Extracto
Introducción
Los microARN (miRNA) juegan un papel importante en la regulación de procesos biológicos a nivel post-transcripcional. La desregulación de miRNAs se ha observado en el cáncer, y miRNAs están siendo investigados como posibles marcadores biológicos con respecto al diagnóstico, pronóstico y predicción en el manejo del cáncer. reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR) se utiliza habitualmente, cuando se mide la expresión de los genes miARN. la normalización adecuada de los datos de RT-qPCR es importante para asegurar resultados confiables. El objetivo del presente estudio fue identificar miRNAs expresados de forma estable aplicables como candidatos Normaliser en futuros estudios de expresión de miARN en el cáncer de recto.
Materiales y Métodos
Se realizó alto rendimiento de perfiles de miARN (OpenArray ®) en diez pares de tejido de cáncer de recto disecados micro-láser y estroma adyacente. Se aplicó una estrategia de expresión normalización media global para identificar los miRNAs expresados de forma estable durante la mayor parte posterior validación. En el primer experimento de validación, un panel de miRNAs se analizaron en 25 pares de micro diseccionados tejido de cáncer rectal y estroma adyacente. Posteriormente, los mismos miRNAs se analizaron en 28 pares de tejido de cáncer rectal y mucosa rectal normal.
Resultados
A partir del experimento de perfiles de miARN, MIR-645, miR-193a-5p, miR 27a y let-7 g fueron identificados como de manera estable expresan, tanto en el tejido maligno y del estroma. Además, confirmó NormFinder estabilidad de la expresión alta de las cuatro miRNAs. En los experimentos de validación basados RT-qPCR, no hubo diferencia significativa entre el tumor y el estroma /se detectó la mucosa rectal normal para la media de los candidatos Normaliser miR-27a, miR-193a-5p y let-7 g (primera validación
P
= 0,801, segundo validación
P = 0,321
). MiR-645 se excluyó del análisis de los datos, ya que no fue detectado en 35 de 50 muestras (primera validación) y en 24 de 56 muestras (segunda validación), respectivamente. No se observó diferencia significativa en el nivel de expresión de RNU6B entre el tumor y el estroma adyacente (primera validación), y entre el tumor y la mucosa rectal normal (segunda validación).
Conclusión
Recomendamos la expresión de la media miR-27a, miR-193a-5p y let-7 g como factor de normalización, al realizar los análisis de los genes miARN expresión por RT-qPCR en el tejido del cáncer rectal
Visto:. Eriksen AHM, Andersen RF, Pallisgaard N, Sørensen FB , Jakobsen a, Hansen TF (2016) Expresión Perfiles de microARN identificar y validar los genes de referencia para la cuantificación relativa de microARN en el cáncer rectal. PLoS ONE 11 (3): e0150593. doi: 10.1371 /journal.pone.0150593
Editor: Partha Mukhopadhyay, National Institutes of Health, Estados Unidos