Extracto
Una proteína aislada de la corteza de los
Crataeva tapia gratis (CrataBL) es a la vez un inhibidor de proteasa vegetal de tipo Kunitz y una lectina. Hemos determinado la secuencia de aminoácidos y la estructura tridimensional de CrataBL, así como caracterizado sus propiedades bioquímicas y biológicas seleccionadas. Encontramos dos isoformas diferentes de CrataBL aislados de la fuente original, que difieren en las posiciones 31 (Pro /Leu); 92 (Ser /Leu); 93 (Ile /Thr); 95 (Arg /Gly) y 97 (Leu /Ser). CrataBL mostró actividad inhibidora relativamente débil contra la tripsina (K
IAPP = 43 mM) y fue más potente contra el Factor Xa (K
IAPP = 8,6 M), pero no era activo contra una serie de otras proteasas. Hemos confirmado que CrataBL contiene dos sitios de glicosilación y forma un dímero en una concentración elevada. Las estructuras cristalinas de alta resolución de dos formas cristalinas diferentes de la isoforma II verifican el pliegue β-trébol de CrataBL y han demostrado la presencia de dímeros que consisten en dos moléculas casi idénticas haciendo amplios contactos (~645 Å
2). La estructura se diferencia de las de las proteínas más estrechamente relacionadas por la falta de la N-terminal β-horquilla. En experimentos destinados a investigar las propiedades biológicas de CrataBL, hemos demostrado que la adición de 40 mM de la proteína durante 48 h causó la inhibición del crecimiento máximo en el ensayo de MTT (47% de las células DU145 y 43% de las células PC3). La apoptosis de DU145 y PC3 líneas celulares se confirmó mediante citometría de flujo utilizando anexina V FITC y yoduro de propidio tinción /. El tratamiento con CrataBL dio como resultado la liberación de citocromo mitocondrial
c
y en la activación de la caspasa-3 en las células DU145 y PC3
Visto:. Ferreira RDS, Zhou D, Ferreira JG, Silva MCC , Silva-Lucca RA, Mentele R, et al. (2013) Estructura cristalina de
Crataeva tapia
Corteza de proteínas (CrataBL) y su efecto en líneas celulares de cáncer de próstata humano. PLoS ONE 8 (6): e64426. doi: 10.1371 /journal.pone.0064426
Editor: Enrique Pérez-Payá, Centro de Investigación Príncipe Felipe y IBV-CSIC, España