Extracto
CA125 como un biomarcador de cáncer de ovario es ineficaz para la población general. El objetivo de este estudio fue evaluar multiplexada inmunoensayo basado en perlas de varios biomarcadores asociados con el cáncer de ovario, tales como transtiretina y apolipoproteína A1, junto con CA125, para mejorar la identificación y evaluación de pronóstico de cáncer de ovario. Se midió los niveles séricos de CA125, transtiretina y apolipoproteína A1 a partir del suero de 61 individuos sanos, 84 pacientes con enfermedad de ovario benigno, y 118 pacientes con cáncer de ovario usando un sistema de ensayo líquido multiplex, Luminex 100. Los resultados se analizaron a continuación de acuerdo de salud y /o benigna frente a los sujetos con cáncer de ovario. Cuando CA125 se combinó con los otros biomarcadores, la sensibilidad y especificidad global mejoraron significativamente en la curva ROC, que mostró 95% y 97% de sensibilidad y especificidad, respectivamente. Al 95% de especificidad para todas las etapas de la sensibilidad aumentó a 95,5% en comparación con 67% para el CA125 solo. Para la etapa I + II, la sensibilidad aumentó de 30% para CA125 sola a 93.9%. Para la etapa III + IV, los valores correspondientes fueron 96,5% y 91,6%, respectivamente. Además, los tres biomarcadores eran suficientes para obtener la máxima separación entre no oncológico (grupo sano más benigno) y la etapa I + II o todas las etapas (I-IV) de la enfermedad. La nueva combinación de transtiretina y apolipoproteína A1 con CA125 mejora tanto la sensibilidad como la especificidad del diagnóstico de cáncer de ovario en comparación con las de los biomarcadores individuales. Estos hallazgos sugieren que el beneficio de la combinación de estos marcadores para el diagnóstico de cáncer de ovario
Cita:. Inmunoensayos Kim YW, basado en perlas Bae SM, Lim H, Kim YJ, Ahn WS (2012) Desarrollo de multiplexado para la detección temprana del cáncer de ovario estadio utilizando una combinación de biomarcadores séricos. PLoS ONE 7 (9): e44960. doi: 10.1371 /journal.pone.0044960
Editor: José Luis Pérez-Gracia, Clínica Universidad de Navarra, España |
Recibido: 11 de marzo de 2012; Aceptado: August 10, 2012; Publicado: 10 Septiembre 2012
Copyright: © Kim et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. El estudio fue apoyado por la Fundación Nacional de Investigación de Corea (NRF), Seúl, República de Corea (Grant#5-2011-A0154-00119). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de ovario tiene una relación más alta de mortalidad por caso que cualquier otra neoplasia ginecológica, ya que tiende a ser complejo de síntomas y mal diagnosticado que otras enfermedades, que se traduce en la gran mayoría de pacientes con cáncer de ovario de ser diagnosticado en etapas metastásico avanzado (estadio III /IV) [1] - [3]. La tasa de supervivencia a los 5 años de los pacientes con cáncer en etapa temprana oscila entre 50-95%, pero sólo aproximadamente el 20% de todos los casos reportados se detecta en las primeras etapas; la tasa de supervivencia a 5 años es de aproximadamente el 11% cuando se detecta en los estadios avanzados (III /IV) [4] - [6]. Por lo tanto, muchos esfuerzos se han centrado en la identificación de biomarcadores de diagnóstico para la detección temprana de cáncer de ovario [7], [8]. Un método de detección robusta base de perfiles moleculares para el cáncer de ovario aún no se ha establecido ya que la enfermedad exhibe cambios metabólicos debido a la presencia del tumor y posibles variaciones genéticas que afectan química de la sangre durante el curso de la progresión del tumor [9].
el 125 (CA125) Estudio del antígeno de cáncer es el biomarcador clínico más utilizado para el cáncer de ovario [10]. Sin embargo, CA125 ha demostrado ser un biomarcador de diagnóstico tumor pobre porque carece de especificidad y sensibilidad para el cáncer de ovario temprano (sólo 23% en la etapa I el cáncer de ovario, en contraste con más de 80% en el cáncer de ovario avanzado) [11]. Se eleva por encima de los niveles de referencia en sólo el 50% de enfermedad en estadio temprano clínicamente detectable, y no es elevado con poca frecuencia en pacientes con enfermedades benignas de ovario [12], [13]. Además, los niveles de CA125 son falsamente elevados en las mujeres embarazadas y mujeres con patologías detectables intraperitoneal [14] - [16]. Por lo tanto, se han hecho intentos de combinar o sustituir CA125 con otros marcadores, y los investigadores han evaluado la capacidad de algunos marcadores establecidos para mejorar la identificación y el pronóstico de cáncer de ovario [12], [17], [18], lo que indica que la adición de uno o varios marcadores a CA125 mejoraría el rendimiento diagnóstico y pronóstico si la sensibilidad fue mejorada sin pérdida de especificidad. Sin embargo, debido a que la medición de la concentración sérica de cada biomarcador putativo con ELISA individuales requiere un considerable tiempo, costo y volúmenes de muestra, nuevos métodos o tecnologías para la multiplexación debe ser desarrollado.
El sistema basado en perlas Luminex es una automatizado plataforma de ensayo de alto rendimiento que proporciona la multiplexación en una fase de solución, lo que resulta en que sea particularmente flexible y no destructivo para el análisis de proteínas. El uso de anticuerpos de detección marcadas con biotina y estreptavidina-R-ficoeritrina permite la cuantificación de reacciones antígeno-anticuerpo que se producen en la superficie de las microesferas a través de la medición de la intensidad de fluorescencia relativa. Por lo tanto, el sistema es capaz de medir hasta 100 analitos simultáneamente en un volumen pequeño de muestra (menos de 50 l), lo que indica métodos multivariantes que utilizan un panel de biomarcadores para predecir puntos finales clínicos específicos de interés en.
este estudio, se intentó medir tres biomarcadores séricos de cáncer de ovario, CA125, transtiretina y apolipoproteína A1, usando un sistema de inmunoensayo basado en perlas multiplex, y se evaluó el efecto combinado de los tres biomarcadores para el diagnóstico de cáncer de ovario en comparación con los de los marcadores individuales solos.
Materiales y Métodos
declaración de Ética
Todos los pacientes que participaron en el estudio habían firmado una declaración de consentimiento que indica que las muestras de los pacientes pueden ser utilizados para fines científicos intenciones. Las muestras se obtuvieron de los pacientes en el Departamento de Obstetricia y Ginecología en concordancia con los procedimientos aprobados por la Junta de Revisión Institucional de la Universidad Católica de Corea (07BR212).
Pacientes y muestras
A todos los pacientes se inscribieron en el hospital de Santa María de la Escuela de Medicina Católica durante el periodo desde enero de 2001 a julio de 2007, de acuerdo con los procedimientos aprobados por la Junta de Revisión Institucional de la Universidad Católica de Corea. Este estudio se basó en el análisis de suero tomadas de 118 pacientes con cáncer de ovario, 84 con enfermedad benigna, y 61 mujeres sanas. muestras de suero de pacientes se recogieron antes de la cirugía, y después se incubaron durante 30 min a temperatura ambiente, seguido por centrifugación a 3000 rpm para la separación. El suero se almacenó a -70 ° C hasta que se usaron en los experimentos; congelación y descongelación frecuente se evitaron. Las etapas y grados de los tumores de los pacientes con cáncer de ovario fueron asignados de acuerdo con las directrices proporcionadas por la Federación Internacional de Ginecología y Obstetricia (FIGO), y los grupos inscritos fueron divididos de acuerdo a la edad.
La conjugación de primaria anticuerpos con microesferas
tres tipos diferentes de microesferas (1 × 10
6 microesferas para cada anticuerpo, Biosource, Camarillo, CA) se prepararon en cada tubo, y luego se resuspendieron adecuadamente por agitación y sonicación, seguido por centrifugación durante 2 min a 8000 rpm. Los sobrenadantes se descartaron, y los sedimentos se guardan y se lavaron una vez con solución salina 100 l. Ochenta l de 100 mM de fosfato de sodio monobásico (pH 6,2, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), 10 l de 50 mM de sulfo-NHS (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) y 10 l de EDC 50 mM (Pierce Biotechnology) se añadieron, a continuación, la solución se incubó durante 20 min a temperatura ambiente. Después de la centrifugación (8000 rpm, 2 min), los sedimentos se guardan y se lavaron dos veces con 250 l de MES 50 mM (pH 5,0, Sigma-Aldrich). Después de la eliminación del sobrenadante, se añadieron 500 l de MES a cada tubo incluyendo diferentes microesferas. Después de la adición de 0,5 g de cada anticuerpo [anti-CA125 (Fitzgerald Industries International, Inc., Concord, MA), anti-transtiretina (Abcam), y anti-apolipoproteína A1 (Fizgerald Industries International, Inc.)] en cada tubo , los tubos se incubaron durante 2 h en un agitador, que estaba protegido de la luz. Después de la incubación, las microesferas unido al anticuerpo se sedimentaron por centrifugación durante 2 min a 8000 rpm, y luego se añadieron 500 l de tampón de BSA 1%. Después de la incubación adicional durante 30 min a temperatura ambiente, las microesferas se lavaron dos veces con tampón de BSA 1% y luego se almacenaron a 4 ° C bajo protección de la luz.
biotinas de etiquetado sobre los anticuerpos secundarios
para biotinas de etiquetado sobre los anticuerpos secundarios, se utilizó un kit de marcaje de biotina (Alpha Diagnostics International Inc., San Antonio, TX) según el protocolo del fabricante. Brevemente, se añadió biotina en una proporción de 1:10 (biotina: anticuerpo). Después de la incubación durante 1 hora a temperatura ambiente protegido de la luz, la diálisis se realizó con solución salina tamponada con fosfato (PBS).
Análisis de muestras por sistema de matriz de líquido múltiplex, Luminex 100
El suero de individuos sanos y pacientes con cáncer de ovario se diluyeron a 1:100 en un tampón que incluye 1% de BSA (Sigma-Aldrich) y 0,05% de Tween 20 (Sigma-Aldrich). Cincuenta l de cada suero diluido se sembraron en un 1,2 micras placa de filtro (96 también), al que se añadieron 2.500 gotas de cada microesfera unido al anticuerpo en 50 l. Después de la incubación durante 2 h a temperatura ambiente bajo la protección de la luz, se lavaron dos veces con tampón PBS incluyendo 0,05% de Tween 20. El cien l de 0,4 mg de estreptavidina-R-ficoeritrina (Sigma-Aldrich) se añadió a cada pocillo, y las placas se incubaron a continuación durante 30 min, seguido de dos lavados con PBS que contenía 0,05% de Tween 20. la identificación de microesferas unido al anticuerpo y la proyección de microesferas con destino a antígeno-anticuerpo se llevaron a cabo mediante el uso de Luminex 100 (Luminex Corp., Houston, TX) según el protocolo del fabricante. Los rangos de las concentraciones de cada antígeno para las curvas estándar fueron 10-250 U /ml para CA125, 0,1-100 mg /ml para la transtiretina, y 0,5-50 ng /ml para la apolipoproteína A1. Los datos se analizaron mediante el programa BeadView (Upstate, Charlottesville, VA).
El análisis estadístico
Se utilizó el test de análisis de varianza (ANOVA) para evaluar la significación estadística de las diferencias entre los sanos individuos y pacientes con cáncer de ovario. SigmaPlot (v12.0, Systat, Chicago, IL) y SAS (v9.1, SAS Institute, Cary, NC, EE.UU.) se utilizó para el análisis estadístico para determinar la sensibilidad, la especificidad y el operador receptor característico (ROC) ( OBSERVACIÓN en S1 archivo).
criterios OBSERVACIÓN
Una descripción del cumplimiento de las recomendaciones de Información para el tumor de estudios de pronóstico de marcador (Observación) [19] criterios para los estudios de biomarcadores se proporciona en S1 del archivo.
resultados
Los niveles séricos de marcadores tumorales de ovario en control sano, benigna, cáncer de ovario y grupos
Las características de los pacientes y los niveles séricos de marcadores de cáncer de ovario se muestran en la Tabla 1 . la concentración de los biomarcadores séricos, tales como CA125, transtiretina y apolipoproteína A1 en el suero de individuos sanos, pacientes benignos, y los pacientes de cáncer de ovario se midió simultáneamente por un sistema de matriz de líquido multiplex usando microperlas recubiertas con anticuerpos de captura y anticuerpos marcados con biotina contra cada uno de los marcadores tumorales y estreptavidina-R-ficoeritrina. Los niveles en suero de CA125 fue significativamente mayor en los pacientes con cáncer de ovario que las que en individuos sanos y pacientes con buen pronóstico, siendo los niveles de apolipoproteína A1 y transtiretina fueron menores en los pacientes con cáncer de ovario (fig. 1A). En primer lugar, se compararon los niveles séricos de estos tres marcadores tumorales de acuerdo con las etapas del tumor (fig. 1B). Los niveles en suero de CA125 se elevaron gradualmente con el estadio del tumor. Además, tanto la transtiretina y apolipoproteína A1 se incrementaron significativamente en los individuos sanos. A continuación, se intentó comparar los niveles séricos de tres marcadores tumorales de acuerdo con los tipos histológicos de cáncer de ovario (Fig. 1C). El nivel en suero de CA125 era la más alta de tipo seroso en comparación con los de los otros tipos.
(A) los controles sanos, la enfermedad de ovario benignos y estadios tumorales pacientes con cáncer ovárico (B) en pacientes con cáncer de ovario (C) diferentes subtipos histológicos en pacientes con cáncer de ovario. valor P sobre un grupo indica la significación estadística de las diferencias entre cada grupo y los controles sanos. Cada ovario sujetos con cáncer se comparó con los controles sanos. N, controles sanos; BE, enfermedad ovárica benigna; C, de células claras; E, endometrioide; G, de la granulosa celular; M, mucinoso; S, serosa; O, de otro.
Comparación de la sensibilidad y especificidad entre tres marcadores tumorales por sí solos y la combinación de tres marcadores para el diagnóstico de cáncer de ovario
A continuación, se comparó la sensibilidad y especificidad entre cada marcador solo y los tres marcadores en combinación con el fin de diagnosticar el cáncer de ovario usando el análisis de característica de funcionamiento del receptor (ROC). En este estudio, hemos utilizado los valores de corte de 35 U /ml, 100 ng /ml y 500 ng /ml para CA125, transtiretina y apolipoproteína A1, respectivamente, para una mejor exactitud diagnóstica de las muestras analizadas aquí. Mediante el uso de estos valores de corte, hemos sido capaces de reducir al mínimo las tasas de resultados falsos positivos y falsos negativos en la diferenciación de los pacientes benignos de sujetos con cáncer de ovario. Las sensibilidades y especificidades para discriminar entre cáncer de ovario y enfermedad benigna se muestran en la Figura 2. La sensibilidad y especificidad de los marcadores individuales con CA125, transtiretina y apolipoproteína A1 fueron 77,4% y 70,8%, 69,7% y 63,6%, y 60,2% y 56,9%, respectivamente (Fig. 2A). La sensibilidad y especificidad de los marcadores individuales para las primeras etapas (estadios I y II) fueron 51,6% y 51,2%, 61,2% y 59,2%, y 51,3% y 54,6%, respectivamente (Fig. 2B). Y la sensibilidad y especificidad de los marcadores individuales para la fase final del (estadios III y IV) fueron 93,4% y 84,3%, 74,9% y 68,2%, y 58,4% y 55,1%, respectivamente (Fig. 2C). Por simple vista de las curvas, el poder discriminatorio en la Fig. 2A es modesta aún mejor para CA125, en la Fig. 2B, muy débil para todos los biomarcadores con cierta preferencia de TTR, y en la Fig. 2C, claramente más fuerte para CA125 seguido de TTR e inútil para ApoA1.
Las curvas mostradas fueron cuantificados obtenida por transformación de los datos en bruto por SigmaPlot 12.0 versión de software y la sensibilidad /especificidad valores se predice a partir del área bajo la curva y los datos calculados. curvas ROC para CA125, transtiretina y apolipoproteína A1 solo: (A) pacientes benignos frente a los pacientes con cáncer de ovario; (B) los pacientes benignos frente a los pacientes en estadios I a II cáncer de ovario; (C) pacientes benignos frente a los pacientes con estadios III de cáncer de ovario IV.
Cuando CA125 se combinó con los biomarcadores (transtiretina y apolipoproteína A1), la sensibilidad y la especificidad para discriminar entre el cáncer de ovario y saludable individuos mejoraron significativamente en la curva de ROC (Fig. 3A-C). Los tres biomarcadores (CA125, TTR, y Apo-A1) pacientes significativamente distinguidos con cáncer de ovario en etapa temprana de individuos sanos. Al 95% de especificidad para todas las etapas de la sensibilidad aumentó a 95,5% en comparación con 67% para el CA125 solo. Para la etapa I + II aumentó la sensibilidad a 93,9% a partir de 30% para CA125 sola. Para la etapa III + IV eran los valores correspondientes respectivamente 96,5% y 91,6%, lo que sugiere que el panel de tres biomarcador clasifica los cánceres en etapa temprana con una sensibilidad del 94% a 95% de especificidad, que fue significativamente mayor que CA125 sola. La sensibilidad y la especificidad para discriminar entre cáncer de ovario y la enfermedad de ovario benigno se mejoró ligeramente en la etapa I + II solamente grupo de pacientes, que mostró 61,6% y 58% de sensibilidad y especificidad, respectivamente (Fig. 3D-F). En la figura, es evidente que la diferencia entre el CA125 y el panel para sano vs. total y la etapa I + II cáncer de ovario es altamente significativa (P & lt; 0,0001), pero insignificante para vs. sano etapas del cáncer de III + IV (P = 0,043); en contraste para la diferenciación más importante entre benigna vs. cáncer de ovario, la diferencia entre CA125 y el panel que falta para benigna vs. total y la etapa I + II de cáncer de ovario y bastante mejor para benigna frente a estadio de cáncer de ovario III + IV (P = 0,045). A medida que la discriminación más importante es generalmente postula entre un grupo maligno y su grupo de enfermedad benigna de manera diferencial correspondiente, se hace evidente que la diferencia entre CA125 y el panel es ligeramente mejor para benigna vs etapas III + IV.
Las curvas mostrados han sido cuantificada obtenida por transformación de los datos en bruto por SAS software versión 9.1 y la sensibilidad /especificidad valores se predijo desde el área bajo las curvas y los datos calculados. curvas ROC para CA125 sola y un panel de tres biomarcadores: (a) los controles sanos frente a pacientes con cáncer de ovario. La diferencia global en el AUC entre el panel de tres biomarcadores y CA125 sola fue estadísticamente significativa (P & lt; 0,0001); (B) los controles sanos frente a pacientes con estadios I a II de cáncer de ovario (P & lt; 0,0001); (C) los controles sanos frente a pacientes con estadios III para el cáncer de ovario IV (p = 0,043); (D) los pacientes benignos frente a los pacientes con cáncer de ovario. (P = 0,49); (E) pacientes benignos frente a los pacientes en estadios I a II cáncer de ovario (P = 0,19); (F) pacientes benignos frente a los pacientes con estadios III de cáncer de ovario IV (P = 0,045).
Los tres biomarcadores fueron suficientes para lograr la máxima separación entre grupo y la etapa más saludable benigna I + II o todas las etapas (I-IV) (Fig. 4). Los grupos combinados de pacientes sanos y benignos fueron probados por el análisis ROC frente al total y la etapa I + I o III + IV grupos de cáncer de ovario mediante la estimación de una mezcla entre la Fig. 3A-C y 3D-F resultados. De hecho, las pruebas ABC de diferencias significativas entre CA125 y el panel de tres biomarcador no muestra diferencias frente a los estadios III + IV y claras discrepancias modestas pero significativas frente al total (P = 0,012) y las fases I y II del cáncer de ovario (P = 0,014) .
curvas ROC para CA125 sola y un panel de tres biomarcadores: (A) los controles sanos, más benignos pacientes frente a los pacientes con cáncer de ovario. (P = 0,012); (B) los controles sanos, más benignos pacientes frente a los pacientes con estadios I a II cáncer de ovario (P = 0,014); (C) los controles sanos, más benignos pacientes frente a los pacientes con estadios III de cáncer de ovario IV (P = 0,52).
Validación
Para confirmar si esta combinación es la más alta precisión de multivariante algoritmos de clasificación, se utilizan paneles de dos biomarcadores (CA125 más transtiretina, CA125, más apolipoproteína A1, transtiretina y además apolipoproteína A1). La sensibilidad y la especificidad de estos paneles de dos biomarcadores no se mejoraron para discriminar entre el cáncer de ovario y de individuos sanos, en comparación con el panel de tres biomarcadores en la curva de ROC (Fig. 5A-C), lo que sugiere que el panel de tres biomarcadores mostró la más alta precisión, mientras que los paneles de dos biomarcadores mostraron tendencias similares con el panel de tres biomarcadores entre un grupo maligno y su grupo de enfermedad benigna (Fig. 5D-F). Y el panel de tres biomarcadores fue suficiente para obtener la máxima separación entre grupo sano, más benigna y la etapa I + II o todas las etapas (I-IV) (Figura S1).
curvas ROC para el CA125 solo, el dos y el tres paneles -biomarker: (a) los controles sanos frente a pacientes con cáncer de ovario; (B) los controles sanos frente a pacientes con estadios I a II cáncer de ovario; (C) los controles sanos frente a pacientes con estadios III a IV cáncer de ovario; (D) los pacientes benignos frente a los pacientes con cáncer de ovario; (E) pacientes benignos frente a los pacientes en estadios I a II cáncer de ovario; (F) pacientes benignos frente a los pacientes con estadios III de cáncer de ovario IV.
A partir de una población de pacientes con cáncer de ovario, se utilizó un muestreo aleatorio estratificado simple sin reemplazo. Para la validación, 50% de estos pacientes eran para ser usado como un conjunto de entrenamiento para establecer el beneficio de la combinación de estos marcadores para el diagnóstico de cáncer de ovario. El resto de los pacientes se desempeñó como el conjunto de validación para validar de manera independiente la utilidad de este biomarcador. Los conjuntos de entrenamiento y validación fueron muy similares con respecto a las características del paciente. En el conjunto de entrenamiento, la sensibilidad y especificidad global del panel de tres biomarcadores mostraron la más alta precisión, mientras que los paneles de dos biomarcadores mostraron tendencias menos sensible que el panel de tres biomarcadores en la curva ROC (Figura S2, S3, S4). En el conjunto de validación, el panel de tres biomarcadores mostró la más alta precisión (Figura S5, S6, S7).
Para ver si esta combinación da la potencia más alta clasificación en los algoritmos de clasificación multivariante, hemos utilizado cuatro biomarcadores del panel (CA125 más transtiretina más apolipoproteína A1, más hemoglobina). La sensibilidad y la especificidad de estas panel de cuatro biomarcador no mejoraron para discriminar entre el cáncer de ovario y de individuos sanos (y /o de grupo benigna) en comparación con el panel de tres biomarcadores en la curva ROC (Figura S8-S9), lo que sugiere que el panel de tres biomarcador es suficiente para obtener la máxima separación entre (grupo y /o benigno) saludable y la etapa I + II o todas las etapas (I-IV). En su conjunto, el panel de tres biomarcadores podría ser un poderoso biomarcador para el diagnóstico de cáncer de ovario.
Discusión
Convencionales herramientas de detección de cáncer de ovario son ineficaces para la población general [3]. El marcador más estudiado para el cáncer de ovario, CA125, es una proteína que se encuentra en los niveles en la mayoría de las células de cáncer de ovario que se elevan en comparación con las células normales y un marcador potencialmente útil para el diagnóstico y el pronóstico después del tratamiento de cáncer de ovario, pero CA125 se expresa en Sólo el 50-60% de los pacientes con enfermedad en estadio temprano, y también es elevada frecuencia en mujeres con enfermedades benignas de ovario [20] - [22]. Debido a los puntos vulnerables de CA125 como un biomarcador de cáncer de ovario [23], la combinación de uno o más otros marcadores tumorales con CA125 podría mejorar la sensibilidad y especificidad del diagnóstico de cáncer de ovario o la detección más temprana de tales cánceres [9]. Por lo tanto, considerables esfuerzos han sido desplegados para conseguir un mínimo valor predictivo positivo (VPP) del 10% y una especificidad de más del 99% como una prueba de detección del cáncer de ovario efectiva [24], [25]. En 2009, una prueba clínica (OVA1) fue aprobado por la FDA. La prueba se basa en la estimación de los niveles de cinco proteínas (transtiretina, apolipoproteína A1, transferrina, microglobulina beta-2, y el cáncer de antígeno 125) en la sangre, que después se combinan en una única puntuación, que van desde 0 a 10, usando un algoritmo único (OvaCalc). Aunque no existen estudios publicados para OVA1 [26], se informó de que el rendimiento de los algoritmos OvaCalc mostró una sensibilidad del 92,5%, 43,0% de especificidad, 41,9% de valor predictivo positivo y el 92,9% de valor predictivo negativo. Y entre los 96 pacientes diagnosticados con cáncer de ovario epitelial, OvaCalc designa todos menos 1 como de alto riesgo. Sin embargo, no se informó el número de mujeres con condiciones benignas de ovario fueron categorizados de forma incorrecta como un alto riesgo de malignidad, pero este número se presume que es considerable. Además de la actualidad pruebas suficientes (por ejemplo, la evidencia publicada insuficiente), la prueba no está aprobado como un cribado de cáncer de ovario en estadio temprano y puede conducir a una mayor cantidad de resultados falsos positivos como herramienta de cribado [26]. Por lo tanto se necesitan más estudios para mejorar la especificidad y la sensibilidad de los marcadores biológicos combinados en ambos ensayos clínicos retrospectivos y prospectivos como una herramienta de detección. Algunos de los resultados de las pruebas se han publicado [23]. Sin embargo, hasta la fecha ninguna prueba de detección ha alcanzado características de funcionamiento adecuadas para ser utilizadas como una herramienta valiosa para la detección de cáncer de ovario en estadio temprano. En este estudio, evaluamos una nueva combinación de tres biomarcadores conocidos de cáncer de ovario, CA125, transtiretina y apolipoproteína A1, en un intento de mejorar la sensibilidad de CA125, mostrando que la transtiretina y apolipoproteína A1 se aumentaron la sensibilidad y especificidad de la CA125 en el cáncer de ovario en estadio temprano. Mientras transtiretina y apolipoproteína A1 se han utilizado varias veces como posibles biomarcadores de cáncer de ovario [23], [27], el panel de tres biomarcadores fue evaluados nuevamente en nuestra población coreana. Por otra parte, este estudio presentó eficazmente la validación de la utilización de un sistema de ensayo líquido multiplex para la detección simultánea de varios biomarcadores para el diagnóstico de cáncer de ovario. El punto de corte de 35 U /ml para CA125 hemos utilizado es generalmente aceptado como normal [28].
transtiretina se ha utilizado como biomarcador para el estado y la inflamación malnutritional, enfermedades agudas y crónicas, pero después de la traducción formas modificadas tienen también se ha informado como parte de un panel de biomarcadores para la detección temprana de cáncer de ovario [29] - [31]. El nivel sérico de larga duración transtiretina se había reducido regulado en los pacientes con cáncer de ovario etapa posterior respecto a la de los controles sanos y pacientes con cáncer colorrectal, de mama o cáncer de próstata. Se identificó que corresponde al pico en m /z 12,8 kD, una forma truncada de transtiretina mostró una falta de los N-terminales de diez aminoácidos. Además de las mutaciones en el nivel de proteína, TTR existe en diferentes isoformas [32]. Recientemente, una variante truncada de transtiretina junto con la apolipoproteína A1 y un tejido conectivo activación de la proteína III se describieron como un panel eficiente de nuevos biomarcadores para la detección de cáncer de ovario epitelial en estadio temprano en mujeres [23].
apolipoproteína A1 es la importante componente de proteína de la lipoproteína de alta densidad (HDL) en el plasma [33]. Se demostró que la concentración de apolipoproteína A1 en la sangre se reduce en diferentes tipos de cáncer [34]. Apolipoproteína A1 ha sido identificado como un biomarcador potencial de cáncer de ovario, cáncer colorrectal, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica y el cáncer de páncreas [29], [35], [36]. Sin embargo, también se informó de observaciones controvertidos incluyendo la regulación de la apolipoproteína A1 en una variedad de tumores malignos de ovario, hígado, de mama [37]. Recientemente, la apolipoproteína A1 se muestra para mejorar la sensibilidad de CA125 para la detección de cáncer de ovario epitelial en estadio temprano y sugirió un agente prometedor terapéutico para el tratamiento de cáncer de ovario [23], [38].
Sin embargo, cuando se aplica individualmente , los marcadores estudiados aquí no superaron CA125 en sus sensibilidades y especificidades en el diagnóstico de cáncer de ovario. La combinación de marcadores individuales se ha intentado por otros investigadores como una estrategia para mejorar la tasa global de ovario la detección del cáncer [23], [39] - [41]. A continuación, se aplicó la combinación de los dos marcadores séricos con CA125, y se compararon las sensibilidades y especificidades entre el panel de tres marcador y cada marcador solo. Los resultados de los análisis de la curva ROC muestran que la combinación de tres biomarcadores tenía una gran sensibilidad mejorada sobre la de cada biomarcador solo. El panel de tres biomarcadores clasifica los cánceres en etapa temprana con el 93,9% de sensibilidad y la fase tardía de los cánceres con una sensibilidad del 96,5% al 95% de especificidad. También hemos añadido la hemoglobina, uno de nuestros biomarcadores séricos publicado recientemente [42], en el panel para confirmar si esta combinación da la potencia más alta clasificación. Sin embargo, el panel de cuatro biomarcadores (CA125 más transtiretina más apolipoproteína A1, más hemoglobina) no mejoró la sensibilidad y la especificidad para discriminar entre el cáncer de ovario y de individuos sanos (y /o de grupo benigna) en comparación con el panel de tres biomarcadores en el curva ROC. Por lo tanto, independientemente de la hemoglobina, el panel de tres biomarcadores fue suficiente para obtener la máxima separación entre no oncológico (grupo sano, más benigno) y la etapa I + II o todas las etapas (I-IV) de la enfermedad. La sensibilidad y especificidad de este panel para la etapa I + II son comparables con los resultados con un panel de cuatro biomarcador seleccionado de 96 antígenos candidatos medidos mediante inmunoensayos multiplex con técnicas [43]. Su panel de biomarcadores clasificó correctamente el 67% de las lesiones benignas como no oncológico. Otro estudio demostró la utilidad clínica de un /test HE4 combinado CA125 para la discriminación de masas ováricas benignas y malignas con sensibilidad 76,4% en% de especificidad 95 [44]. La alta especificidad y el correspondiente aumento en la sensibilidad para el panel de tres biomarcadores tiene mérito en los ensayos de detección del cáncer de ovario. Era, sin embargo, informó que para la población general, el PPV de un panel de 6-marcador (leptina, prolactina, OPN, IGF-II, MIF, CA-125) se mide mediante un sistema de inmunoensayo basado en perlas múltiplex sería de 6,5% , lo que indica que 14 de 15 mujeres con un resultado positivo de la prueba experimentarían resultados falsos positivos [45].
Existen varias limitaciones que deben ser abordados en relación con el presente estudio. En primer lugar, una descripción más clara de la población, tales como la edad y la distribución por razas, el estado nutricional, la presencia de la carcinomatosis peritoneal y ascitis, la presencia de la enfermedad de la infección, la exclusión de la enfermedad autoinmune o otros tumores malignos (tales como los cánceres de ovario metastásicos de sistema gastrointestinal) podría ser muy importante para la evaluación de los niveles de biomarcadores [46] - [49]. En segundo lugar, la variación biológica natural de ciertos marcadores y la variación biológica individuo con el tiempo también se debe considerar como la variabilidad asociada podría inducir un número de error de medición ensayo por resultados falsos positivos [50], [51]. Por ejemplo, la variación biológica intraindividual inherente a CA125 fue mayor en mujeres premenopáusicas que en las mujeres posmenopáusicas [52]. E incluso en un estudio de casos y controles multi-centro, puede haber diferencias de concentración de biomarcadores. Un marcador de 4-panel (apolipoproteína A1 + + transtiretina inter-α-tripsina inhibidor IV + CA125), por ejemplo, las diferencias de concentración exhibidas entre el descubrimiento de biomarcadores y establecer conjunto de validación independiente [17]. Se ha aceptado que puede haber diferencias demográficas y epidemiológicas, y las diferencias entre los protocolos de procesamiento de muestras hospitales, lo que lleva a resultados diferentes. Por lo tanto, se necesita un modelo para la estimación de componentes analíticos y biológicos de la variación de los marcadores.