Extracto
Objetivo
Para explorar los genes de la inmunoglobulina-como receptor de las células killer (KIR) y del ligando de HLA y su relación con los resultados del cáncer colorrectal metastásico (CCRm) los pacientes tratados con la primera línea 5-fluorouracilo, leucovorina, e irinotecán (FOLFIRI).
Métodos
Un total de 224 pacientes con CCRm fueron seleccionados para la tipificación KIR /HLA. La determinación de las combinaciones KIR /HLA se basa en el contenido de genes y variantes. asociaciones genéticas con respuesta completa (RC), tiempo hasta la progresión (TTP) y la supervivencia global (SG) se evaluaron mediante el cálculo de probabilidades y proporciones de riesgo. También se realizó la modelización multivariante con covariables pronósticas.
Resultados
En CR, la presencia de KIR2DL5A, 2DS5, 2DS1, 3DS1 y KIR3DS1 /HLA-Bw4-I80 se asoció con un aumento de las tasas de RC , con la mediana de las RUP que van desde 2.1 a la 4.3, mientras que la ausencia de KIR2DS4 y 3DL1 se asoció con un aumento de las tasas de RC (OR 3.1). Tras el análisis univariado, los pacientes que fueron sometidos a cirugía de resección de tumor, ausencia de KIR2DS5, y la presencia de KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 mostró una mejor SG significativo (HR 01/05 a 02/08). El análisis multivariado identificó como parámetros independientemente relacionados con OS del tipo de tratamiento (cirugía de recursos humanos; 2.0) y el genotipo KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 (HR para T-I80 2.7 y que no existe interacción KIR /HLA funcional 1.8). Para TTP, no se observó asociación con genes /HLA KIR.
Conclusión
marcadores predictivos
Este estudio, por primera vez, evidencias de que la determinación del genotipo de pares KIR-HLA se encuentran asociados con completa respuesta y mejora la predicción de supervivencia global de la respuesta al tratamiento FOLFIRI en el cáncer colorrectal metastásico. Estos resultados sugieren un papel del sistema KIR /HLA en la evolución del paciente, y guían a las nuevas investigaciones sobre los inmunogenética de CCRm través de estudios sobre el mecanismo y la validación clínica
Visto:. De Re V, Caggiari L, M De Zorzi, Talamini R, Racanelli V, Andrea MD, et al. (2014) La diversidad genética del sistema KIR /HLA y evolución de pacientes con cáncer colorrectal metastásico tratados con quimioterapia. PLoS ONE 9 (1): e84940. doi: 10.1371 /journal.pone.0084940
Editor: Amanda Ewart Toland, Ohio State University Medical Center, Estados Unidos de América
Recibido: 2 Agosto, 2013; Aceptado: 28 Noviembre 2013; Publicado: 31 Enero 2014
Derechos de Autor © 2014 De Re et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. El trabajo fue apoyado por la Asociación italiana para la Investigación del cáncer (AIRC n.10266 y n. 12214 Programa Especial Molecular Oncología clínica, 5 × 1000). Ningún organismo de financiación no tenía ningún papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:. Co-autor Valli De Re es un miembro del Consejo Editorial de la revista PLoS ONE . FI recibe regalías por el uso de la prueba genética UGT1A1. Los autores confirman que no hay patentes, productos en desarrollo o los productos comercializados para declarar pertinente para este artículo. No hay más patentes, productos en desarrollo o los productos comercializados para declarar. Esto no altera la adhesión de los autores a todas las políticas de PLoS ONE sobre los datos y compartir materiales.
Introducción
El sistema inmune innato es la primera línea de defensa en respuesta a las células tumorales. Las células asesinas naturales (NK) realizan un papel importante en esta respuesta con su capacidad para matar las células tumorales, producir citoquinas, y la diafonía con el sistema adaptativo. Interacciones entre los receptores de tipo inmunoglobulina los receptores de células killer (KIR) y el antígeno de leucocitos humanos (HLA) -ligand regular la respuesta de las células NK, lo que resulta en una multitud de combinaciones KIR /HLA y diferentes efectos NK. Modificación de las células tumorales debido a quimioterapéutico-tratamiento también puede contribuir a una diferencia de NK-respuesta.
Similar a otros regímenes de combinación en el cáncer colorrectal metastásico (CCRm), los tratamientos basados en FOLFIRI (5-fluorouracilo, leucovorina e irinotecán), que se utiliza en aproximadamente 60% de tratamiento de primera línea en Europa [1], siguen siendo ineficaces en una proporción significativa de los pacientes [2]. La inmunoterapia antitumoral destinado a mejorar naturales inmunidad de células T en los pacientes afectados por tumores malignos avanzados actualmente se están aplicando en la clínica con resultados prometedores, a menudo mostrando un efecto sinérgico con la quimioterapia [3]. Con el fin de optimizar los protocolos terapéuticos y controlar la eficacia de este tipo de terapias, el reconocimiento de los mecanismos exactos que modulan la acción de la inmunidad del huésped que resulta en un efecto sobre el resultado del paciente no son del todo claras y podría involucrar a los receptores de las células T y las células inmunitarias diferentes. Es necesario seguir trabajando para llenar las lagunas que aún persisten en nuestro conocimiento.
La estadificación patológica es la única clasificación de pronóstico utilizado en la práctica clínica para seleccionar pacientes para quimioterapia. Perfiles de expresión génica, que sin embargo requieren muestras de tumores primarios, podría contribuir a la clasificación y el valor pronóstico de predicción de cáncer de colon [4]. Factores adicionales, preferentemente fácilmente disponibles, para identificar pacientes con mayor riesgo de recurrencia (factores pronósticos), así como para predecir que tienen más probabilidades de beneficiarse de la quimioterapia (factores predictivos) son útiles para mejorar la selección de pacientes para quimioterapia adyuvante. Además nuevos criterios de evaluación de respuesta en tumores sólidos (criterios de la OMS), diseñados criterios de respuesta inmune relacionados (RICR) para evaluar las respuestas antitumorales a agentes quimioterapéuticos, está resultando cada vez más en una mejor evaluación de los agentes anti-tumorales [5] para un uso más frecuente de inmunoterapia y inmune-quimioterapia en pacientes con cáncer [6]; [7].
Los diferentes tipos de la infiltración de células inmunes tienen diferentes efectos en la progresión del tumor [8]. Las células NK pueden afectar a la progresión tumoral y podrían representar un marcador sustituto de la respuesta de la inmunidad del huésped contra las células cancerosas, incluyendo CRC [9]; [10]. se encontró la infiltración de células NK in situ a ser mínima dentro de las muestras de CRC resecado quirúrgicamente, a diferencia de los números más altos de células NK en la mucosa normal adyacente [11]. La acumulación de pruebas indica que la sobreexpresión de la HLA-E en las células de CRC conduce a la inhibición de la respuesta anti-tumor mediada por células NK mediante la participación de células T CD8 y subconjuntos de células NK [12].
células NK, tradicionalmente considerados como parte del sistema inmune innato, también se ha demostrado que compartir muchas funciones con la inmunidad adaptativa [13]; [14]. Contribución de la interacción /HLA KIR de señalización en las células NK no se entienden plenamente [15], pero su importancia ha sido subrayada por varios estudios genéticos recientes que han vinculado KIR /HLA-combinaciones con el resultado de diversas enfermedades, y con un poco de la respuesta clínica al tratamiento, incluyendo el de este estudio. células NK preferentemente matan a las células diana que expresan pocos o ningún moléculas HLA de clase I en su superficie. La actividad de las células NK está regulada por un equilibrio de señales del transductor a través de la activación de los receptores inhibitorios y [16].
La mayoría de los receptores NK parecen pertenecer a una familia conocida como los KIR. Se expresan en las células NK y en un pequeño subconjunto de linfocitos T. Los receptores KIR son o inhibitoria (con colas largas (L), es decir, KIR2DL1) o activación (con colas cortas S (), es decir, KIR2DS1). Un distinta KIR normalmente interactúa con un alotipo específica de un HLA de clase I molécula [15]; [17]. Cada célula NK puede expresar varios diferentes receptores inhibidores y /o activadores que funcionan independientemente el uno del otro. En consecuencia, hay un nivel relativamente alto de Pleiotropia y la heterogeneidad de los KIR en los seres humanos. La expresión independiente de los genes KIR polimórficas y ligandos de HLA altamente polimórficos determina la función final de células NK [15]; [18].
Los agentes citotóxicos pueden activar diferentes vías de la muerte celular, induciendo patrones de péptidos de HLA distintos de la presentación cruzada de antígenos tumorales-lanzado a las células T citotóxicas, incluyendo las células NK [19]. Una mayor tasa de absorción de antígeno asociado a tumor por las células presentadoras de antígeno HLA mediada ha informado después de la administración de 5-FU [20]. Los efectos antitumorales de la quimioterapia podrían mejorar aún más funciones de las células NK [21] - [25]
Debido a la nueva función del sistema inmune en la biología de tumores sólidos [26], el papel potencial de. efectores inmunes en la mediación de la eficacia de la terapia [3]; [25] y la falta de información clínica sobre el papel del sistema /HLA KIR en cáncer colorrectal metastásico, que tenía por objeto: 1) caracterizar el perfil genético del sistema KIR /HLA en un grupo homogéneo de pacientes con CCRm tratada con FOLFIRI y 2 ) determinar el efecto de la composición genética del paciente del sistema /HLA KIR en la tasa de respuesta y la supervivencia. Con este fin, hemos desarrollado un KIR /HLA genotipado par para caracterizar el espectro de genes inmunológicos relacionados con el NK en respuesta al tratamiento CRC FOLFIRI en el análisis univariante y multivariante. Aquí analizamos los estudios relacionados con las interacciones KIR /HLA altamente polimórficos, con énfasis en cómo estos genes pueden regular la función NK-hacia la respuesta tumoral y la supervivencia de los pacientes tratados.
Métodos
Pacientes y tratamiento
se utilizó datos de los resultados obtenidos de un estudio previo, y los criterios de elegibilidad y los tratamientos FOLFIRI se han descrito anteriormente en detalle [27] Para este estudio se seleccionaron pacientes con un estadio IV y el CRC recurrente. Los pacientes fueron tratados en primera línea con FOLFIRI solamente, y no se permitieron las terapias biológicas. Los pacientes evaluables para la respuesta objetiva, el tiempo hasta la progresión tumoral (TTP) y la supervivencia global (SG) fueron 224.
La duración media de seguimiento fue de 21,73 meses (rango: 1,07 a 91,8). Las tasas de respuesta fueron las siguientes: respuesta completa (CR, n = 15), respuesta parcial (PR, n = 80), enfermedad estable (SD, n = 62), y enfermedad progresiva (PD, n = 67). La respuesta tumoral se evaluó mediante los criterios de la OMS como se informó anteriormente [28]. OS se definió como el tiempo desde la primera administración del fármaco hasta la fecha de la muerte o el último seguimiento. se censuraron los pacientes vivos en el último seguimiento. TTP se definió como el tiempo desde la fecha de la terapia inicial a la fecha más temprana de la progresión del tumor o el último seguimiento. La mediana de SG fue de 21,7 meses (rango: 1,07 a 91,8). La mediana del THP fue de 8,5 meses (rango: 0,7-41,6). Características de los pacientes se muestran en la Tabla 1.
KIR y HLA Genotipado
Se extrajo el ADN de la sangre utilizando el kit EZ1 Qiagen Italia como se describe anteriormente [29]. Los pacientes fueron genotipados para la presencia de los genes KIR (2DL1-4, 2DL5A y 2DL5B, 3DL1-3, 2DP1, 2DS1-3, 2DS4, 2DS5, 3DP1, y 3DS1) usando una reacción en cadena de polimerasa multiplex reacción-secuencia del cebador específico, optimizado en nuestro laboratorio [30].
alta resolución de HLA de clase I análisis se realizó por PCR tipificación basada en la secuencia con cebadores específicos para los loci a, B y C y el uso del software Asignar SBT (versión 3.27 b) [30]. KIR y genes HLA frecuencias eran representativos de los de una población caucásica [31] y fueron comparables a los encontrados en nuestra serie de donantes de sangre no cáncer (datos no mostrados).
El análisis de los genes KIR-HLA
El contenido de genes KIR muestra un alto grado de variación, en términos de número y tipo de genes presentes. Dos grupos principales de haplotipos KIR se han descrito, basado en el contenido de genes, y se designan como A y B [32]; [33]. Los haplotipos del grupo A tienen una forma sencilla y constante el contenido de genes, representada por genes que codifican receptores inhibidores KIR 2DL1, 2DL3, 2DL4, 2DS4, 3DL1, 3DL2 y 3DL3. Por el contrario, los haplotipos del grupo B tienen el contenido de genes más variables y mayor, que involucra genes que codifican los receptores inhibitorios distintivos y una variedad de receptores activadores.
Las asociaciones de KIR con sus ligandos HLA afines se establecieron sobre la base del valor teórico combinaciones KIR /HLA, de acuerdo con una clasificación estándar [34]. HLA-A, -B y -C moléculas se colocaron en 3 grupos (HLA-C1, C2, y Bw4) basados en las secuencias de aminoácidos que determinan el epítopo de unión a KIR. HLA-C alotipos con asparagina en la posición 80 (HLA-C1) son ligandos para el KIR 2DL2, 2DL3, y 2DS2; HLA-C alotipos con lisina en la posición 80 (HLA-C2) son ligandos para el KIR 2DL1 y 2DS1. En el tercer grupo, alotipos HLA-A y -B con el epítopo Bw4 son ligandos para los KIR 3DL1 y 3DS1 y se distinguen por sustituciones en la posición 77, 80, 81, 82 y 83 en el extremo C terminal de la clase I de HLA a1 dominio ; HLA-A * 03 y * 11 son ligandos para KIR3DL2 y HLA-C * 04 es un ligando para KIR2DS4 [35].
Análisis estadístico
La odds ratio (OR) y el 95% de confianza intervalos (IC) se utilizan para investigar la asociación entre los genes KIR /HLA y la respuesta del tumor (CR, PR, SD y PD). TTP y OS se calcularon utilizando el método de Kaplan-Meier, y se utilizó la prueba de log-rank para probar las diferencias entre los subgrupos. modelos de regresión de riesgos proporcionales de Cox se utilizaron para calcular los coeficientes de riesgo (HR) y IC del 95%. prueba de chi-cuadrado y análisis exacto de Fisher para la tendencia también se utilizaron para probar el efecto de los KIR y antígenos de leucocitos humanos en CR. La independencia de las asociaciones genéticas de las características del tumor y clínicos se puso a prueba mediante modelización multivariante de covariables, incluyendo el sexo, edad, localización del tumor (recto; colon derecho, izquierdo y coma), el estadio TNM el momento del diagnóstico, la cirugía radical (resección quirúrgica de localmente recurrente cáncer). Los resultados se consideraron estadísticamente significativas cuando p & lt; 0,05 (dos caras). Todos los análisis se llevaron a cabo utilizando SAS 9,2 software estadístico (SAS Institute, Inc., Cary, NC).
Comité de Ética Aprobación
El estudio fue coordinado y patrocinado por el Centro di Riferimento Oncológico , Instituto Nacional del cáncer, Aviano, Italia, accordantly al principio Declaración de Helsinki. El uso de la recogida de muestras de sangre fue aprobado por el CNO, Junta institucional: RC linea 4. Todos los pacientes dieron su consentimiento informado por escrito para el análisis genético antes de entrar en el estudio, este consentimiento se considera suficiente y aprobado por la Junta de Revisión Institucional
Resultados
Asociaciones de HLA /KIR con tasas de respuesta completas
Presencia de KIR2DL5A, 2DS5, 2DS1, 3DS1 y KIR3DS1 /HLA-Bw4-I80 se asoció con una mejora de las tasas de RC (RC frente a PR + SD + PD) con RUP que van desde 2.1 a la, 4,3 (p & lt; 0,05, Tabla 2). A la inversa, la ausencia de KIR2DS4 y 3DL1 se asoció con un CR mejorada (OR 3,1, IC 95% 0,0-0,5, p 0,001, Tabla 2). análisis de haplotipos KIR indicó que el haplotipo B /B, incluyendo KIR2DL5A, 2DS1, 2DS5 y 3DS1, pero no KIR2DS4, fue más frecuente en los pacientes con CR (33,3%) que en otros pacientes (4,8%) (OR 5.45, 1.5- 19,1, p 0,013). haplotipos A /A y A /B contienen sólo KIR2DS4 como el único gen KIR activación, de acuerdo con el concepto de que la activación de KIR (Akir) los genes se asocian generalmente sólo con el haplotipo B grupo, un número creciente de genes Akir (con sus afines HLA portadora) se asoció con un mejor CR (p & lt; 0,001, Fig 1).. Ninguno de los pacientes y las características tumorales enumerados en la Tabla 1 se asoció con tasas de RC (p & gt; 0,05, datos no mostrados).
El análisis de genes KIR muestra una tendencia (prueba de ji cuadrado para la tendencia, p & lt; 0,001) entre un número creciente de genes Akir (KIR2DS3 y KIR2DS5; ligando desconocido) o Akir /HLA-ligando (KIR2DS1 /HLA-C2, KIR2DS2 /HLA-C1, KIR2DS4full /HLA-Cw * 04, KIR3DS1 /HLA-Bw4) y la tasa de CR.
Análisis de KIR y sus ligandos de HLA de genotipado, mostró una tasa de CR superior al combinar KIR3DS1 con HLA-Bw4-I80 que cuando se combina bien con el HLA-Bw4-T80 o HLA-Bw6 (no reconocido por KIR3Ds) o en caso de ausencia del gen KIR3DS1, respecto a otros pacientes (PR + SD + PD) (Tabla 2). Entre los diferentes genes KIR, la KIR3DS1 la activación y el KIR3DL1 inhibidora segregan como alelos del mismo KIR3DL1 /locus S1 y KIR3DL1 y KIR3DS1 supuestamente son receptores para un mismo subconjunto de alelos HLA-B. Dentro del ligando HLA-Bw4-I80, las 3 combinaciones diferentes de KIR3DS1 y KIR3DL1 (es decir, la presencia /ausencia, presencia /presencia, ausencia /presencia, respectivamente) eran indicativos de una tendencia de aumento de la frecuencia CR en presencia de KIR3DS1 (p 0,016 , Fig. 2).
el efector NK funciones están determinadas por la señal acumulativa generada a través de la ligadura de la activación y receptores inhibidores de células NK con su ligando HLA putativo en las células diana. Activación (KIR3DS1) y receptores inhibitorios (KIR3DL1) son genes de un mismo locus y tienen especificidad ligando HLA-B similar con por lo tanto un posible papel de equilibrio en la respuesta NK. El receptor KIR3D puede reconocer las moléculas HLA-B que transporten el epítopo Bw4 común (Bw4-I80 y Bw4-T80 variantes), pero no el motivo Bw6. La figura muestra una mayor frecuencia de pacientes con CR en pacientes portadores de KIR3Ds con el ligando Bw4-I80 (10%) que en los pacientes con Bw4-T80 (0%) o Bw6 /6 (4%). Entre el ligando HLA-Bw4-I80, la presencia del gen KIR3DS1 se asocia con una tendencia hacia una tasa de CR mejorado (prueba de Chi cuadrado para la tendencia, p 0,016). + Y - indican la presencia o ausencia del gen, respectivamente
Asociaciones de HLA /KIR con la supervivencia global y el tiempo hasta la progresión
Entre las características del paciente, solamente la resección quirúrgica de localmente recurrente. el cáncer ha mejorado las tasas de supervivencia en comparación con los pacientes que no tenían la resección quirúrgica (mediana 25,1 vs 14,4 meses, HR 2.1, p & lt; 0,001, Figura 3A, la Tabla 3 y Tabla S1)
B) de Kaplan-Meier. parcelas de la asociación entre KIR2DS5 y OS. OS curvas de pacientes con KIR2DS5 (sólida línea de negro), o sin el gen (-, rojo línea discontinua). La implicación de este resultado no pudo ser más investigado como el ligando de KIR2DS5 no ha sido identificado todavía. C) Las representaciones de Kaplan-Meier de la asociación entre KIR3DL1 /HLA-B y OS. OS curvas de pacientes con KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 (sólida línea de negro), KIR3DL1 /HLA-Bw4-T80 (línea discontinua roja), o sin ninguno (- /-, línea discontinua verde). D) Kaplan-Meier parcelas de la asociación entre una combinación de cirugía, KIR2DS5 y KIR3DL1 /HLA y OS. Sí y no se refiere a la presencia o ausencia de una cirugía radical, respectivamente. - Se refiere a la ausencia del gen. método de Kaplan-Meier y log-rank se utilizaron para probar las diferencias entre los subgrupos. 0,95 y 0,95 LCL UCL; inferior y superior del percentil 95, respectivamente; CI (95%); intervalo de confianza del 95%.
Entre los genotipos (Tabla S1), la presencia de KIR2DS5 gen (Figura 3B) y KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 (Figura 3C) se asoció con una mejora de la SG , mientras que KIR3DL1 /HLA-Bw4-T80 (HR 2,8, p & lt; 0,001) o una interacción receptor no KIR3DL1 (- /-) (HR 1,8, p 0,007) se asoció con peor OS. La mediana de SG fue de 25,1 meses en los pacientes KIR2DS5, 29,4 meses (22.7-43.0) en KIR3DL1 /pacientes HLA-Bw4-I80, 14,7 meses (11.7-22.3) en pacientes KIR3DL1 /HLA-Bw4-T80, y 21,6 meses (18,6 a 26,7 ) en pacientes sin KIR3DL1 /HLA-Bw4 (ya sea I80 o T80 o ausencia de KIR3DL1).
en el análisis multivariado incluyendo la única característica clínica asociada con OS (cirugía radical) y los genotipos /HLA KIR, cirugía y KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 retuvo un efecto independiente sobre la SG (CRI 2,0, p & lt; 0,001 y HR 02/07 a 01/08, p & lt; 0,001 a 0,006, respectivamente) (Tabla 3). El efecto de los compuestos pacientes que tenían (o no) la cirugía radical, que tenían (o no) de genes KIR2DS5 que está parcialmente en desequilibrio de ligamiento con KIR3DL1 (http://www.allelefrequencies.net/kir6010a.asp. Consultado el 2012 ctubre 17) y KIR3DL1 /pares HLA-B en el sistema operativo se ilustra en la figura 3D. La mediana de SG fue 43,0 meses en los pacientes tratados con cirugía, sin KIR2DS5 pero KIR3DL1 /Bw4-I80 + genotipo y 13,7 meses en los pacientes sin tratamiento de cirugía y que tiene un genotipo incluyendo pero no KIR2DS5 KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 genes par.
Para el análisis de TTP, ni los genes ni las combinaciones de genes /HLA KIR KIR individuales se asociaron significativamente con TTP (p & gt; 0,05, datos no mostrados)
Discusión
el estudio,. por primera vez, se ha investigado la relevancia clínica de KIR /HLA combinaciones de genes en pacientes con CCRm y tratamiento FOLFIRI. Dependiendo de la combinación /HLA KIR, la respuesta tumoral y OS diferían entre los pacientes que tenían características clínicas y tumorales similares. Sólo dos estudios han investigado la distribución de los genes KIR y HLA en muestras de CRC [36]; [37], pero estos estudios analizaron sólo las frecuencias KIR /HLA en pacientes con cáncer en comparación con sujetos normales de control con el fin de probar el impacto del estado KIR /HLA en la susceptibilidad del individuo a CRC.
Se han hecho avances en los últimos años en tratamientos de cáncer colorrectal metastásico, con la introducción de nuevos fármacos dirigidos molecularmente como anticuerpos contra el VEGF o los objetivos de EGFR; sin embargo, la tasa de supervivencia de largo son bajos. Las células NK proporcionan una defensa de primera línea contra las células transformadas malignamente [38]; [39] y la evidencia reciente de la utilización de anticuerpos de bloqueo del receptor de muerte celular programada inmunosupresor 1 (PD-1) y la vía de relieve el papel central de reinducción de sistema inmune del huésped y de potenciar la citotoxicidad mediada por células NK en varios pronóstico del tumor [40 ]; [41] incluyendo CRC [3]. Por otra parte, algunos de los anticuerpos terapéuticos aprobados clínicamente para tratar el cáncer, tales como cetuximab y rituximab, se consideran para funcionar parcialmente a través de la activación de células NK actividad ADCC mediada por [42]. En general, a pesar del papel central de las células NK en las respuestas inmunes del huésped y el hecho de que el sistema de KIR gen /HLA es el sistema principal receptor capaz de modular la función de células NK, los genotipos KIR /HLA en el resultado clínico en cáncer colorrectal metastásico ha sido esencialmente sin explorar .
el análisis de la KIR /HLA composición genética de los pacientes con CCRm propone que la presencia de los KIR 2DL5A, 2DS5, 2DS1 3DS1 y /HLA-Bw4 par ligando y ausencia del KIR2DS4 y 3DL1 (Tabla 2, figuras 1-2) podría influir en la probabilidad de lograr una respuesta radiológica después de la quimioterapia. Por lo tanto, en nuestros pacientes de la serie que muestran un haplotipo más activador (por ejemplo haplotipo B /B), y las células NK en especial KIR3DS1 /HLA-Bw4-positivos en ausencia de su gen del receptor KIR3DL1 inhibidor de contrarresto, debería ser más propensos a la actividad citolítica y CR de otros pacientes.
Estado de la técnica para KIR genotipos /HLA indican que las combinaciones KIR /HLA inhiben las células NK con diferentes intensidades [43]; [44] y que las células NK se activarán cuando se retira la inhibición, por lo que la activación de los receptores deben implicar estimulantes [45]. Además, se encontró una tendencia disminución de la actividad citolítica NK contra células diana receptores, que tienen HLA-C2 (fuerte), HLA-C1 (modesta), HLA-Bw4 (débil actividad citolítica) y, a continuación, al no tener que faltan auto-ligando [ ,,,0],46]; [47]. Por lo tanto, las células NK que tienen receptores KIR inhibitorios con una avidez inferior para HLA-ligando (por lo tanto, tiene una función de disminución de la relación inhibidora a otro KIR) y que tienen muchos receptores KIR activador pueden mostrar una citólisis mediada por NK aumento de las células diana. Por ejemplo, la presencia de la fuerte KIR2DS1 receptor de activación con sus afines ligando HLA-C2 eran más propensos a matar a HLA-C2 + células [48] y esto se asoció con un aumento de la supervivencia libre de progresión (SLP) en pacientes con leucemia linfocítica crónica [49 ]. Además, el bloque de la interacción KIR /HLA inhibitoria se ha demostrado para disminuir la progresión de la leucemia en un
in vivo
modelo animal [50]. En los pacientes tratados con el trasplante autólogo de progenitores hematopoyéticos de alto riesgo para el neuroblastoma, la ausencia de combinación KIR /HLA inhibitoria funcional se asoció con un menor riesgo de muerte y la progresión [51]. Una actividad citotóxica mediada por células NK aumento obtenido por bloqueo del receptor inhibidor de PD-1 upexpressed en células NK de pacientes con varios tumores sólidos, incluyendo CRC [52] también se asoció con una regresión del cáncer durable [3]. Nuestros resultados son por lo tanto compatible con la hipótesis de que la presencia de los KIR activador (es decir, alto número de aKIRs y la presencia de KIR3DS1 /HLA-Bw4-I80, Fig. 1 y 2) tiene un efecto beneficioso sobre la respuesta tumoral. Se sabe que la quimioterapia puede inducir distintos patrones de HLA presentación cruzada de antígenos-lanzado tumorales a células T citotóxicas [20]; [53], y que los efectos antitumorales de la quimioterapia pueden ser modificados por las células NK [21]; [22]; [25]. Down-regulación de la presentación de antígenos por la maquinaria de HLA y una reducción en el número de células T que infiltran el sitio del tumor se han asociado con un peor pronóstico [54]; [55]. Por otra parte, el recuento de células NK en camas tumorales [11]; [12]; [53]; [56] han demostrado ser pronosticadores favorables, también en CRC. Nuestros datos parecen complementar estas observaciones, lo que sugiere que, en función de un fenotipo de células NK más sensible (número de aKIRs) y pares específicos activadores /inhibidores KIR /HLA (por ejemplo KIR3D /HLA-Bw4), la respuesta del tumor podría ser más o menos eficaz , dando lugar a un grado diferente de reducción en el tamaño de los tumores primarios. A nivel celular, estos efectos podrían estar mediados por un aumento de la acumulación de los receptores KIR de activador en las células NK y HLA-ligandos eficaces en las células tumorales que mejoran la inmunidad tumoral mediada por NK. Por analogía con los resultados, en otras situaciones, el resultado de la citólisis puede ser más eficaz cuando está presente una dosis baja de células diana, pero no suficientemente eficaz en el caso de la alta dosis de células diana en los que es probable la respuesta inmune innata abrumado [57]. De la misma manera, es posible que algunos péptidos (nuevos o sólo son más abundantes) pueden ser presentados por HLA a KIR en el curso del crecimiento del cáncer, o incluso editarse debido al tratamiento CCRm, y por lo tanto que los complejos de péptidos /HLA pueden influir en la NK función de las células en el sitio del tumor [58]; [59] - [64]
Entre las características de los pacientes, sólo la cirugía ups OS.. Los datos de KIR y KIR /HLA genotipo mediante análisis univariante identificó dos KIR asociados con la supervivencia encontrado previamente asociado con CR; la KIR2DS5 y KIR3DL1. Después de la comparación con la cirugía multivariante, sólo el KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 siguen siendo estadísticamente significativa, lo que indica que KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 genotipo era altamente predictiva de la supervivencia independiente de la cirugía (Tabla 3). Desde i) hasta la actualidad no se conoce el ligando de KIR2DS5, ii). KIR2DS5 está en desequilibrio de ligamiento positivo con el gen de KIR3DL1 (LD 30), iii) KIR3DL1 y 3DS1 son genes de un mismo locus, iv) KIR3D genotipo y la cirugía son factores independientes (Tabla 3), se evaluaron sus efectos por los genes KIR compuestos en parcelas OS Kaplan Meier de los pacientes previamente tratados con cirugía y quimioterapia combinada o tratadas únicamente con quimioterapia porque la cirugía no se indicó. Los resultados mostraron pacientes con un mejor sistema operativo de los otros (mediana de SG 79,4 al 22,9 meses); el mejor aumento de OS se encontró cuando tanto KIR3DL1 y 3DS1 genes del mismo locus estaban en la presencia de su homólogo HLA Bw4-I80 (OS mediana 79,4 meses); Los pacientes que reciben un tratamiento quirúrgico o que tenían un gen HLA-Bw4-T80 (2 factores independientes) tenían todas un peor sistema operativo (OS mediana de 14,4 meses, la Figura 4). Teniendo en cuenta que la RC se encontró asociado con un mayor activatory fenotipos de células NK y que CR se asoció con un aumento en la SG, nuestra hipótesis de trabajo es que KIR3DL1 inhibitoria /HLA-Bw4-I80 y la ausencia de genotipos KIR2DS5 encontrado asociado con un mayor OS eran determinantes de subconjunto de células NK, que tiene un potencial funcional para un fenotipo inhibidor que es necesaria para mantener el control de enfermedades y prolongar la supervivencia. Esta observación es similar a los encontrados durante la infección viral aguda; De hecho, durante, por ejemplo, 1 infección de la inmunodeficiencia humana aguda tipo virus, la expansión de células NK puede estar asociado primero con una expansión no específica de la activación de KIR-expresando las células NK, que sin embargo es seguida por la aparición de un KIR3DL1 protectora + que expresan las células NK , pero sólo en presencia de su putativo, HLA-Bw4-I80 ligando [65]. Sin embargo, inhibidores pares KIR HLA se demostraron para jugar un papel crítico en la modulación de la función de células NK durante el desarrollo NK, de hecho la expresión y la participación de receptores inhibidores por su ligando es necesaria para la transición de CD56
células NK brillantes para diferenciarse terminalmente y más potente citotóxicos células CD56
dimNK [16]; [66] y por otra parte, la expresión de KIR inhibitorio con un papel destacado de KIR3DL1 /Bw4, hacen necesario el reconocimiento de uno mismo HLA durante su maduración a células completamente funcionales con capacidad citotóxica y la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) [66]. Recientemente, los resultados de KIR /HLA genotipificación como predictores de resultado de apoyo relacionada con el virus de la hepatitis C hepatocelular carcinoma un papel central de las células NK citotóxicos que tiene un KIR2DL2 inhibidor /2DL3-HLA-C1 + fenotipo en pacientes que presentan un resultado favorable [67], así como en aquellos con la resolución espontánea infección aguda por VHC [68]. Suponemos que en nuestros casos HLA-Bw4-I80 puede entregar señales críticas a las células KIR3DL1 + NK que les permite desarrollar en asesinos altamente funcionales que son capaces de responder agresivamente a las células diana, lo que resulta en poblaciones de células NK más potentes [65]; [69]; [70]. Nuestros datos sobre un aumento del CR en pacientes con KIR3DS1 y, a continuación, OS, en pacientes con KIR3DS1 y /o KIR3DS1 más genes KIR3DL1 que interactúan con su apoyo ligando HLA-Bw4-I80 esta hipótesis (Figura 4).
OS curvas de supervivencia de Kaplan-Meier (truncadas en 80 meses) de los pacientes estratificados en los pacientes con factores de (a) identificados mejores y peores (B) los factores pronóstico de la combinación de genes y tratamiento quirúrgico.
por otra parte, una cuerpo de evidencia de los estudios de asociación genética apoya la importancia biológica no sólo de la interacción de KIR3DL1 con HLA-Bw4 sino también la variación funcional visto con diferente KIR3DL1 y KIR3DS1 alotipos de HLA y (revisado en [71]). En este concurso de activación (KIR3DS1) y receptores inhibitorios (KIR3DL1) pueda reconocer a un conjunto diferente de las moléculas HLA (HLA-Bw4-I80, HLA-Bw4-T80) y /o de unión diferentes complejo HLA-péptido [36]; [59]. La reducción dramática de la molécula HLA-T80, que se sabe que tienen una menor afinidad por los receptores KIR3D, en el resultado del paciente en nuestra serie, se muestra en las figuras 3C.
Finalmente, por que conduce a una reducción de la número de células diana, de acuerdo con los hallazgos previos de que los receptores KIR y HLA-ligandos pueden ser más eficaces cuando la respuesta inmune innata no es probable abrumado [57], la cirugía muestra un efecto independiente del genotipo KIR /HLA al sistema operativo de los pacientes. KIR3DL1 /BW4-I80 genotipo conduce a un aumento OS del paciente cuando se había realizado una cirugía radical, mientras que la presencia de una gran masa de células tumorales no tratados con cirugía aplana el efecto beneficioso de genotipo KIR /HLA de OS.
Esto es para nuestro conocimiento el primer estudio que aborda la relevancia de KIR genotipo sobre el pronóstico del cáncer colorrectal metastásico tratados con FOLFIRI regimiento.