Extracto
Los estudios anteriores han demostrado que
c-MET es
sobreexpresa en los casos de cáncer de vejiga agresiva (BCA). Identificación de diafonía entre
c-MET
y otra RTK como
AXL
y
PDGFR
sugieren que
c-MET
genes de red (
c-MET CD -
AXL CD -
PDGFR
) puede ser clínicamente relevante para BCa. Aquí, examinamos si la expresión de
c-MET
genes de red se puede utilizar para identificar a los pacientes BCa en mayor riesgo de desarrollar enfermedad agresiva.
in vitro
análisis,
c-MET
caída suprimido la proliferación celular, la invasión y la migración, y el aumento de la sensibilidad a la apoptosis inducida por cisplatino. Además,
c-MET
gen de red (
c-MET
,
AXL
, y
PDGFR
) permitió la expresión de la discriminación de los tejidos normales de BCa tejidos de control y dejaban suponer mala progresión de la enfermedad en pacientes no musculares BCa invasoras y pobre supervivencia global en pacientes musculares BCa invasivos. Estos resultados sugieren que
c-MET
la expresión del gen de la red es un marcador pronóstico novedoso para predecir qué pacientes BCa tienen un mayor riesgo de desarrollar enfermedad agresiva. Estos genes podrían ser un marcador útil para la terapia de co-orientación, y se espera que juegue un papel importante en la mejora tanto de la respuesta al tratamiento y la supervivencia de los pacientes BCa
Visto:. YW Kim, Yun SJ, Jeong P, Kim SK, Kim SY, Yan C, et al. (2015) El
c-MET
red como nuevo marcador de pronóstico para predecir cáncer de vejiga Los pacientes con un mayor riesgo de desarrollar enfermedad agresiva. PLoS ONE 10 (7): e0134552. doi: 10.1371 /journal.pone.0134552
Editor: Renato Franco, Istituto dei Tumori Fondazione Pascale, ITALIA
Recibido: 26 Marzo, 2015; Aceptado: July 13, 2015; Publicado: July 30, 2015
Derechos de Autor © 2015 Kim et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
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Financiación: Este trabajo fue apoyado por una Fundación Nacional de Investigación de Corea (NRF) subvención financiado por el gobierno de Corea (MSIP; http:. //www.msip.go .kr /web /main /main.do) (núm NRF-2014R1A2A1A09006983) y por el Programa de Investigación de Ciencias básicas a través de la Fundación Nacional de Investigación de Corea (NRF), financiado por el Ministerio de Educación, Ciencia y Tecnología (http: //www.moe.go.kr/main.do)(2012R1A1A4A01008753). Además, este trabajo fue apoyado en parte por el R01DK100974; U01 DK103260; U24 DK097154; NIH NCATS UCLA CTSI UL1TR000124; un Fondo Descubrimiento Steven Spielberg en el premio de desarrollo del cáncer de próstata Carrera del Investigador; IMAGINE un Premio Programa NO IC Investigación (JK). JK es una Fundación de Investigación Académico Asociación Americana de Urología y una Escuela de Medicina de Harvard Eleanor y Miles Shore Académico. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
La sobreexpresión de los receptores tirosina quinasas (RTK) se produce en los casos de cáncer de vejiga agresivo (BCA); Se recomiendan las terapias de este modo RTK-dirigidos para estos pacientes [1, 2]. La inhibición farmacológica de la actividad RTK (por ejemplo, con gefitinib) es el tratamiento estándar de oro para los pacientes bca, aunque ha tenido un éxito limitado [3, 4].
El
c-MET proto
-oncogene, que se encuentra en el cromosoma 7q21-31 [5], se sobreexpresa en BCa.
c-MET
se activa mediante su ligando, el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), e induce aumento de la proliferación, la migración, la motilidad y la invasión de las células CaV [6]. Tras la estimulación y la dimerización de
c-MET
, la fosforilación de tirosina se produce en sitios específicos dentro del dominio intracelular (es decir, Y1234, Y1235, Y1349, Y1356 y), que aumenta la actividad intrínseca de tirosina quinasas y conduce a la reclutamiento de muchas proteínas de señalización, incluyendo la proteína de unión al receptor del factor de crecimiento 2 (GRB2), Grb2 asociado ligante-1 (GAB1), homología Src 2 dominio que contiene (SHC), fosfolipasa C1 (PLC1), y fosfoinosítido 3-quinasa (PI3 -K) [7]. El Ras /MAPK Erk-, PI3-K /Akt /mTOR [8], y STAT3 vías de señalización también se activan, induciendo de este modo varias respuestas biológicas [6, 9].
La sobreexpresión de
c- MET
se correlaciona con BCa metástasis [7, 10]; de hecho,
c-MET
se sobreexpresa en más del 60% de los casos BCa localmente avanzado y metastásico [5], y está vinculada a la mala supervivencia [11]. Teniendo en cuenta que la dimerización de las RTK es importante para controlar su función biológica en el contexto del cáncer, la diafonía entre los
c-MET
y otros RTK debe ser investigado cuidadosamente si queremos comprender el papel de los
c- MET
en la progresión del cáncer humano. Las secciones de tumor primario de pacientes con un tipo raro de BCa, llamados neuroendocrino (NE) BCa, espectáculo
c-MET
expresión [12]. Esto sugiere que la NE BCa puede ser un objetivo adecuado para los inhibidores de
c-MET
. Un estudio previo mostró que un miembro de la
c-MET
familia, recepteur d'origine Nantais (RON), forma un heterodímero con el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) [13]. Además, el análisis de microarrays RTK reveló que las RTK como
AXL
y
PDGFR
diafonía con
c-MET
[11].
AXL
y
PDGFR
están asociados con cáncer de mama agresivo [14], el riñón [15], pulmón [16, 17], y los cánceres de próstata [18, 19], lo que sugiere que
c-MET Network -
AXL CD -
PDGFR
puede ser clínicamente relevante para BCa [11]
el objetivo del presente estudio fue examinar la asociación clínica. entre la expresión de
c-MET
genes de red (
c-MET CD -
AXL CD -
PDGFR
) y la evolución de la enfermedad en los pacientes bca, y para investigar si
c-MET
genes de red se puede utilizar para identificar a los pacientes BCa en mayor riesgo de desarrollar enfermedad agresiva.
Materiales y Métodos
pacientes y muestras de tejidos
muestras de tumores primarios de pacientes sometidos a resección transuretral (RTU) o cistectomía radical en la Universidad Nacional de Chungbuk en Corea del Sur fueron verificados histológicamente como carcinoma urotelial. mucosa de la vejiga normal se recogerán a partir de pacientes con enfermedades benignas como la hiperplasia benigna de próstata (HBP), cálculos de uréter, y la incontinencia urinaria de esfuerzo, después de consentimiento informado. Todos los tejidos de control fueron confirmados histológicamente como normal. Los pacientes con carcinoma concomitante
In situ gratis (CIS), las lesiones de la CEI solos, un período de seguimiento corto (menos de 6 meses), o en los que los datos eran incompletos, fueron excluidos para producir una población de estudio más homogénea. Se reclutó un total de 165 (135 hombres y 30 mujeres;; edad media, 65 años) y 34 pacientes BCa controles (edad media, 54 años 19 masculinos y 15 femeninos). Todos los tumores fueron disecados-macro (por lo general dentro de los 15 minutos de la resección quirúrgica), y cada espécimen BCa se confirmó mediante análisis patológico de una sección de tejido fresco congelado derivado de la TUR o especimenes de la cistectomía. Las muestras tumorales fueron congeladas en nitrógeno líquido y se almacenaron a -80 ° C hasta su uso. CVNMI pacientes fueron sometidos a una segunda RTU 2-4 semanas después de la resección inicial si el espécimen BCa no incluían la capa muscular adecuado o cuando se detectó un tumor de alto grado. Los pacientes con un tumor T1, múltiples tumores, tumores grandes (& gt; 3 cm de diámetro), o de alto grado Ta CVNMI recibió un ciclo de tratamiento intravesical [bacilo de Calmette-Guérin (BCG) o mitomicina-C]. La respuesta al tratamiento se evaluó por cistoscopia y citología urinaria. Los pacientes que estaban libres de la enfermedad dentro de los 3 meses de tratamiento fueron seguidos cada 3 meses durante los primeros 2 años y luego cada 6 meses a partir de entonces. MIBC pacientes con tumores clínicamente localizado o localmente avanzado y un buen estado funcional del Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) (0 o 1) fueron sometidos a cistectomía radical y la disección completa de los ganglios linfáticos pélvicos. Los pacientes no elegibles para la cistectomía radical debido a la enfermedad metastásica, falta de esperanza de vida, o mal estado funcional ECOG (≥2) fueron sometidos a RTU o una biopsia para el diagnóstico histopatológico. Los pacientes con pT3, pT4, o enfermedad con ganglios positivos (basado en el análisis de muestras de cistectomía radical) y aquellos con enfermedad metastásica, pero buen estado general recibieron al menos cuatro ciclos de quimioterapia basada en cisplatino. Los pacientes que se negaron o no completaron un imaginología se [tomografía computarizada (TC) o resonancia magnética (MRI)] al menos una vez cada 3 meses para evaluar las respuestas fueron excluidos del análisis.
Los tumores se por etapas y la clasificación de acuerdo a la clasificación TNM de 2002 y el
Asociación Europea de Urología (EAU)
directrices basadas en las ediciones de 1973
OMS
sistema de clasificación [20, 21]. La recurrencia se define como la recurrencia de CVNMI primaria con un mismo estadio patológico inferior o, y la progresión se definió como la identificación de T2 o enfermedad etapa superior a la recaída. En el caso de MIBC, la progresión se definió como la recurrencia locorregional o una nueva metástasis a distancia en pacientes cistectomizados y un aumento ≥20% en la masa del tumor primario o una nueva metástasis a distancia en pacientes no cistectomizados.
extracción de RNA y transcripción inversa en ADNc
ARN fue aislado de los tejidos por homogeneización con 1 ml de reactivo TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA) en un tubo de vidrio de 5 ml. El homogenado se transfirió a un tubo de 1,5 ml y se mezcló con 200 ml de cloroformo. Después de incubar durante 5 min a 4 ° C, el homogeneizado se centrifugó durante 13 min a 13.000 g a 4 ° C. La fase acuosa superior se transfirió a un tubo limpio que contenía 500 ml de isopropanol. La mezcla se incubó durante 60 min a 4 ° C y luego se centrifuga durante 8 min a 13.000 g a 4 ° C. La fase acuosa superior se descartó y se mezcla con 500 ml de 75% de etanol y se centrifugó durante 5 min a 13.000 g a 4 ° C. La capa acuosa superior se descartó, y el sedimento se secó a temperatura ambiente, se disolvió en agua tratada con DEPC, y después se almacenó a -80 ° C. La calidad y la integridad del ARN se confirmaron usando un dispositivo Nanodrop. cDNA fue preparado a partir de 1 mg de ARN total usando un equipo de primer capítulo de síntesis de cDNA (Amersham Biosciences Europe GmbH, Freiburg, Alemania) de acuerdo con el protocolo del fabricante.
Cultivo de células y transfección
T24 se obtuvieron células CaV y se cultivaron de acuerdo con las instrucciones proporcionan por la ATCC. Los medios se suplementaron con 10% de suero fetal bovino, 2% de glutamina y 1% de antibióticos (Invitrogen, Carlsbad, CA), y las células se mantuvieron en una atmósfera humidificada de 5% de CO2 a 37 ° C. Para los desmontables experimentos, las células fueron transfectadas transitoriamente con 200 pmol piscina siRNA para silenciar MET (MET siRNAs, Life Technologies, número de catálogo 103545, 103551, 103557, 103767 y 103769) o ARNip de control negativo, utilizando Lipofectamine 2000 (Invitrogen).
ensayo de proliferación
células siRNA-transfectadas se sembraron en placas de 24 pocillos a una densidad de 1 × 10
4 /pocillo. Las células fueron teñidas con violeta cristal y se contaron después de 7 días [22].
independiente del anclaje ensayo de crecimiento en agar blando
células siRNA-transfectadas (1 × 10
4) se sembraron en 3 ml de agar 0,35% en contenía FBS al medio de cultivo y superpuestos en 2 ml de agar al 0,7% en contenía FBS al medio de cultivo en placas de 6 pocillos. Imágenes de 3- (4, 5-dimethylthiaz-113 olyl-2) -2, bromuro de 5-difeniltetrazolio (MTT) teñidas colonias fueron capturadas bajo un microscopio Zeiss como se describe anteriormente [22]
ensayo de invasión.
Las células (3 × 10
5 células /ml), se contaron y se sembraron sobre insertos recubiertos con colágeno (Millipore Corp., Billerica, MA). Después de 16 h, las células que migraron a la superficie inferior de los insertos se tiñeron con solución de cristal violeta. El colorante se extrae de las células usando solución de ácido acético al 10%, y la absorbancia se leyó en un lector de microplacas FLUOstar Omega (BMG Labtech, Cary, NC) tal como se describe anteriormente [22].
Ensayo
apoptosis de la célula
células T24 transfectadas transitoriamente con siRNA se incubaron en medio con o sin cisplatino 10 M durante 8 horas. La viabilidad celular se midió en un ensayo de MTT como se describe anteriormente [23]. apoptosis de las células se cuantificó mediante la medición de la masa metabólicamente activa de las células tratadas después de la normalización frente a células no tratadas.
Wound-curación (cero in vitro) de ensayo
células T24 cultivadas en poli-L-lisina fueron co-transfectadas con el plásmido que codifica GFP. Posteriormente fueron sometidos a
in vitro
ensayo de cero con las imágenes capturadas a las 0 y 16 h después de la incubación usando el microscopio de fluorescencia. Células se ha movido desde el borde del cero hacia el centro del cero (marcados por líneas de puntos amarillos).
Western blot
células T24 transfectadas se recogieron rápidamente, flash congelado en nitrógeno líquido, y se almacena a -80 ° C. La proteína total se extrajo en tampón de lisis [1% Nonidet P-40, Tris 50 mM (pH 7,4), NaCl 10 mM, NaF 1 mM, MgCl2 5 mM, EDTA 0,1 mM, 1 mM fluoruro de fenilmetilsulfonilo, y el inhibidor completo de la proteasa de la tableta de cóctel (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania)] en las condiciones indicadas y se centrifuga a 12,500
g
durante 15 minutos. proteínas 25μg por cada condiciones fueron sometidos a correr en gel de SDS-PAGE, que fueron transferidos a membranas de nitrocelulosa para el análisis de transferencia de Western. Después de bloquear con 10% de BSA /PBST durante 1 h, las membranas se incubaron con anticuerpos específicos frente a
c-MET
, MMP2, MMP9 o β-actina. Las transferencias se visualizaron mediante quimioluminiscencia mejorada.
Análisis computacional
Para estudiar la asociación entre el
c-MET
genes de red y los parámetros clínicos en pacientes BCa, se examinaron los perfiles de expresión de estos genes en pacientes BCa utilizando microarrays de datos obtenidos previamente (número de acceso GSE13507). estaban disponibles para 165 pacientes de datos de microarrays. Los resultados clínicos, incluyendo la supervivencia libre de progresión (SLP), la supervivencia global (SG) y la supervivencia específica del cáncer (CSS) se obtuvieron de los registros médicos. La correlación entre la expresión génica y evolución de la enfermedad se examinó mediante análisis de regresión de riesgos proporcionales de Cox. De Kaplan-Meier (KM) análisis de curvas de supervivencia con un subconjunto de los perfiles de expresión génica de pacientes con "bajo" y "alto" expresión de cada gen se utilizaron para identificar los efectos de
c-MET
red de la expresión génica en BCa. La expresión 50
percentil (mediana) de gen se utilizó como el valor manguito-off. Se realizó la prueba de log-rank para evaluar la significación de las diferencias entre las dos curvas de supervivencia.
declaración ética
El estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la Universidad Nacional de Chungbuk. Todos los sujetos dieron su consentimiento informado por escrito. recogida y análisis de muestras fueron aprobados por el Consejo de la Universidad Nacional de Chungbuk de Revisión Institucional.
Resultados
Características clínicas y patológicas de los pacientes BCa
La edad media de los 165 pacientes en la cohorte del estudio fue de 65,2 ± 12,0 años, y el período de seguimiento medio fue de 48,4 meses. De los 165 pacientes, el 62,4% (103/165) tenían CVNMI y el 37,6% (62/165) tenían MIBC. La edad media de los 34 pacientes en el grupo de control normal fue de 54,0 ± 10,4 años. Las características basales de los pacientes y los controles se presentan en la Tabla 1.
Pérdida de
c-MET
suprime la proliferación celular y la invasión BCa y aumenta la sensibilidad a la apoptosis inducida por cisplatino
los estudios anteriores sugieren que la señalización a través del estroma HGF el
c-MET
vía aumenta la invasión y metástasis de las células BCa [6, 11, 13]; Por lo tanto, hemos tratado de determinar los efectos de los
c-MET
ha silenciamiento sobre la proliferación y la invasión, y de la respuesta apoptótica a cisplatino (un agente quimioterapéutico principales que se utilizan para tratar a pacientes BCA). Se encontró que las células BCa en la que
c-MET
fue derribado forman menos (y más pequeñas) colonias que las células de control negativo, lo que sugiere una reducción de la proliferación celular en agar blando (figura 1A). El ensayo de invasión de células mostró que las células que albergan BCa intacta
c-MET
eran más invasiva que aquellas en las que
c-MET
fue derribado.
c-MET
células T24 -silenced eran mucho menos invasiva que las células controles (células no transfectadas y células transfectadas con siRNA control) (Figura 1B). A continuación examinó la consecuencia de
c-MET
pérdida en la apoptosis de las células en un ensayo MTT.
c-MET
desmontables células mostraron aumento de la sensibilidad a la apoptosis inducida por cisplatino (Fig 1C).
Todos los experimentos se realizaron con tres
c-MET
líneas celulares desmontables (SI
c-MET
-1, Si
c-MET
-2, y si
c-MET
-3) transfectadas con diferentes
MET
siRNAs y líneas celulares de dos controles (Ctrl y NT). Ctrl, control; NT, no transfectadas * p & lt;.. 0,05
Pérdida de
c-MET
inhibe la migración celular de las células mediante la regulación negativa BCa MMP2 y MMP9
examinado la migración celular y la expresión de MMP2 y MMP9 en células CaV. Cicatrización de heridas de ensayo (también llamado como el ensayo in vitro cero) mostró que
c-MET
células migraron -knockdown menos eficiente que las células control (Figura 2A). También se encontró que la anulación de
c-MET
downregulated la expresión de MMP-2 y MMP9 en células BCA (Figura 2B).
(A) de curación de heridas de ensayo que muestra que desmontables de c-MET la migración de las células T24 inhibitsthe. (B) Pérdida de
c-MET
downregulated la expresión de metaloproteinasas de matriz (MMP) -2 y MMP-9. Todos los experimentos se realizaron con dos
c-MET
líneas celulares knockdown (SI
c-MET
-1 y si
c-MET
-2) transfectadas con diferentes siRNAs MET y dos líneas celulares de control (Ctrl y NT). Ctrl, control; NT, no transfectadas.
Expresión de
c-MET
se correlaciona con la SG en pacientes MIBC
Para responder a la pregunta de si
c-MET ¿Cuáles son los genes de red involucrados en la progresión BCa y agresividad, analizamos la expresión de mRNA de estos genes en un microarray de ADN y se compararon los resultados con características de la enfermedad, tales como el grado del tumor (G), el estadio del tumor (T, N y M ), el tamaño del tumor, recurrencia, progresión y CSS. a continuación, más comparaciones se realizaron después de los pacientes se clasificaron en grupos CVNMI y MIBC. Los resultados revelaron que
c-MET
la expresión de ARNm en pacientes MIBC correlacionaron significativamente con OS (p = 0,023; HR, 2.107; 95% intervalo de confianza (IC), 1,110 a 3,998) (Tabla 2). Estos datos fueron confirmados por análisis de la curva de supervivencia KM (Fig 3). BCa pacientes con altos niveles de
c-MET
expresión mostraron una peor supervivencia que aquellos con baja expresión (log-rank test, p = 0,020).
La expresión de
AXL
puede distinguir entre pacientes CVNMI y MIBC y controles sanos
A continuación examinó la asociación clínica entre conocida
c-MET
socios,
AXL Opiniones y
PDGFR
, y la progresión BCa. Los resultados mostraron que
AXL
expresión claramente correlacionada tanto con CVNMI y MIBC. Los tumores de vejiga (CVNMI y MIBC) mostraron 0.471 veces más alta expresión de
AXL
ARNm de tejidos de control.
AXL
la expresión de ARNm por CVNMI (p & lt; 0,0001, tasa de falso descubrimiento (FDR) & lt; 0,0001) y MIBC (p = 0,0001, FDR = 0,0006) fue significativamente mayor que en los controles normales (Tabla 3) .
AXL
la expresión del ARNm en el tejido CVNMI fue de aproximadamente 1.532 veces mayor que en el tejido MIBC (Tabla 3).
Expresión de
PDGFR isoformas
se altera significativamente en BCa y alta expresión de
PDGFRL
predice la supervivencia pobres
Para probar si
PDGFR
es útil como un clasificador de diagnóstico, se analizó la expresión de tres isoformas diferentes (es decir, ,
PDGFRA
,
PDGFRB
, y
PDGFRL
). Hemos encontrado que la expresión de
PDGFR
isoformas podría ser utilizado para distinguir muestras CVNMI y MIBC de los controles normales. La expresión de
PDGFRA
de ARNm de los tumores de vejiga claramente discriminados (CVNMI y MIBC) y tejido normal de control (p & lt; 0,0001, FDR & lt; 0,0001), con
PDGFRA
expresión en CVNMI y MIBC siendo aproximadamente 0.274 veces mayor que la de los controles. La expresión de
PDGFRB
también fue claramente diferente entre los tumores y tejidos normales (p = 0,0001, FDR & lt; 0,0001).
PDGFRB
expresión en CVNMI fue significativamente mayor que en los controles normales (p & lt; 0,0001), pero no se mostró ninguna diferencia significativa entre MIBC y los controles normales (p = 0,0698). Del mismo modo,
PDGFRL
se expresó diferencialmente en CVNMI y los controles normales, con un aumento moderado (0,804 veces) (p & lt; 0,0001) en el primero. Por lo tanto, es probable que
PDGFR
expresión se incrementa en todo tipo de BCa. Es de destacar que la expresión de
PDGFR
isoformas en los tejidos de los pacientes CVNMI era generalmente más alto que en los tejidos de los pacientes MIBC (Tabla 4).
A continuación, para entender la clínica relevancia del aumento de
PDGFR
expresión en BCa, hemos examinado la correlación clínica entre los
PDGFR
isoforma de expresión y la progresión de la enfermedad. Hemos encontrado que
PDGFRL
expresión se correlacionó significativamente con la progresión CVNMI (p = 0,046; HR, 3,675; IC del 95%, 1,024 a 13,188) (Tabla 5). análisis de supervivencia KM mostró que los pacientes CVNMI con alta expresión de
PDGFRL
mostraron PFS más pobres que aquellos con baja expresión de
PDGFRL gratis (log-rank test, p = 0,032) (figura 4).
los niveles de expresión de
c-MET
genes de la red se correlaciona significativamente con la progresión de la enfermedad en pacientes con OS CVNMI y en MIBC pacientes
Para identificar la clínica importancia de
c-MET
genes de la red, hemos examinado la asociación entre el
c-MET
la expresión génica de red (
c-MET
,
AXL
, y
PDGFR
) y el pronóstico BCa. La expresión de
c-MET
genes de la red se basa en una evaluación de la puntuación de riesgo para cada paciente se calcula mediante la combinación de los niveles de expresión de los tres genes. Hemos encontrado que la expresión de
c-MET
genes de red significativamente correlacionado con la progresión de la enfermedad en pacientes CVNMI (p = 0,023; HR, 4.386; IC del 95%, 1,221 a 15,757) y la SG en pacientes con MIBC (p = 0,038; HR, 1,976; IC del 95%, 1,039-3,759) (Tabla 6). análisis de supervivencia KM mostró que los pacientes CVNMI con alta expresión de
c-MET
genes mostraron red PFS más pobres (log-rank test, p = 0,013) que aquellos con baja expresión. Del mismo modo, los pacientes MIBC (log-rank test, p = 0,034) con alta expresión de los genes de la red de c-Met mostraron SG más baja que aquellos con baja expresión (Figura 5).
Discusión
los resultados del presente estudio sugieren que la pérdida de
c-MET ¿Qué hace que las células BCa menos invasiva y más susceptibles a cisplatino. Además, el patrón de expresión de
c-MET
genes de red permite la discriminación de los tejidos BCa de tejidos de control normales y parece predecir pobres resultados clínicos en una población de Corea del paciente.
aberrante
c-MET
expresión se produce en diversos tipos de cáncer y se asocia con un mal pronóstico [24]. La sobreexpresión de
c-MET Hoteles en BCa se asocia con un mal sistema operativo y libre de metástasis la supervivencia [5, 7, 10]. Yeh et al. informaron que la sobreexpresión de
c-MET
se asocia positivamente con invasión muscular y pobre supervivencia a largo plazo (p & lt; 0,001) [11]. En informes anteriores sugieren que
c-MET
expresión está estrechamente relacionada tanto con la agresividad del tumor y la supervivencia de los pacientes [5, 7, 10, 11, 18]. Los resultados presentados en el presente documento están de acuerdo con los de estudios previos. Se encontró que la sobreexpresión de
c-MET
se asoció significativamente con la supervivencia de los pobres, en particular en pacientes OS MIBC. Esto sugiere que la inhibición de
c-MET
expresión puede desempeñar un papel importante en la prevención de la progresión BCa y mejorar la supervivencia de los pacientes.
Análisis in vitro mostraron que
c- MET
caída suprime la proliferación celular, la invasión y la migración, y la reducción de la expresión de MMP-2 y MMP9. Esto fue acompañado por aumento de la sensibilidad a la apoptosis inducida por cisplatino. MMP2 y MMP9 se degradan las proteínas de la matriz extracelular, facilitando así la invasión de células y la metástasis [25, 26]. Estos resultados indican que
es probable que reduzca la invasión y la metástasis del cáncer y mejorar la supervivencia de pacientes con cáncer de c-MET
inhibición. Por lo tanto, una comprensión más precisa de la importancia de la
c-MET
inhibición es necesaria si hemos de desarrollar inhibidores que se dirigen a
c-MET
en diversos tumores. Recientemente, varios
c-MET
drogas -targeting fueron probados en ensayos clínicos, y todos muestran actividad clínica prometedora con efectos secundarios aceptables [27]. Por ejemplo, tivantinib (también llamado ARQ197) y un inhibidor dual de
c-MET
/VEGFR2 (foretinib) fueron estudiados en la fase I a II de ensayos clínicos en pacientes con carcinoma papilar de células renales y carcinoma hepatocelular avanzado, respectivamente [24]. Un nuevo inhibidor de multicinasa de
MET
,
VERFR1
,
AXL
,
TIE2
,
KIT
,
FLT3
, y
RET
, llamado cabozantinib (también conocido como XL184), inhibe el crecimiento, la metástasis y la angiogénesis en el cáncer de páncreas y glioblastoma, y reduce la resistencia a la gemcitabina. En particular, los ensayos clínicos, en el cáncer de próstata metastásico resistente a la castración (mCRPC) de los pacientes informaron de un efecto prometedor en PFS, metástasis ósea, y el dolor [28]. Sin embargo, los tumores que muestran inicialmente una buena respuesta a los inhibidores de MET pueden desarrollar resistencia más tarde [24]. La resistencia adquirida a los inhibidores de MET se desarrolla a través de múltiples mecanismos, incluyendo alteraciones genéticas (por ejemplo, secundaria
EGFR T790M
mutación), la amplificación MET, y se activa vías de señalización [29]. Por lo tanto, podrían ser necesarias para prevenir la resistencia a fármacos y para lograr resultados beneficiosos terapia de combinación múltiple de destino o la terapia de co-orientación [24].
Es importante examinar la diafonía entre los
c-MET
y otros RTK porque los socios de diafonía de
c-MET
biomarcadores pueden ser importantes para la terapia de co-orientación y ayudar a prevenir la resistencia a los inhibidores de MET individuales.
RON
,
AXL
y
PDGFR
tener una diafonía con
c-MET
. La sobreexpresión de
AXL
y
PDGFR
se asocia con la agresividad y el pronóstico de una serie de tumores [14-19]. Los resultados presentados en este documento son consistentes con estudios previos en este sentido; Sin embargo, hubo algunas diferencias. En contraste con el estudio de embargo y otros, que evaluó la asociación entre el
PDGFRA
y la progresión BCa, se examinaron los tres
PDGFR isoformas
:.
PDGFRA
,
PDGFRB
, y
PDGFRL
. Sin embargo, sólo
PDGFRL
se asoció con la progresión CVNMI. La mayoría de los estudios que trataban de identificar una correlación entre la progresión BCa y
PDGFR
examinado el
PDGFRA Opiniones y
PDGFRB
isoformas. Por lo tanto, el presente estudio es el primero en identificar una asociación significativa entre el
PDGFRL
expresión y pronóstico BCa. Además, Sin embargo, et al. sólo examinó el papel de los
AXL
y
PDGFR Hoteles en casos avanzados [11]. Aquí, mostramos que la expresión de
AXL
y
PDGFR
distinguida CVNMI y MIBC de los controles sanos. En particular, la expresión de estos dos genes fue mayor en los pacientes que en los pacientes CVNMI MIBC. Por lo tanto,
AXL
y
PDGFRL
puede ser más específico para CVNMI de MIBC. Se necesita una gran validación para aclarar las funciones y efectos de
PDGFR
isoformas de BCA (CVNMI y MIBC) pronóstico.
También encontramos que
c-MET
gen de red (
c-MET
,
AXL
, y
PDGFR
) expresión está estrechamente asociada con la progresión de la enfermedad en pacientes CVNMI y con una pobre supervivencia (especialmente OS) en pacientes MIBC. Estos resultados sugieren que la inhibición de la
c-MET
vía puede prevenir la progresión de la enfermedad en pacientes CVNMI y mejorar la supervivencia de pacientes MIBC. Además, múltiples terapias de combinación o co-focalización podrían ser necesarias para prevenir la resistencia a los medicamentos adquiridos. Yeh et al. demostró que el 21,5% (14/65) de los pacientes co-expresión de
c-MET
/
AXL
/
PDGFR
mostró una pobre supervivencia a largo plazo (p = 0,015) [11]. Sin embargo, sólo se identificaron una correlación clínica entre
c-MET
genes de red en pacientes con BCa localmente avanzado y metastásico. Aquí, hemos identificado una correlación clínica en pacientes con CVNMI o MIBC. Por lo tanto, el presente estudio sugiere que la
c-MET
red es un biomarcador prometedor y diana para fármacos co-focalización; esto debe ser probado en ensayos clínicos que involucran tanto a los pacientes CVNMI y MIBC.
En su conjunto, estos datos sugieren que (1)
c-MET
/
AXL
/
niveles PDGFR
se pueden utilizar para distinguir a los pacientes de cáncer de los controles normales y para distinguir CVNMI de MIBC; y (2) la expresión de
c-MET
genes red está asociado de forma significativa con peores tasas de supervivencia para los pacientes BCa
.
La identificación de las redes de señalización implicadas pueden proporcionar información que avanzar en nuestra comprensión de la mecanismos subyacentes a la biología del tumor y ayuda a predecir el potencial de resistencia a los medicamentos [30]. Creemos que
c-MET
la expresión del gen de la red es un marcador pronóstico novedoso para predecir qué pacientes BCa tienen un mayor riesgo de desarrollar enfermedad agresiva. Estos genes podrían ser un marcador útil para la terapia de co-orientación, y se espera que juegue un papel importante en la mejora tanto de la respuesta al tratamiento y la supervivencia de los pacientes BCa.
Apoyo a la Información sobre Table S1. Conjunto de datos con la recurrencia, progresión y 5 genes en pacientes CVNMI
doi:. 10.1371 /journal.pone.0134552.s001 gratis (PDF) sobre Table S2. Conjunto de datos con la progresión, la supervivencia global, la supervivencia específica del cáncer, y 5 genes en pacientes MIBC
doi:. 10.1371 /journal.pone.0134552.s002 gratis (PDF) sobre Table S3. Conjunto de datos con la recurrencia, progresión y
C-MET
genes de red en pacientes CVNMI
doi: 10.1371. /Journal.pone.0134552.s003 gratis (PDF) sobre Table S4. Del conjunto de datos con la progresión, la supervivencia global, la supervivencia específica del cáncer y
C-MET
genes de red en pacientes MIBC
doi: 10.1371. /Journal.pone.0134552.s004 gratis (PDF)
Reconocimientos
Este trabajo fue apoyado por una Fundación Nacional de Investigación de Corea (NRF) subvención financiado por el gobierno de Corea (MSIP) (núm NRF-2014R1A2A1A09006983) y por el Programa de Investigación de Ciencias básicas a través de la Nacional Fundación de Investigación de Corea (NRF), financiado por el Ministerio de Educación, Ciencia y Tecnología (2012R1A1A4A01008753). Además, este trabajo fue apoyado en parte por el R01DK100974; U01 DK103260; U24 DK097154; NIH NCATS UCLA CTSI UL1TR000124; un Fondo Descubrimiento Steven Spielberg en el premio de desarrollo del cáncer de próstata Carrera del Investigador; IMAGINE un Premio Programa NO IC Investigación (JK). J. K.