inmunohistoquímica usando anticuerpo anti-CD155, en el adenocarcinoma de pulmón y el melanoma se correlaciona con mal pronóstico [24, 25]. Sin embargo, estos estudios no discriminan entre mCD155 y sCD155. En este estudio, hemos demostrado que la expresión de ambos mCD155 (
CD155α
) y sCD155 (
CD155β
) fueron upregulated en el cáncer, incluyendo el cáncer colorrectal, gástrico y de mama, en comparación con los no-cáncer tejidos. Aunque, debido al limitado número de cada tipo de cáncer, no pudimos evaluar la correlación entre los niveles de expresión de sCD155 (
CD155β
) mRNA en tejidos de cáncer o los niveles de CD155 en suero y la progresión de la enfermedad y el pronóstico, los niveles más altos de sCD155 en el suero se asoció con estadio avanzado de cáncer gástrico y el tamaño del tumor en ratones.
informes previos han demostrado el papel de la forma soluble de los receptores de membrana en la evasión del tumor. moléculas unidas a membrana tales como la clase NKG2D ligandos MHC relacionadas con I-molécula (MIC) y las proteínas UL16 de unión (ULBPs) y Fas, que están implicadas en las células NK y la citotoxicidad CTL mediada contra los tumores, se han demostrado para ser lanzado como soluble formas en los sueros de diversos pacientes con cáncer [26-30]. A diferencia de CD155, MIC y ULBPs soluble se generan a partir de tumores por proteolítica derramamiento [26, 31, 32]. Los tumores pueden evadir la vigilancia inmune mediada por NKG2D por varios mecanismos; una de ellas es que el MIC soluble regula a la baja la expresión de NKG2D [31, 33]. informe anterior mostró que los altos niveles de ULBP2 soluble en el suero se asociaron con un mal pronóstico de la enfermedad en pacientes con melanoma [27], lo que sugiere que ULBP2 soluble está implicada en la evasión inmune tumor
.
A diferencia de los ligandos de NKG2D, el significado funcional de sCD155 en la inmunidad tumoral ha seguido siendo poco clara. Estudios recientes revelaron que DNAM-1 comparte el CD155 ligando con inmunoreceptor de células T con Ig y dominios ITIM (TIGIT) o CD96 [34, 35]. CD96 de reticulación con proteína de fusión CD155-Fc unido a la placa inhibió la producción de IFN
γ
por las células NK [36]. Por otra parte, los ratones deficientes en CD96 mostraron disminución de la metástasis tumoral experimental [36], lo que sugiere que CD96 y DNAM-1 se oponen entre sí en la inmunidad tumoral. Del mismo modo, TIGIT tiene un efecto contrario a DNAM-1 en la inmunidad de tumor [37, 38]. Para aclarar el significado funcional de sCD155 en la inmunidad tumoral, se necesitan más estudios cómo la interacción de sCD155 con su activador (DNAM-1) y los receptores inhibitorios (CD96 y TIGIT) y su señalización a través de estos receptores activadores e inhibidores están regulados.
Apoyo a la Información
S1 Fig. Establecimiento de ELISA tipo sándwich para sCD155.
(A) Curva estándar de proteína de fusión CD155-Fc humana. (B) En una placa de 12 pocillos, 1 × 10
6 HeLa fueron cultivadas por 1 ml de medio; sobrenadantes de cultivo se recogieron después de 24 y 48 h para la detección de la proteína CD155 soluble
doi:. 10.1371 /journal.pone.0152982.s001 gratis (EPS)
Reconocimientos
Agradecemos Tochihara S y Nomura y para los servicios de secretaría.