Extracto
Objetivo
Para examinar la expresión LMP10 y su posible impacto en el resultado clínico en el virus del papiloma humano (VPH) amigdalina positiva y VPH-negativas y la base de la lengua carcinoma de células escamosas (TSCC y BOTSCC).
Antecedentes
Resultado es mejor en TSCC VPH-positivo y BOTSCC en comparación con el juego tumores VPH-negativas, con aproximadamente el 80% frente al 40% de supervivencia libre de enfermedad a los 5 años (DFS ) con un tratamiento menos agresivo que la quimiorradioterapia de hoy. Dado que el tratamiento actual a menudo da lugar a efectos secundarios dañinos, menos la terapia intensiva, con la supervivencia del paciente sostenida sería una alternativa atractiva. Sin embargo, otros marcadores junto con el VPH son necesarios para seleccionar a los pacientes y para este propósito la expresión LMP10 se investiga aquí en paralelo a la condición de VPH y el resultado clínico.
Materiales y Métodos
De 385 pacientes diagnosticados entre 2000 y 2007 en el hospital Universitario Karolinska, 278 fijados con formol y embebidos en parafina TSCC y biopsias BOTSCC, con la condición de ADN del VPH conocida, se ensayaron para LMP10 expresión nuclear y citoplasmática (fracción de células positivas y la intensidad de la tinción). a continuación, los datos se correlaciona con el resultado clínico.
Resultados
Un ausente /bajo en comparación con un alto LMP10 fracción moderada /nuclear de células positivas se correlacionó con una mejor 3 años DFS en el VPH -positivo grupo de pacientes (log-rank p = 0,005), pero no en el grupo de VPH-negativas. En el grupo de VPH-negativas de los pacientes, en contraste con el grupo de VPH-positivo, moderada /alta LMP10 fracción citoplásmica y débil /intensidad citoplasmática moderada /alta LMP10 correlacionado a una mejor 3-años DFS (p = 0,003 y p = 0,001) y 3 años de supervivencia global (p = 0,001 y 0,009).
Conclusión
LMP10 expresión nuclear en el grupo de VPH-positivo y LMP10 expresión citoplasmática en el grupo de VPH-negativas de los pacientes en correlación con un mejor resultado clínico
Visto:. Tertipis N, L Haeggblom, Nordfors C, N Grün, Näsman A, Vlastos A, et al. (2014) Correlación de LMP10 Expresión y el resultado clínico en el Virus del Papiloma Humano (VPH) Positivo Negativo y el VPH-amigdalar y la base de la lengua del cáncer. PLoS ONE 9 (4): e95624. doi: 10.1371 /journal.pone.0095624
Editor: Anthony WI. He aquí, la Universidad China de Hong Kong, Hong Kong
Recibido: 7 Febrero, 2014; Aceptado: March 27, 2014; Publicado: 21 Abril 2014
Derechos de Autor © 2014 Tertipis et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. El sueco Fundación de Cáncer de 120.417; El Consejo Sueco de Investigación Médica K2011-56X-15282-07-06; El cáncer de Estocolmo Fundación 121043; Henning y la Fundación Ida Perssons; Instituto Karolinska 2013fobi37387; El Consejo del Condado de Estocolmo 520007; El Fondo Jubileo V Gustavo Rey; La Fundación para el Cáncer y Alergia. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:. Co-autor Torbjörn Ramqvist es un miembro del Consejo Editorial PLoS ONE. Esto no altera nuestra adhesión a PLoS ONE políticas y criterios editoriales.
Introducción
En 2007, la Agencia Internacional para la Investigación del Cáncer (IARC) reconoció el virus del papiloma humano (VPH) como un factor de riesgo para carcinoma de células escamosas de la orofaringe (OPSCC) basado en los datos por otros y nosotros [1], [2], [3], [4]. Por otra parte, OPSCC HPV-positiva, con amigdalar y la base del cáncer de células escamosas lengua (TSCC y BOTSCC) que representan el 80% de los casos, tiene un mejor pronóstico en comparación con los correspondientes tumores VPH-negativas (80% vs. 40% -60 % supervivencia libre de enfermedad a 3 años (DFS) [1], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12]. en paralelo con un reciente aumento en la incidencia de VPH-positivo CCCA en muchos países, la terapia curativa para el carcinoma de cabeza y cuello de células escamosas (HNSCC), incluyendo OPSCC, se ha vuelto más agresiva por ejemplo, con quimio-radioterapia resulta en una mayor efectos adversos graves [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22], [23], [24] . un tratamiento menos agresivo probablemente sería suficiente para la mayoría de los pacientes con TSCC VPH-positivo y BOTSCC, donde el VPH es más común y donde viral tiene un gran impacto sobre la supervivencia [25]. Sin embargo, antes de que se estrecha el tratamiento, otros marcadores en combinación con el VPH estado sería de utilidad para seleccionar pacientes con TSCC VPH-positivo y BOTSCC con una respuesta favorable muy probable que la terapia [26], [27], [28], [29], [30], [31], [32] . Estudios recientes han identificado algunos marcadores, por ejemplo HLA de clase I ausentes /o expresión baja intensidad CD44, o alto CD8 + de linfocitos infiltrantes de tumores (TIL) que cuenta en TSCC y BOTSCC VPH-positivo, que todos mostraron ser favorables factores pronósticos y indican una probabilidad del 95-100% de enfermedad a 5 años supervivencia específica [26], [27], [28], [29], [30], [31], [32]. Por desgracia, los biomarcadores anteriores sólo reconocen una fracción de todos los pacientes con una buena probabilidad de responder bien al tratamiento y para que los biomarcadores adicionales a los de arriba son necesarios.
LMP10 (proteínas de bajo peso molecular 10) es un beta subunidad de proteasoma 20S, identificado como una unidad inducible tercera IFN-g por Nandi et al 2006 [33]. Junto con LMP2 y LMP7, LMP10 acumule el llamado que actúa sobre immunoproteasome respuesta inmune intensificada. Como un componente de la maquinaria de procesamiento de antígenos (APM), LMP10 está implicada en la vía de péptido de recorte durante la presentación del péptido por las moléculas de HLA. Los defectos en los diferentes componentes de APM se han encontrado en muchos tumores y han mostrado correlación con el resultado clínico de los pacientes [34], [35], [36], [37].
En este estudio, hemos examinado, por tanto, para LMP10 expresión en TSCC VPH-positivo y negativo y VPH-BOTSCC, en 278 pacientes diagnosticados entre 2000 a 2007 en el hospital Universitario Karolinska, y las posibles correlaciones de expresión LMP10 a la supervivencia.
pacientes, materiales y métodos
Declaración de Ética
el estudio se realizó de acuerdo a los permisos éticos 2005 /431-31 /4, 2005/1330/32 y 2009/1278/31/4 del Comité regional de Ética en el Instituto Karolinska, Estocolmo, Suiza. escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los participantes en el estudio
Pacientes y biopsias
Durante 2000-2007, 385 pacientes diagnosticados con TSCC y BOTSCC (definida como la CIE-10 códigos:. C09, C01 0.9 respectivamente) en el hospital Universitario Karolinska, fueron identificados a través del Registro de cáncer de Suecia. De estos, 278 pacientes, con biopsias de pre-tratamiento de diagnóstico, probados anteriormente para el ADN del VPH y con material suficiente, se incluyeron en este estudio [27]. Los 258 pacientes tratados con intención curativa fueron entonces comprendidos en el análisis de supervivencia. la radioterapia (RT) (2,0 Gy /día, de 6.5-7 semanas, la dosis total: 68 Gy) o acelerada RT (1,1 + 2,0 Gy /día durante 4,5 semanas, la dosis total: 68 Gy) fue dado a 192/258 ( 74,4%) de los pacientes, mientras que 66/258 (25,6%) pacientes también tenían la quimioterapia de inducción y concomitante RT. la radiación intersticial (braquiterapia) también fue dado a algunos pacientes (78 Gy) totalmente. Los pacientes con enfermedad ganglionar se sometieron a la disección del cuello 6-8 semanas después de completarse la RT. Los pacientes fueron seguidos cada 3 meses durante los primeros 2 años, y cada 6 meses durante el 3er año, y sus datos de supervivencia se obtuvieron de los registros de los pacientes. El estudio se realizó de acuerdo a los permisos éticos 2005 /431-31 /4, 2005/1330/32 y 2009/1278/31/4 del Comité Regional de Ética en el Instituto Karolinska, Estocolmo, Suecia.
Análisis del VPH
ADN del VPH de los tipos de VPH 27 y betaglobina se ensayó mediante un ensayo múltiple basado en perlas en un instrumento Magpix (Luminex Corporation) como se describe anteriormente [30].
la inmunohistoquímica
en breve fijados con formol y parafina, incrustado (FFPE) muestras de biopsias de tumores (4 M) se des-con parafina en xileno y rehidratada en etanol de concentraciones decrecientes. Después se calentaron en tampón de citrato (pH 6,0) para la recuperación de antígeno. los sitios no específicos se bloquearon con 1,5% de suero de caballo diluido en solución salina tamponada con fosfato (PBS). secciones de parafina se incubaron durante la noche a + 8 ° C con el anticuerpo primario, MECL-1 C-2 (anti-LMP10 anticuerpo de Santa Cruz Biotechnology), en una cámara húmeda seguido por la aplicación secundaria de anticuerpos y un kit estándar ABC-HRP para la detección de antígeno . Se utilizó el cromógeno-3'-diaminobenzydine (DAB) para la visualización. Hematoxilina se aplicó para contratinción seguido de deshidratación en etanol de concentraciones crecientes y xileno.
Evaluación de Inmunohistoquímica La tinción
LMP10 citoplasmática y nuclear de la tinción, incluidos los controles negativos y positivos (Figura 1), se evaluó por dos investigadores independientes ciegos para los datos y el resultado clínico, similar al descrito anteriormente [32]. La fracción de células malignas teñidas para LMP10 en el núcleo y el citoplasma se evaluó por separado semi-cuantitativamente en 4 grados de porcentajes de células tumorales teñidas: 0 (0%), 1 (1-25%), 2 (26 a 75% ) o 3 (76-100%). La intensidad de la tinción se anotó por separado y se evaluó como tinción ausente, débil, moderado y fuerte. La intensidad de la tinción se definió mediante la comparación de la intensidad de la tinción en las células malignas, con la coloración de los controles internos (tejido linfoide normal) por lote. En la minoría de los casos en que no se incluso, se utilizó la tinción dentro de la misma muestra la intensidad de la mayoría de las células en el análisis. La tinción y evaluación de los antígenos HLA de clase I se realizaron en las mismas muestras tumorales en dos estudios anteriores como se describe en otro lugar [27], [28]
(A):. /Moderada expresión citoplásmica débil de LMP10; (B): /alta expresión citoplásmica nuclear y ausente moderado de LMP10; (C): nuclear LMP10 ausente o indetectable y la expresión citoplasmática; (D): Moderado nuclear y la expresión citoplasmática de LMP10. Una ampliación de 400X.
Análisis estadístico
Las dos características del paciente y los datos categóricos se analizaron mediante el test de Chi-cuadrado o, para la comparación de los valores medios, la prueba t de Student. Se informó de dos colas valores de p (5% de nivel de significación) para todos los análisis. La supervivencia se mide en días de diagnóstico hasta que se produjo un evento, o hasta 3 años después del diagnóstico cuando los pacientes fueron censurados. La muerte debida a cualquier causa (evento) se incluyó en la definición de la supervivencia global (SG), mientras que sólo se utilizó recurrencia de la enfermedad (TSCC o BOTSCC) para el cálculo de la supervivencia libre de enfermedad (SLE). En particular, la muerte de los pacientes sin recurrencia antes fue censurado en el día 0 en el cálculo de DFS. Estimador de Kaplan-Meier se utilizó para la SLE y la SG, y las diferencias en la supervivencia de los pacientes fueron analizados utilizando la prueba de log-rank. El modelo de riesgos proporcionales de Cox se utilizó para el cálculo de los coeficientes de riesgo ajustados y no ajustados (HRS). Todos los cálculos y los análisis se realizaron utilizando IBM Corp., SPSS, versión 21.0.
Resultados
Los pacientes, las características del tumor y el VPH
Las características de los 278 pacientes, 195 (70%) con TSCC y 83 (30%) con BOTSCC y sus tumores se muestran en la Tabla 1. en total 207/278 (74%) de los tumores fueron VPH-positivo. Los pacientes con tumores VPH positivos eran más jóvenes (media y la mediana de edad de 60 años) que aquellos con tumores VPH-negativo (la media y la mediana de edad de 64 y 62 años, respectivamente) (p & lt; 0,001) (Tabla 1 y los datos no presentados). En el total de 258/278 (92,8%) pacientes recibieron tratamiento con intención curativa (Tabla 1), 199/207 (96%) de los pacientes con tumores positivos para VPH (edad media de 60 años) y 59/71 (83%) de los pacientes con tumores VPH-negativas (edad media 62 años). Sólo los 258 pacientes tratados con intención curativa se incluyeron en el análisis de 3 años SLE y la SG.
Expresión LMP10 y el VPH en TSCC y BOTSCC
LMP10 expresión nuclear y citoplasmática era evaluado para todos los 278 pacientes y se ejemplifica en la figura 1. LMP10 expresión nuclear no mostró ninguna diferencia significativa entre el TSCC y grupos BOTSCC, ni con respecto a la fracción de células positivas ni con la intensidad de la tinción (p = 0,115 y p = 0,313, respectivamente, Tabla 2). Sin embargo, la fracción de células positivas citoplasmáticos LMP10 fue relativamente mayor en el HPV-positivas en comparación con el grupo de VPH-negativos (p = 0,033), mientras que no hubo diferencia significativa en LMP10 intensidad de la tinción citoplásmica entre los grupos (p = 0,211, la Tabla 2).
LMP10 tinción nuclear y el estado del VPH en correlación con la evolución clínica
LMP10 expresión nuclear se evaluó tanto para la fracción de células positivas en el núcleo, y por la intensidad de tinción nuclear, y se correlacionó con la supervivencia de los 258 pacientes tratados con intención curativa (como se ilustra curvas de Kaplan-Meier en las figuras 2 y 3, respectivamente)
a y D:. DFS (a) y OS (D ) para TSCC y BOTSCC independientemente de la condición de VPH del tumor. B y E: DFS (B) y OS (E) de los pacientes con TSCC VPH-positivo y BOTSCC. C y F:. DFS (C) y OS (F) de los pacientes con TSCC VPH-negativas y BOTSCC
A y D: DFS (A) y OS (D) para TSCC y BOTSCC independientemente del estado de HPV del tumor. B y E: DFS (B) y OS (E) de los pacientes con TSCC VPH-positivo y BOTSCC. C y F:. DFS (C) y OS (F) de los pacientes con TSCC VPH-negativas y BOTSCC
Un ausente /baja (≤25%), en comparación con una moderada /alta ( 26-100%), fracción de células positivas LMP10 nucleares correlacionados con una SSE más de 3 años en todo el grupo de pacientes, y para los pacientes con tumores VPH positivos, pero no entre los pacientes con tumores VPH-negativas (log-rank test , p = 0,002, p = 0,005 y p = 0,688, respectivamente) (Figura 2 A-C). Sin embargo, hubo diferencias significativas en la SG a 3 años, al comparar parámetros similares, para todo el grupo, el de los grupos negativos de VPH VPH-positivo y (log-rank test, p = 0,115, p = 0,158 y 0,561, respectivamente) ( Figura 2 D-F).
un ausente, en comparación con débil /moderada /fuerte (presente), LMP10 intensidad de la tinción nuclear se correlaciona con una mejor 3 años DFS para todo el grupo (p = 0,01) y el grupo de HPV-positivos (p = 0,037), pero no para el grupo de VPH-negativos (p = 0,473) (Figura 3A-C). Para OS 3 años esto sólo se observó para todo el grupo de pacientes (p = 0,014) (Figura 3 D).
La posible influencia de la expresión LMP10 nuclear, así como la intensidad de la tinción nuclear LMP10 se prosiguió por separado para los grupos de VPH-positivos y negativos de VPH.
Un análisis de regresión de Cox multivariado se realizó en pacientes con tumores VPH positivos y negativos de VPH por separado, incluyendo la fracción de células positivas LMP10 nucleares o LMP10 intensidad nuclear, la edad y el estadio del tumor, con respecto a la SSE de 3 años y SG a 3 años. Para el grupo de VPH-positivo una fracción ausente /baja en comparación con una alta fracción moderada /de las células LMP10 positivos todavía era un determinante de una mejor 3-años DFS (p = 0,027) (Tabla 3), pero no la edad o etapa, (p = 0,079 y p = 0,744) (datos no mostrados). Además, ninguno de estos parámetros eran determinantes de OS 3-años, a excepción de la edad (p = 0,006, datos no mostrados) (Tabla 3). LMP10 intensidad de la tinción nuclear no alcanzó significación estadística para la DFS de 3 años o SG a 3 años (Tabla 3). El análisis correspondiente para el grupo de VPH-negativas sugerido que la expresión LMP10 nuclear no tuvo impacto en el resultado clínico en este grupo (3 años DFS y 3 años OS) (Tabla 3).
LMP10 citoplasmática tinción y el VPH estado en correlación con la evolución clínica
LMP10 expresión citoplasmática se evaluó tanto para la fracción de células positivas y la intensidad de la tinción y se correlacionó con la supervivencia de los 258 pacientes tratados con intención curativa (ilustrado como de Kaplan-Meier curvas en las figuras 4 y 5, respectivamente)
a y D:. DFS (a) y OS (D) para TSCC y BOTSCC independientemente de la condición de VPH del tumor. B y E: DFS (B) y OS (E) de los pacientes con TSCC VPH-positivo y BOTSCC. C y F:. DFS (C) y OS (F) de los pacientes con TSCC VPH-negativas y BOTSCC
A y D: DFS (A) y OS (D) para TSCC y BOTSCC independientemente del estado de HPV del tumor. B y E: DFS (B) y OS (E) de los pacientes con TSCC VPH-positivo y BOTSCC. C y F:. DFS (C) y OS (F) de los pacientes con TSCC VPH-negativas y BOTSCC
Una moderada /alta en comparación con un /baja fracción de células positivas ausente citoplasmáticos LMP10 correlacionados a una mejor DFS 3 años para los pacientes con tumores negativos de VPH, pero no para todo el grupo de pacientes, ni para los pacientes con tumores positivos para VPH, (log-rank test, p = 0,003, p = 0,488 yp = 0,086 , respectivamente (Figura 4 a-C). para 3 años Sistema operativo la correlación correspondiente fue significativa tanto para el VPH-negativas y todo el grupo, pero no para el grupo de VPH-positivo (log-rank test, p = 0,001, p & lt ;. 0,001 y p = 0,159, respectivamente), (Figura 4 D-F)
débil /moderada /alta (presente) LMP10 intensidad de la tinción citoplásmica en comparación con la tinción LMP10 ausente se correlacionó con una mejor 3-años DFS para los pacientes con tumores negativos de VPH, pero no para todo el grupo o para los pacientes con tumores positivos para VPH (log-rank test, p = 0,001, p = 0,219 y 0,368, respectivamente) (Figura 5 a-C). para 3 años Sistema operativo la correlación correspondiente fue significativa tanto para el VPH-negativas y todo el grupo, pero no para el grupo de VPH-positivo (log-rank test, p = 0,009, p = 0,01 yp = 0,334, respectivamente (Figura 5 D -F).
la posible influencia de LMP10 expresión citoplasmática fue perseguido por separado para los grupos negativos de VPH VPH-positivo y (Tabla 3). Para que un análisis de regresión de Cox multivariado se realizó en pacientes con tumores VPH-positivos y negativos de VPH, incluyendo la fracción de células positivas LMP10 citoplasmáticos, la edad y la etapa, con respecto a los 3 años de SSE y SG a 3 años. Un análisis correspondiente se realizó para LMP10 intensidad citoplasmática. Para los pacientes con tumores negativos de VPH, tanto una alta fracción moderada /de células positivas citoplasmáticos LMP10, y la presencia de LMP10 tinción citoplásmica se correlaciona con una mejor 3-años DFS (p = 0,014 y p = 0,006, respectivamente) (Tabla 3 ). Las cifras correspondientes a los 3 años de la SG fueron p = 0,010 yp = 0,051, respectivamente (Tabla 3). La edad y la etapa no alcanzaron significación estadística en el análisis de los pacientes con tumores VPH negativos (datos no mostrados).
El análisis correspondiente para el grupo de VPH-positivo sugerido que la expresión citoplasmática LMP10 no tuvo ningún impacto en el resultado clínico (3 años DFS y 3 años OS) (Tabla 3).
Expresión LMP10, HLA Clase I Expresión y Estado del VPH en correlación con la evolución clínica
en estudios recientes se ha demostrado que la expresión de HLA de clase I ausente o baja se correlaciona con una mejor supervivencia en pacientes con TSCC VPH-positivo y BOTSCC, mientras que lo contrario era el caso de los pacientes con TSCC VPH-negativas y BOTSCC [27], [28]. Para investigar si la correlación de expresión LMP10 predice la supervivencia independiente de la expresión de clase I HLA o no, dos análisis multivariante de Cox-regresión con respecto a los 3 años DFS se llevaron a cabo, con los datos de HLA de clase I obtenidos a partir de Näsman et al [27].
En el primer análisis, TSCC VPH-positivo y BOTSCC fueron examinados y el análisis incluyeron la fracción de expresión que LMP10 células positivas nucleares, la edad, el estadio y HLA de clase ensayada como la intensidad de HCA2-tinción. Tal como se presenta en la Tabla 4, tanto LMP10 e intensidad HCA2 fueron predictores independientes de 3 años DFS.
En el segundo análisis, TSCC VPH-negativas y BOTSCC fueron estudiadas y el análisis contenían la fracción de LMP10 células positivas frente al citoplasma, la edad, el escenario y la fracción de células positivas HLA de clase I ensayados por HCA2-tinción. Tal como se presenta en la Tabla 4, tanto la fracción de células positivas y LMP10 HCA2 fueron predictores independientes de 3 años DFS.
Discusión
El presente estudio investigó la expresión LMP10 tanto en los compartimentos nucleares y citoplasmáticos , en relación con el VPH y el resultado clínico en 195 casos 83 BOTSCC TSCC y. expresión nuclear y citoplásmica de LMP10, incluyendo tanto la fracción de células positivas y la intensidad de la tinción fue similar en los tumores VPH-positivo y el VPH-negativas, a excepción de la más alta fracción de células positivas LMP10 citoplásmicos en el grupo de VPH-positivo.
por otra parte, una baja fracción ausente /de las células LMP10 positivas en el núcleo, así como la intensidad de la tinción nuclear ausente correlacionado con un mejor 3 años DFS para los pacientes con tumores VPH positivos, pero no para aquellos con tumores negativos de VPH . Se encontró que la inversa para la tinción LMP10 citoplásmico, donde una moderada /alta fracción de células positivas y la intensidad débil /moderada /alta se correlacionó con mejor 3-años DFS y OS en el VPH-negativo, pero no en el grupo VPH-positivo.
la razón de la diferencia con respecto a la tinción citoplasmática y nuclear LMP10 y la supervivencia de los grupos de VPH-positivos y negativos de VPH no es obvia. En estudios anteriores LMP10 expresión citoplásmica ha sido evaluado en la vejiga y el cáncer de esófago, tanto para la fracción de células positivas y la intensidad de la tinción, pero no ha demostrado tener ningún impacto pronóstico [34], [35], [37]. Sin embargo, en estos estudios no hubo análisis separado de expresión nuclear y citoplasmática. En este estudio, la evaluación y el análisis de la tinción nuclear y citoplasmática proporcionado información adicional.
Para nuestro conocimiento no existen estudios previos sobre la expresión LMP10 en relación con la supervivencia en el CECC. Meissner
et al.
Demostró una correlación con la supervivencia en HNSCC tanto para LMP2 y LMP7 [38] y en un reciente estudio, la expresión de LMP7 también se correlaciona con la supervivencia en el cáncer salival [39]. Sin embargo, los tumores no se analizaron para la presencia de VPH en cualquiera de estos estudios.
El hallazgo de que una baja expresión LMP10 nuclear correlaciona con una mejor 3-años DFS en el grupo de VPH-positivo, mientras que una correspondiente LMP10 expresión citoplasmática alta correlación con una mejor 3 años DFS en el grupo de VPH-negativas sugiere varias implicaciones. En primer lugar, nuestro estudio sugiere que LMP10 podría ser utilizado como marcador pronóstico para los pacientes, ya sea con tumores positivos al HPV o VPH-negativas. Hemos sido previamente capaces de mostrar que un biomarcador, en la misma vía, la expresión de HLA de clase I, se puede utilizar de una manera diferencial para predecir el resultado clínico en tumores VPH positivos y negativos de VPH. Por lo tanto, una expresión ausente /baja HLA de clase I es un factor pronóstico positivo para los pacientes con tumores VPH positivos, mientras que lo contrario es cierto para los pacientes con tumores VPH-negativas, donde una expresión elevada de HLA de clase I es de beneficio [27]. Por lo tanto, tanto con respecto a HLA de clase I y la expresión LMP10 en relación con la supervivencia, hubo diferencias entre los tumores VPH-positivo y HPV-negativos, aunque éstos fueron más pronunciados para HLA de clase I. En particular, como se demuestra por el análisis multivariante en la Tabla 4, la expresión de LMP10 y HLA de clase I fueron predictores independientes de la supervivencia de los tumores VPH positivos y negativos de VPH. Los mecanismos subyacentes a la regulación de LMP10 y la expresión de HLA de clase I en estos tumores deben por lo tanto, al menos en parte, estar separados.
No se sabe si la presencia de VPH puede influir en la expresión LMP10 directamente, e incluso si esto es el caso, el mecanismo detrás de esta regulación no se conoce. Se ha demostrado que el VPH E5 tiene el potencial de regular a la baja la expresión de HLA de clase I [40]. Ya sea E5 también afecta a la expresión de LMP10 ha, a nuestro conocimiento, no se ha investigado. Se ha demostrado que los virus del papiloma humanos tienen la capacidad de regular el HLA de clase I de cadena pesada, así como algunos de los componentes de maquinaria de procesamiento de antígenos en el nivel transcripcional [41]. Sin embargo, la regulación transcripcional de, por ejemplo, se encontró que el promotor LMP2 ser dependiente de la proteína E7 de HPV18 y la 6b VPH de bajo riesgo, pero no por la E7 de HPV16. Esto sugiere que hay una diferencia de potencial en los efectos celulares causados por la proteína E7 de HPV16 y HPV18. Digno de mención, la mayoría de los casos TSCC y BOTSCC son positivos para HPV16. Si la expresión de LMP10 puede ser regulada por E7 ha, a nuestro conocimiento, no se han investigado. Digno de mención, en el presente estudio la fracción de células positivas LMP10 citoplasmáticas fue mayor en el HPV-positivas en comparación con el grupo de VPH-negativas. Sin embargo, no hubo diferencia significativa en la intensidad de la tinción citoplásmica LMP10 entre los grupos. Esto indica la posibilidad de que algunos, pero no una fuerte regulación por VPH en estas células tumorales.
Existen algunas limitaciones en nuestro estudio. Principalmente el estudio es retrospectivo, pero esto puede no afectar a los resultados. Además, hubo menos casos de VPH-negativo, que es una representación directa de la alta prevalencia del VPH en COCE en pacientes de Suecia en la actualidad.
En conclusión, este estudio muestra que la expresión LMP10 en TSCC y BOTSCC se correlaciona de supervivencia libre de enfermedad para los pacientes con tumores VPH positivos y negativos de VPH y tiene el potencial para ser utilizado en un entorno clínico. Sin embargo, dado que la expresión LMP10 nuclear predice la supervivencia para los pacientes con tumores VPH positivos, mientras que la expresión citoplasmática LMP10 se correlaciona con la supervivencia de los tumores VPH-negativas, necesitaría expresión LMP10 para ser analizados en relación con la condición de VPH del tumor.
Reconocimientos
agradecemos Caitrin Jane Crudden para leer detenidamente el manuscrito.