Extracto
Objetivo
Para asignar integral el estado de metilación de los sitios CpG en la región HPV16 larga de control (LCR) en las células cancerosas positivas para el VPH, y para explorar más a fondo los efectos de estado de metilación de HPV16 LCR en la bioactividad celular y E6 y E7 expresión. Además, para analizar el estado de metilación de la LCR en el carcinoma de células escamosas de la orofaringe (OPSCC) pacientes positivos al HPV.
Métodos y Materiales
Los patrones de metilación de HPV16 LCR en UM-SCC47, CaSki y células SiHa y especímenes OPSCC HPV16-positiive se detectaron por bisulfite secuenciación PCR y la clonación TA. Para las células tratadas con 5-aza-2 'desoxicitidina y E6 y E7 desmontables, MTS y tinción con azul de tripano, la anexina-V y la tinción 7-AAD, y yoduro de prodidium se utilizaron para evaluar el crecimiento celular y la proliferación celular, la apoptosis celular, y la detención del ciclo celular, respectivamente. E6 y E7 mRNA y proteína de expresión fueron analizados por cuantitativa en tiempo real PCR e inmunocitoquímica, respectivamente.
Resultados
Estado de la hipermetilación de la LCR en UM-SCC47 (79,8%) y las células CaSki ( se observó 90,0%) y no metilación estado de la LCR en las células SiHa (0%). Tras la desmetilación, las células con diferentes niveles de metilación respondieron de manera diferente durante el crecimiento, la apoptosis y detención del ciclo celular, así como en términos de su expresión E6 y E7. En pacientes OPSCC HPV16-positivas, las tasas de metilación fueron del 9,5% en toda la región LCR, un 13,9% en el 5'-LCR, 6,0% en el promotor de E6, y el 9,5% en el promotor p97, y se encontró que la hipermetilación del promotor de p97 en un subconjunto de los casos (20,0%, 2/10).
Conclusiones
Nuestro estudio reveló dos diferentes niveles de metilación de la LCR en células de cáncer de HPV16-positivas y pacientes OPSCC, que pueden representar diferentes mecanismos de carcinogénesis de células cancerosas positivas para el VPH. Desmetilación de los meCpGs en HPV16 LCR podría ser un objetivo potencial para un subgrupo de pacientes HPV16-positivas con carcinoma de cabeza y cuello de células escamosas
Visto:. Zhang C, Deng Z, X Pan, Uehara T, Suzuki M, Xie M (2015) Efectos de la metilación del Estatuto de los sitios CpG dentro de la región de control a largo HPV16 HPV16 en-positivo de Cabeza y cuello células de cáncer. PLoS ONE 10 (10): e0141245. doi: 10.1371 /journal.pone.0141245
Editor: Scott M. Langevin, Universidad de Cincinnati College of Medicine, Estados Unidos