Extracto
Estatmina es un marcador pronóstico en muchos tipos de cáncer, incluyendo el cáncer de endometrio. Los estudios preclínicos, predominantemente en el cáncer de mama, han sugerido que la estatmina puede ser, además, un marcador predictivo de la respuesta a paclitaxel. En primer lugar, se evaluó la respuesta a paclitaxel en líneas celulares de cáncer de endometrio antes y después de stathmina knock-down. Posteriormente se determinó la respuesta clínica a la quimioterapia con paclitaxel que contiene en el cáncer de endometrio metastásico en relación con el nivel de proteína en los tumores stathmina. Estatmina nivel también se determinó en las lesiones metastásicas, analizando los cambios en el estado de biomarcadores de progresión de la enfermedad. Knock-down de stathmina mejoró la sensibilidad a paclitaxel en líneas celulares de carcinoma endometrial con tanto de forma natural mayor y menor sensibilidad a paclitaxel. En las muestras clínicas, alto nivel stathmina se demostró que se asocia con una mala respuesta a la quimioterapia y que contiene paclitaxel a las enfermedades reducción de la supervivencia específica sólo en los pacientes tratados con dicha combinación. Estatmina nivel aumentó significativamente desde la primaria hasta lesiones metastásicas. Este estudio sugiere, compatible con los datos preclínicos y clínicos, que stathmina podría ser un biomarcador predictivo de la respuesta al tratamiento con paclitaxel en el cáncer de endometrio. Re-evaluación del nivel stathmina en lesiones metastásicas antes del inicio del tratamiento pueden ser relevantes. Además, la validación de un ensayo clínico aleatorizado, será importante
Visto:. HMJ Werner, Trovik J, Halle MK, Wik E, AKSLEN LA, Birkeland E, et al. (2014) Estatmina concentraciones de proteína, un marcador predictivo Posibilidad de taxano respuesta al tratamiento en cáncer endometrial. PLoS ONE 9 (2): e90141. doi: 10.1371 /journal.pone.0090141
Editor: Rui Medeiros, IPO, Inst Puerto Oncología, Portugal
Recibido: 11 Octubre, 2013; Aceptado: January 21, 2014; Publicado: 25 Febrero 2014
Copyright: © 2014 Werner et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Helse Chaleco , Consejo de Investigación de Noruega (803100, 805797) y la Sociedad de cáncer de Noruega (Harald Andersen legat) apoyó este estudio. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:. Los autores informan de los siguientes conflictos: The University of /Universidad de Bergen Haukeland Hospital /Dana Farber Cancer Institute /Harvard a través de BTO (Bergen Teknologioverføring AS): Algunos aspectos relativos a STMN1 como marcador pronóstico y predictivo de cáncer de endometrio están sujetos a la espera de los derechos de propiedad intelectual (US 12 /962.946). Esto no altera los autores de la adhesión a las políticas de PLoS ONE en los datos y materiales de uso compartido.
Introducción
Stathmin1 (STMN1 indicado en adelante como "stathmina ') es una fosfoproteína citosólica de 18 kD, conocida para jugar un papel importante en el ciclo celular. Estatmina se expresa en todos los tejidos. Es un regulador crítico de la dinámica de los microtúbulos a través de sus propiedades de microtúbulos desestabilización, incluyendo tanto la prevención de la polimerización y la promoción activa de la despolimerización de microtúbulos [1] - [4]. La fosforilación de la estatmina en cuatro residuos de serina en el comienzo de la fase mitótica atenúa sus actividades de desestabilización, permitiendo que las células para formar un huso mitótico; desfosforilación continuación, se lleva a cabo antes de la salida de la mitosis [1], [4]. Estatmina también participa en el transporte intracelular, la motilidad celular, la polaridad, el mantenimiento de la forma celular y la regulación de la apoptosis [1].
Un biomarcador se define como una "característica que se mide y se evalúa objetivamente como un indicador de la normalidad procesos biológicos, procesos patógenos o respuestas farmacológicas a una intervención terapéutica especificado [5]. Los biomarcadores se pueden dividir en varios tipos, tales como de pronóstico; relacionado con el pronóstico de un paciente independiente del tratamiento, y los biomarcadores predictivos; que identifican subpoblaciones de pacientes que más probablemente (no) responder a un tratamiento [5]. Por lo tanto, los biomarcadores predictivos fiables son de suma importancia para un mejor tratamiento individualizado y
Estatmina está regulada positivamente en muchos cánceres sólidos, incluyendo cáncer de endometrio [1], [6] -. [14], y su regulación al alza se ha asociado con variables clínico de enfermedad agresiva como un mayor riesgo de metástasis en los ganglios linfáticos [9], [15] y la supervivencia de los pobres [6], [9], [10], [12], [13], [16], stathmins que confirman papel como biomarcador pronóstico.
Actualmente, pocos marcadores predictivos son conocidos en cánceres humanos y menos aún se aplican clínicamente. En el cáncer de endometrio marcadores predictivos clínicamente validados todavía están disponibles [17]. Ambas terapias dirigidas y agentes quimioterapéuticos convencionales son eficaces sólo en un subgrupo de pacientes [18], [19], existe por lo tanto una necesidad urgente de identificar marcadores predictivos clínicamente útiles. Ejemplos incorporados en la clínica incluyen
KRAS
estado mutacional indicando respuesta a cetuximab y panitumumab en cáncer colorrectal [18], [20], [21], ALK reordenamiento en el cáncer de pulmón de células no pequeñas predecir la respuesta a crizotinib [18], [20], [22] y HER2 /neu amplificación o sobreexpresión en cáncer de mama para la elegibilidad para el tratamiento con trastuzumab [18], [20], [23].
Los taxanos son un grupo de agentes quimioterapéuticos utilizados con frecuencia en el tratamiento del carcinoma endometrial. Los estudios preclínicos en el cáncer de mama y de próstata y el retinoblastoma [24] - [28] dan indicaciones preclínicos que stathmina puede ser un marcador predictivo de respuesta a taxanos en estos tipos de cáncer. Los altos niveles de stathmina disminuyó la sensibilidad de líneas celulares de cáncer de mama a paclitaxel y vincristina [24] y knock-down de stathmina de siRNA aumento de la sensibilidad a paclitaxel tanto de mama [25] y células de la próstata [27]. Este impacto del nivel de proteína stathmina en la respuesta al tratamiento se limitaba a los agentes anti-microtúbulos. Por desgracia, ninguno de estos estudios ha tomado este conocimiento a un siguiente nivel, la integración de los resultados con los datos clínicos. En el cáncer de endometrio en nuestro conocimiento no existen estudios preclínicos, clínicos ni, han explorado una asociación entre el nivel stathmina y la respuesta a paclitaxel que contiene la quimioterapia. En este informe, hemos demostrado en líneas celulares de carcinoma de endometrio, que la reducción de los niveles de Estatmina por Estatmina resultados knock-down en una mejor respuesta al paclitaxel. También mostramos por primera vez a lo mejor de nuestro conocimiento, que el nivel de proteína stathmina se asocia con la respuesta a paclitaxel que contiene la terapia en muestras clínicas de pacientes con carcinoma de endometrio metastásico.
Materiales y Métodos
las líneas celulares
Dos líneas celulares de cáncer de endometrio fueron seleccionados debido a la diferencia en su perfil de sensibilidad a paclitaxel; Ishikawa (Sigma, sensible) y Hec1B (American Type Culture Collection, reduce sensibles). La Enciclopedia de datos (CCLE) línea celular de cáncer confirma la diferencia en la sensibilidad [29]. Se obtuvieron las líneas en 2009 y verificación de la autenticidad de repetición en tándem corto (STR) de perfiles se llevó a cabo en 2012 [30], [31]. Las líneas celulares se mantuvieron en las condiciones recomendadas por los suministradores.
transfección celular
Las células fueron cultivadas a 50-70% de confluencia antes de la transfección mediante transducción lentiviral (Open Biosystems, GIPZ lentiviral shRNAmir) . se utilizó a una MOI 2.5 Un gen GIPZ lentiviral shRNA objetivo fijado de 3 (V3LHS_383505 V3LHS_411977;; V2LHS_62940). Un control GIPZ lentiviral shRNAmir no silenciar (BV17110_2.80 × 10 8) se utilizó como control. Las células se seleccionaron con puromicina (1 mg /ml) después de la transfección.
Medicamentos
El paclitaxel y carboplatino se adquirieron de Sigma.
experimentos línea celular
las líneas de células fueron tratados con paclitaxel en concentraciones crecientes (rango de 1 a 500 nM) durante 24 h. Como taxanos clínicamente se combinan a menudo con derivados de platino en el cáncer de endometrio, también trataron las células con una combinación de paclitaxel (en concentraciones crecientes (rango de 1 a 500 nM) y carboplatino (concentración fija, 200 mM) durante 24 h para observar cualquier tratamiento sinérgico . efectos células fueron posteriormente o bien se fijaron en 2% de formaldehído durante la evaluación microscópica de la apoptosis, que se utiliza en un ensayo de proliferación (MTS) o transformados para inmunotransferencia Los experimentos se realizaron al menos por triplicado
para la evaluación de la apoptosis, en.. menos 150 células se contaron en tres áreas diferentes en placas de 96 pocillos. Para los ensayos de proliferación, los experimentos se realizaron por triplicado en placas de 96 pocillos. Los ensayos se realizaron con CellTiter 96® AQ
Una solución ueous Ensayo de proliferación celular (Promega) siguiendo las instrucciones del fabricante. la absorbancia se registró a 490 nm usando un lector de placas de ELISA (Tecan Magellan Sunrise).
se realizaron inmunotransferencias de acuerdo con un protocolo estándar. En resumen, las células fueron cultivadas y tratadas en placas de 6 pocillos y se recogieron en tampón de lisis a las 24 h del tratamiento con paclitaxel. Las proteínas (25 ug) se separaron por SDS /PAGE y se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa (Biorad, Noruega). Estatmina y /o (escindido) PARP se detectaron usando PARP escindida (Asp214) (D64E10) (# 5625Cell Signaling), diluido 1:1000 y estatmina (# 3352, Cell Signaling), diluido 1:1000; β-actina sirvió como control de carga (anticuerpo anti β-actina (AC-15) (ab6276) AbCam), se diluyó 1:10000. Se utilizaron fosfatasa alcalina anticuerpos secundarios conjugados (anti-IgG de conejo (Sigma Aldrich A3687): anti-IgG de ratón (Sigma Aldrich A3562)). y el sustrato de quimioluminiscencia (Lumiphos 34150 WB, Thermo Scientific) para la detección
serie de pacientes
Los pacientes diagnosticados y tratados de cáncer de endometrio en el hospital Universitario de Haukeland, Bergen, Noruega, están después de firmar el consentimiento informado, prospectiva y consecutiva incluidos en una base de datos (ajuste basado en la población) a partir de 2001, evitando el sesgo de selección y la garantía la recopilación de datos óptima para todos los pacientes, como se informó anteriormente [14]. Sin embargo los pacientes han sido tratados siguiendo las directrices de rutina y las muestras clínicas investigadas por lo tanto, consistirá en archivo de tejidos recogidos de forma prospectiva. clinicopathological datos recogidos incluyen, entre otros, FIGO 2009 etapa, subtipo histológico, grado, tratamiento primario y adyuvante, y el seguimiento incluido el tratamiento de la enfermedad metastásica. Para el propósito de este estudio, los pacientes que recibieron paclitaxel que contiene la quimioterapia (como una rutina en nuestro hospital una combinación de paclitaxel y carboplatino) después del tratamiento quirúrgico, ya sea para la enfermedad residual o metástasis antes de abril de 2011, se estudiaron para la respuesta de tratamiento de acuerdo con los criterios RECIST [ ,,,0],32], con la última entrada de seguimiento de julio de 2013. de un total de 607 pacientes en la base de datos, de los cuales 121 tenían sistémica es decir, la enfermedad residual o recurrente, 57 tenían datos de respuesta de acuerdo con los criterios RECIST disponibles; 33 de los cuales fueron tratados con paclitaxel que contiene la quimioterapia. Definimos buena respuesta como respuesta completa o parcial (criterios RECIST), y la mala respuesta como la enfermedad estática o progresión de la enfermedad (criterios RECIST). Además nos fijamos en la supervivencia específica de la enfermedad en relación con el nivel stathmina para todos los pacientes con cáncer de endometrio y específicamente para los pacientes tratados para la enfermedad metastásica. El tiempo medio de seguimiento en nuestra cohorte fue de 34 meses (rango 0-105 meses).
microarrays de tejidos (TMA) construcción
TMA se generaron como se ha descrito anteriormente y validado en varios estudios [33 ]. El área de mayor agresividad del tumor fue identificado en todas las diapositivas hematoxilina /eosina para asegurar la representatividad tumor y tres (tumor primario) o cilindros de tejido de un (metástasis) (0,6 mm de diámetro cada uno) fueron montadas en un bloque receptor usando un instrumento de precisión por encargo ( instrumentos Beecher, de silver Spring, MD, EE.UU.). Formol fija parafina embebido (FFPE) los tejidos del tumor primario estaba disponible en las TMA de 603 pacientes para la evaluación del nivel de stathmina. De 77 pacientes con metástasis, el tejido metastásico adicional estaba disponible en TMA para la investigación de nivel stathmina en comparación con el tumor primario correspondiente. Demasiado pocos casos tenían lesiones metastásicas evaluables adicionales, que se obtiene antes de la paclitaxel que contiene la quimioterapia, para la evaluación de nivel stathmina, con datos de respuesta disponible de acuerdo con los criterios de RECIST y un perfil de tratamiento previo similar (n = 3) para permitir los análisis estadísticos significativos de respuesta en relación con el estado de biomarcadores en las lesiones metastásicas.
la inmunohistoquímica
5 micras TMA secciones gruesas se dewaxed con xileno /etanol. La recuperación del antígeno hecho por microondas en TRS pH 6 (S1699 Dako Target Retrieval Solution) durante 20 minutos. Los portaobjetos se bloquearon para la peroxidasa (Dako S2023) durante 8 minutos y se incubó durante 60 minutos con estatmina (Cell Signaling#3352), diluido 1:50. EnVision + sistema, se usó anticuerpo secundario HRP (Dako K4011), seguido de DAB + cromógeno (DAKO K4011) como sistema de detección. Las diapositivas se counterstained con hematoxilina (Dako, S2020).
La tinción de evaluación
Cegado por las características del paciente y los resultados, las diapositivas se anotó por dos autores (JT) y HMJW utilizando microscopía de luz estándar como se describió anteriormente [34], [35]. El valor kappa, como una medida de la reproducibilidad, fue de 0,73 en un conjunto independiente de 68 portaobjetos obtenidos individualmente por HMJW y JT. Alto nivel de proteína se define como el cuartil superior, la puntuación de 9, de acuerdo con publicaciones anteriores [15]. En caso de múltiples metástasis con variación en el nivel stathmina, la lesión con más alto nivel define la puntuación final de las lesiones metastásicas.
Estadísticas
Los análisis estadísticos se realizaron utilizando PASW18 Estadísticas (Análisis Predictivo software, SPSS inc. de Chicago, EE.UU.). Las variables categóricas se evaluaron utilizando la prueba de χ2-Pearson o exacto de Fisher cuando proceda. Los valores de p de dos caras de & lt; 0,05 se consideró significativo. El análisis univariado de tiempo de tratamiento primario hasta la muerte por carcinoma de endometrio (la supervivencia específica de la enfermedad) se llevaron a cabo utilizando el método de Kaplan-Meier. El método de riesgos proporcionales de Cox se utilizó para el análisis de supervivencia multivariante (hipótesis de proporcionalidad comprobó mediante representación log menos log).
Declaración de Ética
consentimiento
Todos los pacientes han firmado informado antes de su inclusión en el estudio. El estudio ha sido aprobado por el noruego Inspección de Datos (961478-2), las Ciencias Sociales Servicios de datos de Noruega (15501) y la Junta de Revisión Institucional local (Comités Regionales de Medicina y Salud Ética de la Investigación; REKIII nr 052,01)
resultados
Respuesta a paclitaxel en líneas celulares de cáncer de endometrio
La respuesta al paclitaxel varía entre las líneas celulares de cáncer de endometrio [29], [36], [37]. Mostramos Ishikawa células son sensibles a tratamiento con paclitaxel con un alto porcentaje de células apoptóticas después de 24 h de tratamiento (recuento microscópico y ensayo de proliferación) en oposición a las células Hec1B (Fig. 1A y 1B). El tratamiento de combinación de carboplatino y paclitaxel no dio como resultado el efecto del tratamiento sinérgico (no mostrado)
A:. evaluación microscópica de la apoptosis en Ishikawa y células de tipo salvaje Hec1B después del tratamiento con paclitaxel en las siguientes dosis: 0 nM, 5 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM, 250 nM y 500 nM. Los resultados son representativos de 5 experimentos independientes. Los errores estándar de la media se indican. la actividad metabólica celular evaluada con un ensayo de proliferación (MTS, Promega) en las células de tipo salvaje Ishikawa y Hec1B después del tratamiento con paclitaxel en las siguientes dosis:: B 0 nM, 1 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM, 250 nM y 500 nM. Los resultados son representativos de 3 (Ishikawa) y 2 (Hec1B) experimentos independientes.
Estatmina knock-down por transfección viral
La microscopia de fluorescencia mostraron una tasa de transfección de 70-80% en el inicio de los experimentos, con notable reducción de los niveles estatmina en las líneas de células knock-down estatmina en comparación con las líneas de células de tipo salvaje (figura 2a y 3a.) de control de knock-down y
a:. inmunotransferencia después de la transfección células con un lentiviral stathmina shRNAmir ( 'kd STMN') o un control no silenciar ( "no sil '), así como la línea celular parental (de tipo salvaje;' WT '). Las transferencias se tiñeron para stathmina, y β-actina de control de carga. B: Ishikawa línea celular de tipo salvaje, no silenciamiento y stathmina ronda abajo después del tratamiento con paclitaxel durante 24 h en las siguientes dosis: 0 nM, 5 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM, 250 nM y 500 nM. El nivel de fragmentación de las células se indica en una pieza de inserción, como un proxy de la progresión en el proceso de apoptosis. Los diamantes; De tipo salvaje, triángulos; no silenciamiento y cruces; Estatmina células knock-down. C: inmunotransferencia de Ishikawa de tipo silvestre, control (no silenciamiento) y líneas de células knock-down Estatmina después del tratamiento con paclitaxel durante 24 h en las siguientes dosis: 0 nM, 100 nM y 250 nM. La transferencia se tiñó de PARP escindida y stathmina, con β-actina que sirve como control de carga. D: Izquierda: Ishikawa de tipo silvestre ( "WT") y la línea celular de la derecha: Ishikawa stathmina knock-down ( 'STMN kd') línea celular. Imágenes microscópicas de células después del tratamiento durante 24 h con 0 nM (fila superior) o 500 nM (fila inferior) paclitaxel también demuestra una mayor tasa de fragmentación de las células Estatmina knock-down de Ishikawa (panel inferior derecho) en comparación con el de tipo salvaje (parte inferior izquierda panel)
a:. inmunotransferencia después de la transfección de las células con un lentiviral stathmina shRNAmir ( 'STMN kd') o un control no silenciar ( "no sil '), así como la línea celular parental (silvestre de tipo; "WT"). Las transferencias se tiñeron para stathmina, y β-actina de control de carga. B: línea de células de tipo salvaje Hec1B, no silenciamiento y stathmina knock-down líneas, después del tratamiento con paclitaxel durante 24 horas en las siguientes dosis: 0 nm, 5 nm, 10 nm, 50 nm, 100 nm, 250 nm y 500 Nuevo Méjico. C: Izquierda: Hec1B de tipo silvestre ( "WT") y la línea celular de la derecha: Hec1B stathmina knock-down ( 'STMN kd') línea celular. Mostrando imágenes microscópicas de células después del tratamiento durante 24 h con 0 nM (fila superior) o 500 nM (fila inferior) demostrando paclitaxel aumentó la muerte celular de las células Estatmina knock-down Hec1B (panel inferior derecho) en comparación con Hec1B de tipo salvaje (izquierda panel inferior).
En ambos estatmina líneas de células knock-down (Ishikawa y Hec1B), se observó una mejor respuesta al tratamiento con paclitaxel (Fig. 2b y 3b). Hec1B células muestran un aumento de la tasa de apoptosis estadísticamente significativa después de stathmina knock-down. Posiblemente debido a la intrínseca mayor sensibilidad a paclitaxel en células Ishikawa, knock-down no dio lugar a un gran aumento similar en la muerte celular. Sin embargo, se observó una tasa de fragmentación claramente aumentado en las células Ishikawa knock-down Estatmina tratada que se oponen a las células de control, que pueden considerarse como una señal de una mayor activación de la vía apoptótica (inserte Fig. 2b). El uso de inmunoblot, probamos para validar aún más esta activación de la vía de escisión de PARP demostrando apoptótica mejorada a una concentración de paclitaxel inferior para Ishikawa después stathmina knock-down en comparación con los controles (Fig. 2c). imágenes microscópicas de Ishikawa y Hec1B de tipo salvaje y Estatmina células knock-down después de 24 h del tratamiento con paclitaxel con 0 nM (control) y 500 nm se muestran en las figuras 2d y 3c. Hemos probado el efecto de stathmina knock-down de la sensibilidad a la monoterapia con carboplatino y paclitaxel tratamiento combinatorio-carboplatino sin observar aumento de la sensibilidad o efectos sinérgicos (no se muestra).
Alto nivel de stathmina predice una mala respuesta al paclitaxel en muestras clínicas
a continuación se investigó muestras tumorales del paciente para ver si se podía observar una asociación similar entre el nivel stathmina y la respuesta al tratamiento. tinción Estatmina era predominantemente citoplasmática, como se informa en la literatura [15], [38]. imágenes representativas de inmunohistoquímica con débil (normal) y fuerte tinción (alto) stathmina se muestran en la Figura 4a. Excluyendo los pacientes metastásicos que recibieron tratamiento anti-hormonal solamente, los pacientes con enfermedad metastásica que recibieron paclitaxel que contiene la quimioterapia habían características clínico-patológicos similares a los de los pacientes tratados de manera diferente. La inclusión de los pacientes tratados con fármacos anti-hormonales solamente, los pacientes ancianos frágiles en su mayor parte, las características clínico-patológicas todavía se mantuvo similar, excepto que este subgrupo fue significativamente mayor (Tabla 1). Los pacientes con niveles normales stathmina respondieron claramente mucho mejor (criterios RECIST) para el tratamiento de pacientes con nivel stathmina alta (Fig. 4b). nivel Estatmina no predijo la respuesta a otros regímenes de quimioterapia o modalidades de tratamiento
A:. Imágenes representativas de débil tinción inmunohistoquímica stathmina (arriba) y fuerte (alta o patológica) tinción stathmina (abajo) en el carcinoma de endometrio. Bares (esquina inferior derecha) medida 40 micras. B: La respuesta clínica al paclitaxel para todos los pacientes de carcinoma endometrial con enfermedad evaluable de acuerdo con los criterios RECIST y separados de lo normal frente al nivel de alta stathmina. mala respuesta (RECIST: enfermedad estática o progresión de la enfermedad) se indica en azul, buena respuesta (RECIST: respuesta completa o parcial) se indica en rojo. C:. La comparación de alto nivel de proteínas (patológica) stathmina en las lesiones primarios y metastásicos
Al acercarse desde un ángulo diferente, en general, los pacientes con alto nivel de stathmina mostraron una supervivencia específica de la enfermedad reducida, en consonancia con la función stathmins como un biomarcador pronóstico (Fig. 5a). Sin embargo, dentro del subgrupo de pacientes con enfermedad metastásica tratados con paclitaxel que contiene la quimioterapia, la supervivencia específica de la enfermedad fue significativamente más pobre en los pacientes con alta en comparación con la estatmina normal (p = 0,03, Fig. 5b). En los pacientes que recibieron otros tratamientos para la enfermedad metastásica, el pronóstico no estaba relacionado con el nivel stathmina (p = 0,76, Fig. 5c. Para descartar la confusión por variables de pronóstico clínico-patológicos importantes conocidos, se realizó un análisis multivariado de la supervivencia para los dos subgrupos que estudie el efecto de nivel stathmina en la supervivencia después del tratamiento para la enfermedad metastásica, corregida por la FIGO linfoma y el tipo histológico. estatmina nivel de proteínas sigue siendo un predictor independiente de la supervivencia específica de la enfermedad en el subgrupo de pacientes que recibieron paclitaxel que contiene la quimioterapia (n = 38, HR 2.3, IC 1.1 -5.2), ajustado por la FIGO etapa y el subtipo histológico, pero no en el subgrupo que recibió otros tratamientos (n = 43, HR 1,1, IC 0,4-2,7)
a:. Todos los pacientes con datos completos (n = . 476) Número de eventos específicos de la enfermedad entre corchetes. B: Todos los pacientes con enfermedad metastásica que recibieron tratamiento con paclitaxel (n = 38) Número de eventos específicos de la enfermedad entre corchetes C:.. Todos los pacientes con enfermedad metastásica que recibieron diferentes tratamientos (n = 43). Número de eventos específicos de la enfermedad entre paréntesis.
Estado del biomarcador discordante en las lesiones primarios y metastásicos
El porcentaje de pacientes con alto nivel de stathmina fue significativamente mayor en las metástasis en comparación con las lesiones primarias con patológica niveles (alto) observaron en el 18% de estos últimos (n = 84 de 477 lesiones primarias con tinción stathmina disponible) en comparación con el 37% en metastásico muestras (n = 29 de 79) (Fig. 4c).
en las muestras pareadas-metástasis primaria, el 35% de las lesiones metastásicas mostraron alto nivel de stathmina. Se observó una discordancia del 26% entre las lesiones metastásicas y sus primarias. En el 16% se produjo un cambio de alto nivel en las metástasis y en el 10% a nivel normal.
Discusión
Estatmina nivel de proteína se ha demostrado que es un marcador pronóstico de la enfermedad agresiva en muchos tipos de cáncer , incluyendo el cáncer de endometrio, donde el nivel de alta stathmina en el tumor primario identifica a los pacientes con alto riesgo de enfermedades y de los ganglios linfáticos metástasis recurrentes [6], [9], [10], [12], [13], [15], [16 ]. La identificación y el desarrollo de biomarcadores predictivos son de capital importancia para aumentar la eficacia del tratamiento y reducir los efectos secundarios innecesarios, no sólo en terapias dirigidas, sino también en los regímenes quimioterapéuticos, como para las dos cosas que sólo una subpoblación responderá bien, sobre todo en el tratamiento del cáncer metastásico, pero, actualmente con herramientas muy limitadas disponibles para predecir estos pacientes [39], [40]. Ninguno de los factores clínico-patológicos importantes, como la etapa FIGO o subtipo histológico, se conocen actualmente para ayudar a distinguir los posibles respondedores de los no respondedores a paclitaxel que contiene la quimioterapia en enfermedad metastásica. El estudio de las grandes series de base poblacional con la anotación clínica de alta calidad, como nuestra serie, combinado con experimentos preclínicos son una herramienta útil y eficiente en el tiempo para explorar potenciales biomarcadores predictivos, que posteriormente pueden ser probados en ensayos clínicos
.
con la política anterior
in vitro
resultados en el cáncer de mama, se muestran en líneas celulares de cáncer de endometrio que, independientemente del nivel de stathmina original, sensibilidad a paclitaxel aumentó y con ello expedita la apoptosis después de éxito stathmina knock-down. Esto se demostró mediante recuento microscópico directo y en células de Ishikawa también justificados por inmunotransferencia se centra en la escisión de PARP. la escisión de PARP es un indicador establecido de apoptosis, distinguiéndola de otros mecanismos de muerte celular, tales como necrosis. La formación de cuerpos apoptóticos aumento observado por microscopía en las líneas de células knock-down Estatmina encaja con aumento de la apoptosis [41], [42].
En nuestra recogida prospectiva, de forma retrospectiva analiza series de pacientes, sino que también demostró una notable diferencia en respuesta a paclitaxel que contiene la quimioterapia comparando pacientes con normal a las personas con alto nivel de stathmina, también cuando la corrección de las variables de pronóstico clínico-patológicos más importantes. Incluso cuando se explora una gran serie, tales clínico con pacientes con cáncer de endometrio como el nuestro, recogidos durante más de 10 años, con un seguimiento adecuado y RECIST [32] Documentación compatible de la respuesta, en última instancia, sólo un número pequeño de pacientes habían sido tratados con el tratamiento de interés, lo que subraya la dificultad de recoger serie con el número de pacientes adecuados para los estudios con marcadores específicos; pero al mismo tiempo la importancia de explotar estas grandes series de base poblacional recogida prospectiva de biomarcadores predictivos sugeridas en estudios preclínicos, y explorar el potencial validez clínica antes de la fase de ensayo clínico. La correlación estadísticamente significativa entre el nivel alto stathmina y la mala respuesta de paclitaxel de acuerdo con los criterios RECIST en muestras clínicas y el hecho de que el nivel stathmina tiene un valor pronóstico independiente en pacientes que recibieron paclitaxel para la enfermedad metastásica, no está presente en los pacientes que no lo hacen, en los análisis de supervivencia, apoya la probabilidad de que el nivel de nivel stathmina puede actuar no sólo como un marcador de pronóstico, sino también como un marcador predictivo de la respuesta al tratamiento paclitaxel en los carcinomas endometriales
.
a diferencia de estudios anteriores que miran stathmina como un marcador predictivo potencial, predominantemente en
in vitro
estudios de cáncer de mama, en este estudio hemos sido capaces de probar y confirmar la asociación en muestras clínicas de los pacientes tratados con el fármaco de interés; utilizando datos de una serie de pacientes recogidos prospectivamente bien anotado. Tanto el soporte de los ensayos preclínicos y clínicos que la sensibilidad a las influencias de nivel stathmina al paclitaxel. Hemos explorado y excluidos que este efecto se puede generalizar a otros agentes quimioterapéuticos, tales como carboplatino, también se utilizan con frecuencia en el cáncer de endometrio.
recomendaciones informe para los estudios de pronóstico directrices de marcadores tumorales (Observación) se han desarrollado con el objetivo de mejorar la calidad metodológica y la transparencia de informes en este tipo de estudios [43]. El presente estudio ha sido realizado de acuerdo con estas directrices para mejorar la calidad y la validez general de sus resultados.
Los taxanos, originalmente aislado de la corteza del árbol de tejo, pertenecen a la familia de agentes quimioterapéuticos anti-microtúbulos , con paclitaxel como su prototipo. En pocas palabras, los taxanos se unen a ß-tubulina, haciendo que los microtúbulos para resistir la despolimerización, la inhibición de la progresión del ciclo celular y la promoción de detención de la mitosis y la muerte celular [44]. El carboplatino, en contraste, es uno de los agentes a base de platino, interactuando con el ADN e interfiriendo con la reparación del ADN. Como stathmina es un regulador crítico de la dinámica de los microtúbulos, tenido en cuenta el modo de acción de los fármacos, el efecto positivo de la estatmina knock-abajo en respuesta paclitaxel y la ausencia de sensibilidad a carboplatino, también es biológicamente plausible.
Nos muestran una mayor proporción de alto nivel en stathmina metastásico (37%) en comparación con las lesiones primarias (18%). Discrepancia en el estado stathmina se observó en un cuarto de muestras pareadas, en paralelo, por ejemplo, en las conclusiones cáncer de mama, donde se muestran las discrepancias entre las lesiones primarias y metastásicas en 14-55% y 0-40% para los receptores de hormonas y HER2, respectivamente [45] - [47]. En el cáncer de endometrio, pocos estudios se discuten las diferencias en el estado de marcador de lesiones entre primarios y metastásicos [38], [48], [49]. la heterogeneidad intratumoral está bien descrito en el cáncer y un posible factor de confusión en muchos estudios, con independencia de la utilización de las diapositivas de tejido completo o TMA. la variación entre observadores es poco probable que sea la única explicación para estas diferencias descritas. Además, un estado de la evaluación de estudio reciente mutación, un método considerado menos subjetiva que la puntuación inmunohistoquímica, en múltiples lesiones metastásicas de un paciente con carcinoma de células renales, el apoyo que detecta cambios de biomarcadores de primaria a lesiones metastásicas son reales y puede estar relacionado con y relevante para la progresión del tumor [39]. Los cambios en el estado de biomarcadores de primaria a lesiones metastásicas apoyan la necesidad de repetidas biopsias de lesiones metastásicas, a relacionarse mejor respuesta a la terapia de potenciales biomarcadores predictivos, sino también a sólo ofrecen terapias con efecto positivo probable cuando biomarcadores predictivos están disponibles [47], [50 ], [51]. Para el cáncer de mama, la American Society of Clinical Oncology (ASCO) aconsejó en 2007 que ya para el estado de receptores hormonales, la prueba se debe considerar que se repita en la enfermedad metastásica si los resultados eran de influir en el manejo del paciente [52].
Conclusión
Estos resultados, incluyendo los datos preclínicos y por primera vez los datos a partir de muestras clínicas, apoyar stathmina que puede ser un biomarcador predictivo de la respuesta al tratamiento con paclitaxel en el cáncer de endometrio. Sin embargo, se necesitan estudios confirmatorios, idealmente a partir de ensayos clínicos aleatorios. La discordancia de biomarcadores de la progresión del tumor está en línea con otros estudios sobre la heterogeneidad de biomarcadores tumorales y apoya la necesidad de una biopsia repetida en la enfermedad metastásica.
Reconocimientos
Britt Edvardsen, Ellen Valen, Gerd Lillian Hallseth,