Extracto
Antecedentes y Objetivo
El Real Pronóstico varió entre los pacientes con el mismo escenario, por lo tanto, había una necesidad de nuevos factores pronósticos y predictivos. El objetivo de este estudio fue evaluar la relación de los marcadores biológicos relacionados con la apoptosis tales como p53, Bcl-2, Bax, y c-myc, y las características clinicopatológicas y su valor pronóstico.
Métodos
de 1996 a 2007, 4426 pacientes habían sido sometidos a una gastrectomía D2 curativa para el cáncer gástrico en la Universidad de Fudan Centro de cáncer de Shanghai. Entre 501 pacientes, los niveles de expresión de p53, bcl-2, bax, y c-myc fueron examinados por inmunohistoquímica. Se investigaron el valor pronóstico de los marcadores biológicos y la correlación entre los marcadores biológicos y otros factores clínico-patológicos.
Resultados
Había 339 varones y 162 mujeres con una edad media de 57. Los porcentajes de positivos la expresión de p53, bcl-2, bax, y c-myc fueron 65%, 22%, 43% y 58%, respectivamente. Hubo una fuerte correlación entre p53, bax, y la expresión de c-myc (
P
= 0,00). No hubo asociación significativa entre Bcl-2 y la expresión de Bax (
P Hotel & lt; 0,05). la expresión de p53 correlaciona con el grado histológico (
P
= 0,01); Bcl-2 expresión con el estadio patológico (
P
= 0,00); la expresión de Bax con el varón (
P
= 0,02), el grado histológico (
P
= 0,01), el tipo Borrmann (
P
= 0,01), la localización del tumor (
P
= 0.00), metástasis de ganglios linfáticos (
P
= 0,03), y el estadio patológico (
P
= 0,03); la expresión de c-myc con el tipo Borrmann (
P
= 0.00). Bcl-2 expresión se relaciona con una buena supervivencia en el análisis univariado (
P
= 0,01). El análisis multivariado mostró que la expresión de Bcl-2 y el estadio patológico se definieron como factores pronósticos independientes. No hubo diferencias significativas de las tasas de supervivencia general a 5 años de acuerdo con la Bcl-2 expresión o no en el estadio IIB (
P
= 0,03).
Conclusión
La expresión de Bcl-2 fue un factor pronóstico independiente para los pacientes con cáncer gástrico; que podría ser un candidato para el sistema de estadificación del cáncer gástrico
Visto:. Liu X, Cai H, H Huang, Long Z, Y Shi, Wang Y (2011) El significado pronóstico de la apoptosis relacionadas marcadores biológicos en Los pacientes con cáncer gástrico chinos. PLoS ONE 6 (12): e29670. doi: 10.1371 /journal.pone.0029670
Editor: Masaru Katoh, Centro Nacional del Cáncer, Japón
Recibido: 29 Junio, 2011; Aceptó 2 de diciembre de 2011; Publicado: December 28, 2011
Derechos de Autor © 2011 Liu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Los autores no tienen el apoyo o la financiación para reportar
Conflicto de intereses:. los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
a pesar de que la incidencia de cáncer gástrico ha ido disminuyendo considerablemente. desde hace varias décadas, todavía era el cuarto cáncer más común y la segunda causa más frecuente de muerte por cáncer [1], [2]. Era muy importante para predecir con precisión el riesgo de mal pronóstico con el fin de maximizar el efecto terapéutico y para minimizar los efectos adversos en el tratamiento de pacientes con cáncer. Entre los factores pronósticos ahora disponibles para el cáncer gástrico, el factor pronóstico más preciso e importante fue la etapa TNM de la UICC. Como resultado de la variabilidad de pronóstico dentro de la misma etapa de cáncer gástrico, era imposible predecir con exactitud el pronóstico a través de los procedimientos de estadificación convencionales. Por lo tanto, era esencial para buscar los otros factores específicos para identificar subgrupos de pacientes con evolución más agresiva de la enfermedad. Recientemente, algunos estudios han demostrado que otros factores patológicos, tales como el número de ganglios linfáticos positivos, la presencia de afectación ganglionar extracapsular, y el tamaño del tumor tenía un valor pronóstico adicional [3] - [5]. Teniendo en cuenta que algunos marcadores biológicos, como los oncogenes, genes supresores de tumores, los reguladores del ciclo celular, y los genes de reparación del ADN, estaban relacionados con la génesis tumoral, crecimiento, invasión y metástasis, muchos científicos se dedicaron a la búsqueda de los nuevos factores pronósticos con estos marcadores moleculares. A pesar del hecho de que algunas de estudios han evaluado la importancia pronóstica de los marcadores, tales como p53, bcl-2, bax, y c-myc en el cáncer gástrico, los resultados fueron controvertida [6] - [11]. Por otra parte, se llevaron a cabo estos estudios previos para investigar el valor pronóstico adicional de los marcadores a la 6ª etapa TNM de la UICC, que era urgente para dilucidar la relación entre estas autoridades y la 7ª etapa TNM de la UICC. Por fin, no hubo estudios que evalúan la expresión de estas significado pronóstico molecular en pacientes con cáncer gástrico en China. Por lo tanto, se evaluó la expresión de marcadores biológicos tales como p53, bcl-2, bax, y c-myc en este estudio.
proteínas p53 fueron los productos de los genes supresores de tumores, que actuaban mediante la modulación de la proliferación celular a través de control del puesto de control de detención G1 del ciclo celular [12], [13]. Bcl-2 y Bax pertenecían a la familia Bcl-2, y el segundo fue una de las clases más importantes de moléculas reguladoras de la apoptosis. La familia de Bcl-2 fueron clasificados en dos subfamilias: proteínas anti-apoptosis (Bcl-2, Bcl-XL, Bcl-w, BFL-1, brag-1, y MCL-1) y proteínas pro-apoptosis (Bax, Bak , Bcl-X, malo, oferta, y HRK) [14]. Se ha demostrado que la bax a Bcl-2 podría afectar a la sensibilidad relativa o resistencia de las células apoptóticas a Simuli [15]. proteína c-myc fue un tipo de factor de transcripción. Un estudio previo mostró que la expresión de c-myc estaba vinculado con la proliferación celular [16].
En este estudio, se evaluó la expresión de marcadores biológicos tales como p53, Bcl-2, Bax, y c-myc, su expresión correlacionada con las características clínico-patológicas y evaluado su valor pronóstico.
Materiales y Métodos
Los pacientes
Durante enero de 1996 y diciembre de 2007, 4426 pacientes con diagnóstico histológico de adenocarcinoma gástrico primario se sometieron curativa gastrectomía D2 en el Departamento de cáncer gástrico y el sarcoma de tejido blando en la Universidad de Fudan Centro de cáncer de Shanghai. Fuera de estos pacientes, se seleccionaron 501 casos, ya que sus muestras se tiñeron inmunohistoquímicamente después de la operación con el examen histológico de rutina. Los datos fueron recuperados de informes operativos y patológicas de los pacientes, y los datos de seguimiento se obtuvieron por teléfono, carta, y la base de datos clínica para pacientes ambulatorios. Este estudio incluyó a 339 hombres y 162 mujeres de edades comprendidas entre 22 y 82 años de edad, la edad media fue de 57 años. Puesta en escena se realizó de acuerdo con la Clasificación de estadificación TNM de la UICC para el carcinoma del estómago (séptima edición, 2010). Un seguimiento de todos los pacientes se llevó a cabo de acuerdo con el protocolo estándar (cada tres meses durante al menos 2 años, cada seis meses durante los próximos 3 años, y después de 5 años cada 12 meses para la vida). Los elementos de comprobación en marcha incluyen el examen físico, examen de marcadores tumorales, ultrasonido, radiografía de tórax, tomografía computarizada y el examen endoscópico. El tiempo de seguimiento medio fue de 44,6 meses en el momento del análisis. El consentimiento informado por escrito había sido obtenida de todos los pacientes, y este estudio fue aprobado por el Comité Ético del Centro de Cáncer de Shanghai de la Universidad de Fudan. El estudio fue retrospectivo.
tinción inmunohistoquímica
p53, Bcl-2, Bax, y c-myc fueron detectados por el método inmunohistoquímico. Todos los anticuerpos primarios y anticuerpos monoclonales de ratón se adquirieron de Dako (Hamburgo. Alemania). La tinción inmunohistoquímica se realizó por el sistema de polímero mejorar marcado método (ELPS), con 10% de materiales fijados con formalina, incluidos en parafina. Serie 5 micras secciones de parafina se deparaffinised con xileno y hidratados con agua ehanol /desionizada. Las secciones fueron incubadas con metanol /0,3% H
2O
2 para 10 min y se bloquearon con tinción no específica reactivo de bloqueo. Después de la incubación durante la noche a 4 ° C con anti-p53, bcl-2, bax, y el anticuerpo c-myc (diluido 1:100, 1:100, 1:100, 1:100, respectivamente), las secciones se trataron de acuerdo con la norma inmunoperoxidasa métodos que usan una biotina estreptavidina peroxidasa kit complejo (LSAB + kit /HRP; Dako). Después, la reacción peroxidasa se reveló con diaminobencidina (Dako). secciones de control negativo se sometieron al mismo procedimiento, excepto que el primer anticuerpo fue sustituido por PBS. No se observó tinción positiva en los controles. La posición de la tinción era predominantemente en el citoplasma de células de bax y c-myc, citoplasma y citomembrana para bcl-2, el núcleo de p53.
La tinción inmunohistoquímica de puntuación
Todas las rebanadas fueron evaluados por dos patólogos sin conocimiento de los resultados clínicos. El porcentaje de células y intensidades de tinción inmunorreactivas se evaluó en cada muestra. El porcentaje de células inmunorreactivas se clasificó en una escala de 0 a 4: no tinción se puntuó como 0, 1 a 10% de células teñidas obtuvieron como 1, 11 a 50% como 2, 51 a 80% como 3, y 81- 100% como 4. Las intensidades de tinción se clasifican de 0 a 3: 0 se define como negativo, 1 como débil, 2 como moderado, y 3 tan fuerte, respectivamente. Los datos brutos se convirtieron en el marcador inmunohistoquímico (IHS), multiplicando las puntuaciones cantidad e intensidad. Una puntuación de 9-12 IHS se consideró como una fuerte inmunorreactividad (+++), 5-8 como moderada (++), 1-4 como débil (+), y 0 como negativo (-). En el análisis final, los casos tenían una puntuación de menos de 1 fueron considerados como negativos, y ≥1 se consideran positivos.
El análisis estadístico
La asociación entre los factores clínico-patológicos y marcadores biológicos se evaluado mediante la prueba de Chi-cuadrado. tasa de supervivencia a cinco años se calculó por el método de Kaplan-Meier, y las diferencias entre las curvas de supervivencia fueron examinados con la prueba de log-rank. Todas las variables significativas observadas en el análisis univariado fueron incluidos en el análisis de supervivencia multivariante mediante regresión de Cox de riesgos proporcionales. El nivel aceptado de significación fue de
P Hotel & lt; 0,05. Los análisis estadísticos y gráficos se realizaron con el programa SPSS 13.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL).
Resultados
características clinicopatológicas
Había 339 varones y 162 hembras (2.09: 1), con una edad media de 57 años. Hubo 57 (11,4%) cánceres gástricos tempranos y 444 (88,6%) de cáncer gástrico avanzado. De acuerdo con el tipo histológico, se observaron tumores bien diferenciados en 9 (1,8%) pacientes, moderadamente diferenciado en 164 (32,7%) pacientes, y los tumores pobremente diferenciados en 328 restantes (65,5%) pacientes. Según tipo Borrmann, 57 (10,4%) eran de tipo 0, 36 (7,2%) de tipo I, 15 (3,0%) de tipo II, 371 (74,0%) de tipo III, 22 (4,4%) de tipo IV. De 501 pacientes, 159 (31,7%) tenían tumores localizados en el tercio superior, 72 (14,4%) tenían tumores en el tercio medio, 244 (48,7%) tenían tumores en el tercio inferior del estómago, y 26 (5,2%) tumores habían ocupado dos tercios o más de estómago. Metástasis en los ganglios linfáticos se observó en 356 pacientes, la tasa de metástasis fue del 71,1%. La distribución de estadio patológico fue la siguiente: 35 (7,0%) pacientes pertenecían al estadio IA, 52 (10,4%) del IB, 60 (12,0%) IIA, 83 (16,5%) IIB, 88 (17,6%) IIIA, 83 ( 16,5%) III B, y 100 (20,0%) IIIC.
expresión de p53
expresión de p53 fue positiva en el 64,9% de todos los tejidos de cáncer gástrico. Se observó tinción de p53 en el núcleo de células de carcinoma (Figura 1). la expresión de p53 se asoció con bax y c-myc (Tabla 1). histología correlacionada con la expresión de p53 bien diferenciado. No hubo correlación con el sexo, edad, tipo Borrmann, localización del tumor, metástasis a los ganglios linfáticos, y el estadio patológico (Tabla 2).
A) Expresión positiva de p53. B) Expresión positiva de bcl-2. C) Expresión positiva de Bax. D) Expresión positiva de c-myc. (Aumento original: todo × 100).
Bcl-2 expresión
expresión de bcl-2 fue positivo en el 22,2% de todos los tejidos de cáncer gástrico. se observó bcl-2 tinción en el citoplasma y citomembrana de células de carcinoma (Figura 1). bcl-2 expresión se asoció con bax (Tabla 1). No hubo correlación con el estadio patológico, pero no hay correlación con el sexo, edad, tipo histológico, el tipo Borrmann, localización del tumor, metástasis a los ganglios linfáticos, y (Tabla 2).
expresión de Bax
expresión de Bax fue positivo en el 42,9% de todos los tejidos de cáncer gástrico. se observó bax tinción en el citoplasma de las células de carcinoma (Figura 1). expresión bax se asoció con p53, bcl-2 y c-myc (Tabla 1). sexo femenino, diferenciado moderadamente, Borrmann II, tercera ubicación superior, y la metástasis de los ganglios linfáticos correlacionan con la expresión de Bax. A medida que aumentaba el estadio patológico, la expresión de Bax se hicieron más frecuentes. No hubo correlación con la edad (Tabla 2).
expresión de c-myc
c-myc expresión fue positivo en el 58,1% de todos los tejidos de cáncer gástrico. Se observó tinción de c-myc en el citoplasma de las células de carcinoma (Figura 1). la expresión de c-myc se asoció con p53, y bax (Tabla 1). Borrmann III correlaciona con la expresión de c-myc. No hubo correlación con el sexo, edad, tipo histológico, localización del tumor, metástasis a los ganglios linfáticos, y el estadio patológico (Tabla 2). Además, los datos primarios sobre las características clínico-patológicos y evaluaciones de inmunorreactividad de 501 casos de cáncer gástrico se mostraron como un cuadro suplementario en un formato Excel (Tabla S1).
El análisis univariante
El exceso de los cinco -Año tasa de supervivencia fue del 53,7% para los 501 pacientes. tasa de supervivencia a cinco años fue de 64,9% y 50,5% en los pacientes bcl-2 negativos Bcl-2 positivos y, respectivamente, y esta diferencia fue estadísticamente significativa (Fig. 2). A excepción de Bcl-2 de expresión, los factores pronósticos significativos incluyen: sitio del tumor, el tipo Borrmann, el estado de los ganglios linfáticos y el estadio patológico. La Tabla 3 muestra los resultados en el análisis univariado de los factores pronósticos.
No hubo diferencias significativas entre Bcl-2 y Bcl-+ 2- (
P
= 0,005).
análisis multivariado
análisis de supervivencia multivariante, incluyendo todos los factores pronósticos significativos mencionados en el análisis univariado, se llevó a cabo para determinar los factores pronósticos independientes para el cáncer gástrico. El análisis multivariante mediante regresión de Cox de riesgos proporcionales demostró que Bcl-2 expresión y el estadio patológico fueron factores pronósticos independientes (Tabla 4).
Comparación de la supervivencia de acuerdo a los marcadores biológicos en el mismo escenario
de acuerdo al 7 Sistema de estadificación TNM de la UICC, cáncer gástrico se dividió en 7 etapas: etapa IA, IB etapa, estadio IIA, IIB, IIIA, IIIB, IIIC. Basándose en la expresión de bcl-2, cada etapa se dividió en grupo negativo bcl-2 positivo y bcl-2. No hubo diferencias significativas de supervivencia exceso de todos los 5 años entre el grupo negativo Bcl-2 positivo y Bcl-2 de acuerdo con la etapa IIB (
P
= 0,003). Además, se encontró que había diferencias significativas de todo-supervivencia a 5 años entre Bcl-2 positivo y negativo grupo de Bcl-2 de acuerdo con Borrmann III (
P
= 0,002); sin diferencias significativas en función del estadio II y estadio III (Figura 3).
A) No hubo diferencias significativas entre Bcl-2 + grupo y el grupo de Bcl-2 de acuerdo con Borrmann III (
P
= 0,002). B) No hubo diferencias significativas en función del estadio II. C) No hubo diferencias significativas en función del estadio III.
Discusión
La identificación de factores pronósticos en el cáncer gástrico es esencial para predecir la supervivencia de los pacientes y determinar las estrategias terapéuticas óptimas. Muchos estudios han indicado que la profundidad de la invasión y la metástasis de los ganglios linfáticos fueron los factores pronósticos más importantes en el cáncer gástrico [17], [18]. Como resultado de la variabilidad de pronóstico dentro del mismo estadio patológico de cáncer gástrico, ha habido una gran cantidad de investigaciones para marcadores biológicos específicos para identificar a los pacientes con peor pronóstico [19] - [21]. Mientras tanto, la expresión de p53, bcl-2, bax, y c-myc fueron conocidos por estar relacionada con la tumorogénesis. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue investigar si estos marcadores biológicos pueden utilizarse como factores pronósticos adicionales para el escenario tradicional TNM en el cáncer gástrico. En este estudio, la expresión de estas proteínas fue investigada en 501 casos de cáncer gástrico humano primario resecado.
Las tasas de expresión inmunohistoquímica de p53, Bcl-2, Bax, y c-myc fueron 64,9%, 22,2% , 42,9%, 58,1%, respectivamente, y estos resultados fueron consistentes con las tasas de expresión de otros estudios mencionados como 17 a 84,1%, 12,7 a 67%, 42,4-58,0%, 23,5-72,9%, respectivamente [9], [12 ], [22] - [26]. p53 juega un papel importante en la apoptosis. Se alteró más frecuentemente en el cáncer humano. proteína p53 de tipo salvaje induce la detención del crecimiento en el G1 /S fase de ciclo celular en respuesta al daño del ADN, evitando así la proliferación de las células. De tipo silenciado p53 perdido la función, y se dejó las células con el ADN dañado a proliferar. En este estudio, se encontró una correlación inversa entre p53 y el tipo histológico, lo que demuestra que la desregulación de p53 podría dar como resultado la proliferación no controlada en el cáncer gástrico. Fue coherente con un estudio anterior [22]. Fue controversia en cuanto al valor pronóstico de p53, han informado de algunos estudios que p53 se asocia con un mal pronóstico [27], [28], mientras que otros informaron que p53 no tiene ninguna influencia en el pronóstico [29], [30]. Nuestra investigación demostró que p53 no estaba relacionada con el pronóstico del cáncer gástrico. Bax actuó como un acelerador de la apoptosis en la vida de la célula. Un estudio anterior propuso que la relación de Bax a bcl-2 juega un papel crítico en la regulación de la propensión a la apoptosis [31]. En el presente estudio, la expresión de Bax se asoció con la de Bcl-2, Bax y la sobreexpresión correlacionó significativamente con algunas características clínico-patológicas tales como el sexo, el tipo histológico, el tipo Borrmann, la localización del tumor y la metástasis de los ganglios linfáticos. Se encontró que los pacientes con expresión positiva de Bax eran propensos a presentar metástasis en los ganglios linfáticos, y bax no fue un factor pronóstico independiente. Este resultado fue diferente de una investigación previa. Anagnostopoulos et al. [24] informó de que la expresión de Bax negativa en gástrica se asoció con metástasis en los ganglios linfáticos y el mal pronóstico clínico. Las razones de los resultados contradictorios no estaban claras. Era posible que las diferencias de genes entre los occidentales y orientales personas contribuyeron a este. El c-myc proto-oncogén era un regulador maestro de la proliferación celular y la transformación a través de medios de la transcripción y nontranscriptional, y fue desregulado con frecuencia en tumores malignos humanos. Ninomiya et al. [26] informó de que el exceso de reactividad a los productos de c-myc fueron más frecuentes en los cánceres invasivos que en los cánceres localizados, y la expresión de la producción de c-myc en el tejido canceroso se correlacionó bien con diseminación peritoneal, y los pacientes con expresión positiva de c-myc tenido peor pronóstico que aquellos con expresión negativa c-myc. En este estudio, no se encontró ninguna relación entre la expresión de c-myc y comportamiento invasivo y el pronóstico no sean de tipo Borrmann. Se encontró que la expresión de c-myc se asocia más con Borrmann III.
El gen bcl-2 fue descrita en primer lugar como un oncogén en el linfoma folicular. Era bien sabido para inhibir la apoptosis [32], pero algunos estudios han informado de que la sobreexpresión de Bcl-2 suprime la proliferación celular y se asoció con un comportamiento menos agresivo biológica [33], [34]. bcl-2 se ha informado en una variedad de tumores malignos epiteliales humanos, incluyendo carcinoma gástrico. Sin embargo, el papel exacto y la importancia clínica de Bcl-2 se mantuvieron no se ha dilucidado. Estudios anteriores han demostrado que la expresión de bcl-2 se asoció con un mejor pronóstico en el cáncer de pulmón de células no pequeñas y cáncer gástrico [35], [36]. Pietenpol et al. [37] informaron de que la sobreexpresión de bcl-2 inhibe el crecimiento de varias líneas celulares de tumores sólidos. Saegusa et al. [33] demostraron que la mayoría de las células bcl-2 + cáncer estaba en un estado no proliferativa, y la expresión media de Ki-67 etiquetado índice y el índice de etiquetado apoptótica en bcl-2 + focos eran significativamente más bajo que en bcl-2- focos. Aizawa et al. [36] demostraron que la expresión de bcl-2 en el cáncer gástrico avanzado se asoció con un índice apoptótico inferior y un mejor pronóstico. Todos estos estudios sugieren que la actividad proliferativa celular bcl-2 no sólo inhibe la apoptosis, sino también suprimida. En este estudio, hemos caracterizado por primera vez la expresión de bcl-2 de proteínas en pacientes con cáncer gástrico chinos. Nuestros datos muestran que Bcl-2 se correlacionó significativamente con una mejor supervivencia
.
La identificación de factores pronósticos en el cáncer gástrico es esencial para predecir la supervivencia de los pacientes y determinar las estrategias terapéuticas óptimas. Es bien sabido que la profundidad de la invasión y la presencia o ausencia de metástasis en los ganglios linfáticos fueron los factores pronósticos más importantes en el cáncer gástrico. Sin embargo, era imposible predecir con exactitud el pronóstico a través de los procedimientos de estadificación convencionales como resultado de la variabilidad de pronóstico dentro de la misma etapa del cáncer gástrico. Liu et al. [5] encontró que había diferencias significativas entre el grupo de tumores de tamaño grande y el grupo de tumores de pequeño tamaño en función del estadio IIIb y IV. Por lo tanto, era esencial para buscar los otros factores específicos para identificar subgrupos de pacientes con evolución más agresiva de la enfermedad, especialmente en la 7ª edición del sistema de estadificación TNM de la UICC. De acuerdo con la séptima clasificación UICC TNM, cada etapa de cáncer gástrico se dividió en grupo negativo bcl-2 positivo y bcl-2. Nuestros datos muestran que la expresión de Bcl-2 influyó mucho el pronóstico en el estadio IIB. Los resultados indicaron que la expresión de bcl-2 podría proporcionar información pronóstica adicional en los pacientes con cáncer gástrico.
Algunas limitaciones de este estudio deben ser reconocidos. En primer lugar, no se describió el estado de Helicobacter pylori. Como carcinógeno crucial de cáncer gástrico, Helicobacter pylori podría estar relacionado con algunos otros parámetros tales como Bcl-2. En segundo lugar, no se investigó la relación entre la recurrencia del tumor y bcl-2.
En conclusión, la expresión de bcl-2 puede servir como un indicador útil para predecir el pronóstico de pacientes con cáncer gástrico. Por lo tanto, podría ser un candidato para el sistema de estadificación además de los factores convencionales.
Apoyo a la Información sobre Table S1.
datos sin procesar en las características clínico-patológicos y evaluaciones de inmunorreactividad de 501 casos de cáncer gástrico
doi: 10.1371. /journal.pone.0029670.s001 gratis (XLS)