Extracto
bocavirus humana es la segunda parvovirus humano autónomo con potencial patógeno asumido. Otros parvovirus son conocidos que persistan e incluso integrarse en el genoma del huésped, con el tiempo que contribuye al desarrollo de varias etapas de cáncer. bocavirus humana también persiste en un porcentaje desconocido de pacientes clínicamente asintomáticos, además de aquellos con infección primaria. El objetivo del presente estudio fue analizar el papel de bocavirus humano en los cánceres de pulmón y colorrectal. Por lo tanto,,, muestras de tumores archivados en parafina fijados con formol se proyectaron para el ADN humano bocavirus por PCR, transferencia de Southern y secuenciación. tejidos positivos se somete además a la fluorescencia en el análisis de hibridación in situ para detectar específicamente DNA bocavirus humana en las células infectadas. En total, 11 de los pulmones 60 (18,3%) y 9 de los 44 (20,5%) tumores colorrectales dieron positivo para el ADN bocavirus humano por PCR y se confirmaron por secuenciación y la fluorescencia en el análisis de hibridación in situ. Por lo tanto, el ADN bocavirus humano está presente en los núcleos de las células infectadas, ya sea en una o varias copias, y aparece para formar concatémeros. La aparición de estas estructuras de ADN bocavirus humanos apoya la existencia del mecanismo de replicación σ- o rodar-horquilla postulado. Por otra parte, la fluorescencia en los patrones de hibridación in situ inspirado la hipótesis de que el ADN humano, ya sea bocavirus persiste como cccDNA o se integra en el genoma del huésped. Este hallazgo sugiere que este virus puede contribuir indirectamente al desarrollo de algunos cánceres colorrectales y de pulmón, al igual que otros virus de ADN, tales como el virus de la hepatitis B humana, o puede desempeñar un papel activo en el cáncer mediante la interacción con el genoma del huésped.
Visto: Schildgen V, M Malecki, Tillmann RL, Brockmann M, Schildgen O (2013) El Bocavirus humano se asocia con algunos cánceres de pulmón y colorrectal y persiste en tumores sólidos. PLoS ONE 8 (6): e68020. doi: 10.1371 /journal.pone.0068020
Editor: Amit Kapoor, Universidad de Columbia, Estados Unidos de América
Recibido: 8 Febrero 2013; Aceptado: 24 de mayo de 2013; Publicado: 27 Junio 2013
Derechos de Autor © 2013 Schildgen et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por una beca de investigación sin restricciones de la Kröner Else-Fresenius Stiftung, Alemania. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
Desde su descubrimiento en 2005 por Tobias Allander [1], existe una creciente evidencia de que los humanos generalizadas (bocavirus HBoV) juega un papel importante en infecciones del tracto respiratorio (subtipo 1) y en las infecciones gastrointestinales (subtipos 2- 4) [2-6]. Además, HBoV es el cuarto virus más común detectado en infecciones respiratorias [7] y se supone que es la segunda parvovirus que es capaz de infectar a los seres humanos con el potencial de causar enfermedad clínica. Sin embargo, su papel en las infecciones gastrointestinales está ahora en duda, basada en una novela estudio del Reino Unido [8].
Antes, nuestras secuencias de ADN que contienen grupo identificado fragmentos del genoma "de cabeza a cola" conectados por una nueva tramo enlazador identificado. Después de la publicación, la observación de que las secuencias de "cabeza a cola" se producen por HBoV subtipo 1 fue confirmada por Kapoor y colegas, quienes se identificaron estas estructuras, ADN circular cerrado covalentemente episomal (ccc) en pacientes infectados con HBoV subtipo 3 [9]. Kapoor y colegas, así como grupos de China [10,11] y los EE.UU. [12], llegaron a la conclusión de que estas estructuras ADNccc pueden ser genomas virales que persisten en estas células. Esta conclusión es compatible con la hipótesis de que HBoV puede persistir en el huésped infectado y puede existir en un estado asintomático pero productiva, que a su vez podría explicar el relativamente alto porcentaje de pacientes asintomáticos que eliminan el virus.
Otro ejemplo de una virus de ADN que persiste en una estructura circular covalentemente cerrado e induce daño en los tejidos es el virus de la hepatitis B humana (HBV). En todas las infecciones de VHB crónicos, cccDNA está presente en las células del hígado, y esta persistencia cccDNA induce inflamación crónica que no afecta a la condición del paciente durante un largo tiempo, pero lentamente conduce a hígado fibrosis, cirrosis, y, finalmente, el cáncer en un notable porcentaje de crónica infecciones por el VHB [13-17].
Teniendo en cuenta que otros parvovirus son capaces de integrarse en el genoma del huésped [18], y la primera conocida parvovirus patógeno humano, parvovirus B19, está asociada con varios tipos de cáncer, incluyendo linfomas [ ,,,0],19], tumores testiculares [20], y papilares de tiroides anaplásico carcinomas [21,22], y enfermedades inflamatorias crónicas como la tiroiditis de Hashimoto [23], cardiomiopatía y miocarditis [24], parece posible un mecanismo similar para la patogénesis asociada a HBoV.
el curso de la enfermedad de los parientes más cercanos de HBoV, es decir, el parvovirus bovino (BPV) y el virus minuto de canino (MVC, CNMV, también conocido como CPV-1), los resultados de una infección inicial de las vías respiratorias, seguidas de la infección del intestino y posterior desprendimiento a través de la ruta intestinal /respiratorias [25]. Las hipótesis que HBoV puede persistir en un órgano diana y que esos tejidos afectados experimentan daños a largo plazo por lo tanto debe ser probado.
Por lo tanto, hemos abordado la cuestión de si HBoV, por analogía con el virus de la hepatitis B, ¿pueden ser detectada en los tumores. Teniendo en cuenta que la patogénesis de las infecciones HBoV comienza en las vías respiratorias y termina en el tracto gastrointestinal, analizamos el cáncer no microcítico de pulmón no microcítico (CPNM) y los tumores de los tumores colorrectales. Ambos son cánceres en los que el desarrollo de tumores no se conoce bien y en el que una contribución viral no ha sido hasta ahora excluidos [26-29].
Materiales y Métodos
Declaración de Ética
Todos los procedimientos se realizaron de acuerdo con la declaración de Helsinki y de acuerdo a la votación del Comité ético de la Universidad privada de Witten-Herdecke (votar no. 73/2012). Esta votación fue aprobado específicamente para el estudio actual. Debido a la naturaleza retrospectiva y las muestras de doble ciego de pacientes utilizados en el estudio, el Comité Ético concluyó que no era necesario el consentimiento informado por escrito. La cohorte del estudio consistía exclusivamente en pacientes adultos.
Las muestras de pacientes
Sesenta (FFPE), secciones de tumor de pulmón en parafina fijados con formol y 44 tumores colorrectales fueron seleccionados al azar a partir de muestras archivadas de nuestra rutina laboratorio clínico. La edad media de los pacientes fue de 69,21 años, con una mediana de 71 años. El estudio se realizó de forma retrospectiva. No existen datos clínicos adicionales, incluyendo el estado del tratamiento, la conducta de fumar, o la terapia del cáncer, se utiliza debido a que la información no habría tenido ninguna influencia en el resultado del estudio. Como controles, el tejido libre de tumor de la región de cada tumor se analizó para HBoV siempre que estén disponibles. Un muestras adicionales de tejido tumoral 10 libre, pulmón sano y colorrectales se analizaron para ADN bocavirus humano. Como controles adicionales, las muestras de 10 virus del papiloma humano (HPV) tumores cervicales positivas y 10 del VPH tumores cervicales negativos, así como 10 tumores de mama fueron seleccionados para el ADN HBoV. Todas las muestras clínicas se recogieron en 2011 y 2012.
Los análisis PCR y PCR en tiempo real
Se extrajo el ADN de muestras de tejidos FFPE utilizando el kit de tejido FFPE Maxwell 16 (Promega, Mannheim, Alemania) de acuerdo con el protocolo del fabricante. PCR y PCR en tiempo real se realizó como se describió anteriormente [30,31].
Secuenciación
Las muestras que dieron positivo por PCR en tiempo real para bocavirus humanos fueron sometidas a PCR convencional utilizando los cebadores HBoV-LC-Ku-1 y HBoV-LC-Ku-2 [30,31]. ADN amplificado por PCR se cargó en un gel de agarosa al 1,5% en tampón TAE y fue gel extraído antes de la secuenciación. extracción de gel se realizó usando un kit Qiagen Gel-purificación (Qiagen, Hilden, Alemania) siguiendo estrictamente el prospecto. Para la secuenciación, los productos de PCR purificados se mezclaron previamente con o bien el cebador HBoV-LC-Ku-1 o el cebador HBoV-LC-Ku-2 y se envían a Eurofins MWG (Munich, Alemania) para capilar secuenciación de Sanger. Las secuencias FASTA obtenidas se sometieron a análisis de secuencia y la alineación utilizando el software Vector NTI 12,0 (Invitrogen, Karlsruhe, Alemania). La secuenciación se realizó para todos los tumores que dieron positivo para HBoV por PCR (n = 20).
Los análisis Fish &
FISH análisis se realizaron esencialmente como se describe para otros biomarcadores analizados comúnmente, tales como HER2neu y EML4-ALK, tal como se publicó anteriormente [32], con la modificación de que se utilizaron HBoV- y sondas GAPDH específica, esta última como control. Las sondas se diseñan para hibridarse cerca de las dos regiones terminales del genoma HBoV o a tanto el extremo 5 'y el extremo 3' del gen de control (GAPDH).
El método de ensayo fue similar a la separables enfoque de pescado que se utiliza para la detección de EML4-ALK. Cuando dos sondas se unen en estrecha proximidad entre sí, las señales rojas y verdes son lo suficientemente cerca para que aparezca como una sola señal amarilla. Esta situación podría surgir si los genomas HBoV producen DNA circular cerrado covalentemente como, como se describe por Kapoor y compañeros de trabajo [9]. En contraste, las señales distintas separadas por al menos dos longitudes de señal indican que las sondas se hibridan en diferentes lugares, como en una forma lineal del genoma bocavirus.
Las sondas se enumeran en la tabla 1. FISH se realizó como sigue : tejidos tumorales FFPE, los tejidos circundantes libres de tumor y los tejidos de control fueron cortadas en rodajas de 3 micras de grosor y se montaron en portaobjetos. Como controles, las células HepG2 humanas fueron cultivadas en portaobjetos de cámara como se describe anteriormente [33] y se transfectaron con los plásmidos bocavirus humano p5TRHBoV [34] y el plásmido PTA-RSV pCR II-TOPO que contiene una secuencia del gen N del RSV parcial) usando Lipofectamine (Invitrogen, . Karlsruhe, Alemania) | Objetivo
fluorocromo
emisión
Secuencia
T
M
Modificación
GAPDH StartRhodamine GreengreenTCTACGAGCCTTGCGGGCTCCGGGTCTTTGCAGTCGTATG (40) & gt; 75 ° C5 '-RGR , 3'-RGRGAPDH StopRhodamine RedredCTGGGGACTGGCTTTCCCATAATTTCCTTTCAAGGTGGGG (40) 74.6 ° C5 '-RRE, 3'-RREBoca Cabeza SRhodamine GreengreenTCAGACTGCATCCGGTCTCCGGCGAGTGAACATCTCTGGG (40) & gt; 75 ° C5'-RGR, 3'-Cola RGRBoca SRhodamine RedredGTTCCTCTCCAATGGACAAGWGGAAAGAAAAGGGTGACTG (40) 72.5 ° C5 ' -RRE, 3'-RRETable sondas FISH 1. utilizados para la detección de HBoV y GAPDH genes en las diapositivas de FFPE tumores colorrectales y de pulmón.
Todas las sondas fueron acoplados a fluorocromos en sus extremos 3 'y 5' para mejorar las señales de fluorescencia. Descargar CSV CSV
Las diapositivas fueron procesadas de acuerdo a la ZytoLight SPEC ALK /EML4 TriCheck
TM protocolo de sonda (ZytoVision, Bremerhaven, Alemania) siguiendo las recomendaciones del fabricante. Las sondas se utilizan en concentraciones de 2 pm todos. análisis microscópicos y la documentación se realizaron en un microscopio Zeiss Axioplan usando el software AxioVision 4.8 (Zeiss, Jena, Alemania). Todas las muestras tumorales positivas HBoV fueron sometidos a análisis de FISH (n = 20).
Resultados
En total, 11 de los pulmones 60 (18,3%) y 9 de los 44 (20,5%) tumores colorrectales dado positivo para el ADN HBoV por punto final convencional PCR seguida de electroforesis en gel (datos no mostrados) y por qPCR (tabla 2). El punto final y qPCR resultados estaban de acuerdo, es decir, las muestras que dieron positivo por PCR punto final también fueron positivos por PCR en tiempo real y viceversa, mientras que las muestras que fueron negativas por un método permanecieron negativos por el otro ensayo. Por otra parte, el ADN HBoV no se detectó en ninguna de las muestras de control de grupo (10 tumores de mama, tumores de cuello uterino 10 del VPH-positivo, y 10 tumores de cuello uterino VPH-negativo). La secuenciación de los productos de PCR y las alineaciones posteriores confirmaron que el ADN HBoV se amplificó a partir de las muestras de tumores (Figura 1a). Sin embargo, no hubo correlación entre el número de copias HBoV y el estadio tumoral.
Paciente Nº
origen tumoral
punto final HBoV PCR
HBoV punto final PCR Sexo del ambiente del tumor
HBoV Fish & ADN total HBoV copias /g
alineación-n. (Figura 1)
CR1femaleappendixpositivenegativepositive120656CR2Malecaecumpositivenegativepositive284915CR3femalecaecumpositivenegativepositive885failed sequencingCR4Malecolonpositivenegativepositive125CR5Malecolonpositivenegativepositive14182CR6femalecolonpositivenegativepositive70failed sequencingCR7femalerectumpositivenegativepositive1710failed sequencingCR8Malerectumpositivenegativepositive65failed sequencingCR9femalerectumpositivenegativepositive1failed sequencingL1femalelungpositivenegativepositive9480413L2femalelungpositivenegativepositive156314L3Malelungpositivenegativepositive37L4Malelungpositivenegativepositive119594L5femalelungpositivenegativepositive33L6Malelungpositivenegativepositive3361L7femalelungpositivenegativepositive17285712L8femalelungpositivenegativepositive619012L9femalelungpositivenegativepositive25400011L10Malelungpositivenegativepositive163008L11femalelungpositivenegativepositive110379Table 2. Los pacientes, los tipos de tumores y qPCR resultados de los tejidos tumorales
El CR = colorrectal; L = pulmón CSV Descargar CSV
A medida que se utilizaron secuencias de referencia el siguiente número de acceso al GenBank:. HBoV-1 = FJ858259 (Bonn-1 ) a. alineado las secuencias de productos de PCR obtenidos a partir de muestras de tejido tumoral. En total, 15 muestras tenían suficiente ADN presente después de la amplificación por PCR para la secuenciación directa. las secuencias fueron destruidas y alineados con la cepa de referencia Bonn-1. es obvio que todas las secuencias eran altamente conservada y completamente emparejado la secuencia de referencia. tres secuencias tenían secuencia-HBoV no adicional aguas arriba de las regiones alineadas (que se muestra en la Figura 1b). b. la alineación de la secuencia aguas arriba presente en tres genomas HBoV aislado a partir de tejidos tumorales. la secuencia insertada aguas arriba era observada en tres muestras que dieron forma independiente ADN extraído y analizado por PCR y secuenciación de tres carreras independientes, excluyendo por tanto a un solo artefacto o evento de contaminación cruzada. Sorprendentemente, las secuencias subrayadas corresponden totalmente la secuencia de ADN humano del cromosoma 5, secuencias de referencia AC008698.6 (
Homo sapiens
cromosoma 5 clones CTB-70H11, bases 76065 a 76026) y AC025156.2 (
Homo sapiens página 3 BAC RP11-494C5 de Roswell Park Cancer Institute, basa desde 130245 hasta 130284), lo que indica que HBoV es capaz de recombinarse con su huésped.
En todos los tumores HBoV-positivos en los pacientes (tabla 2), se ensayaron también los tejidos sanos circundantes estos tumores de ADN HBoV por PCR (n = 30; 2 tumorales libres FFPE bloques de la zona que rodea cada tumor HBoV-positivo). ADN HBoV no se detectó en ninguna de las muestras de tejido libre de tumores investigados (dos bloques adyacentes FFPE por paciente, uno en cada lado del bloque de tumor). Por otra parte, no se detectó ADN HBoV en los tejidos FFPE de pacientes sin pulmón o tumores colorrectales (10 pulmones de control sanos y 10 tejidos de control colorrectales sanos). Quince aislamientos pasan el control de calidad de secuenciación Sanger y reveló altamente conservadas HBoV-1 secuencias del gen NP1.
Sorprendentemente, en tres casos, la secuencia de ADN NP1 estaba flanqueado por una secuencia de aguas arriba que contenía una parte conservada del cromosoma humano 5 ( 1b). A medida que estas tres muestras se sometieron a extracción independiente de ADN, PCR, y se ejecuta de secuenciación, la posibilidad de que esta observación el resultado de la contaminación cruzada entre las tres muestras se puede excluir.
Como se demostró anteriormente que puede persistir en HBoV una forma de ADN episomal que se define químicamente como un ADN circular cerrado covalentemente (CCC), que investigó la forma en la que el ADN HBoV persiste en estas muestras tumorales.
Para responder a esta pregunta, una hibridación in situ fluorescente (FISH fue desarrollado) de ensayo. La línea celular HepG2 humana se transfectó con el p5TRHBoV [34] plásmido, que contiene una copia casi de longitud completa del genoma HBoV. Como controles, transfectadas las células HepG2 con un plásmido que contiene un virus sincitial respiratorio humano parcial de secuencia (RSV) y las células transfectadas de manera simulada. Estos datos se muestran en la Figura 2a.
a. Filas 1-3 muestran los tejidos teñidos con DAPI HBoV sondas y específica; filas 4-6 muestran los controles positivos y negativos. LEH y REH corresponden al extremo izquierdo (extremo 5 ') y el extremo derecho (extremo 3') del genoma viral o el gen GAPDH. Las células humanas transfectadas con plásmidos con o sin genomas bocavirus humanos, así como las células transfectadas de manera simulada se utilizaron como controles. Fila 7 muestra células HepG2 teñidas con sondas específicas para secuencias terminales del gen GAPDH. segundo. La ampliación de la imagen resultante de la concentración de células HepG2 doble manchado con sondas específicas para el gen GAPDH humano. Esta figura muestra que la distancia entre las dos sondas diferentes en el extremo 5 'y el extremo 3' es lo suficientemente grande como para dar lugar a señales separadas (señal dividida). do. las imágenes fusionadas de tejidos de ADN HBoV positivos, incluyendo un tejido de control negativo.
Se utilizaron sondas FISH dirigidas a las regiones cercanas a la horquilla de extremo izquierdo (LEH) y el extremo derecho de la horquilla (REH). Una sonda se marcó con un colorante fluorescente verde, y el otro se marca con un colorante fluorescente de color rojo (tabla 1).
cultivos de células transfectadas se analizaron por microscopía de fluorescencia mostró que las sondas utilizadas para la detección de ADN genómico HBoV fueron altamente específico; sólo aquellas células que se transfectaron con plásmido p5TRHBoV y ni las células falsamente transfectadas ni las células transfectadas con el plásmido de control mostraron señales (Figura 2a, cultivo celular). Estos experimentos se realizaron por triplicado.
En todas las muestras tumorales que dieron positivo por PCR, HBoV fue también detectado por análisis FISH (n = 20, tabla 2). Múltiples señales por célula se detectaron en 3 tumores colorrectales y 4 tumores de pulmón, y se detectaron las señales individuales en las muestras tumorales colorrectales 6 y 7 pulmonares restantes. La figura 2a muestra imágenes que representan a cada tipo de tumor observado en los análisis de FISH. ADN HBoV no se detectó en las muestras de control negativo. Se detectaron señales HBoV-FISH, tanto del LEH y REH. Sorprendentemente, su patrón de tinción no fue homogénea: algunas muestras mostraron una única señal de REH y LEH por célula infectada, y se detectaron múltiples señales en otras muestras. Múltiples señales por célula se observaron en algunos tejidos de pulmón y colorrectal (pulmón: n = 4, colorrectal: n = 3), lo que indica que varias copias de ADN HBoV están presentes en las células debido a la replicación o varios genomas que persisten como episomas o ser integrados en el ADN huésped. Estas observaciones son congruentes con el hecho de que HBoV replica de manera focal. Además, estas señales no siempre se encuentran en el núcleo; Algunos parecían ser en el citoplasma, tal como se indica mediante la fusión de los diferentes canales de color.
Además, los análisis de FISH microscópico del gen GAPDH muestra que la distancia entre las señales de cabeza y cola del gen GAPDH es suficientemente grande para separar claramente ambas señales (Figura 2A, la última línea; Figura 2b, ampliada de la figura 2a). La fusión de las imágenes fluorescentes de tumores HBoV positivos muestra que las señales HBoV terminales están situados cerca uno del otro, en algunos casos, según lo indicado por las señales de color verde /rojo con una pequeña zona intermedia de color amarillo, mientras que las señales rojas y verdes se separaron claramente en los demás (split señales), lo que indica que el genoma se produce en una forma no circular. Las señales de color amarillo apoyan la observación anterior de Kapoor y colegas que los genomas HBoV persisten como cccDNA [9]. imágenes fluorescentes representativos se muestran en la Figura 2c.
Discusión
En nuestro estudio piloto, que incluyó 60 tumores de pulmón y 44 tumores colorrectales, identificamos ADN HBoV en el 18,3% (n = 11) de todos los tumores de pulmón y 20,5% (n = 9) de todos los tumores colorrectales. Los datos presentados sugieren que HBoV se asocia con algunos tumores de pulmón y colorrectal y confirmar la hipótesis de que HBoV persistencia es mayor en pacientes con cáncer [35]. La aparición de múltiples señales de FISH dentro de las células individuales es compatible con la hipótesis de que HBoV replica por el círculo rodante o el mecanismo de horquilla orden alternativo de la replicación. Para investigar esta cuestión, otros estudios utilizando microscopía confocal, un método que todavía no está establecida en nuestro laboratorio, pueden ser útiles.
Las cepas HBoV identificados en muestras de tumores en el presente estudio pertenecían al genotipo 1, que es el genotipo más frecuente en Europa; no es raro que no se identificaron otros subtipos, como los otros subtipos son generalmente raros y están asociados con la gastroenteritis aguda, un trastorno clínico que no fue investigado en nuestro estudio.
ADN HBoV Si persiste en los tumores como episomas o si se integra en el genoma humano queda por investigar. Nuestros datos muestran que el genoma HBoV se puede encontrar en una forma lineal (señales divididas) o en una forma "de cabeza a cola" (señal fusionada de color amarillo o señales verdes y rojos directamente adyacentes). Esta observación debe interpretarse con cuidado, sin más análisis. Las señales no separados podrían representar intermediarios de replicación "cabeza a cola", cccDNA, como ya se observó [9,10,36], o múltiples copias del genoma que persiste en las células infectadas. Las señales de división podrían ser interpretados como especulativamente intermediarios de replicación horquilla de rodadura o el ADN genómico como lineal. Además, el ADN no presente en el núcleo podría estar situado en el citoplasma o empaquetado en partículas virales extracelulares.
El hallazgo de que HBoV puede persistir en algunos tejidos infectados en forma de cccDNA, similar a otros virus cancerígenos, podría interpretarse de varias maneras. En primer lugar, HBoV podría contribuir al desarrollo de algunos tumores de pulmón y colorrectal, reconociendo que no queda claro si HBoV tiene un papel activo o pasivo en el desarrollo de estos tumores. Esta hipótesis sigue siendo motivo de especulación, pero se apoya en los fragmentos de ADN humano del cromosoma 5 que se encuentra en tres casos totalmente independientes, lo que indica un evento de recombinación con el ADN del huésped (Figura 1b). Aunque es poco probable, existe un riesgo mínimo de que este resultado es un artefacto de PCR. Ya sea HBoV es capaz de integrarse en el ADN cromosómico humano o recombinarse con el genoma humano que queda por investigar. En un estudio de seguimiento, esta hipótesis podría ser investigada mediante el uso de tejido fresco del tumor y el análisis de RFLP seguido de transferencia de Southern, lo que llevaría a un cambio de banda en el caso de la integración en el genoma del huésped. Por desgracia, esto era técnicamente imposible en nuestro estudio, ya que se utilizó el tejido FFPE retrospectivamente. Además, es necesario analizar la expresión de proteínas virales en los tumores respectivos y su interacción con proteínas celulares, un método que no se puede realizar en la ausencia de anticuerpos ampliamente disponibles.
segundo lugar, algunos tumores de pulmón y colorrectal podría proporcionar un ambiente óptimo para HBoV y apoyar la replicación HBoV. El segundo supuesto, en primera instancia parece ser más probable debido a que otros prefieren los parvovirus y dividiendo la proliferación de células [37,38].
Las funciones de los parvovirus humanos como agentes causantes de cáncer o contribuyentes a la carcinogénesis se han discutido extensamente por primera conocido parvovirus humano B19. En 2007, un grupo chino detecta el parvovirus B19 en el 81,1% de los adenocarcinomas de colon mediante hibridación in situ y se confirma este resultado en el 78,4% de ellos mediante técnicas de inmunohistoquímica para detectar las proteínas virales en los tejidos ISH-positivas [39]. Ese estudio apoya una observación clínica anterior en la que B19 se asocia con el cáncer de pulmón en un paciente japonés [40]. Por otra parte, como se mencionó en la introducción, parvovirus B19 se sospecha que es un agente causal de otros tipos de cáncer y puede inducir procesos inflamatorios crónicos en un tejido infectado [19-24]. Mecanismos similares pueden desempeñar un papel en los tejidos infectados HBoV; Así, los estudios futuros deberían centrarse en los procesos inflamatorios asociados con HBoV. En conjunto, estas observaciones conducen a la hipótesis de que los parvovirus humanos, en particular HBoV y el parvovirus B19, pueden desempeñar un papel activo en los cánceres humanos. Por lo tanto, más estudios basados en estudios prospectivos utilizando tejidos tumorales frescas o la novela Cufi-8 del sistema de cultivo celular [7] son altamente deseables y podría dilucidar el papel de estos virus en los cánceres humanos.