Extracto
Antecedentes
tratamiento a base de anticuerpos anti-EGFR es un importante estrategia terapéutica para el cáncer colorrectal avanzado (CRC); a pesar de esto, varias mutaciones, incluyendo
KRAS
,
BRAF
, y
PIK3CA
mutaciones, y
HER2
amplificación están asociados con los mecanismos subyacentes a la desarrollo de resistencia a la terapia anti-EGFR. El objetivo de nuestro estudio fue investigar las frecuencias y las implicaciones clínicas de estas alteraciones genéticas en el CCR avanzado.
Métodos
KRAS
,
BRAF
, y
PIK3CA
mutaciones se determinaron por reacción Cobas en tiempo real en cadena de polimerasa (PCR) en 191 pacientes con CCR avanzado con metástasis a distancia. Inestabilidad de microsatélites (MSI) de estado se determinó mediante un ensayo de fragmentación y
HER2
amplificación se evaluó por hibridación in situ de plata. Además,
KRAS
mutaciones fueron investigados por el método de secuenciación de Sanger en 97 de 191 casos de CCR.
Resultados
Las mutaciones en
KRAS
,
BRAF
, y
PIK3CA
se encontraron en 104 (54,5%), 6 (3,1%), y 25 (13,1%) casos de CCR avanzado, respectivamente. MSI-alto estatus y
HER2
amplificación se observaron en 3 (1,6%) y 16 (8,4%) casos, respectivamente.
PIK3CA
mutaciones fueron encontradas con mayor frecuencia en
KRAS
tipo mutante (18,3%) que
KRAS
tipo salvaje (6,9%) (
P = 0,020
). Por el contrario,
HER2
amplificaciones y
BRAF
mutaciones se asociaron con
KRAS de tipo salvaje
con significación marginal (
P = 0,052
y 0,094, respectivamente) . En los análisis combinados con
KRAS
,
BRAF
y
HER2
estado,
BRAF
mutaciones o
HER2
amplificaciones se asociaron con la peor pronóstico en el tipo silvestre
KRAS
grupo (
P
= 0,004). Al comparar la eficacia de los métodos de detección, los resultados de los análisis de PCR en tiempo real revelaron 56 de 97 (57,7%) casos de CCR con
KRAS
mutaciones, mientras que la secuenciación de Sanger reveló 49 casos (50,5%).
Conclusiones
KRAS
se encontraron mutaciones en el 54,5% de los pacientes con CCR avanzado. Nuestros resultados apoyan el uso de subgrupos que
PIK3CA
y
BRAF
mutación o
HER2
estado de amplificación, además de
KRAS
estado de mutación, es muy útil para la gestión CRC pacientes avanzados
Visto: SK. Nam, Yun S, Koh J, Kwak Y, Seo AN, Parque KU, et al. (2016)
BRAF
,
PIK3CA
, y
HER2
Oncogénicos Alteraciones De acuerdo con
KRAS
estado de la mutación en el cáncer colorrectal avanzado con metástasis a distancia. PLoS ONE 11 (3): e0151865. doi: 10.1371 /journal.pone.0151865
Editor: Wayne A. Phillips, Peter MacCallum Cancer Centre, AUSTRALIA
Recibido: 3 de diciembre de 2015; Aceptado: 4 Marzo de 2016; Publicado: 18 Marzo 2016
Derechos de Autor © 2016 Nam et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. Todo relevante los datos se encuentran dentro de los archivos de información de apoyo
Financiación:. Esta investigación fue apoyada por una beca de la Tecnología de Corea R & amp Salud; D Proyecto a través del Instituto para el Desarrollo de la Industria de la Salud de Corea (KHIDI), financiado por el Ministerio de Salud & amp ; El bienestar, la República de Corea (número de concesión: HI14C1813, https://www.khidi.or.kr/eps). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer colorrectal (CCR) es el tercer cáncer más común y la incidencia de CCR sigue aumentando en todo el mundo cada año. A pesar de la detección precoz y los avances terapéuticos, las cuentas de la enfermedad metastásica regionales o distantes para casi el 50% de los pacientes recién diagnosticados de CRC y las tasas de supervivencia global de los pacientes con CCR avanzado sigue siendo insatisfactoria. La reciente identificación de la genética molecular ha permitido avances considerables en el manejo de pacientes con CRC avanzado. El desarrollo de terapias específicas dirigidas contra las mutaciones específicas, tales como los de la
receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR)
gen de la tirosina quinasa ha mejorado la eficacia del tratamiento y la evolución clínica de los pacientes con CCR avanzado [1-4]. Sin embargo, los CRC son tumores heterogéneos molecularmente que albergan diversas alteraciones de genes que incluyen las mutaciones en
KRAS
,
BRAF
, y
PIK3CA
, así como
HER2
amplificación; muchos pacientes con estas mutaciones, por lo tanto experimentan resistencia contra los fármacos anti-EGFR y presentan un mal pronóstico [2,3,5,6]. Por lo tanto, es importante para explorar el mecanismo molecular subyacente a la respuesta y la resistencia al tratamiento anti-EGFR en avanzado CRC.
KRAS
mutaciones, que son comúnmente detectados en aproximadamente el 40% de los casos de CCR , se cree que están asociados con la resistencia a un tratamiento anti-EGFR en CRC. La evaluación de los
KRAS mutaciones
tanto, es esencial antes de la utilización de fármacos anti-EGFR para seleccionar los pacientes que pueden beneficiarse de las terapias anti-EGFR [7,8]. Por otra parte, estudios recientes sugieren que las mutaciones genéticas adicionales, tales como
BRAF mutaciones
,
PIK3CA
mutaciones, y
HER2
amplificación están implicados en la resistencia a las drogas dirigidas a EGFR de pacientes con CRC con el tipo salvaje
KRAS
[5,9].
BRAF
, que es un miembro de la familia de la RAF, juega un papel importante en la MAP quinasa /ERK-vía de señalización [10]. Muchos estudios anteriores han revelado que las mutaciones en
BRAF ¿Cuáles son un biomarcador de mal pronóstico en el CCR avanzado. Además,
BRAF
tumores mutantes muestran una mala respuesta al tratamiento anti-EGFR, especialmente en pacientes con CCR tipo salvaje
KRAS
[5,11].
PIK3CA
está mutado en diversos cánceres humanos; en CRC, que está mutado en aproximadamente el 20% de los casos. Actualmente, los pacientes que albergan
PIK3CA
mutaciones en el exón 20 y no hay mutaciones en
KRAS
pueden mostrar resistencia al tratamiento anti-EGFR. Por otra parte,
PIK3CA
mutaciones en el exón 9 y las mutaciones KRAS tienden a encontrarse juntos [3,12]. Por último,
HER2
amplificaciones están presentes en un número pequeño de CRC, y algunos estudios han informado de la asociación entre el
HER2
la amplificación y la mala respuesta a los fármacos anti-EGFR [13].
a pesar de estos hallazgos anteriores, el conocimiento de las frecuencias y las implicaciones clínicas de estas alteraciones genéticas en pacientes coreanos es aún limitada. En el presente estudio, se evaluó la prevalencia de estas alteraciones genéticas en pacientes con CCR avanzado, y se evaluó la relación de estas alteraciones genéticas con los factores clínico-patológicos y resultados de los pacientes. Además, se comparó la eficacia del uso de pruebas de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (PCR) Cobas con la de pruebas utilizando secuenciación de Sanger como métodos de detección de
KRAS mutaciones
.
Materiales y Métodos
pacientes y muestras de tejidos
Un total de 191 pacientes CCR avanzado con metástasis a distancia sincrónicas o metacrónicas que se sometieron a tratamiento quirúrgico en el hospital de la Universidad Nacional de Seúl Bundang entre 2003 y 2009 se inscribieron en este estudio. Todos los pacientes fueron tratados con resección quirúrgica de los CRC primaria en el diagnóstico inicial y metástasis a distancia resecarse cuando se detecta. Ninguno de los pacientes fueron tratados con quimioterapia o radioterapia preoperatoria. la información clínico-patológico y seguimiento de los datos se obtuvieron de los registros médicos de los pacientes y los informes de patología. La supervivencia global (OS) se calculó como el tiempo transcurrido entre la fecha de la cirugía y la fecha de la muerte.
La histopatología y la clasificación de los tumores se determinaron de acuerdo con la clasificación de la OMS. El uso de datos de registros médicos y muestras de tejidos para este estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital Bundang Universidad Nacional de Seúl (Referencia: B-1210 /174-301). Todas las muestras y los datos de historias clínicas fueron anónimos antes de su uso en este estudio y los participantes no dieron su consentimiento informado por escrito. La Junta de Revisión Institucional renunciado a la necesidad de consentimiento informado por escrito bajo la condición de anonimato y de ninguna intervención adicional para los participantes.
KRAS
,
BRAF
, y
PIK3CA mutación
analiza usando el tiempo real PCR
las muestras tumorales se obtuvieron de especímenes de resección quirúrgica de la CRC primaria. Hematoxilina-eosina (HE) manchadas diapositivas fueron revisados por un patólogo (H.S.L). Se identificaron las áreas tumorales y microscópicamente disecaron más de un área de 1 cm x 1, que consistía en más de 60% de células tumorales. Uno o dos (FFPE) secciones de tejido 8-micras de espesor fijados con formalina embebidos en parafina del tumor se desparafinaron con xileno durante 5 min a temperatura ambiente (RT), se deshidrataron en alcohol absoluto durante 5 min a RT, y se dejaron secar al aire completamente por 10 min. Se aisló el ADN utilizando el ADN Cobas Kit Preparación de la muestra (Roche, Branchburg, NJ, EE.UU.) y el mismo protocolo de preparación para todos los kits de mutación Cobas se utilizó en este estudio. La concentración del ADN aislado se midió utilizando un espectrofotómetro NanoDrop UV (Thermo Fisher Scientific, Wilmington, DE, EE.UU.) y el ADN se diluyó con ADN Diluyente de Muestra de la Cobas 4800 el ensayo de mutación kit (Roche) a la concentración óptima para cada gen (
KRAS página 4 ng /l,
BRAF página 5 ng /l, y
PIK3CA página 2 ng /l). La amplificación y detección se realizaron con un instrumento analizador automático Cobas X480. La prueba de PCR en tiempo real podría detectar el codón 12, 13 y 61 de
KRAS mutación
, V600E
BRAF
mutación, y el exón 1, 4, 7, 9 y 20 de
PIK3CA
mutación.
KRAS
análisis de mutaciones mediante la secuenciación de Sanger método
se recogieron
las muestras tumorales de las mismas muestras de CRC primarias que habían utilizado para la real pruebas de PCR en tiempo. Todas las muestras se microdissected manualmente y & gt; 60% de la superficie de la muestra se demostró que contenía células tumorales según la estimación de la H & amp; E-diapositivas manchadas. análisis de secuenciación de Sanger de
KRAS
mutaciones en el codón 12, 13, y 61 se llevó a cabo en 97 de las 191 muestras de tejido FFPE de pacientes con CRC, tal como se describe anteriormente [14].
HER2
análisis de dos colores plata de hibridación in situ (SISH)
su análisis se realizó en bloques de la matriz de tejido de la misma cohorte. Se llevó a cabo la construcción de bloques de la matriz de tejido como se describe anteriormente [5,15]. Brevemente, se extrajo un área representativa de los 191 especímenes de casos de CRC, y dos núcleos de la zona central y periférico que mide 2 mm de diámetro para cada caso se utilizó para la construcción de tejido bloque de matriz. De campo brillante análisis SISH de dos colores se realizó mediante un dispositivo de tinción automática SISH (XT referencia, Ventana Medical Systems) de acuerdo con los protocolos del fabricante para el INFORM ADN HER2 y INFORM cromosoma 17 (CEP17) sondas (Ventana Medical Systems). Nosotros interpretamos las señales sish HER2 /CEP17 de acuerdo con la guía interpretativa que acompaña a la sonda de ADN HER2 INFORM para la tinción de células de cáncer gástrico (sistemas Ventana Medical). Se evaluó el tejido tumoral de los puntos calientes de las señales de HER2 /CEP17 positivos usando 20X o 40X. Las señales se enumeran en 20 núcleos de las células del tumor que no se solapan por núcleo con 60X o 100X objetivos. agrupaciones pequeñas se definieron como 6 señales, y los racimos más grandes como 12 señales.
HER2
amplificación de genes se definió como una relación de HER2 /CEP17 de ≥ 2,0 en la zona central o periférico. Esos casos dudosos con una relación HER2 /CEP17 entre 1,8 y 2,2 se cuentan en 20 núcleos adicionales que no se solapan de células tumorales; la relación se volvió a calcular sobre la base de estos resultados.
La inestabilidad microsatélite (MSI) Análisis
Las secciones se preparan a partir de muestras de tejido FFPE y hematoxilina y eosina diapositivas fueron evaluados para identificar el área del tumor representativo y área normal en cada sección. Estas áreas seleccionadas se microdissected. Se realizó un análisis de MSI como se ha descrito anteriormente [16,17]. En pocas palabras, el estado de MSI se determinó mediante el análisis de cinco loci microsatélites (BAT-26, BAT-25, D5S346, D17S250 y S2S123) utilizando ADN secuenciador automático (ABI 3731 analizador genético; Applied Biosystems, Foster City, CA). Según la norma Bethesda en MSI, los tumores fueron clasificados como MSI-H cuando al menos dos de los cinco marcadores muestran nuevas bandas, MSI-L cuando se observaron alelos adicionales con uno de los cinco marcadores, y MSS cuando se examina muestran todos los marcadores de microsatélites patrones idénticos en ambos tejidos tumorales y normales.
el análisis estadístico
los análisis estadísticos se realizaron con el paquete estadístico SPSS Statistics 18 (Chicago, IL, EE.UU.). La asociación entre los parámetros clínico y las alteraciones genéticas se analizaron mediante la prueba de Chi-cuadrado o la prueba exacta de Fisher. La prueba de ji cuadrado fue realizado sólo si al menos 80% de las células tienen una frecuencia esperada de 5 o mayor, y no de células tiene una frecuencia esperada menor que 1,0. Si no es así, se utilizó la prueba exacta de Fisher. La edad fue tratada como una variable continua y comparados usando la prueba t independiente debido a la p & gt; 0,05 mediante la prueba de normalidad de Shapiro-Wilk. Kaplan-Meier de supervivencia se trazaron, y se analizaron las diferencias estadísticamente significativas en las curvas de supervivencia mediante la prueba de log-rank. análisis de supervivencia multivariante mediante un modelo de riesgos proporcionales de Cox se realizó con el estado mutacional, la edad y el estadio al momento del diagnóstico inicial. Se evaluaron la razón de riesgo (HR) y su intervalo de confianza del 95% (IC). En todos los casos,
P
los valores inferiores a 0,05 fueron considerados estadísticamente significativos.
Resultados
Características de los pacientes
Las características clínico-patológicas de los pacientes se resumen en la Tabla S1. Los pacientes consistió en 103 hombres (53,9%) y 88 mujeres (46,1%) con una edad media de 60 años (rango: 28-93 años). De los 191 casos, 49 (25,7%), los tumores se localizaron en el colon derecho, 71 (37,2%), los tumores en el colon izquierdo, y 71 (37,2%), los tumores en el recto. En cuanto al grado de diferenciación histológica, 165 (86,4%) eran tumores de bajo grado, y 26 (13,6%) eran tumores de alto grado. En cuanto a los tratamientos, 176 (92,1%) pacientes recibieron 5-fluorouracilo (5-FU) adyuvante con o sin tratamiento anti-EGFR (cetuximab) después de la resección quirúrgica; 150 (85,2%) pacientes recibieron 5-FU quimioterapia basada solamente; y 26 (14,8%) pacientes recibieron 5-FU con fármacos anti-EGFR.
Las alteraciones genéticas asociadas con la vía de señalización del EGFR en CRC avanzada
Todos los datos básicos se presentan en la Tabla S2. De los casos de tumores examinados, 87 (45,5%) tenían tipo salvaje
KRAS
y 104 (54,5%) tenían
KRAS
mutaciones. Entre los tumores con
KRAS
mutaciones, se observaron mutaciones en el codón 12 o 13 en 97 (93,3%), mientras que se observaron mutaciones en el codón 61 en 7 (6,7%) pacientes.
se observaron BRAF V600E) gratis (6 mutaciones en los tumores (3,1%).
PIK3CA
mutaciones se identificaron en 25 tumores (13,1%). Los dos más comunes
PIK3CA
mutaciones se localizaron en el exón 9 (17 casos, 68,0%) y el exón 20 (5 casos, 20,0%). Otras mutaciones raras se encuentran en los exones 1 y 4 (2 casos, 8,0%). Un caso albergaba un
PIK3CA
mutación del exón 4, así como
PIK3CA
exón 9 mutación. El análisis demostró SISH
HER2
amplificación de genes en 16 tumores (8,4%). Tres casos de esta cohorte fueron MSI-H (1,6%), y los 188 (98,4%) casos restantes se clasificaron como MSS /MSI-L.
Fuera de 104
KRAS de tipo mutante
CRC casos, 23 (22,1%) tenían
PIK3CA mutaciones
,
HER2
amplificaciones, o
BRAF
mutaciones (Tabla 1). Dieciocho casos mostraron
PIK3CA mutación
, 4 casos mostró
HER2
amplificación, uno de los casos habían ambos
BRAF
y
PIK3CA
mutaciones, y un caso tuvo tanto
PIK3CA
mutación y
HER2
amplificación. Fuera de 87
KRAS
CRC tipo salvaje,
BRAF mutaciones
,
PIK3CA
mutaciones, y
HER2
amplificaciones fueron encontrados en 5 (5,7%), 6 (6,9%), y 11 (12,6%) casos, respectivamente; En general, 21 de los 87
KRAS de tipo salvaje
casos (24,1%) tenían
BRAF mutaciones
,
PIK3CA
mutaciones, o
HER2
amplificaciones.
Curiosamente, la presencia de
PIK3CA mutaciones
se asoció significativamente con la presencia de
KRAS mutaciones
(
P
= 0,020, Tabla 2). Las mutaciones en
KRAS
y
BRAF
fueron casi mutuamente excluyentes; Sin embargo, un caso albergaba concomitante
KRAS Opiniones y
BRAF
mutaciones.
HER2
amplificaciones y
BRAF mutaciones
tendían a ser observada con mayor frecuencia en
KRAS
tumores de tipo salvaje que en
KRAS
tumores de tipo mutante con significación estadística marginal (
P = 0,052
y
P = 0,094
, respectivamente). estado de MSI no mostró ninguna asociación con estas alteraciones genéticas en esta cohorte.
Asociación de alteraciones genéticas con características clínico
La Tabla 3 muestra la relación entre las alteraciones genéticas y las características clínico-patológicas.
KRAS
mutante tumores eran más propensos a estar ubicado en el colon derecho (
P = 0,021
). Estos tumores también se asociaron con bajo grado histológico (
P = 0,029
).
BRAF
tumores mutantes se asociaron significativamente con la profundidad de la invasión de T4 (
P = 0,033
). Aunque no alcanzó la significación estadística,
BRAF
mutante tumores tendieron a localizarse en el colon derecho (
P = 0,127
) y tener invasión linfática (
P
= 0,097) en comparación con las mismas características en
BRAF
tumores de tipo salvaje. Los tumores con
HER2
amplificaciones se correlacionaron significativamente con una ubicación distal (
P
= 0,006).
HER2
amplificaciones también mostraron una asociación con la más joven, pero esta diferencia no fue estadísticamente significativa (
P = 0,081
). No hubo otras asociaciones significativas entre los
PIK3CA
mutaciones o estado de MSI con factores clínico-patológicos.
significado pronóstico de las alteraciones genéticas
Para determinar la importancia pronóstica de estos genética alteraciones, los análisis de supervivencia se realizaron utilizando el método de Kaplan-Meier para el sistema operativo (figura 1). Los datos del seguimiento de los 191 pacientes con CRC se incluyeron en el análisis de supervivencia. Hubo 84 muertes relacionadas con el CRC, y la mediana de seguimiento fue de 37,9 meses (rango, 0.8-104.6 meses). Los pacientes con
BRAF mutaciones
mostraron una tendencia a un resultado desfavorable para el sistema operativo, pero este resultado no alcanzó significación estadística (
P = 0,081
).
KRAS mutaciones
,
PIK3CA mutaciones
,
HER2
amplificaciones, y el estado de MSI no mostraron ninguna asociación con el sistema operativo de los pacientes (
P = 0,993
,
P = 0,538
,
P = 0,368
, y
P = 0,538
, respectivamente). La mutación de
KRAS codón 61
tendía a ser asociado con la supervivencia global más corto, pero no alcanzó significación estadística (
P = 0,554
).
Estimación de la supervivencia
de Kaplan-Meier gráficas de la supervivencia global (OS) en 191 pacientes con CCR avanzado de acuerdo con
KRAS
estado de las mutaciones (a), la ubicación de
KRAS
mutaciones en pacientes con CCR avanzado (b),
BRAF
mutaciones (c),
PIK3CA
mutaciones (d),
HER2
amplificaciones (e), y el estado de MSI (f).
Curiosamente, el
KRAS
subgrupo de tipo salvaje con
BRAF
mutaciones o
HER2
amplificaciones mostraron el peor pronóstico en los análisis combinados (
P = 0,004
; la figura 2A). Mediante el uso de riesgos proporcionales de Cox, este subgrupo era pobre factor pronóstico (HR, 2.055, IC, 1,093-3,861;
P
= 0,025), independientemente de la edad y la etapa de diagnóstico inicial (Tabla S3). Entre 191 CRC avanzadas, 165 pacientes no fueron tratados con los pacientes medicamentos anti-EGFR, en los que el
KRAS
subgrupo de tipo salvaje con
BRAF
o
HER2
alteraciones también mostró la peor pronóstico (
P = 0,012
; la figura 2B). Mediante el uso de riesgos proporcionales de Cox, este subgrupo era pobre factor pronóstico con significación estadística marginal (RR, 1,984, IC, 0,963-4,085;
P = 0,063
; datos no mostrados). Sin embargo, en 26 pacientes tratados con 5-FU con fármacos anti-EGFR, el
KRAS sobre Wild subgrupo tipo con
BRAF
o
HER2
alteraciones no se asoció con un mal pronóstico (
P
= 0,305, datos no mostrados), lo que puede ser debido a pequeño número de casos. En el
KRAS
subgrupo de tipo salvaje,
BRAF
o
HER2
alteraciones se asoció con la diferenciación grado histológico alto, estadio avanzado, invasión linfática y la invasión perineural, pero con el límite estadístico significación (Tabla S4).
los resultados del análisis combinado en pacientes con CCR avanzado con el
KRAS de tipo salvaje
subgrupo de acuerdo con
BRAF
mutación y
HER2
la amplificación independientemente del estado de tratamiento anti-EGFR (n = 191) (a), en los que no fueron tratados con fármacos anti-EGFR (n = 165) (b).
Comparación de Cobas real Time PCR y secuenciación de Sanger métodos para
KRAS mutaciones
de 191 muestras de CRC, los tejidos de 97 pacientes estaban disponibles para el análisis de comparar la detección de
KRAS mutaciones con el
prueba de secuenciación de Sanger y la prueba de PCR en tiempo real Cobas. De los 97 tumores incluyen,
se detectaron mutaciones de KRAS
en 49 casos (50,5%) por la prueba de secuenciación de Sanger. Las mutaciones en
KRAS
codón 12 o 13 y
KRAS
codón 61 se detectaron en 47 (48,5%) y 2 (2,1%) casos, respectivamente. Por otra parte, 56 casos (57,7%) de
KRAS
mutaciones se detectaron por el tiempo real de prueba PCR; la prueba situado 52 (53,6%) mutaciones en el codón 12 o 13 y 4 (4,1%) las mutaciones en el codón 61. El tiempo real prueba de PCR mostró una sensibilidad mayor que la de la prueba de secuenciación de Sanger.
Discusión
KRAS
es un oncogén conductor muy conocido en los CRC y la presencia de
KRAS
mutación predice una mala respuesta a anti-EGFR terapia dirigida en pacientes con CCR metastásico. Se evaluaron las frecuencias y la importancia de las mutaciones en clincopathologic
KRAS
,
BRAF
, y
PIK3CA
, y
HER2
amplificación, así como la relación de estas alteraciones genéticas en pacientes con CCR avanzado que eran candidatos para el tratamiento anti-EGFR en la práctica diaria. Las mutaciones en los casos
KRAS
,
BRAF
, y
PIK3CA
se encontraron en 104 (54,5%), 6 (3,1%), y 25 (13,1%) de avanzada CRC, respectivamente. Además, MSI-H fenotipo y
HER2
amplificación fueron observados en 3 (1,6%) y 16 (8,4%) casos, respectivamente.
El desarrollo de terapias dirigidas contra las alteraciones moleculares específicas tiene contribuyeron a la gestión de los pacientes con CCR avanzado, y los fármacos anti-EGFR se utilizan en estos pacientes. Aunque la presencia de
KRAS
mutación es útil para excluir a los pacientes que no se beneficiarán del tratamiento anti-EGFR, muchos pacientes con el tipo salvaje
KRAS
CRC muestran respuestas negativas a este tratamiento. Hasta la fecha, se considera que
BRAF mutaciones
,
PIK3CA
mutaciones, y
HER2
amplificaciones están asociados con los mecanismos subyacentes de estas respuestas pobres [4,5]. En nuestra cohorte, 16 de 87
KRAS de tipo salvaje
casos (18,4%) tenían
BRAF
mutaciones o
HER2
amplificaciones; Además, el análisis combinado mostró que
KRAS
pacientes con tipo salvaje
BRAF
mutaciones o
HER2
amplificaciones tenían el peor pronóstico. Debido a que las terapias dirigidas a
BRAF
mutaciones y
HER2
amplificaciones tienen beneficio significativo de supervivencia en diversos cánceres humanos [10,18,19], el tratamiento con anti-BRAF y agentes anti-HER2 puede haber una buena estrategia terapéutica para mejorar la supervivencia en pacientes con CCR tipo salvaje
KRAS
albergar
BRAF
mutaciones o
HER2
amplificaciones y que también tienen una resistencia primaria o secundaria a anti-EGFR tratamiento.
a pesar de un pequeño número de tumores con
PIK3CA
mutaciones en nuestra cohorte, encontramos que
PIK3CA mutaciones
se superponen en gran medida con el
KRAS
mutaciones, que era consistente con los estudios previos en Europa [20] y los pacientes con CRC japoneses [21] con metástasis. En la actualidad, varios inhibidores dirigidos a la
PIK3CA
vía de señalización se han desarrollado, y estos agentes se están probando en ensayos preclínicos y clínicos de los pacientes con CCR [22-24]. Teniendo en cuenta nuestros resultados y los estudios previos [20,21] que
KRAS mutaciones
excluyó la presencia de
PIK3CA
mutaciones, la inhibición de la
PIK3CA
vía de señalización podría ser una estrategia terapéutica útil para el tratamiento de pacientes con CRC
KRAS mutaciones
.
en general, 24 de los 191 casos (12,6%) tenía dos o más alteraciones oncogénicas en este estudio. Se puede interpretar que estas alteraciones genéticas se producen al mismo tiempo en el mismo tumor, pero puede ser debido a la heterogeneidad tumoral. Durante la progresión tumoral, las alteraciones oncogénicas se desarrollan en un subclón, que contribuyen a la metástasis del cáncer y la resistencia a fármacos. Se utilizaron los métodos de detección más sensibles, por tanto, se pudieron detectar mutaciones en población de células tumorales menor. En el manejo de pacientes con CRC, el diagnóstico molecular sensible es útil para detectar alteraciones oncogénicas de menor importancia, que puede ser el próximo objetivo en los pacientes avanzados de CRC con resistencia primaria o secundaria a la primera línea de tratamiento específica. En nuestra cohorte, un caso albergaba concomitante
KRAS Opiniones y
BRAF
mutaciones. Es bien sabido que los
BRAF
mutaciones suelen detectarse en
KRAS
tumores de tipo salvaje, y que son casi mutuamente exclusiva con
KRAS
mutaciones en el CCR. Varios estudios han informado de que los casos raros Harbor combinan
KRAS
y
BRAF
mutaciones, que se produce en menos de 0,02% [25,26]. A pesar de que la biología del tumor y el pronóstico de los pacientes con concomitante
KRAS
y
BRAF
mutaciones han sido todavía incierto, la investigación anterior sugiere que estas mutaciones concomitantes están asociados con la progresión tumoral tales como metástasis de los ganglios linfáticos y superior etapa T [25,27]. Se necesitan más estudios a gran escala para aclarar la función de incidencia y biológico de la concomitante
KRAS Opiniones y
BRAF
mutaciones.
Estudios previos con pacientes avanzados con metástasis CRC informaron que aproximadamente 34 ~ 45% de los pacientes tenían
KRAS
mutaciones [20,21,28]. Este estudio con pacientes con CRC coreanos demostró que la frecuencia de
KRAS
mutaciones fue 54,5%, y que estas mutaciones se observaron principalmente en los codones 12 o 13 (93,3%). La frecuencia de
KRAS
mutaciones en esta cohorte fue ligeramente más alto que en los informes publicados anteriormente de pacientes con CCR metastásico [20,21,28]. Hay varias explicaciones posibles para ello. En primer lugar, se reclutó sólo pacientes con CCR avanzado en esta cohorte, lo que puede explicar la mayor frecuencia de
KRAS
mutaciones. En segundo lugar, hubo algunas diferencias en los métodos de detección de mutaciones. Se analizó el estado de mutación usando Cobas-PCR en tiempo real, que se considera para mostrar una sensibilidad más alta que la de otros métodos de detección.
Se ha informado de que la mayoría de
ocurren KRAS
mutaciones en pacientes con CRC en el codón 12 y 13. Este estudio también demostró que
KRAS
mutaciones fueron vistas principalmente en los codones 12 o 13 (93,3%). En nuestro
KRAS
análisis de subgrupos mutación, la mutación de
KRAS codón 61
tendían a ser asociado con la supervivencia global más corto, pero no alcanzó significación estadística. El impacto pronóstico de
KRAS
codón 61 mutaciones se ha reportado en varios estudios anteriores, aunque con resultados controvertidos [29]. Debido a que la incidencia de
KRAS codón 61 mutaciones
es raro, más estudios a gran escala puede ayudar a aclarar la relación entre estas mutaciones y la evolución clínica.
Las mutaciones de
Opiniones y BRAF
PIK3CA
se detectó en el 3,1% y el 13,1% de los casos, respectivamente. Aunque las frecuencias de estas mutaciones se consideran bajos, eran similares a los de estudios previos en avanzado CRC [20,21,28]. De acuerdo con el estudio anterior [30],
BRAF
mutaciones se asociaron con la histología agresiva CRC, tales como una mayor estadio T y la presencia de invasión linfática. Aunque los resultados no alcanzaron significación estadística, los pacientes que albergan
BRAF
mutaciones también mostraron una SG más corta
Se evaluaron dos métodos de detección de
KRAS
mutaciones en muestras de CRC:. Cobas reales -tiempo PCR y secuenciación de Sanger. Había una buena correlación entre
KRAS
detección de mutaciones por PCR en tiempo real y la de secuenciación de Sanger, y PCR en tiempo real mostraron una sensibilidad más alta que la de secuenciación de Sanger. En nuestra cohorte, 7 casos de
KRAS
mutaciones fueron detectados por la prueba en tiempo real que no fueron detectados por la prueba de secuenciación de Sanger, específicamente 5 casos para el codón 12 o 13 y 2 casos para el codón 61. El Sanger método de secuenciación, desarrollado en 1975, fue considerado uno de los métodos básicos de detección de mutaciones; Sin embargo, este método parece tener sensibilidad limitada-un nivel bajo del alelo mutante puede ser indetectable por este método [31]. Por el contrario, la prueba de PCR en tiempo real incluyendo varios kits comerciales se considera que es un método altamente sensible que muestra ventajas en la detección de
KRAS
mutaciones [32]. Hasta la fecha, la considerable heterogeneidad intratumoral de alteraciones moleculares y su impacto clínico de la terapia dirigida se han descrito en varios tumores. En CRC, varios estudios informaron la significación clínica de
KRAS
heterogeneidad en el tratamiento anti-EGFR [5,33,34]. Normanno et al. sugiere que un bajo contenido de
KRAS
alelos mutantes era suficiente para producir resistencia a los anticuerpos monoclonales de EGFR, y el umbral de su estudio fue de 3 ~ 10% de mutante
KRAS
frecuencia de los alelos que no era previsible para ser detectado mediante el uso de Sanger de secuenciación [33]. Aunque se necesitan más estudios para validar estos resultados y aclarar el papel de las alteraciones moleculares de resistencia a tratamiento anti EGFR, la detección precisa de estas mutaciones tiene una gran importancia clínica.
En conclusión, se encontró que la prevalencia de
KRAS mutaciones
fue 54,5% en pacientes con CCR avanzado de Corea, que fue más frecuente que la reportada en otras poblaciones.
BRAF
mutaciones o
HER2
amplificaciones fueron encontrados en el 16,1% de
KRAS
pacientes de tipo salvaje, y además, el análisis combinado mostró que
KRAS de tipo salvaje
pacientes con
BRAF
o
HER2
amplificaciones tenían el peor pronóstico.
PIK3CA
mutaciones se observaron con mayor frecuencia en
KRAS
tipo mutante que en el tipo salvaje
KRAS
pacientes con CCR.