Extracto
Antecedentes
microseminoproteína-beta (MSMB) regula la apoptosis y uso de asociación de todo el genoma estudia el polimorfismo de nucleótido único rs10993994 en el
MSMB
promotor se ha relacionado con un mayor riesgo de desarrollar cáncer de próstata. La ubicación promotor del alelo de riesgo, y su capacidad para reducir la actividad del promotor, sugirió que el alelo de riesgo rs10993994 podría resultar en MSMB rebajado en tejido benigno conduce a un mayor riesgo de cáncer de próstata.
Metodología /Principales conclusiones
MSMB expresión en el tejido prostático benigno y maligno se examinó mediante inmunohistoquímica y se compara con el genotipo rs10993994. concentraciones MSMB urinario se determinaron por ELISA y se correlacionó con PSA urinaria, la presencia o ausencia de cáncer, el genotipo rs10993994 y edad de inicio. MSMB niveles en tejido de la próstata y la orina se redujeron en gran medida con la génesis tumoral. MSMB urinaria era mejor que el PSA urinaria en la diferenciación de los hombres con cáncer de próstata en todos los grados de Gleason. La alta alelo de riesgo se asoció con heterogeneidad de tinción MSMB y la pérdida de MSMB tanto en el tejido y la orina en la próstata benigna.
Conclusiones
Estos datos muestran que algunos alelos de alto riesgo descubiertos usando en todo el genoma Los estudios de asociación producen efectos fenotípicos con potencial utilidad clínica. Proporcionamos el primer vínculo entre un polimorfismo baja penetrancia para el cáncer de próstata y una prueba de potencial en el tejido humano y los fluidos corporales. Existe un potencial para desarrollar tejidos y MSMB urinaria por un biomarcador de riesgo de cáncer de próstata, el diagnóstico y seguimiento de enfermedades
Visto:. Whitaker HC, Kote-jarai Z, Ross-H Adams, Warren AY, J Burge, George A, et al. (2010) La rs10993994 alelo de riesgo para el cáncer de próstata da lugar a cambios clínicamente relevantes de la Expresión microseminoproteína-beta en tejidos y orina. PLoS ONE 5 (10): e13363. doi: 10.1371 /journal.pone.0013363
Editor: Andrew Vickers, del Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, Estados Unidos de América
Recibido: 30 de junio de 2010; Aceptado: 1 de septiembre de 2010; Publicado: 13 Octubre 2010
Derechos de Autor © 2010 Whitaker et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Los autores le gustaría reconocer el apoyo de la Universidad de Cambridge, Cancer Research UK (códigos de subvención C522 /A8072 y C5047 /A8385), el Instituto de Investigación del cáncer, la Campaña Everyman, el paquete de trabajo del 7PM Promark UE y Hutchison Whampoa Limited y la próstata Fundación de Investigación del Cáncer. Los autores desean agradecer el apoyo del Instituto Nacional para la Investigación de la Salud que financia el Centro de Investigación de Cambridge Bio-médica, Cambridge, Reino Unido, el Centro de Investigación Biomédica en el Instituto de Investigación del Cáncer y el Royal Marsden NHS Foundation Trust y la biomédica Centro de Investigación en Manchester central Foundation Trust. Los autores también desean agradecer el apoyo de la Nacional del Cáncer de Investigación del Cáncer de próstata: los mecanismos de progresión y tratamiento (Solicitud) en colaboración (código de subvención G0500966 /75466) que ha financiado colecciones de tejidos y orina en Cambridge. Los autores también desean agradecer el apoyo de los Consejos de Cáncer de Victoria y Australia del Sur, la Prostate Cancer Foundation de Australia, la Agencia del Cáncer de estilo victoriano, Jack y Judy Baker por su apoyo al Sistema de Salud de la Universidad NorthShore y The Ronald y Fundación Rita McAulay lo que apoya la recogida de estudio de impacto. Douglas Easton es un Investigador Principal de Investigación del Cáncer del Reino Unido. Hans Lilja es financiado por los [números de subvención R33-CA127768-02] Instituto Nacional del Cáncer; Sociedad Sueca del Cáncer [3455]; y el Consejo Sueco de Investigación (Medicina) [20095]. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:. Dr. Hans Lilja tiene patentes para los ensayos de PSA y hK2 libres. Esto no altera la adhesión de los autores a todos los PLoS ONE políticas sobre los datos y compartir materiales, como se detalla en línea en la guía para los autores.
Introducción
microseminoproteína-beta (MSMB) es el segunda proteína más abundante en el semen después de antígeno prostático específico (PSA) [1]. A diferencia de PSA, MSMB no está directamente regulada por andrógenos y su nivel no se ve afectada por la manipulación de la hormona [2], [3], [4]. especificidad de próstata de expresión MSMB se demostró inicialmente en roedores [5], [6] y apoyado en la elaboración de un modelo de ratón de próstata que utiliza el
MSMB
región del promotor /potenciador para dirigir la expresión específica de próstata [7], [8]. Sin embargo, estudios en humanos sugieren MSMB se puede expresar en un número de tejidos secretores y de las mucosas, aunque a niveles mucho más bajos que en la próstata [9], [10], [11], [12], [13], [14].
Dos estudios de asociación de todo el genoma completo (GWAS) han identificado un polimorfismo etiqueta pequeña nucleótido (SNP), rs10993994, en 10q que está fuertemente asociada con un mayor riesgo de desarrollar cáncer de próstata [15], [16]. Este SNP se encuentra en el 5 'UTR de
MSMB
. El alelo de riesgo es común, con una frecuencia de ~30-40% de los europeos y el 70-80% en los hombres de ascendencia africana, y confiere un mayor riesgo de cáncer de próstata de 1,3 (relación de probabilidades por cada alelo). Esta asociación se observa tanto en los europeos y los afroamericanos y parece ser independiente de la edad del diagnóstico y el grado del tumor [17]. mapeo a escala fina no ha identificado otras variantes asociadas de forma independiente en la región. Además, un estudio reciente en líneas de células ha demostrado que el alelo de riesgo (T) redujo significativamente la actividad del promotor del gen de 13% de que en el alelo de riesgo bajo (C) [18]. Como este SNP se encuentra dentro de la
se sugiere MSMB
proximal región promotora reducción de la actividad del promotor que se produzca a través de sitios de unión de factores de transcripción alterada tales como CREB [19]. Estos datos sugieren fuertemente que el rs10993994 alelo T está asociado causalmente con el riesgo de cáncer de próstata, y que esta asociación puede ser mediada a través de la reducción de expresión de la proteína MSMB en el tejido prostático benigno. Se ha informado de que
MSMB
ARNm en las líneas celulares se redujo en las células homocigóticas para el alelo de riesgo, lo que sugiere una hipótesis mediante el cual reduce la expresión MSMB en individuos con el alelo de riesgo rs10993994 podría conducir a la reducción de la regulación del crecimiento celular y un mayor riesgo de tumorigénesis [19].
Varios grupos han estudiado la expresión MSMB en cáncer de próstata y todos han encontrado niveles más altos de MSMB en el tejido o suero benigno y normal en comparación con el material de los tumores [2], [ ,,,0],3], [4], [12], [20], [21], [22], [23]. Hasta la fecha se han completado estudios en la orina. Los altos niveles de MSMB en tejido benigno es consistente con la hipótesis de que MSMB une a los receptores de la superficie celular y regula el crecimiento de la próstata mediante el control de la apoptosis posiblemente a través de la MAP quinasa /AKT señalización [24], [25], [26].
el cáncer de próstata es el cáncer masculino sólido más común en el Reino Unido. En la actualidad, la mejor herramienta de diagnóstico es el PSA sérico, mientras que el ARNm de PCA3 urinario también se utiliza como una prueba de diagnóstico útil sobre todo para los hombres con PSA elevado y una biopsia negativa inicial [27]. Sin embargo, la necesidad de un examen rectal digital antes de la prueba se opone a su uso como una herramienta de detección. PSA urinaria ha sido reportado como una herramienta de diagnóstico potencialmente útil en los hombres con PSA sérico 2,5-10 ng /ml y es de particular interés en la detección y el seguimiento de la enfermedad ya que es más aceptable para los pacientes. [28].
hemos utilizado los estudios de inmunohistoquímica de MSMB en el tejido prostático benigno para demostrar una relación entre la expresión de la proteína MSMB y el genotipo rs10993994. Hemos desarrollado un ensayo ELISA urinaria para examinar la asociación entre PSA urinaria, niveles MSMB y el genotipo MSMB para determinar si este tiene potencial para utilizar clínicamente como una proyección o una herramienta de diagnóstico.
Materiales y Métodos
Declaración de Ética
aprobación ética se obtuvo completa para todas las colecciones de muestras humanas, ya sea del Multi-Centro de Investigación Comité de Ética de West Midlands o el Multi-Centro de Investigación Comité de Ética Trent. Todas las muestras se obtuvieron con consentimiento por escrito y se analizaron de forma anónima.
cohortes de pacientes
Tejido, muestras de sangre y de orina de pacientes con cáncer de próstata diagnosticado se obtuvieron del Hospital de Addenbrooke, de Cambridge, Reino Unido (prostatectomías radicales recogieron entre 2001 y 2008) y el Instituto de Investigación del cáncer (biopsia y prostatectomía transuretral recogen de 1995-2002). Los pacientes normales /benigna fueron reclutados como parte del estudio de impacto, un estudio del riesgo de cáncer de próstata en hombres con
/2
mutaciones en la línea germinal BRCA1 en el Instituto de Investigación del Cáncer (05 /MRE07 /25) [29]. Esta cohorte no tenía antecedentes de enfermedad de la próstata e incluyó hombres con mutado y de tipo salvaje (control)
BRCA1
y
BRCA2
. La mediana de edad, PSA y la puntuación de Gleason de las cohortes utilizados se indican en la figura S1.
No todos los pacientes tenían tejido de buena calidad para IHC, el ADN para el genotipado, los niveles de PSA en suero y orina disponible. Para superar esto, los pacientes se dividieron en tres grupos para responder a preguntas específicas. 168 pacientes con tejido de buena calidad se utilizaron para el estudio IHC se representa en la figura 1. Las muestras de 133 de los pacientes se hicieron en un microarray de tejido (TMA) que contiene múltiples núcleos de regiones normales /benignos (& gt; 3), prostática intraepitelial neoplasia (PIN) y al menos dos regiones distintas de tumor de cada paciente. Los casos restantes eran parte de un TMA adicional de jóvenes pacientes con cáncer de próstata de inicio (definida como diagnosticada a ≤60 años) desde el Estudio de Cáncer de Próstata Reino Unido genética. Este TMA incluye múltiples regiones normales /tumorales benignas y de 35 pacientes. n = indica el número de eventos en lugar de la cantidad de núcleos examinados es decir, donde se encontró patología heterogénea ambas regiones se puntuaron de forma independiente.
inmunohistoquímica MSMB se realizó en TMA utilizando un sistema de tinción automática BondMax. Para todas las secciones de los núcleos se muestran en azul y MSMB tinción de color marrón. (A) MSMB no estaba presente en urotelio (panel izquierdo), negro flecha - urotelio, flecha blanca - próstata, vesícula seminal (panel central), la flecha negro - vesícula seminal, flecha blanca - la próstata, la vejiga (panel derecho), flecha negro - las células de grasa, flecha blanca - capa muscular de la vejiga propia. (B) tinción MSMB en la próstata es específico para las glándulas benignas (flechas blancas) y no las células tumorales de próstata (Gleason 3) (flechas negras). MSMB también falló para teñir las glándulas benignas atróficas. Los ejemplos de los criterios de tinción (ninguno /débiles, moderadas y fuertes) aplicadas a la inmunohistoquímica. Los resultados de la tinción fueron muy significativas como se calcula mediante una prueba de Kruskal-Wallis. n representa el número de eventos patológicos anotó.
Sólo 145 pacientes tenían ADN que podría ser utilizado para el genotipado como se muestra en la Figura 2B. secciones de próstata radical completos o secciones de tejido muy grandes estaban disponibles de 32 pacientes de la cohorte Addenbrookers
.
(A) Un ejemplo de tinción mega-bloque de las secciones grandes de la próstata que muestran homogénea (panel izquierdo) o heterogéneo (panel de la derecha ) tinción. inmunohistoquímica MSMB se anotó como antes tan fuerte, moderada, débil o se pierde para cada paciente y se estratificó según el genotipo; T - alto riesgo, bajo riesgo C-. los valores de p se calcularon utilizando una prueba de Kruskal-Wallis. n representa el número de eventos patológicos anotó.
Para el ELISA MSMB se muestra en la Figura 3 89 hombres con cáncer de próstata que tenía tejidos, ADN y una muestra de orina fueron utilizados. Los pacientes normales /benignos fueron reclutados como parte del estudio de impacto, un estudio del riesgo de cáncer de próstata en hombres con
BRCA1 /2
mutaciones germinales (n = 215). Todas las muestras de orina se obtuvieron antes de cualquier examen rectal digital, alícuotas y se congelaron inmediatamente a -80 ° C. Donde se determinó disponibles edad, PSA y la puntuación de Gleason el momento del diagnóstico de cada paciente.
urinarios concentraciones de PSA MSMB y se determinaron y se normalizó para la creatinina. (A) MSMB orina se determinó por ELISA para la cohorte normal /benigna paciente y una cohorte más pequeña con un diagnóstico de cáncer de próstata. La misma cohorte también se ensayó para determinar los valores de PSA de suero cotejadas PSA urinaria y. Se generaron curvas ROC; AUC = área bajo la curva, los intervalos de confianza se dan entre paréntesis y los valores p se indican en los niveles de confianza del 95%. La diferencia entre MSMB urinaria y PSA ROC curvas p = 0,0021. La diferencia entre el MSMB urinaria y la cohorte de tumores se estratificó aún más por el grado Gleason de suma (B). MSMB urinaria y PSA bajos de muestras de Gleason (6 y 7) se compararon con alta Gleason (8 y 9) muestras y las curvas ROC, y se visualizan como antes. MSMB urinario también se estratificó según el alelo de riesgo rs10993994 (C). n = el número de individuos en cada grupo examinó.
Genotipado
La genotipificación se completó como se describe anteriormente [15]. Se extrajo ADN de sangre entera para la serie 2 y 3, ya sea comercialmente por GeneProbe o con Qia-Amp® DNA Mini Kit (Qiagen) según las instrucciones del fabricante. La genotipificación de las muestras se realizó por 5'exonuclease ensayo (Taqman ™) usando el sistema de detección de secuencias ABI Prism 7900HT de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los cebadores y sondas fueron suministradas directamente por Applied Biosystems como ensayos-By-Design ™.
La inmunohistoquímica
Todo inmunohistoquímica (IHC) se realizó mediante una tinción automatizada Bondmax y anti-MSMB anticuerpos (Abcam) (1:400) sobre el tejido de la serie 1 y 2. Para la matriz /tumor multi-normal se utiliza un núcleo 48 de TMA Stretton Scientific. Los núcleos se counterstained con hematoxilina y se desliza imagen usando un sistema de escaneo Aperio. Patología fue confirmada por un especialista uro-patólogo (AW) antes de la puntuación de cualquier tinción inmunohistoquímica. La puntuación se lleva a cabo por dos observadores, uno de los cuales era un uro-patólogo (AW), y un consenso obtenido. hematoxilina eosina secuencial y secciones teñidas fueron utilizados para confirmar la patología. La tinción se clasificó como; "Ninguna" - sin manchas, "débil" - no todas las células epiteliales teñidas y tinción pálida, "moderado" - la mayoría o todas las células epiteliales teñidas moderadamente, "fuerte" - todas las células epiteliales teñidas fuertemente (Figura 1B). Donde las secciones contenían tinción heterogénea se logra un consenso general sobre la base de las proporciones relativas de las diferentes puntuaciones. Cuando patología heterogénea existía dentro de núcleos, por ejemplo, regiones tumorales benignas y de lado a lado, cada región se obtuvo como un evento separado. n = indica el número de eventos en lugar de la cantidad de núcleos examinados
los niveles de PSA y MSMB
El suero y orina PSA (Free & amp; total). & amp; ensayos de creatinina se llevaron a cabo por el Centro de Investigación Core Laboratorio de Ensayo de Bioquímica INDH Cambridge Biomédica, Hospital Addenbrookers utilizando el kit prostratus libre /PSA total DELFIA (Perkin Elmer Life & amp; Analytical Sciences) y un analizador Dimensión RXL (Siemens Healthcare). Para el ELISA MSMB todos los procedimientos se llevaron a cabo con agitación a temperatura ambiente. Los pocillos se lavaron entre cada paso tres veces con 0,05% de Tween-PBS y una platewasher BioTek ELx50. Noventa y seis placas de pocillos (Fisher Scientific) se recubrieron durante la noche a 4 ° C en el ratón de anticuerpo anti-PSP94 (1:1000, Abcam) diluido en PBS. Los pocillos se bloquearon con 1% de BSA (Sigma) durante 1 hora antes de añadir 50 l de muestra o estándar a cada pocillo por duplicado y se incubaron durante otras 2 horas. Las diluciones en serie (25 a 0,78 g /ul) de PSP94 recombinante (rPSP94, R & amp; D Systems) se utilizaron como control en cada placa. Se añadió a cada pocillo durante 1 hora seguido de incubación horas a1 con burro anti-cabra-HRP (Abcam, 1:20,000); de cabra anti-MSMB (sistemas de D 0,2 mg /ml de R & amp). Para visualizar 100 l de TMB (Sigma) se añadió a cada pocillo durante 15 minutos. La reacción se detuvo mediante la acidificación con 50 l de HCl y la absorbancia medida a 450 nm usando un espectrofotómetro Lucy II.
Se determinó el rango dinámico de la prueba ELISA para ser 0,01-100 g /ml, aunque el rango no lineal fue mucho mayor. Cualquier placa de exhibición & gt; 20% de variabilidad en la curva estándar se considera que han fracasado y repetida. Intra e inter-ensayo variabilidad fue del 8,8% y 22%, respectivamente. Efectos sobre la estabilidad de la proteína se mostró a ser & lt; 20% después de la prueba por la congelación y descongelación 3 veces antes de ensayar o incubando rPSP94 pre-diluido -3 durante 4 horas a temperatura ambiente antes del ensayo. La recuperación de diferentes fluidos se determinó que era & lt; 20% por dilución de rPRDX-3, ya sea en PBS, 0,1% de albúmina de suero bovino (Sigma) o 10% de suero de cabra (Dako Cytomation). concentración MSMB se determinó por interpolación de los valores de regresión no lineal de la curva estándar sigmoidal. La concentración de todas las muestras de orina se normalizó el uso de creatinina medida usando un kit de ensayo de creatinina (R & amp; D Systems) y la pendiente de la curva estándar determinada por los estándares conocidos (20 a 0,3125 mg /dL) y la regresión lineal. Sólo las muestras que podrían ser interpolados a partir de las curvas estándar sin extrapolación se incluyeron en el análisis.
Métodos Estadísticos
Todas las estadísticas incluyendo regresión lineal e interpolación para el ensayo de ELISA se realizaron usando GraphPad Prism 5. para comparar la sensibilidad y la especificidad de las mediciones en la cohorte de tumor en comparación con la cohorte benigna se realizaron curvas receptor-operador (ROC). Se utilizó una prueba de ANOVA de 1 vía con una corrección de Kruskal-Wallis para determinar si los niveles de tejido o MSMB urinaria fueron significativamente diferentes entre las cohortes benignos y tumores cuando la cohorte de tumores se estratificó según el grado de Gleason o genotipo. Se utilizó una prueba t de Student de Mann-Whitney de dos colas para todas las comparaciones por pares. Para todos los experimentos un valor de p de 0,05 fue considerado significativo.
Resultados
Aparte de próstata benigna no tejidos normales o carcinogénico demostrado ninguna tinción MSMB lo que sugiere que a nivel de proteínas en el tejido es MSMB específica altamente próstata (Figura 1A y la Figura S2). En particular los tejidos que rodean la próstata, por ejemplo, urotelio, vesículas seminales y la capa muscular propia de la vejiga no mostraron tinción mientras que las glándulas prostáticas benignas adyacentes fueron fuertemente teñidas (Figura 1A).
De acuerdo con informes anteriores glándulas prostáticas benignas mostraron niveles significativamente más altos de la tinción en comparación con las regiones tumorigénicos en nuestra cohorte (p & lt; 0,0001, Figura 1B y Figura S1) [2], [3], [4], [12], [20], [21], [22], [23]. tinción MSMB también se perdió constantemente en la neoplasia intraepitelial prostática (PIN) en comparación con el tejido benigno (p & lt; 0,0001) lo que sugiere que puede ser una solución pronta, causal, evento en la génesis tumoral. La tinción para MSMB en tejido benigno osciló entre homogénea, que fue más comúnmente visto con una fuerte tinción (Figura 2A, panel izquierdo) y variables, tinción heterogénea ve con frecuencia con una débil y moderada tinción (Figura 2A, panel derecho).
tinción MSMB en el tejido se asoció significativamente con el genotipo rs10993994 (p & lt; 0,0001), siendo la tinción más débil de los hombres homocigotos para el alelo de alto riesgo (TT) y el más fuerte en los homocigotos CC (Figura 2B). No hubo evidencia de una asociación entre la tinción MSMB y la edad al momento del diagnóstico o PSA de esta serie maligna de los hombres (Figura S3).
Se determinó los niveles urinarios de MSMB en 215 hombres normales /benignos, sin antecedentes de cáncer de próstata la enfermedad y 89 hombres con cáncer de próstata (figura S4). En consonancia con la asociación en el tejido prostático hubo una disminución significativa en MSMB urinaria en los hombres con tumores en comparación con los hombres sin antecedentes de enfermedad de la próstata (Apoyo 4A Documento) (p & lt; 0,0001). MSMB urinaria mejoró significativamente en PSA urinaria, pero no PSA en suero, para el diagnóstico del cáncer de próstata en esta cohorte (diferencia entre MSMB urinaria y curvas ROC PSA CI 0,21, 95%: 0,075, 0,34, p = 0,0021) (Figura 3A). Cuando las muestras de tumor se estratificaron en bajo (6 y 7) y alta (8 y 9) Suma puntuaciones de Gleason MSMB urinaria demostrado altos niveles de especificidad y sensibilidad especialmente en comparación con PSA urinaria (Figura 3B). Hubo una disminución significativa en MSMB urinaria con el alelo de alto riesgo en comparación (TT) para el alelo de riesgo bajo (CC) (Figura 3C) (p = 0,0319), aunque esto no se reflejó en una diferencia significativa en las curvas ROC. Criado MSMB urinario benigno es poco probable que refleje un volumen de la próstata benigna aumentado ya que no había aumento significativo en MSMB urinaria con la edad (Documento de Apoyo 4B) (p = 0,543). Para demostrar que la correlación era específico para el genotipo rs10993994 se compararon los niveles urinarios MSMB y estado de la mutación BRCA1 y BRCA2 germinal, que se conocen los factores de riesgo del cáncer de próstata [30], [31], y no encontró ninguna relación (Figura S4).
Discusión
Este es el primer estudio para describir la relación entre el alelo de riesgo de la etiqueta SNP rs10993994 y los niveles MSMB en el tejido benigno de la próstata y el tumor y para correlacionar el nivel de proteínas con el genotipo y la agresividad del cáncer de próstata cáncer. La pérdida casi completa de MSMB en PIN (Figura 1B) sugiere que la reducción de MSMB es un evento temprano en la génesis de tumores consistente con una asociación entre el riesgo de cáncer de próstata y el genotipo rs10993994.
Hay una fuerte evidencia que une el SNP rs10993994 en
MSMB
región promotora con un mayor riesgo de desarrollar cáncer de próstata [15], [16]. MSMB ha sido estudiado por un gran número de grupos como un putativo de biomarcadores de cáncer de próstata ya que los niveles en el tejido y el suero se reducen o se pierden con el desarrollo del cáncer [2], [3], [4], [12], [20], [ ,,,0],21], [22], [23] (Figura 1B). Hemos confirmado estos resultados y también que es en gran parte MSMB prostático específico a nivel de proteínas en el tejido (Figura 1A y Figura S2). La evidencia reciente sugiere que una vez que los tumores de próstata rs10993994 han desarrollado tiene poco efecto sobre la progresión de la enfermedad que indica que cualquier aumento en el riesgo afecta a la glándula benigna y el desarrollo del tumor inicial [17]. Esto es consistente con la pérdida de MSMB que hemos observado en PIN, lo que sugiere que se requiere la expresión MSMB reducida o perdida en benigna de la próstata para la transformación maligna. El vínculo entre el alelo de riesgo MSMB y la expresión en el tejido fue altamente significativa (p & lt; 0,0001) (Figura 2B). heterogeneidad pronunciada se observó también en los tejidos con moderada a baja expresión más comúnmente relacionado con el alelo TT (Figura 2A).
Varios grupos han examinado los niveles en suero MSMB demostrando valor pronóstico después de la prostatectomía radical [3], [32 ]. En consonancia con la pérdida de MSMB en las glándulas tumorigénicas (Figura 1B) que han demostrado una pérdida muy significativa de MSMB en la orina de pacientes con cáncer de próstata de grado bajo y alto de Gleason se comparó con aquellos que no tienen la enfermedad de la próstata conocida (Figura 3A). Estos resultados se comparan favorablemente con PSA urinaria que previamente se ha informado que tiene potencial utilidad clínica en pacientes con niveles séricos de PSA de 4-10 ng /ml [28]. MSMB urinaria no era tan preciso como el PSA sérico, la prueba actual estándar de oro para el diagnóstico de cáncer de próstata (AUC de 0,97 para el PSA sérico y 0,77 para MSMB urinaria. Sin embargo, nuestros cohortes no representa los falsos positivos y los negativos se ve cuando se utiliza PSA para cribado de la población que sugiere una cohorte menos sesgada debe ser probado a establecer el verdadero beneficio de MSMB urinaria para la detección del cáncer de próstata. Aunque es quizás sorprendente que tales cambios son tan fácilmente detectable dado el potencial pequeño número de glándulas tumorogénicos dentro de una próstata de otra forma benigna. Sin embargo, hemos demostrado la especificidad de próstata casi completa para la proteína MSMB lo que sugiere que es poco probable que los niveles significativos de MSMB surgen de cualquier otro tejido. es probable que una proporción de hombres en nuestro estudio normal /benigna (edad media de 53 años) tendrá algún grado de la hiperplasia prostática benigna (HPB), pero hemos observado ningún aumento significativo en MSMB urinaria con la edad lo que sugiere que el aumento del volumen de la próstata tiene poco efecto sobre MSMB urinaria (figura S4).
diferencias urinarios en la MSMB con el alelo de riesgo eran significativa, pero no lo suficientemente discriminatoria nuestra cohorte relativamente pequeña. Los cambios fueron independientes de otros factores de riesgo genéticos establecidos, tales como
BRCA1
y
BRCA2 mutación
(figura S4). El aumento de la sensibilidad del ensayo y prueba de un representante cohorte basado en la población en comparación con el PSA son más propensos a demostrar una verdadera significación clínica en el uso de MSMB urinaria para estimar el riesgo y diagnosticar el cáncer de próstata. La orina es una medida biológica altamente aceptable para los pacientes y nuestros hallazgos indican que MSMB es un objetivo potencial para una mayor investigación como un biomarcador urinario para la detección del cáncer de próstata y el diagnóstico, sin la necesidad de un examen rectal digital. A diferencia del PSA, los informes anteriores han sugerido que los niveles MSMB se ven afectados por la terapia de ablación hormonal se utiliza con frecuencia en el tratamiento del cáncer de próstata y tenemos que determinar si MSMB podría ser útil en la carga de enfermedad de vigilancia en pacientes sometidos a diversas formas de tratamiento [2], [3] , [4]. MSMB también puede ser útil en la detección de los pacientes con PSA elevada, pero una biopsia negativa que se beneficiarían de una mayor investigación.
Los estudios cuantitativos de RT-PCR de las líneas celulares se ha demostrado previamente una relación entre el alelo T y rs109939994 rebajado MSMB ARNm, muy probablemente debido a factor de transcripción alterada de unión [19]. La demostración de una asociación similar con MSMB urinaria y tinción MSMB en el tejido prostático benigno refuerza la asociación causal entre la expresión MSMB y el cáncer de próstata. Dentro se cree que la MSMB próstata para regular la apoptosis a través de receptores de la superficie celular, MAP quinasa y Akt [24], [25]. Nuestra hipótesis es que la reducción de expresión MSMB en los hombres con el alelo de riesgo alto puede reducir la apoptosis de las células de la próstata y en última instancia, promover el crecimiento de la próstata menos controlada. La pérdida de una vía de reglamentación tan importante podría promover la génesis de tumores y proporcionar una explicación a un mayor riesgo de desarrollar cáncer de próstata tanto que tiene poco efecto sobre el resultado una vez que el cáncer se ha desarrollado [17].
Nuestros resultados plantean la posibilidad de que urinaria MSMB relacionada con el genotipo puede ser un biomarcador útil para la detección de riesgo de cáncer de próstata y el desarrollo. Esto necesita ser estudiado más a apuntar a los hombres con mayor riesgo de aumento de la vigilancia y la intervención temprana e identificar aquellos hombres con cáncer de próstata.
Apoyo a la Información
Figura S1.
(A) En 168 pacientes total del tumor se estudiaron pero no todos los pacientes tenían tejido, el ADN y la orina disponible. De la cohorte de 168 tenían tejido que incluía benigna que fue utilizado en la Figura 1. 145 pacientes habían tejido y ADN y se incluyeron en la Figura 2. 89 pacientes también tenía una muestra de orina y se podría utilizar para el ELISA se muestra en la Figura 3. (B ) Detalles de las cohortes benignos y tumores utilizados en el estudio
doi: 10.1371. /journal.pone.0013363.s001 gratis (0.73 MB EPS)
figura S2.
MSMB es específico de la próstata en tejidos normales y tumorales. Un tisú de múltiples normal de TMA se tiñó de MSMB usando immunohostochemistry y un sistema de tinción automática Bondmax. La matriz contenía múltiples núcleos de los siguientes tejidos; piel, mama, glándula tiroides, esófago, riñón, vejiga, pulmón, colon, hígado, ovario, útero y estómago. Imágenes representativas de los testículos (seminoma tumor), se muestran de mama y de próstata. tinción MSMB es de color marrón, los núcleos son de color azul
doi:. 10.1371 /journal.pone.0013363.s002 gratis (7.19 MB EPS)
Figura S3.
La correlación entre el genotipo y edad /PSA en el diagnóstico y la tinción inmunohistoquímica y la edad /PSA al momento del diagnóstico. n = el número de individuos examinó en cada grupo. los valores de p se calcularon mediante un ANOVA de 1 vía con una corrección de Kruskal-Wallis
doi:. 10.1371 /journal.pone.0013363.s003 gratis (1.21 MB EPS)
figura S4. gratis (a) los niveles urinarios MSMB se compararon mediante ELISA y una prueba t de 2 colas. (B) los valores MSMB urinarios se analizaron de acuerdo con la edad del individuo (años) en el momento de la recogida de muestras. mediciones (C) de PSA para la cohorte benigna estratificado según el genotipo rs10993994. (D) urinaria MSMB no altera con mutaciones BRCA. hombres benignos en la cohorte 3 fueron genotipados para mutaciones en BRCA 1 y BRCA 2 que son conocidos por conferir riesgo de desarrollar cáncer de próstata. genotipo BRCA se comparó con MSMB urinaria. Control - ninguna mutación, BRCA 1 - mutación en BRCA 1, BRCA 2 -. Mutación en BRCA 2. Para todos los gráficos n = número de muestras analizadas y valores de p se calcularon mediante un ANOVA de 1 vía con una corrección de Kruskal-Wallis
doi: 10.1371 /journal.pone.0013363.s004 gratis (2.03 MB EPS)
Reconocimientos
Nos gustaría agradecer al Dr. William J. Howat y la histopatología /ISH instalación, Research del Reino Unido Instituto de Investigación del cáncer de Cambridge para la ayuda con la inmunohistoquímica MSMB. También nos gustaría dar las gracias a la Investigación del Cáncer del Reino Unido Cambridge Research Institute Bioinformática Core para la asistencia estadística. Estamos muy agradecidos con el Instituto Nacional de Laboratorio de Ensayo Centro de Investigación Biomédica de Investigación de Salud de Cambridge Core Bioquímica de asistencia con los ensayos bioquímicos.