Extracto
Antecedentes
Virus del papiloma humano (VPH) Cabeza y cuello asociado (HNCS) han generado gran cantidad de interés en la investigación en los últimos tiempos. Debido a la alta incidencia de HNCS y la falta de datos suficientes sobre el VPH de alto riesgo (HR-HPV) de la región de Norte-Este de la India, este estudio fue concebido para investigar la infección por VPH-AR, sus tipos y su asociación con los hábitos de estilo de vida como el tabaco, el consumo de alcohol, etc.
Métodos
se recolectaron un total de ciento seis muestras de biopsias tumorales HNC primaria. Estas muestras se analizaron para ADN de VPH-AR (13 tipos de VPH) mediante captura de híbridos 2 (HC2) y se realizó la genotipificación se realizó mediante PCR multiplex anidada E6 (NMPCR).
Resultados
La presencia de HR-HPV se confirmó en un 31,13% (n = 33) y 24,52% (n = 26) de los pacientes con CCC por PCR anidada múltiplex (NMPCR) y el ensayo HC2 respectivamente. Entre los casos de VPH-AR positivas, de los trece tipos de HPV HR analizados, sólo dos genotipos prevalentes, VPH-16 (81,81%), seguido por el VPH-18 (18.18%) fueron encontrados. Se observó una asociación significativa entre la infección por VPH-AR con el consumo de alcohol (p & lt; 0,001) y el tabaco de mascar (p = 0,02) en los casos HNC. En comparación con la infección por VPH-18 del VPH-16 se encontró una relación significativa con el tabaco de mascar (p = 0,02) hábito.
Conclusiones
Nuestro estudio demostró que la masticación de tabaco y el consumo de alcohol pueden actuar como factores de riesgo para la infección por VPH-AR en HNCS de la región noreste de la India. Este fue el primer estudio del nordeste de la India, que también evaluó la aplicabilidad clínica de ensayo HC2 en muestras de pacientes con CCC. Sugerimos que el alcohol, el tabaco y hr- acto infección por VPH de forma sinérgica o complementan entre sí en el proceso de desarrollo y la progresión HNC en la presente población de estudio
Visto:. Kumar R, Rai AK, Das D, R Das , Kumar RS, Sarma A, et al. (2015) El alcohol y el tabaco aumenta el riesgo de infección de alto riesgo del VPH en el cáncer de cabeza y cuello Los pacientes: Estudio de la Región Noreste de la India. PLoS ONE 10 (10): e0140700. doi: 10.1371 /journal.pone.0140700
Editor: Jeffrey S. Chang, Institutos de Investigación Nacional de Salud, TAIWAN
Recibido: 24 de mayo de 2015; Aceptado: September 28, 2015; Publicado: 16 de octubre 2015
Derechos de Autor © 2015 Kumar et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del papel
Financiación:. se prestó apoyo por el Departamento de Biotecnología del Ministerio de Ciencia y Tecnología de la India (Grant No. TC /04 /NE /TBP /2010 y la subvención No. BT /Med /NE-SFC /2009) recibida por AR y AKR, respectivamente [http://www.dbtindia.nic.in/]
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
La cabeza y las cuentas de incidencia del cáncer de cuello (CCC) de aproximadamente el 25-30% de todos los casos de cáncer en la India [1]. HNC es una enfermedad multifactorial y multifásica que afecta a sitios anatómicos tales como el labio, la cavidad oral, nariz y los senos paranasales, nasofaringe, orofaringe, cavidad oral, hipofaringe, laringe etc [2]. Los factores de riesgo importantes son el tabaco, el consumo de alcohol, betel de mascar nuez, el cambio de comportamiento sexual, etc., que son responsables de la mayoría de HNC carga. En los pacientes con CCC de 50 años y más de edad, las asociaciones con los principales factores de riesgo anteriores son más predominantes. El consumo de tabaco y carcinógenos relacionados con el alcohol juegan un papel importante en el desarrollo de HNC probablemente a través de la supresión inmune [3-6]. En el compartimiento extracelular e intracelular, el humo del cigarrillo genera partículas, extractos gaseosos y los solutos de agua. Los principales componentes mutagénicos y carcinogénicos clasificadas de cigarrillos son nicotina, alquitrán, amoníaco, monóxido de carbono, dióxido de carbono, formaldehído, acroleína, acetona, benzopirenos, Hidroxiquinona, óxidos de nitrógeno y el cadmio. Alquitrán y nicotina del humo de los cigarrillos afectan la respuesta inmune innata y aumentan la susceptibilidad a las infecciones [7, 8]. El consumo de alcohol también se considera como uno de los factores de riesgo que pueden contribuir a la carcinogénesis. La Agencia Internacional para la Investigación del Cáncer de la Organización Mundial de la Salud ha clasificado el alcohol como un carcinógeno del Grupo 1 [9]. Virus del Papiloma Humano (VPH) fue defendido por primera vez Syrjanen et al (1983) como un factor de riesgo especialmente para la orofaringe y el cáncer oral [10]. En subconjunto de casos HNC, asociación de VPH se han reconocido en más joven grupo de edad (& lt; 50 años) los pacientes sin hábito del tabaco y consumo de alcohol [11, 12]. El ADN genómico de HPV se detectó principalmente por el método basado en la PCR y los estudios han demostrado que hasta un 60% de los casos HNC puede ser HPV positivo [13, 14]. La asociación causal entre el VPH y el cáncer de cabeza y cuello sigue siendo contradictoria debido a evidencias contradictorias [15, 16]. asociación con el VPH HNC ha adquirido una importancia debido a los hallazgos que el VPH casos positivos HNC tienen buen pronóstico en comparación con los casos negativos de VPH [17-21]. Las posibles vías de transmisión del VPH en HNC pueden ser la conducta sexual oral en adultos y la transmisión perinatal en los niños recién nacidos. En particular, la cavidad oral, la faringe y la laringe, las células epiteliales son más susceptibles a la infección por VPH [2, 22-26]. tipos de VPH se clasifican como de alto riesgo (VPH-16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 y 82) y de bajo riesgo (VPH-26, 30, 34, 53, 66, 67, 69, 70, 73, 82, 85) sobre la base de su potencial carcinogénico. VPH-16 y VPH-18 tipo de alto riesgo han sido considerados como los principales genotipos contributivas en HNC [27, 28].
Los reguladores del ciclo celular maestro, p53, p16 y pRb son importantes genes supresores tumorales que tienen significativa papel en el ciclo celular vía de reglamentación y el cáncer [29]. Estos genes desempeñan un papel importante en el mantenimiento de la integridad genómica y el ciclo celular, y el control de la apoptosis [30, 31]. El VPH de alto riesgo (HR-HPV) los tipos 16 y 18 ejercen principalmente su potencial carcinogénico a través de la expresión de la oncoproteína E6 y E7. La activación de oncogenes E6 conduce a la degradación de p53 a través de su interacción con la ubiquitina ligasa E3 E6AP [31, 32]. El E7 activa degrada la proteína supresora de tumores retinoblastoma (pRb), debido a que E2F factor de transcripción se estimula y da como resultado la sobreexpresión de p16 INK4a, un inhibidor de quinasa dependiente de ciclina [31, 32]. Evadiendo los guardianes maestras mencionadas de ciclo celular, los genes del VPH tomar el control de la proliferación celular que conduce a una división celular incontrolada.
La tasa de incidencia región noreste (NE) de la India ha ajustado por edad (AAR) por 1, 00.000 personas para HNCS en la India [33]. Entre todos los registros de cáncer de base poblacional (PBCR), el distrito de Kamrup Urbana (KUD) de la región noreste de la India ocupó el segundo lugar (AAR-156.3) en las mujeres y cuarta (AAR-185.2) en los machos para todos los sitios de incidencia de cáncer. El AAR para los sitios principales HNC en KUD PBCR es la siguiente: 9.4 lengua (masculino), 3.2 (hembra); la boca 7,7 (macho), 7,6 (hembras); hipo faringe 7,7 (macho) y 7,6 (mujeres); Laringe 8.2 (varón). cánceres relacionados con el tabaco (TRC) representaron & gt; 40% pero & lt; 50% en los hombres, mientras que en las mujeres fue de & gt; 30% pero & lt; 40% de todos los casos HNC en KUD PBCR [33]. La población de la región NE representa el origen étnico único, distintivo estilo de vida y hábitos alimenticios que pueden jugar papel importante en la compleja interacción de factores ambientales y genéticos que pueden estar asociados con una alta incidencia de HNC en esta región. Hay una falta de datos suficientes sobre el estado de HR-HPV en los casos de HNC noreste de la India. El objetivo de este estudio fue investigar la prevalencia de la infección por VPH-AR y su asociación con la masticación betal quid, el fumar, el tabaco, el consumo de alcohol y las características clínico-patológicas de los pacientes. En el presente estudio, se utilizó E6 anidado método PCR multiplex para la detección sensible y específica del tipo de las infecciones por VPH basado en la amplificación del oncogén viral E6 /E7 como se describe anteriormente [28, 34]. La captura de híbridos 2 test (HC2), que es la FDA EE.UU. aprobada y recomendada por la OMS para la detección de VPH en muestras clínicas de las lesiones intraepiteliales cervicales (CIN) se han aplicado por primera vez para la detección de VPH-AR en muestras HNC del noreste de la India .
Materiales y Métodos
Características de los pacientes
Un total de 106 pacientes con CCC se inscribieron en este estudio (73 hombres; mujeres 33). muestras de tejidos tumorales se obtuvieron de la unidad de cirugía de cabeza y cuello oncología del Dr. Bhubaneswar Instituto Borooah Cáncer (BBCI), Centro Regional del Cáncer, Guwahati, India. Los casos confirmados histopatológicamente HNC se inscribieron durante el período de octubre de 2011 a septiembre de 2013. La información demográfica y estilo de vida se recogieron mediante un cuestionario prediseñado través de entrevista personal. La información recogida sobre las variables demográficas incluyeron la edad, el género, la etnia, la educación, el estatus socioeconómico, factores de estilo de vida de alcohol, el hábito de fumar, mascar nuez de betel y otros hábitos alimenticios. El American Joint Committee on estadificación TNM del cáncer se utilizó para la estadificación y el diagnóstico. Los pacientes fueron informados sobre el estudio y se obtuvo el consentimiento por escrito antes de la recogida de las muestras. Este estudio fue aprobado por el comité de ética institucional del Dr. Bhubaneswar Instituto Borooah Cáncer (BBCI), Guwahati, Assam (India).
aislamiento del ADN genómico de
tejido tumoral
Se recogieron muestras de biopsia de tejido en el volumen de 1 ml de solución salina tamponada con fosfato (PBS) y el ADN genómico se extrajo a partir del tejido se homogeneizó utilizando QIAamp DNA Mini kit (Qiagen, Alemania) siguiendo las instrucciones del fabricante. La cantidad y calidad del ADN genómico aislado se confirmó mediante nano-espectrofotómetro (Bio-fotómetro Eppendorf, Alemania) y la electroforesis en gel de agarosa, respectivamente.
Alto Alto Riesgo de detección de ADN de VPH por captura de híbridos 2 (HC2) Ensayo
el ADN genómico aislado de muestras de biopsias de los pacientes se suspendieron en el medio de transporte de muestras (STM) (Qiagen, Alemania) y la presencia de VPH fue detectado por HC2 VPH de alto riesgo-Prueba de ADN
™ kit (Qiagen, Alemania) según las instrucciones del fabricante. En el paciente muestras STM, se realizó la detección quimioluminiscente de los 13 tipos más comunes de VPH-AR (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, y 68) usando automatizado DML 2000 sistema de luminómetro (Digene, EE.UU.). Las señales luminosas se midieron como unidades relativas de luz (RLUs) con intensidad de la luz que indica la presencia o ausencia de ADN diana en la muestra ensayadas. El valor medio de RLU de alto riesgo del VPH calibrador de muestras de control positivo se consideró como valor de corte positivo (CO). Los pacientes espécimen con RLU /CO relación valor ≥ 1 con la sonda de VPH de alto riesgo se considera "positivo" para cualquiera de los tipos de VPH-AR (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59 y 68). La ausencia de ADN de VPH-AR por debajo del límite de detección se denota en la muestra con RLU /CO & lt; 1. Cuando RLU = CO confiere presencia de aproximadamente 5000 copias de virus en la muestra. También se utilizaron dos casos confirmados de cáncer de cuello uterino con positividad de VPH-AR en cada ensayo y transportadores de ADN como control negativo [35, 36]. Los informes de ensayo se generaron de acuerdo con el formato del software TM Hybrid Capture
ver. 2.0. Todas las muestras se ensayaron dos veces y las muestras con resultado positivo VPH hr- tanto en ejecución de prueba sólo fueron puntuados como VPH hr- positivo.
E6 anidado PCR multiplex (NMPCR) para el VPH genotipado
La muestras dieron positivo para el ADN del VPH-AR en el ensayo HC2 fueron analizados para el genotipado del VPH. La reacción de PCR anidada E6 1
ª ronda se realizó en un volumen de 20 l usando 25-100 ng de ADN genómico, tampón 1X Maxima Hot Start PCR, MgCl 1,5-2,0 mM
2 (Thermo Scientific, EE.UU.), 250 nM cada uno de los cebadores (Metabion, Alemania), 250 mM de cada dNTP y de 0,5 U Maxima Hot Start Taq ADN polimerasa (Thermo Scientific, EE.UU.). La condición de ciclos térmicos durante 1
ª ronda de PCR fue el E6: Denaturation- 95 ° C 5 min, 38 ciclos de amplificación con Denaturation- 95 ° C 30 seg, Anillamiento- 55 ° C 45 seg, Extensión- 72 ° C 90 seg, y última Extensión- 72 ° C durante 7 min. El 1
er producto redondo E6 PCR (630bp) se utilizó como molde (1 l) para el 2
ª ronda de reacción anidada para el genotipado del VPH usando conjunto múltiplex de cebadores específicos del tipo de VPH. El volumen de reacción y los componentes fueron similares como se mencionó anteriormente. El 2
ª ronda de PCR anidado condición para el genotipado del VPH fue similar a 1
ª ronda con los cambios sólo en Anillamiento- 55 ° C- 40 segundos y extensión-72 ° C 45 seg [34]. Todos los productos de la PCR se visualizaron en un 2% en gel de agarosa (Amresco, EE.UU.) teñido con bromuro de etidio (Amresco, EE.UU.) en Gel Doc XR
™ sistema (Bio-Rad, EE.UU.). Los positivos cervicales muestras de carcinoma de células escamosas HR-HPV ADN se utilizó como control positivo en cada PCR plazo. Las secuencias de los cebadores se describen en la Tabla 1.
Análisis estadístico
Los datos se representan como la media ± SD o en frecuencias (%). Se emplearon la prueba χ² y la prueba exacta de Fisher para identificar la asociación entre las características clínico-patológicas y el estado de HR-HPV. El análisis univariante se realizó mediante el cálculo de la odds ratio (OR) y sus intervalos de confianza del 95% (IC) y P ≤ 0,05 fue considerado como el nivel de significación. Epi-Info versión 6 del software se utilizó para el análisis estadístico
Resultados
Características de la Red de Pacientes
En la población de estudio (n = 106), 68,86% de los pacientes ( n = 73) eran varones y 31.13% eran (n = 33) mujeres. la edad de los pacientes osciló entre 25 a 80 años (media = 53,41 años). Más de tres cuartas partes (80,18%) de los pacientes eran de zonas rurales, resto (19,56%) eran de zonas urbanas y semi urbanas. hábito alimenticio no vegetariana fue reportado por & gt; 92% de los pacientes (Tabla 2). La población de estudio se agrupan en cualquiera de 'HR-HPV positivo' (n = 33) o "VPH negativo '(n = 73) en base a la presencia de ADN de VPH-AR. Las características demográficas de los pacientes y sus hábitos dietéticos se mencionan en la Tabla 2. Los factores demográficos no se asociaron significativamente con la infección por VPH-AR (p & gt; 0,05). De los 106 casos, los sitios anatómicos entre las características clínico-patológicas de los pacientes eran de la cavidad bucal 81,13% (n = 86), orofaringe 4,71% (n = 5), hipofaringe 2,83% (n = 3), laringe 8.49% ( n = 9) en la (Tabla 3). El porcentaje de pacientes con diagnóstico de HNCS etapa avanzada fueron estadio III 24,52% (n = 26), IVA-55.66% (n = 59) y IVB 5,66% (n = 6). El carcinoma de células escamosas predominante era 85.85% (n = 91) el tipo histológico en la presente población de estudio.
detección de VPH-AR y su asociación con características demográficas y clínico-patológicas
El ADN del VPH de alto riesgo fue detectado por PCR anidada múltiplex (NMPCR) en el 31,13% (n = 33) y captura de híbridos en el 24,52% (n = 26) de los pacientes con CCC. Se encontró que la sensibilidad y la forma predictiva positivo negativo que ser 100% cada uno; la especificidad y el valor predictivo positivo (VPP) se observó como 91,19% y 78,78%, respectivamente. Esta prueba clasifica 93,29% de los casos correctamente y el área bajo la curva se encontró como 89,50% (p & lt; 0,001) con IC del 95% (81,30% - 97,80%). Para confirmar los virus del papiloma humano biológicamente activos, la expresión de p16 se analizó en ambos casos negativos de HPV positivo y el VPH, y más de expresión de p16 se encontró en los casos de VPH positivos, que es un indicador indirecto de la presencia de HPV (datos no presentados). En HC2 analizó muestras, el valor medio de RLU estaba en el rango de 99 a 3466, y el corte positivo media fuera (CO) el valor de HR-HPV era 347 (Qiagen, Alemania) de acuerdo con la instrucción. Los casos positivos de VPH de alto riesgo fueron genotipo para subtipos de HPV E6 utilizando anidados de PCR múltiple. Los detalles de cebadores utilizados para la PCR multiplex anidada E6 [29] se mencionan en la Tabla 1. El HR-HPV casos positivos se encontró además univariante analizado los hábitos de estilo de vida y una asociación significativa entre la positividad de VPH-AR y el consumo de alcohol (OR = 7,56; IC del 95%: 2,64 a 22,19, p. & lt; 0,001) como se indica en la Tabla 2. Las muestras de alcohol bebedor han demostrado tener la infección por VPH-AR en comparación con los no bebedores. A tener en cuenta el efecto sinérgico o complementaria entre los hábitos de tabaco y alcohol, se observó una asociación significativa con la positividad de VPH-AR (OR = 3,09;. IC 95% 1,00 a 9,65; p = 0,02), pero cuando los casos de los fumadores y los hábitos de alcohol fueron juntos analizaron y se calcularon, se encontró que no hubo una asociación significativa con la positividad de VPH-AR. Los masticadores de betel también habían mostrado más la infección por VPH-AR. Entre los casos positivos de VPH-AR (n = 33), 39.40% (n = 13) de los pacientes eran de tabaco no son masticadores y 60,60% (n = 20) fueron los masticadores de tabaco. grupo de los fumadores no 69.69% (n = 23) tienen más probabilidad de infección por VPH-AR en comparación con los fumadores 30.31% (10). Los pacientes que residen en las zonas rurales tienen más HR-HPV positividad 87.88% (n = 29) en comparación con el 9,09% semi urbana residentes (n = 3) (1%) y la zona de 3.03% urbana. No hubo asociación significativa entre la infección por VPH-AR y el género, betel, que mastican tabaco, hábito de fumar, hábito alimenticio, edad y lugar de residencia (Tabla 2).
Entre los casos positivos de VPH-AR (n = 33), la cavidad oral 72,72% (n = 24), laringe 6,06% (n = 2), hipofaringe 6,06% (n = 2) y la orofaringe 15,15% (n = 5) tenían HR-HPV ADN (Tabla 3). No hubo asociación significativa entre la infección por VPH-AR y el sitio del tumor orofaríngeo (p = 0,01). La mayoría de los casos de VPH-AR positivas 90,90%, (30 de 33) se presentaron en estadio III avanzado, IVA o IVB enfermedad. Histológicamente, 90.90% HR-HPV casos positivos fueron el carcinoma de células escamosas, 6,06% eran carcinoma verrugoso y 3.03% eran otros carcinomas (carcinoma adenoide quístico, de células fusiformes malignas) (Tabla 3). No hubo asociación significativa del estadio tumoral TNM, el grado histológico y la morfología de positividad del VPH hr- (p & gt; 0,05). Cuando se analizaron los casos HNC con factores de estilo de vida, se encontró que el consumo de alcohol que se asociaron significativamente con la infección por VPH-AR (p & lt; 0,001) (Tabla 2). A continuación analizamos el estado de HR-HPV en los cánceres de la cavidad oral por sí solos (Tabla 4) y se compara con el tabaquismo, el tabaco, el alcohol, el uso de la nuez de betel y encontramos que había una asociación significativa entre la positividad y el consumo de alcohol HR-HPV (OR = 2,98; 95% CI. 0,95 a 9,43, p = 0,03). Para encontrar el efecto sinérgico o complementario género de tabaco y alcohol, los hábitos del análisis univariado se encontró que existe una asociación significativa entre la positividad de VPH-AR con los hábitos de tabaco y alcohol (OR = 2,94;. IC del 95%: 0,95 a 8,88; p = 0,05 ) (Tabla 4). Sin embargo, cuando se analiza el caso de los fumadores y los hábitos de alcohol juntos, ninguna asociación significativa con la positividad de VPH-AR.
Asociación de VPH tipos 16 y 18 con las características demográficas y clínico-patológicas
Entre los casos positivos de VPH HR, VPH-16 estaba presente en el 81,81% (n = 27) y el VPH-18 en el 18,18% (n = 6) de los casos. Los masticadores de tabaco habían aumentado significativamente el riesgo de infección por VPH-16 (p = 0,02), pero no de VPH-18. El riesgo de VPH-16 siendo positivo es 11,88 veces más en los masticadores en comparación con los no masticadores con IC del 95% (1,01 a 317,2). Sin embargo, el hábito de fumar no muestra ninguna importancia en comparación con los no fumadores (ODER 0,14) con IC del 95% (0,01 a 1,28). La positividad de HPV-18 se encontró en 5 casos (83,33%) de los no masticadores en comparación con los masticadores. Se encontró infección por VPH-16 en los fumadores a ser mayor (p = 0,05) en comparación con el VPH-18 (Tabla 5), aunque se encontró ADN de VPH-AR que se asociaron significativamente con el consumo de alcohol (Tabla 2), pero con referencia al VPH - 16 solo o, VPH tipo 18 solo, no hubo tal asociación se encontró con él. La cavidad oral 70,37% (n = 19), laringe 7,41% (n = 2), hipofaringe 7,41% (n = 2) y la orofaringe 14,82% (n = 4) de los pacientes de cáncer tienen HPV-16 como la mayoría de tipo HR-HPV predominante mientras que el VPH -18 se encontró sólo en la cavidad oral de 83,33% (n = 5) y la orofaringe 16,66% (n = 1). En el subtipo histológico de carcinoma de células escamosas, el VPH-16 se encontró en 25 casos (92,59%) y VPH-18 en 5 casos (83,34%) se detectó. HPV-16 fue predominante en los hombres 66,66% (n = 18), así como proporcionalmente alta en hembras 33,44% (n = 9), mientras que HPV-18 fue más en varones 83,33% (n = 5) en comparación con las mujeres 16,67% ( n = 1) de los casos. Mascar betel quid, el consumo de alcohol, la edad, el género no mostró ninguna asociación significativa con la presencia de VPH-16, 18 tipos (p & gt; 0,05). (Tabla 5)
Discusión
El virus del papiloma humano (HPV) se ha identificado como un factor etiológico en subconjunto de cáncer de cabeza y cuello, especialmente orofaríngea [37]. La mayoría de los pacientes con carcinoma orofaríngeo asociado VPH positivas fueron reportados a ser más jóvenes y en su mayoría no tenían antecedentes de tabaco /alcohol utiliza [38]. Algunos grupos de investigación han defendido que el VPH casos HNC negativos y positivos de VPH deben ser considerados como dos entidades patológicas distintas clínicas, y los regímenes de tratamiento es necesario diseñar en consecuencia [37-39]. Las habilidades de fracción y la proliferación de la hipoxia tumoral se redujo significativamente en las células tumorales positivas de HPV después de la irradiación en comparación con las células negativas VPH [40]. Se demostró que el VPH positivos pacientes HNC localmente avanzados han mostrado significativamente mayor respuesta patológica completa en comparación con los casos negativos de VPH sometidos a régimen de quimioterapia [41]. Numerosos estudios han informado de la detección de ADN de VPH en HNSCC con diferentes tarifas, las técnicas de detección incluyen la hibridación in situ e hibridación de transferencia de Southern (métodos de sensibilidad más bajos) o PCR (métodos de alta sensibilidad) [42]. Además, los métodos utilizados para el muestreo y almacenamiento también varían. La falta de un procedimiento estandarizado y clínicamente relevante universalmente aceptable para la detección del VPH ha expresado su preocupación por su aplicación en la práctica clínica de rutina. Nuestro estudio ha, por primera vez evaluado la aplicabilidad del ensayo de HC2 en muestras clínicas de casos HNC de NE India. Proponemos que la captura de híbridos 2 (HC2) de ensayo, que es aprobado por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA, EE.UU.), para la detección de VPH-AR en muestras cervicales clínicos, también se puede utilizar para la detección de VPH-AR en muestras HNC. Debido a la naturaleza semi-cuantitativa de ensayo HC2 puede tener una aplicación para la evaluación del pronóstico de HR-HPV en pacientes con CCC.
Se utilizó E6 anidado PCR multiplex (NMPCR) para el genotipado del VPH, y encontramos el VPH-16 en 81.81 % (n = 27) y el VPH-18 en el 18,18% (n = 6) de la (n = 33) de los casos positivos de VPH-AR, que es 31,13% de los pacientes con CCC (33/106). Nuestra datos del estudio se apoya en estudios anteriores de la India, que habían encontrado ADN de VPH en el rango de 22% a 73% en los casos de cáncer oral [43-45]. Entre (n = 33) de los casos HR VPH, encontramos (n = 27) HPV 16 en el que 70,37%, 14,82%, 7,41%, 7,41% y (n = 7) HPV-18 en 83,33%, 16,66%, 0 %, y 0% de la cavidad oral, orofaringe, laringe y de pacientes con cáncer de hipofaringe, respectivamente. Nuestro estudio muestra mayor VPH-16, 18 tasa de infección en comparación con estudios anteriores de la India [43-46]. Se encontró que el sitio del cáncer orofaríngeo en comparación con otros sitios del tumor ha mostrado un riesgo significativo para la infección por VPH de alto riesgo. Nuestros datos se apoya en estudio anterior, en el que se encontró que tenía asociación de cáncer de orofaringe con la infección por VPH de alto riesgo [47]. Epidemiología del carcinoma orofaríngeo VPH positiva de células escamosas (OPSCC) son distintos de los negativos de VPH y se caracterizan por la edad más joven y más fuertemente asociado con el comportamiento sexual. VPH asociado cáncer orofaríngeo (VPH-OPC) es cada vez mayor en la incidencia y tiene características clínicas, patológicas, moleculares y epidemiológicos de la enfermedad [38]. La diferencia en nuestras observaciones con otros estudios se puede atribuir a diferentes metodologías, variación étnica, sitios tumorales, etc [48]. Nuestros datos muestran que la masticación de la nuez de betel, fumar no puede tener una relación significativa con la infección por VPH-AR. La positividad de VPH-AR en los casos HNC era pequeña, lo que puede confundir el papel de la nuez de betel, fumar como factores de riesgo para la infección por VPH. Se demostró por Ang et al (2010) que el VPH progresión del cáncer orofaríngeo positivo no puede estar fuertemente asociado con el tabaquismo y [47]. Sin embargo, otros estudios han demostrado la asociación del tabaco con la infección por VPH [49].
observado en nuestros datos que mascan tabaco tienen la infección significativamente mayor HR-HPV, que presenta mascar tabaco como un factor de riesgo para la infección por VPH hr-. La concentración de nicotina y su duración de la exposición a la célula pueden alterar el antígeno mediada por vías de señalización [50]. La alteración en el antígeno mediada por eventos de señalización en las células del sistema inmune puede ser el mecanismo por el cual la nicotina u otros constituyentes del cigarrillo inhiben la respuesta de las células para la infección viral /bacteriana [50]. Sugerimos que el tabaco asociado carcinógenos puede provocar alteraciones en los eventos genéticos que pueden conducir a cambios moleculares, haciendo que el individuo susceptible a la infección por VPH-AR.
En el presente estudio la infección por VPH-AR se encontró que se asociaron significativamente con el consumo de alcohol en los casos HNC. Oh et al (2014) ha demostrado recientemente que la carga HR-HPV y el consumo de alcohol pueden tener un efecto sinérgico sobre la infección por VPH-AR y su persistencia en el cáncer de cuello de útero [51]. Otro estudio reciente ha demostrado que el consumo de alcohol se asoció con un aumento significativo de los riesgos para la infección por VPH en los hombres [52]. Esto apoya nuestra observación de que el consumo de alcohol, puede actuar como un factor de riesgo para la infección por VPH.
etanol, un constituyente principal de las bebidas alcohólicas, se oxida a acetaldehído por alcohol deshidrogenasas (ADH). El acetaldehído es metabolizado a acetato por aldehído deshidrogenasas (ALDH). La mala higiene oral y el tabaquismo pueden cambiar la flora bacteriana bucal que pueden conducir a un aumento de la producción de acetaldehído [53]. En modelos animales, el acetaldehído se ha demostrado como carcinogénicas y mutagénicas [54]. se informó de factores genéticos, como la ADH /ALDH2 polimorfismo, la falta de ALDH2 o bajos niveles de expresión de ALDH2 y los hábitos de consumo de alcohol que se asocia con un mayor riesgo de cáncer de cabeza y cuello [55, 56].
El alcohol puede también modificar la respuesta inmune innata en función de la dosis que puede resultar en la respuesta inflamatoria alterada a la infección [57]. Dado que la respuesta inmune juega un papel importante en la infección por el VPH, el consumo de alcohol puede ayudar en la evasión de la respuesta inmune a la infección por VPH. Se han encontrado componentes de la inmunidad sistémica, como el nivel sérico de citoquinas que aumentarse en casos de infección por VPH persistentes [58].
Nuestro estudio proporciona evidencia sobre aumento de la vulnerabilidad a la infección por VPH-AR en los masticadores de tabaco y bebedores de alcohol en su mayoría pacientes con cáncer de cavidad oral. Nuestra observación está bien apoyado por estudios previos HNC de la India y en todo el mundo [14]. A partir del número total de casos en los hábitos de mascar tabaco y el fumar se analizaron con el VPH, las asociaciones no fueron significativas (Tabla 2), como proporción importante de la población eran VPH negativos y positivos de los casos de VPH eran menos. Pero cuando se tomaron los hábitos de masticación a lo largo de los casos de VPH positivos solo, se encontró asociación significativa (Tabla 4) que demuestre que mascar tabaco y el alcohol actúan como factores de riesgo para la infección por VPH. Más número de cánceres de la orofaringe en nuestro estudio podría haber traído una mejor evaluación de alcohol y tabaco asociación con el VPH-AR en estos tipos de cáncer. Nos centramos principalmente en la detección de ADN de VPH hr- mediante el empleo de nueva metodología de ensayo tales como HC2 y E6-NMPCR que se utiliza en menos HNC. El consumo de alcohol y el tabaco de mascar /fumar son los hábitos generalizados en la población de la India nororiental. Creemos que la sensibilización de masas a través de programas de sensibilización de detección de semen sobre los factores de riesgo HNC puede ayudar en la reducción de la incidencia en la población HNC NE en el futuro.
Llegamos a la conclusión de nuestro presente los datos del estudio que la infección por VPH-AR puede ser más prevalente en los masticadores de tabaco, los bebedores de alcohol y actúan como factores de riesgo para la infección por VPH en los casos HNC del noreste de la India. Hybrid Capture 2 (HC2) el ensayo debido a su alto valor predictivo negativo, especificidad y sensibilidad se puede aplicar para la detección hr- VPH en muestras clínicas HNC.
Reconocimientos
Reconocemos la cooperación de los pacientes con cáncer de cabeza y cuello que participaron en el estudio. También se agradece a Madhumita Dey y Anindita Dutta para las valiosas sugerencias y edición del manuscrito.