Extracto
Aplicaciones
Para determinar la frecuencia y el valor pronóstico de las alteraciones de microsatélites elevados en tetranucleotide repite seleccionados (EMAST ) en el cáncer colorrectal metastásico (CCRm) de los pacientes en relación con la inestabilidad de microsatélites (estado y la proteína MSH3 expresión MSI).
material y Métodos
La frecuencia de EMAST se evaluó en pacientes con CCRm con tumores MSI y microsatélites estables (MSS), los tumores. Una visión general de la literatura se realizó para comparar la frecuencia de EMAST en nuestro estudio con los datos existentes. Inmunohistoquímica para MSH3 se comparó con el estado de EMAST. Resultado fue estudiada en términos de supervivencia global (OS) de los pacientes con CCRm con tumores MSI y SMS.
Resultados
EMAST se evaluó en 89 pacientes con tumores MSI (incluyendo 39 pacientes con síndrome de Lynch) y 94 pacientes con tumores del SMS. EMAST se observó en el 45,9% (84 de 183) de los pacientes, con una mayor frecuencia en los tumores MSI (79,8% frente a 13,8%, p & lt; 0,001). No se encontró correlación entre la expresión de la proteína EMAST y MSH3. No hubo efecto de EMAST en el pronóstico de los pacientes con tumores MSS, pero los pacientes con tumores /no EMAST MSI tenía un pronóstico significativamente mejor que los pacientes con tumores MSI /EMAST. (OS: HR 3,22, IC del 95% 1.25 a 8.30)
Conclusión
p> Frecuencia de EMAST
Visto:. Venderbosch S, van Lent-S van Vliet, de Haan AFJ, Ligtenberg MJ, Goossens M, Punt CJA, et al. (2015) EMAST se asocia con un mal pronóstico en microsatélites inestable cáncer colorrectal metastásico. PLoS ONE 10 (4): e0124538. doi: 10.1371 /journal.pone.0124538
Editor Académico: Hiromu Suzuki, Universidad Médica de Sapporo, Japón
Recibido: 27 Junio, 2014; Aceptado: March 15, 2015; Publicado: 17 Abril 2015
Derechos de Autor © 2015 Venderbosch et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Debido a la ética restricciones, están disponibles a petición de los datos relevantes
[email protected] Financiación:. Este estudio fue apoyado por una beca de la Colorectal Cancer Group Holandés (DCCG). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer colorrectal (CCR) carcinogénesis es un proceso de múltiples pasos en el que están implicados diferentes vías, entre las que destacan la inestabilidad de microsatélites (MSI) es importante [1-3]. MSI se caracteriza por un sistema de reparación de genes deficientes, lo que conduce al desarrollo del cáncer a través de la acumulación de mutaciones de cambio de marco sin reparar en secuencias de repetición simples o microsatélites [4]. Hasta la fecha varios de reparación de genes (MMR), las proteínas se han identificado en los seres humanos: MSH2, MSH3, MSH6, MLH1 y PMS2. MSH2 forma un heterodímero con MSH6 o MSH3, dando lugar a MutSα o MutSβ, respectivamente [5]. MutSα reconoce individuales desajustes de pares de bases y lazos pequeños de inserción-deleción (IDL), mientras que MutSβ reconoce preferencialmente los desajustes y las IDL más grandes. Además, MLH1 y PMS2 forman MutLα, que actúa como un casamentero molecular. Además de los defectos MMR primaria, secundaria pérdida de proteínas MMR puede ocurrir como consecuencia de
MSH3
y
MSH6
marco cambio mutaciones promovido por
MLH1
inactivación [6, 7] o debido a MSH3 y MSH6 degradación de proteínas en tumores que no expresan su pareja heterodimérica MSH2 [8,9]. Como resultado, los defectos individuales o combinadas de subunidades MMR (MutSα, MutSβ y MutL) pueden ser la base de forma variable la inestabilidad genética de los tumores MSI. alteraciones de la línea germinal de genes MMR son la causa de MSI en pacientes con síndrome de Lynch [10]. MSI también se observa en el 10-20% de los pacientes con CCR esporádico, por lo general debido a la hipermetilación del promotor de la
MLH1
gen [11,12]. MSI tumores tienen características distintivas, como la ubicación en el colon proximal, una alta incidencia de infiltrado linfocitario, un poco diferenciado, mucinoso o anillo de sello histología [13]. MSI tumores se asocian con un pronóstico favorable en el cáncer de colon etapa temprana [14].
Una forma distinta de MSI se observa en varios tipos de cáncer y se llama 'las alteraciones de microsatélites elevados en tetranucleótido seleccionada se repite' (EMAST) en contraste con mono-, y la inestabilidad basado dinucleótido en MSI común [15-20]. Sólo unos pocos estudios describen este subtipo en un pequeño número de pacientes con CRC [21-24]. EMAST no se ha vinculado a los principales defectos en la reparación de ADN no coinciden. Se observó la expresión de proteínas heterogéneas y reducida de MSH3 en asociación con EMAST en el CCR [21-24]. Informes más recientes sugieren que la deficiencia MSH3 es la causa de EMAST en células CRC humanos [25,26]. El vínculo entre MSH3 y EMAST sugiere un efecto adquirida, ya que ninguna mutación en la línea germinal
MSH3
nunca se ha demostrado [4]. Hay una amplia gama de la prevalencia de EMAST se CRC y la importancia biológica de EMAST en CRC no está claro. Sólo un artículo describió una asociación con el resultado de la fase II /III de CRC pacientes. [27]
Sólo limitado de datos disponible sobre EMAST o expresión MSH3 en pacientes con CCR. En el presente estudio se evaluó la frecuencia de EMAST en MSI y estables microsatélite tumores (MSS) de CRC. Además, se evaluó en un análisis exploratorio el papel de EMAST como un biomarcador pronóstico en el CCR (CCRm) pacientes metastásicos.
Material y Métodos
Las poblaciones de pacientes
Los datos estaban derivados de los pacientes con CCRm incluidos en dos grandes estudios de fase III: el Cairo (ClinicalTrials.gov NCT00312000) (n = 820) y CAIRO2 (n = 755) (ClinicalTrials.gov NCT00208546), de los cuales los resultados han sido publicados previamente [28,29 ]. Recogida de material fijado en formalina incluido en parafina (FFPE) del tumor primario fue parte del protocolo inicial en ambos estudios. Para determinar el valor de la frecuencia y el pronóstico de los pacientes con CCRm EMAST en tumores con MSI se seleccionaron 50 pacientes con CCRm con tumores MSI tratados en ambos estudios Cairo. Desde MSI es relativamente poco frecuente en cáncer colorrectal metastásico se combinaron los pacientes de El Cairo (n = 19) y el CAIRO2 (n = 31) estudio. No cohorte de validación podría ser seleccionado para los pacientes de MSI. A fin de evaluar la relación entre EMAST y MSI, se recuperaron 39 tumores de pacientes con CRC (muestras anónimas) con síndrome de Lynch conocida (estadio I-IV) a partir de nuestra propia base de datos (que ha sido establecido conforme las directrices del comité de ética médica local (Commissie Mensgebonden Onderzoek Radboudumc) con el consentimiento informado por escrito de los pacientes, de los cuales el uso de tejido está aprobado para este estudio). Para determinar el valor de la frecuencia y el pronóstico de los pacientes con CCRm EMAST en tumores con MSS se seleccionaron 54 pacientes del estudio El Cairo con características comparables (grupo de ensayo). Los pacientes en el grupo de prueba fueron tratados con monoterapia de primera línea capecitabina durante al menos 3 ciclos, la localización del tumor primario en el colon sigmoide o recto- que fue resecado, la OMS rendimiento del Nivel 0, suero normal de línea de base de lactato deshidrogenasa (LDH) de concentración, y que no habían recibido quimioterapia adyuvante previa. Además, se seleccionaron al azar 40 pacientes adicionales con CCRm SMS tumores tratados en el mismo estudio CAIRO como un grupo de validación. (Figura 1)
Análisis EMAST
Se extrajo ADN genómico de cuatro a ocho microdissected manualmente 30 micras sección de tejido FFPE de los tumores primarios. Las áreas que contienen & gt; 50% las células tumorales fueron seleccionados por evaluación microscópica en un portaobjetos de referencia teñidas con H & amp; E. El ADN genómico de los tejidos microdissected fue aislado utilizando el kit micro ADN QIAamp (Qiagen, Valencia, CA) siguiendo las instrucciones del fabricante. concentración de ADN se determinó a 260 nm con el espectrofotómetro Nanodrop ND-1000 (NanoDrop Technologies, Inc., Wilmington, DE, EE.UU.). análisis EMAST se realizó por duplicado en el ADN normal y tumor de los pacientes seleccionados. estado EMAST se determinó por análisis de PCR y GeneScan usando cinco marcadores tetranucleotide: MYCL1, D8S321, D9S242, D20S82 y D20S85 (S1 cuadro) [23]. Un tumor se definió EMAST si al menos dos de los cinco marcadores mostraron inestabilidad y no EMAST si sólo uno o ninguno de los marcadores mostró inestabilidad [22].
Los pacientes se analizaron para la frecuencia y valor pronóstico en cuatro diferentes grupos: pacientes con tumores combinados MSI y EMAST (MSI /EMAST), los pacientes con tumores combinados MSI y no EMAST (MSI /no EMAST), los pacientes con tumores combinados del SMS y EMAST (SMS /EMAST) y pacientes con combinado MSS y tumores no EMAST (SMS /no EMAST). La frecuencia de EMAST se comparó a pacientes con tumores MSI y SMS. El resultado se analizó en el grupo de pacientes con tumores MSI (con exclusión de los pacientes con síndrome de Lynch) para EMAST en comparación con los tumores no EMAST y dentro del grupo de pacientes con tumores del SMS para EMAST comparación con los tumores no EMAST.
la inmunohistoquímica MSH3
la inmunohistoquímica (IHC) se realizó en microarrays de tejidos (TMA) de los tumores primarios de 549 pacientes aleatorios elegibles en el estudio CAIRO como se ha descrito anteriormente. [30] 4 micras láminas fueron cortadas de cada TMA y montado sobre el vidrio. Xileno y etanol se utilizaron para la desparafinación y deshidratación de las diapositivas TMA. Agua y solución salina tamponada con fosfato (PBS) fueron utilizados para el lavado de las diapositivas. La actividad peroxidasa endógena fue bloqueada con peróxido de hidrógeno al 3% en PBS durante 30 min y se lavaron los portaobjetos con agua, después de lo cual se llevó a cabo la recuperación de epítopo inducida por calor. Los portaobjetos se tiñeron con un anticuerpo monoclonal contra MSH3 (clon ERP4334; Epitomics-una compañía de Abcam, Burlingame, CA, EE.UU.), dilución 1: 5000. Dos investigadores independientes realizaron el marcador, y si el marcador de diapositivas no era inequívoca, la opinión de un tercer investigador (patólogo IDN) era definitiva. patrón de tinción de la proteína MSH3 se evaluó mediante el uso de la normal del epitelio, del estroma y las células inflamatorias como control interno. baja expresión de proteínas MSH3 se definió como & lt; 85% de tinción de color marrón de núcleos celulares en las células tumorales y la expresión de proteínas de alta MSH3 se definió como ≥85% de tinción marrón de núcleos celulares en las células tumorales y no es aplicable si ni las células tumorales ni estromales mostró proteína MSH3 la expresión [21].
MSI, la hipermetilación del promotor del gen MLH1 y BRAF estado
Para las muestras de ambos estudios Cairo, de inmunohistoquímica (IHC) se realizó en el tejido FFPE con anticuerpos contra MLH1, MSH2 , MSH6 y PMS2. Además, se realizó un análisis de MSI donde había una ausencia de expresión de la proteína o MMR resultados equívocos IHC. estado de MSI se determinó utilizando dos marcadores de microsatélites (BAT 25 y BAT 26). Si sólo uno de estos marcadores mostraron inestabilidad, el análisis se amplió con cuatro marcadores adicionales (BAT 40, D2S123, D5S346, D17S250 y). Un tumor se definió como MSI si al menos dos de los seis marcadores mostraron inestabilidad o MSS si ninguno de los marcadores mostró inestabilidad. Los tumores con solo uno de los marcadores que muestran la inestabilidad se definieron como MSI-baja y se incluyen en la categoría de MSS. [30] La hipermetilación del estado
MLH1
promotor del gen y el
BRAF V600E
estado de la mutación , se evaluó como se describe anteriormente [30-32]
el análisis estadístico
Para el análisis EMAST, los pacientes fueron divididos en dos categorías:. EMAST tumores y no EMAST. La asociación entre EMAST y expresión de proteínas MSH3 se investigó con un modelo de regresión logística con el grupo de factores independientes y expresión MSH3. OS se definió como el tiempo desde la fecha de la aleatorización hasta la fecha de muerte por cualquier causa. curvas OS se calcula utilizando el método de Kaplan-Meier y se compararon utilizando un modelo de riesgo proporcional de Cox. Todas las pruebas fueron de dos caras y p & lt; 0,05 se consideró como estadísticamente significativo. Todos los análisis se realizaron utilizando el sistema SAS versión 9.2.
Literatura estrategia de búsqueda, los criterios de inclusión, y la extracción de datos
Hemos revisado la literatura sobre la frecuencia de EMAST en pacientes con CRC tumores MSI y SMS . Se realizó una búsqueda en Medline, PubMed y en la Cochrane Library desde enero 1990 hasta abril 2014, con una restricción en idioma Inglés, utilizando los siguientes términos de búsqueda: EMAST, tetranucleótido repetir, en combinación con el cáncer de colon y el cáncer colorrectal. Se seleccionaron las publicaciones originales si el resumen contenía datos para los pacientes con EMAST. En el caso de las publicaciones duplicadas, se incluyó el estudio más reciente y /o más completa. Se excluyeron las publicaciones si la frecuencia de EMAST se limita a cualquiera de los pacientes con tumores MSI o SMS.
Resultados
Prevalencia de EMAST
En general, se observó entre EMAST 45,9% de una total de 183 tumores (Tabla 1). Frecuencia de EMAST fue significativamente mayor entre los pacientes con tumores MSI en comparación con los tumores del SMS:. 79,8% frente al 13,8% (p & lt; 0,001) guía empresas
En los pacientes con SMS /EMAST tumores inestabilidad se muestra de manera general a las 2 EMAST loci (69,2%, 9 de cada 13), mientras que en los pacientes con MSI /EMAST tumores inestabilidad se demostró con frecuencia en 4 (33,8%, 24 de los 71), o 5 (50,7%, 36 de 71) loci EMAST ( Fig 2A). La frecuencia más alta de la inestabilidad en los tumores EMAST se demostró en el locus D20S82 (91,7%, 77 de 84), seguido por el locus MYCL1 (86,9%, 73 de 84), el locus D9S242 (84,5%, 71 de 84 ), el locus D8S321 (72,6%, 61 de 84) y el locus D20S85 (65,5%, 55 de 84) (figura 2B).
EMAST y MSH3
La mayoría de los pacientes con CCRm (n = 381, 69,4%) tenía una alta expresión de MSH3 en las células tumorales (Fig 3). 21,1% de los tumores demostró heterogeneidad nuclear mediante la expresión de ambos núcleos positivos y negativos sobre MSH3 IHC tinción (Fig 3A-3C). Tanto la expresión y el estado MSH3 EMAST se conocen en 139 pacientes. expresión de la proteína heterogénea o de alta MSH3 no se correlacionó con el estado EMAST (p = 0,088 y p = 0,856, respectivamente).
expresión heterogénea MSH3 proteína (A), demostrado por la expresión de ambos marrón (positivo) y azul ( negativos) núcleos sobre tinción MSH3 IHC. baja expresión de proteínas MSH3 se definió como & lt; 85% de tinción de color marrón de núcleos celulares en las células tumorales (B) y la expresión de proteínas de alta MSH3 se definió como ≥85% de tinción marrón de núcleos celulares en las células tumorales (C)
Evolución de los pacientes con tumores MSI
Los pacientes con tumores MSI /EMAST eran en su mayoría mujeres (52% frente a 22%, respectivamente, p = 0,038) (Tabla 2). Por otra parte, los tumores EMAST fueron más frecuentemente situadas por encima de la zona de recto y colon sigmoide (93% versus 63%, p = 0,006).
La mediana de SG fue significativamente peor en los pacientes con MSI /EMAST comparación con MSI /no EMAST tumores tratados en ambos estudios CAIRO (11,4 frente a 39,4 meses, respectivamente, HR 3,22, IC del 95% 1.25 a 8.30) (Tabla 3).
MSI /EMAST y la relación de proteínas MMR
La distribución de la pérdida de proteínas MMR en los tumores CCRm se resume en la figura 4A. La mayoría de los pacientes con tumores MSI mostraron pérdida de MLH1 y /o expresión de la proteína PMS2 (72,0%, 36 de 50 pacientes). La pérdida de MSH2 y /o expresión de la proteína MSH6 se encontró en el 18,0% (9 de 50) de los pacientes. Estos pacientes son propensos Lynch o pacientes con síndrome de Lynch-como. Sólo el 7,1% (3 de 42) de los pacientes con un tumor MSI /EMAST mostró pérdida de la expresión de la proteína MSH6, en comparación con el 62,5% (5 de 8) de los pacientes con tumores MSI /no EMAST.
(A). Porcentaje de pacientes con síndrome de Lynch y mutación conocida línea germinal de los diferentes genes MSI, subdividido en pacientes con tumores MSI /EMAST y pacientes con tumores MSI /no EMAST (B).
La hipermetilación del
MLH1
promotor del gen (32 de 40 pacientes) y
BRAF
mutaciones (24 de los 40 pacientes) se limitaron a los pacientes con un tumor MSI /EMAST (p & lt; 0,001 yp = 0,004, respectivamente).
EMAST en pacientes con síndrome de Lynch
con el fin de analizar más a fondo la relación de MSI y EMAST se seleccionaron 39 pacientes con síndrome de Lynch conocida (con mutaciones de la línea germinal en
MSH2
gen (n = 11),
MLH1
gen (n = 10),
MSH6
gen (n = 10) y
PMS2
gen (n = 8)). La mayoría de esta población mostró EMAST (29 de 39 pacientes). Ninguno de los pacientes mostró hipermetilación del
MLH1
promotor del gen, y todos los tumores eran
BRAF
de tipo salvaje. Nueve de cada 10 pacientes con tumores no EMAST tenían una mutación germinal en
MSH6 gratis (figura 4B).
Evolución de los pacientes con tumores MSS
Línea de base del paciente y del tumor las características de los pacientes con tumores del SMS (grupo de prueba y validación de grupo), subdivididos por EMAST y los tumores no EMAST se presentan en la Tabla 2. no hubo diferencias significativas en el resultado para los pacientes con EMAST en comparación con los pacientes con tumores no EMAST (Tabla 3 ).
Revisión de la literatura
la búsqueda en la literatura identificó 7 estudios en los que EMAST fue descrito en pacientes en estadio I-IV CRC con MSI y SMS tumores [21-24,27,33, 34]. Se excluyeron dos estudios: un estudio describió la misma población [23] y un estudio evaluó la prevalencia de EMAST exclusivamente en pacientes con tumores del SMS [27]. Tres estudios habían número de tumores MSI limitado. La figura 5 resume un diagrama de bosque de los 5 estudios publicados y el actual estudio sobre la prevalencia de EMAST en pacientes en estadio I-IV CRC con tumores MSI y SMS. EMAST es significativamente más frecuente en los tumores con MSI (148/174) (RR 4,80, IC del 95% 3,90 a 5,91). Se observó heterogeneidad significativa.
Discusión
Este estudio presenta el análisis de la frecuencia y el valor pronóstico de los pacientes con CCRm EMAST en. Aunque EMAST se observó en el 45,9% de todos los pacientes con CCRm, que fue más pronunciada en los tumores MSI (79,8%). La frecuencia de EMAST entre los SMS tumores (13,8%) fue mucho menor en nuestro estudio en comparación con la mayoría de los estudios en fase I-IV CRC [21-24,27,34]. La amplia gama de frecuencias (0,54 a 60,2%) de EMAST entre los tumores del SMS descritos en la literatura [21-24,27,33,34] podría ser debido al hecho de que no existe un consenso sobre la definición de EMAST y el panel requerido para su diagnóstico. Debido a la naturaleza polimórfica de tetranucleotide repite en el presente estudio hemos utilizado criterios estrictos para la definición de EMAST:. Al menos dos de los cinco marcadores tetranucleotide debe mostrar inestabilidad
A pesar de que varios estudios pequeños (n = 3 a n = 56) [21-24,33,34] demostraron que MSI invariablemente está asociado con EMAST, la correlación entre EMAST y MSI no está ampliamente aceptado. Se encontró una alta frecuencia de EMAST en los tumores MSI, lo cual fue confirmado en un análisis de la literatura existente en la fase I-IV CRC (figura 5). Sólo un pequeño subgrupo de pacientes con tumores MSI no es EMAST. Curiosamente, la mayoría de los pacientes con tumores MSI /no EMAST mostró pérdida de MSH6. Esto está en consonancia con el hecho de que MSH6 sólo está implicado en la reparación de apareamientos erróneos mononucleótido [35,36]. Los pacientes con tumores MSI /no EMAST son con mayor frecuencia varones y desarrollaron tumores con mayor frecuencia en el recto, estas características son comparables a los pacientes con
MSH6
mutaciones en la línea germinal [37]. En nuestra población de MSI tumores la presencia de EMAST se correlaciona con
MLH1
deficiencia, que causa un defecto total de desajuste de reparación de ADN, tanto en el síndrome de Lynch, así como en el ajuste esporádica, lo que confirma las observaciones anteriores [21,27 ].
los datos sobre el fenotipo EMAST en el CCR son escasos y mecanismo subyacente (s) siguen sin estar claros. Los primeros informes sugirieron que EMAST podría estar asociado con mutaciones en el
TP53
gen [16,17] o que los carcinógenos ambientales pueden exacerbar este fenotipo [38] en los cánceres distintos del CRC. Más tarde, se hizo una asociación entre la pérdida de MSH3 y EMAST en el CCR [21]. Debido al hecho de que MutSβ tiene una fuerte afinidad para el reconocimiento de más de dos nucleótidos no apareados y complementación genética de la deficiencia de MSH3 en las células humanas aumento de la estabilidad en los loci que contiene dinucleótido y tetranucleotide repite [39], se argumentó que esa pérdida de MutSβ debido a MSH3 inactivación puede resultar en MSI no sólo en los loci que contiene repeticiones de dinucleótidos, sino también en los loci con repeticiones tetranucleotide, como EMAST [21]. Estudios recientes confirman la asociación entre la pérdida de MSH3 y EMAST en el CCR, sin embargo se desconoce el mecanismo exacto subyacente [25,26]. Pero no hemos podido demostrar una correlación entre la expresión de la proteína MSH3 y EMAST. En realidad, nos encontramos el patrón de expresión heterogénea de MSH3 en el 21,1% de los pacientes descritos por otros, aunque esto no se correlacionó con EMAST. Sin embargo, nuestro estudio tenía un pequeño número de pacientes. Otra posible explicación para la diferencia entre nuestro estudio y en estudios previos podría ser un sesgo potencial undersampeling ya que utilizamos una muestra de TMA por tumor en vez de diapositivas tumorales completos.
Se demuestra que los pacientes con tumores MSI /no tenían EMAST un pronóstico significativamente mejor en comparación con los pacientes con tumores MSI /EMAST. La adición de EMAST a los tumores MSI parece empeorar el pronóstico y la supervivencia global. Se esperaría que el grupo MSI /no EMAST ser enriquecido para
MSH6
deficiencia desde EMAST sería identificado con un defecto completo desajuste de reparación del ADN, tal como con
MLH1
o
MSH2
deficiencia. Nuestros resultados en la correlación de EMAST con el resultado clínico deben ser interpretados con precaución debido al pequeño número de pacientes en los diferentes subgrupos
.
En resumen, la frecuencia de EMAST entre los pacientes con CCRm con tumores del SMS es baja en comparación con pacientes con tumores MSI. No hubo correlación entre la expresión de la proteína EMAST y MSH3. Nos encontramos una clara relación entre MSI y EMAST, y el resultado fue significativamente mejor en los pacientes con CCRm con tumores MSI /no EMAST. Se necesitan más estudios para dilucidar las bases moleculares de EMAST y para mostrar si las alteraciones tetranucleotide observados en los tumores EMAST pueden tener un impacto funcional por sí mismos o simplemente representar alteraciones espectador en un subgrupo de tumores con defectos específicos en la replicación y reparación del ADN.
Apoyo a la Información sobre Table S1. Tetranucleotide microsatélites secuencias de cebadores de PCR
doi: 10.1371. /Journal.pone.0124538.s001 gratis (PDF)
Reconocimientos
Este estudio fue apoyado por una beca de la holandesa colorrectal Cancer Group (DCCG).