Extracto
Antecedentes
CHL1
gen (también conocido como
LLAMADA
) en 3p26.3 codifica una sola pasada celular transmembrana molécula de adhesión (CAM). Anteriormente CAM de este tipo, incluyendo L1, se mostró a estar involucrados en el crecimiento del cáncer y la metástasis.
Metodología /Principales conclusiones
Se utilizó Clontech cáncer de perfiles matrices (19 diferentes tipos de cánceres, 395 muestras) para analizar la expresión de la
CHL1
gen. Los resultados fueron validados por RT-qPCR de mama, renal y cáncer de pulmón. Cáncer de perfiles Arrays reveló la expresión diferencial del gen: la regulación por disminución /amortiguación en la mayoría de los tumores primarios y la regulación asociada con el crecimiento invasivo /metastático. Frequent baja regulación (& gt; 40% de los casos) se detectó en 11 tipos de cáncer (de mama, riñón, recto, colon, tiroides, estómago, piel, intestino delgado, vejiga, vulva y cáncer de páncreas) y frecuente sobre regulación ( & gt; 40% de los casos) - en 5 tipos (pulmón, ovario, útero, hígado y tráquea) de cáncer. El uso de PCR en tiempo real cuantitativa (RT-qPCR) se encontró que
CHL1
expresión se redujo en 61% de cáncer de mama, el 60% de pulmón, el 87% de células claras y el 89% papilares especímenes de cáncer renal (
P
& lt; 0,03 para todos los casos). Hubo una mayor frecuencia de
CHL1
mRNA disminución de pulmón carcinoma de células escamosas en comparación con adenocarcinoma (81% vs. 38%,
P
= 0,02), sin asociación con la progresión tumoral.
Conclusiones /Importancia
Nuestros resultados sugieren que
CHL1
está implicado en el desarrollo de diferentes cánceres humanos. Inicialmente, durante el crecimiento del tumor primario
CHL1
podría actuar como un supresor tumoral putativo y se silencia para facilitar
In situ el crecimiento tumoral
para 11 tipos de cáncer. También sugerimos que la re-expresión del gen en el borde de la masa del tumor podría promover el crecimiento invasivo local y permitir una mayor propagación metastásica en cáncer de mama ovario, colon y. Nuestros datos también apoyan el papel de
CHL1
como potencialmente nuevo marcador biológico específico en la patogénesis precoz de los dos principales tipos histológicos de cáncer renal
Visto:. Senchenko VN, Krasnov GS, Dmitriev AA, Kudryavtseva AV, Anedchenko EA, Braga EA, et al. (2011) Expresión diferencial de CHL1 génica durante el desarrollo de los principales tipos de cáncer humanos. PLoS ONE 6 (3): e15612. doi: 10.1371 /journal.pone.0015612
Editor: Chad Creighton, Baylor College of Medicine, Estados Unidos de América
Recibido: 11 Agosto, 2010; Aceptado: 17 Noviembre 2010; Publicado: 7 Marzo 2011
Derechos de Autor © 2011 Senchenko et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por becas 08-04-01577 y 10-04-01213 de la Fundación rusa para la Investigación básica; Estado Contratos 02.740.11.5227 y 16.740.11.0173 con el Ministerio de Educación y Ciencia de Rusia; subvenciones de la Sociedad Sueca del Cáncer, el Consejo Sueco de Investigación, el Instituto Karolinska de Suecia y el Instituto Nacional del Cáncer y el Instituto, Centro para la Investigación del Cáncer, Programa de Investigación Intramural del Instituto Nacional del Cáncer. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
genes asociados con el cáncer se dividen en dos categorías principales: los genes causantes de cáncer que impulsan la transformación maligna y mantienen el crecimiento de tumores y genes de progresión del cáncer que orquestan la invasión local y la propagación de las células metastásicas y el crecimiento de metástasis a distancia [1 ], [2], [3]. El
CHL1
gen - estrecha homólogo de L1, también conocido como
LLAMADA CD - adhesión celular L1-como (número de acceso GenBank NM_006614.2) codifica un excelente pase con la adhesión celular transmembrana molécula (CAM), capaz de tanto homotípica y heterotípicos unión. La proteína codificada por este gen es un miembro de la familia de genes L1 de moléculas de adhesión de células neurales. Se trata de una molécula de reconocimiento de los nervios que pueden estar involucrados en las vías de transducción de señales.
CHL1
se expresa en los tejidos normales además de el cerebro y se expresa en una variedad de líneas celulares de cáncer humano y tejidos de tumor primario [4], [5]. También se demostró que el gen está implicado en actividades cognitivas generales (g /IQ) [6], [7] y algunas enfermedades neurológicas (es decir, la esquizofrenia [8]). La supresión de una copia de este gen puede ser responsable de defectos mentales en pacientes con síndrome 3p-. Recientemente se muestran varias CAMs incluyendo L1 de participar en el crecimiento del cáncer y la metástasis [9], [10].
CHL1
está situado en 3p26, una región que se muestra a albergar un candidato para la susceptibilidad al cáncer de próstata en familias con cáncer de próstata finlandeses, aunque no se detectaron mutaciones en la parte de codificación del gen [11]. Por lo tanto, estos informes sugieren que
CHL1
juega un papel en el desarrollo del cáncer [12], no sólo en las actividades neuronales. Anteriormente, en colaboración con el Dr. Helen S. Smith, se realizó un mapeo de deleción del brazo corto del cromosoma 3 en un panel de cánceres de mama y delineamos tres regiones que albergan los genes supresores de tumor de cáncer de mama candidato (TSG), a saber, 3p24- 26, 3p21-22 y 3p12-13 [13], [14], [15], [16]. A continuación, hemos clonado el
CHL1 (CALL)
gen en 1997/1998 y se analizó su expresión en el desarrollo del ratón y realizado un extenso análisis de la bioinformática [5].
A continuación, le ofrecemos un estudio exhaustivo de
CHL1
expresión del ARNm utilizando dos métodos. El análisis cualitativo se realizó utilizando Clontech cáncer de perfiles de matrices, y la PCR cuantitativa (RT-qPCR) se empleó más tiempo real para la validación de los datos de microarrays para los tres principales tipos de cáncer: cáncer no microcítico de pulmón no microcítico (CPNM), cáncer de mama (BC) y carcinomas de células renales (RCC). Nuestros resultados sugieren un papel dual de la
CHL1
en la tumorigénesis: puede contribuir al crecimiento del tumor inicial y luego a la progresión tumoral y finalmente se extendió /metástasis. Los datos apoyan aún más el papel de los
CHL1
como potencialmente nuevo marcador biológico específico en la patogénesis precoz de los dos principales tipos histológicos de cáncer renal.
El trabajo está dedicado a la memoria del Dr. Helen S. Smith.
resultados
in silico
análisis de la expresión CHL1 en tejidos normales y tumorales
Las grandes bases de datos de expresión pública permiten detectar y cuantificar la expresión de la mayoría, si no todos los genes conocidos RefSeq (~20,000) en los tejidos normales y tumorales. Utilizamos varios servidores basados en la web públicos para analizar ratón y humanos
CHL1
expresión [17], [18], [19], [20]. Los datos muestran que
CHL1
se expresa en muchos tejidos adultos y fetales normales, además del cerebro y el sistema nervioso periférico [17], [19]. La expresión variable se observó en muchos tumores; fue especialmente alta en una línea celular de melanoma G361. De acuerdo con Oncomine [18] los datos preliminares basados en el análisis de microarrays, el
CHL1
expresión también varía en varios de los principales tipos de cáncer - renal [21], [22], de cuello uterino [23], de colon [24], [ ,,,0],25], ovario [26], de pulmón [27], [28], el estómago [29] y de mama [30], [31] el cáncer. El Oncomine también mostró co-expresión de
CHL1
con otro tipo de cáncer conocido gen asociado a la metástasis, la lisil oxidasa (
LOX
) [32] en el melanoma metastásico.
Investigación de expresión CHL1 con cáncer de perfiles matrices
Se utilizó cáncer de perfiles matrices I y II (Clontech) para probar la
CHL1
expresión en una amplia muestra de tumores primarios humanos como el de mama, pulmón, riñón, ovario , colon, estómago y otros (Fig. 1). Sólo 395 muestras de 486, incluyendo 90 tumores metastásicos y 12 metástasis eran informativos. En primer lugar, demostramos que el cambio de
CHL1
expresión en todos los tumores estudiados en comparación con los tejidos emparejados no cancerosas (normales) fue estadísticamente significativa (
P Hotel & lt; 0,05, prueba exacta de Fisher o χ
2 criterios)
Las abreviaturas utilizadas:. ADC - adenocarcinoma, ASC - carcinoma adenoescamosa, BAC - adenocarcinoma bronquiolo-alveolares, C - carcinoma, CAC - cystadenocarcinoma, CC-ADC - adenocarcinoma de células claras, EDST - tumor del seno endodérmico, ENB - nefroblastoma epitelial, ESS - endometrial sarcoma del estroma, FAC - adenocarcinoma folicular, FS - fibrosarcoma, I-DC - carcinoma ductal infiltrante, I-IDC - carcinoma infiltrante intraductal, I-LC - carcinoma lobular infiltrante, LC - El carcinoma lobular, LDC - carcinoma mixto lobular-ductal, LM - leiomioma, M - melanoma maligno, MAC - adenocarcinoma mucinoso, MBC - carcinoma borderline mucinoso, MC - carcinoma medular, MMMT - tumor maligno de Müller mixta, NI-IDC - no infiltrantes carcinoma intraductal , PAC - adenocarcinoma papilar, PC - carcinoma papilar, PSC - carcinoma seroso papilar, PSCA - cistoadenoma seroso papilar, PSCAC - cystadenocarcinoma seroso papilar, RCC - carcinoma de células renales, S - seminoma, SC - carcinoma seroso, CPCA - cystadenocarcinoma serosa, SCC - El carcinoma de células escamosas, TAC - tubular adenocarcinoma, TC - El carcinoma tubular, TCC - carcinoma de células transicionales, UBT - útero tumor benigno. Los asteriscos (*) indican muestras con metástasis. ** G361 - una línea de células de melanoma. Las muestras enmarcadas indican un emparejado normal (izquierda) - tumor primario (abajo a la derecha) par con una muestra metastásico asociado (esquina superior derecha de un cuadro). muestras de tumor - T; N - igualada muestras de control normales
El descenso de regulación
Como lo demuestran los datos del Cáncer de perfiles Arrays en las figuras 1 y 2, un alto porcentaje de los pacientes mostraron una baja regulación de..
CHL1
expresión en mama, riñón, recto, colon, tiroides, estómago, piel, intestino delgado, vejiga, vulva y cáncer de páncreas. Se presentaron los resultados del análisis de datos de microarrays para 11 tipos de cáncer en la Tabla 1. En total, una disminución estadísticamente significativa de
CHL1
se encontró expresión en el cáncer de mama - 71% (45 de 63 casos), de colon - 48% (23 de 48), el recto - 50% (14 de 28), la tiroides - 69% (11 de 16), riñón - 75% (21 de 28) y el intestino delgado - 67% (6 de 9) cánceres . Es importante destacar que, un aumento estadísticamente significativo de la frecuencia baja regulación se muestra en las muestras con metástasis en comparación con muestras sin metástasis en el colon (83% vs. 36%,
P
= 0,01) y el recto (75% vs. 31 %,
P = 0,05)
cánceres. La misma tendencia se observó en el cáncer de ovario (60% vs. 19%,
P
= 0,17).
La fracción de los tumores con
CHL1
regulación se demostró con el rojo, regulación a la baja - verde, ARNm nivel de retención - amarillo. Los datos revelaron con el análisis de Clontech Microarray. Los asteriscos (*) indican diferencias estadísticamente significativas entre las frecuencias de
CHL1
expresión cambia con arriba y abajo de la regulación.
Sobre regulación.
el
CHL1 gratis (frecuencia de 20% a 100%) sobre regulación fue encontrado en pulmón, ovario, útero, hígado, piel, próstata, estómago, cuello uterino y los cánceres de tráquea. Sin embargo, el aumento de la
CHL1
nivel de ARNm fue estadísticamente significativa sólo en el cáncer de pulmón -64% (16 de 25,
P Hotel & lt; 0,01). La mayoría de estos casos (14 de 22, P & lt; 0,01) fueron encontrados en diferentes histotypes de NSCLC (ADC, BAC, SCC) en la Etapa I. También hemos observado varios casos de
CHL1
sobre regulación en tumores metastásicos (estómago, pulmón, tráquea, ovario y útero, Tabla 1). Por lo tanto, los casos con
CHL1
regulación podría servir como ejemplo de
CHL1
participación tanto en inicial y posiblemente en la progresión y el crecimiento del tumor invasivo.
La desregulación.
En el útero y el cáncer de ovario la frecuencia de arriba y abajo de la regulación estaba cerca (41% y 30%, 46% y 27%, respectivamente). En el cáncer de ovario la baja regulación fue un acontecimiento frecuente (52%) en las muestras sin metástasis, por el contrario, la sobre regulación era frecuente (60%) en el grupo de los tumores metastásicos. En el cáncer de estómago un cambio estadísticamente significativo de
CHL1
expresión (tanto arriba y abajo de la regulación) se muestra en el grupo con metástasis en relación con el grupo sin metástasis (88% vs. 45%,
P
= 0,02).
las metástasis.
observado re-expresión de la
CHL1
en 4 de 12 metástasis (primera coordenada), junto con baja
CHL1
nivel de mRNA en tumor primario (segunda coordenada): en el ovario (24K /24L), colon (14O /14P, 14V /14W) y de mama (4E /4J, figura 1, array I.). Además, también encontramos silenciamiento de la expresión génica en ambos tumores y metástasis primarias, por ejemplo, cáncer de mama (4G /4H, 4K /4L).
La expresión CHL1 en cáncer de mama, de pulmón y cáncer de los tejidos renales estudió mediante RT-qPCR
el
CHL1
contenido de ARNm se redujo en la mayoría de las muestras tumorales estudiadas en comparación con las muestras normales, pero en algunas muestras de tumores de la
CHL1
expresión era hasta -regulated (Fig. 3. A, B y C).
A. La relativa
CHL1
nivel de ARNm (R) en el cáncer de mama (CM). N
0 - sin metástasis, N
1-2 - metástasis en los ganglios linfáticos regionales. Las muestras nº 1, 2 (Etapa I),#3-22 (Fase II),#23 (Etapa IV); muestras#3-9 (grado 1),#10-21 (grado 2). B. La relación
CHL1
nivel de ARNm (R) en el cáncer de pulmón (NSCLC). Los carcinomas de células escamosas de pulmón, ADC - - SCC adenocarcinomas de pulmón, N - muestras normales de cáncer libres donantes sanos; N
0 - sin metástasis, N
1-2 - metástasis en los ganglios linfáticos regionales; I, II y III - Etapas. C. La relación
CHL1
nivel de ARNm (R) en el cáncer renal (RCC). CC-RCC - carcinomas renales de células claras, PRCC - carcinomas renales papilares; N
0 - sin metástasis, N
1-2 - metástasis en los ganglios linfáticos regionales; I, II y III -. Etapas
cáncer de mama (CM)
Hemos encontrado que el
CHL1
nivel de ARNm se redujo en 61% (14 de. 23,
P
& lt; 0,03), aumentado en 22% (5 de 23) y no cambió en 17% (4 de 23) de las muestras. disminución máxima de la
CHL1
nivel de ARNm fue de 20 veces, aumento máximo fue de 34 veces. No hubo correlación evidente entre el cambio de la
CHL1
expresión y la progresión tumoral (Fig. 3 A).
cáncer no microcítico de pulmón no microcítico (CPNM).
El
CHL1
nivel de ARNm se redujo en un 60% (18 de 30, P & lt; 0,02) y fue normal en el 33% (10 de 30), es decir, menos de cambios de 2 veces. se detectó la disminución o el aumento del nivel de ARNm ni en pulmón no cancerosas tejidos emparejados (normales) ni en los tejidos de cáncer libres donantes sanos. Sin embargo, para dos subtipos histológicos de NSCLC (ADC y SCC) la frecuencia de los cambios de ARNm era diferente. El descenso de regulación se observó en el 38% (5 de 14) de las muestras de ADC. Se detectó el aumento de la
CHL1
ARNm (7 veces) sólo en una muestra de ADC. Por el contrario, en las muestras de SCC
CHL1
expresión se redujo significativamente en un 81%, (13 de 16,
P Hotel & lt; 0,02).
LD
(nivel de ARNm disminución) varió de 2 a 100 veces en la ADC y de 2 a 44 veces en SCC. Hubo un aumento más significativo de
FD gratis (frecuencia de ARNm disminuye) los valores de SCC en comparación con ADC (81% vs. 38%,
P
= 0,02) y sin destacable la relación con el tumor progresión (Fig. 3, B y Tabla 2).
células claras carcinoma de células renales (CCR-CC), el carcinoma papilar de células renales (PRCC) y las líneas celulares de carcinoma renal.
Una disminución significativa (de 3 a 302 veces) de
se detectó CHL1
ARNm en el 87% (26 de 30,
P Hotel & lt; 0,01) de las muestras CC-RCC y 89% (8 de 9,
P Hotel & lt; 0,02). PRCC de especímenes con
LD
av gratis (media geométrica de LD) igual a 18 y 19 veces, respectivamente (figura 3, DO). Por lo tanto podemos concluir que la frecuencia y el nivel medio de la
CHL1
disminución de expresión fueron similares para los dos principales tipos histológicos de cáncer renal, CC-CCR y PRCC. La
LD
av
valor fue significativa en todos los tumores RCC en todas las etapas de desarrollo independientes de la presencia de metástasis (Tabla 3). En CC-CCR con o sin metástasis, el
FD
y
LD
av
valores fueron similares.
Las estimaciones de la
CHL1 los niveles de mRNA en
siete líneas celulares de cáncer renal mostró una fuerte baja regulación de este gen: 80 veces (CAKI2, KRC /y), alrededor de 1000 veces (TK164) y el silenciamiento total de (TK10, KH39, HN4, Caki1, la Fig. 4).
el nivel de ARNm del gen diana se normalizó a la referencia genes
RPN1
y
GUSB
.
Comparación de microarrays y RT-qPCR datos para el cáncer de mama, renal y pulmonar
Los datos de microarrays para el 61 antes de Cristo, 23 y 25 RCC CPNM muestras se compararon con los datos de RT-qPCR para el 23 aC, 30 CC-30 y RCC muestras de NSCLC. En nuestro estudio conjunto una significativa
CHL1
baja regulación fue mostrado durante la mayor parte de las muestras de RCC; Se observó sobre regulación en sólo 3 casos. Nuestros resultados también mostraron que la baja regulación de
CHL1
en la mayoría de BC muestras independientes de la presencia de metástasis y sobre regulación en sólo 7 tumores. Casi los mismos resultados se obtuvieron utilizando RT-qPCR. Hay similitudes entre la matriz y los datos cuantitativos para el cáncer renal y de mama (Tabla 4)
Cáncer de perfiles matrices I y II se incluye un grupo muy heterogéneo de cáncer de pulmón con diferentes subtipos histológicos:. BAC, ADC, SCC, carcinoide con estadios I y II, sólo dos tumores metastásicos y número limitado de ejemplares de cada subtipo. En total, hubo 15 SCC y 5 ADC, que podríamos comparar con los datos de RT-qPCR. Encontramos una sobre regulación en 11 SCC (6 de 11 fueron identificados como Fase I) y 4 ADC (3 ADC fueron Etapa I también); baja regulación en 2 SCC (13%) y 1 ADC (25%, Fig. 1). Recientemente, se demostró una sobre regulación de varios TSG en 3p en el ADC de pulmón en la Etapa I. Estos tumores se caracterizaron con alto grado de diferenciación [33]. Por otra parte, de acuerdo con la frecuencia de datos RT-qPCR de disminución de expresión fue 38% (5 de 14 casos) en ADC y 81% (13 de 16 casos, P & lt; 0,02) en SCC (véase la tabla 2). Una regulación hacia arriba se detectó sólo en el 7% (1 de 14 casos) de ADC y nunca en SCC.
Discusión
CHL1
, localizado en 3p26.1, pertenece a la familia de moléculas de adhesión celular (CAM) - proteínas de superficie celular que median las interacciones célula-célula y célula-matriz. Las alteraciones en la expresión de CAM (incluyendo
CHL1
) y funciones han sido implicados en el desarrollo de diferentes tipos de tumores, por ejemplo, melanoma [34], ovario [9], [35], de próstata [11] y el cáncer de colon [36]. De acuerdo con [9], la evaluación de los patrones de LOH en el cáncer epitelial de ovario seroso (EOC) sugirió que
CHL1
es un candidato supresor de tumores (TSG). Los estudios publicados por nosotros y otros autores (véase la Introducción) sugirieron que el
CHL1
gen podría ser uno de los genes supresores de tumores putativas localizadas en el cromosoma 3 humano [12]. Sin embargo, se observó sobreexpresión de
CHL1 Hoteles en muestras de EOC serosas [9]. Por otra parte, la sobreexpresión L1 CAM en el melanoma maligno ha demostrado estar asociada con metástasis [34].
De acuerdo con los datos de microarrays de expresión Oncomine preliminares [17] junto con el prevalente
CHL1
baja regulación en varios tumores (RCC, pulmón SCC, ADC de colon), se encontró que la sobreexpresión de CHL1 en el melanoma. Se observó que la expresión diferencial en ADC de pulmón [26], de cuello uterino [22] y de mama [29], [30] el cáncer.
Sobre la base de estos datos, la hipótesis de que CHL1 y otros receptores de reconocimiento de este tipo podría desempeñar una doble función en el cáncer: en el crecimiento pre-invasiva precoz que podían servir de TSG y son silenciados; más tarde en la invasión y metástasis etapas de estos genes podrían ser re-expresados en el borde del tumor para conducir la invasión local y permitir la diseminación metastásica.
Esta hipótesis fue analizada en el presente estudio, utilizando una combinación de expresión preliminar de cribado en 19 tipos diferentes de tumores epiteliales con microarrays comerciales (en total 395 muestras informativas, Tabla 1) y la evaluación de la
CHL1
la expresión de ARNm en tumores primarios mediante RT-qPCR. Este método es ampliamente utilizado para corroborar la enfermedad asociada a las firmas de expresión derivados de microarrays. Además, esta tecnología es muy adecuado para traducir los datos de microarrays en ensayos precisos y cuantitativos, de utilidad clínica [37].
Hemos demostrado aquí que la expresión de
CHL1
fue desregulado en los cánceres malignos epiteliales ( 76%,
P Hotel & lt; 0,01, incluyendo el 54% de los casos baja regulación de acuerdo a los datos de microarrays). Estadísticamente significativa
FD
valores se mostraron de mama, colon, recto, tiroides, riñón y cáncer de intestino delgado (Tabla 1). Durante tres tipos /significativas sociales importantes de cáncer - los datos mama, riñón y pulmón de microarrays fueron validados por RT-qPCR. Había una buena concordancia entre los datos de dos métodos para el riñón y cáncer de mama. De acuerdo con los datos de microarrays Oncomine la disminución significativa de
CHL1
nivel de expresión en las muestras de CC-RCC se mostró también.
Clontech microarrays (sobreexpresión en muestras de cáncer de pulmón 64%) y RT-qPCR ( regulación a la baja en el 38% de ADC y en el 81% de las muestras SCC) no estaban en concordancia porque los diferentes subtipos de cáncer estaban presentes en muestras de microarrays estudiados. El desacuerdo entre las matrices y los datos de RT-qPCR para el NSCLC también podría resultar de muestras no homogéneas con diferentes contenidos de las células normales, así como el número limitado de muestras y puede ser estadísticamente no significativa. . Aunque estos datos no son estadísticamente válidos que podrían reflejar las tendencias y asociaciones importantes
Sin embargo, había una vez una buena concordancia entre los resultados cuantitativos para el cáncer de pulmón y los datos Oncomine [17] para los dos principales histotypes cáncer de pulmón - ADC y SCC.
es importante tener en cuenta que explota Oncomine microarrays basados en la plataforma completamente diferente a Clontech cáncer de perfiles matrices. microarrays tradicionales (Affymetrix, Agilent) contienen una serie de diferentes sondas de genes inmovilizados sobre portaobjetos de vidrio. Sólo una muestra de ADNc se puede hibridar con la corredera. Por el contrario, Clontech cáncer de perfiles matrices contienen una serie de muestras de cDNA inmovilizados de diversos tejidos tumorales y normales. Oncomine incluye microarrays de datos tradicionales, haciendo posible el análisis de todo el genoma de un número limitado de muestras y secuencias de cáncer de perfiles permiten el análisis de un gen en muchos tumores en un experimento.
De acuerdo con los datos de microarrays Clontech, el aumento de nivel de ARNm fue observado por varios tipos de tumores de ovario, útero -, colon, estómago, tiroides, pulmón, riñón y tráquea - sobre todo para los tumores no metastásicos. Sin embargo, también hay casos frecuentes de la
CHL1
aumento de nivel de ARNm en tumores metastásicos, por ejemplo, en el estómago y cáncer de pulmón.
Por otra parte, en cuatro metástasis (4i, 14o, 14V, 24K ) de 12 disponible para casos de análisis (es decir, cuando un tumor primario y la metástasis para el mismo paciente eran accesibles) se detectó un aumento de la
CHL1
expresión en metástasis en comparación con el tumor primario (ovario, de colon y de mama). se informó recientemente resultados similares para el gen de la lisil oxidasa asociados a metástasis (
LOX
), cuya expresión se asoció tanto con la supresión de tumores y la progresión del tumor en función del estado de transformación [32]. La sobreexpresión de otro gen L1 molécula de adhesión celular se asoció con metástasis en el melanoma maligno [34].
cáncer es una enfermedad fatal con lo cual el crecimiento invasivo local de tumor y la diseminación metastásica a los órganos vitales distantes resultante en estado latente y /o activo crecimiento y muerte inevitable de los pacientes. Al contrario de los modelos anteriores nueva evidencia sugiere que las células metastásicas pueden ser creados ya durante el crecimiento inicial de un local del tumor primario. Estas células entonces a tener éxito en la migración de células /invasión, la embolización, la supervivencia en la circulación, la detención en un lecho capilar distante, y la extravasación en la multiplicación y dentro del parénquima órgano distante. El fracaso en cualquiera de estos pasos podría bloquear todo el proceso metastásico y puede dar lugar a "las células cancerosas latentes y micrometástasis latentes". La extirpación quirúrgica del tumor primario podría entonces conducir a un crecimiento activo [38]. Debido a la extensión del tumor es responsable de la mayoría de las muertes de pacientes con cáncer, el desarrollo de agentes terapéuticos que inhiben la metástasis tumoral es de suma importancia [39], [40], [41], [42], [43], [44] , [45], [46], [47].
Uno de nosotros predijo anteriormente [5] que el fin de la proteína citoplasmática CHL1 podría interactuar con el citoesqueleto y podría inducir /regular la formación de filopodios conducción migración de células tumorales y la invasión [41], [45], [46].
CHL1
comportamiento en el cáncer es por lo tanto muy similar a
L1
[10], [40] y
LOX
la que ambos trabajan a través de la red de actina.
Este estudio sugiere que
CHL1
podría contribuir al crecimiento invasivo del cáncer y la metástasis. Puede actuar como un supresor de tumores (crecimiento temprano) o oncogén (crecimiento invasivo y metastásico, la Fig. 1, Tabla 1).
CHL1
por lo tanto, podría pertenecer a la nueva categoría de rápido crecimiento de los genes del cáncer que pueden funcionar como ETG u oncogenes [32], [41], [43], [46], [47], [48] . Durante el crecimiento inicial
CHL1
no se expresa (silenciado) en las células tumorales para facilitar
In situ
el crecimiento del tumor. Re-expresión de
CHL1
en el borde de la masa tumoral y alrededor de los vasos tumorales podría promover la migración y el crecimiento invasivo local y, además, permitirá iniciar el proceso metastásico. Por lo tanto, nuestros resultados, junto con los hallazgos que
CHL1
era un gen asociado a cáncer candidato mutado en el cáncer de colon [1] sugiere que este tipo de receptores de reconocimiento de hecho puede desempeñar una doble función en la carcinogénesis. Las mutaciones descubiertas en la parte extracelular de
CHL1
podían permitirse un anticuerpo terapéutico para tratar selectivamente los pacientes [1]. Esto valida
CHL1
como una nueva diana para la intervención inmunológica personalizada en los cánceres que expresan mutado
CHL1
. Las nuevas pequeñas inhibidores terapéuticos dirigidos a
CHL1
podrían ser eficaces en la contención de la nueva formación de tumores de micrometástasis latentes.
Nuestros resultados indican que el
CHL1
gen podría ser importante para el desarrollo de los principales cánceres humanos, y también permitió sugerir una hipótesis sobre una doble función probable de
CHL1
, aunque sólo para los tres tipos de cáncer (ovario, colon y mama) fueron obtenidos hasta el momento datos de apoyo. Una disminución frecuente de un nivel de expresión era frecuente para 11 de 19 tipos de tumores y estadísticamente significativo de cáncer de mama, colon, recto, tiroides, riñón y cáncer de intestino delgado.
Nuestros datos también apoyan el papel de
CHL1
como potencialmente nuevo biomarcador en la patogénesis precoz de los dos principales tipos histológicos de cáncer renal tanto CC-RCC y PRCC. Los resultados obtenidos con 7 líneas celulares de RCC ellos sugieren como un sistema modelo para el estudio del potencial papel en la metilación
CHL1
silenciamiento.
perfiles de Materiales y Métodos
Cáncer análisis de matrices
cáncer de perfiles matrices I y II (154 y 241 muestras, respectivamente, en general 19 tipos diferentes de cáncer a saber, mama, riñón, recto, colon, estómago, piel, tiroides, intestino delgado, vejiga, vulva, páncreas, próstata, cuello del útero, testículo, pulmón, ovario, útero, hígado, tráquea) adquirido de BD Biosciences Clontech (Palo Alto, CA), se utilizaron para analizar la expresión de la
CHL1
gen en tejidos normales y tumorales. información de la muestra completa para Array I y II se presenta en Clontech catálogo: No. 7841-1 y N ° 631777, respectivamente (ver "Información matrices S1")
Se analizaron sólo las muestras informativas con relación clara de normal-. tumor de spots de intensidad. La información para las muestras de la matriz de cáncer de perfiles que se presenta a continuación.
1. Pecho. La mayoría de los tumores están infiltrando ductal (DC), intraductal (IC) y carcinomas lobulares (LC). Etapa I: 2Q, 2R, 2S, 2T, 2U, 4S, 4D, 4F. Etapa II: 2W, 4E, 4L, 4N. Etapa III: 4A, 4B, 4H, 4J, 4M. Coordenadas de 18 metastásico (m) son los tumores 2B, 2C, 2D, 2E, 2H, 2I, 2J, 2M, 2N, 2P, 4H, 4J, 4L, 4O, 4P, 4R, 4S, 4U. Coordenadas de las metástasis son 4G, 4E, 4K.
2. Útero. La mayoría de los tumores son adenocarcinomas (ADC). Etapa I: 8C, 8F, 8H, 8I, 8J, 8K, 8L, 8M, 8N, 8O, 8P, 8Q, 8R, 8S, 8U, 8X, 8Y, 8BB, 8 cc, 8DD, 8EE, 8FF, 10A, 10B , 10C. Etapa II: 8T. Coordenadas de los tumores metastásicos 8W y 8AA, Etapa III. Coordenadas de las metástasis son 8V, 8Z.
3. Colon. Todos los tumores son ADC. Etapa I: 14L. Etapa II: 14M, 14P, 14Q, 14AA. Etapa III: 14S, 14U, 14V, 14Y, 14BB. Otras muestras no tienen información sobre el escenario. Coordenadas de 9 tumores metastásicos son 14E, 14N, 14P, 14U, 14W, 14Y, 14CC, 16A, 16C. Coordenadas de las metástasis son 14O, 14T, 14V, 14X.
4. Estómago. La mayoría de los tumores son ADC. No hay información sobre el escenario. Coordenadas de 11 tumores metastásicos son 20A, 20B, 20E, 20F, 20H, 20I, 20K, 20S, 20T, 20V, 20X.
5. Ovario. Etapa I: 24B, 24D, 24E. Etapa II: 24F. Etapa III: 24A, 24G, 24H, 24J, 24L. La mayoría de los tumores son ADC. Coordenadas de los tumores metastásicos son 24J, 24L, 24M, 24N. Coordenadas de las metástasis son 24I, 24K.
6. Cerviz. 24X (carcinoma adenoescamosa).
7. Pulmón. Etapa I: 28E (carcinoma de células escamosas, SCC), 28F (carcinoide), 28H (SCC), 28I (ADC), 28J (ADC), 28K (SCC), 28L (adenocarcinoma bronquiolo-alveolares, BAC), 28M (SCC ), 28N (ADC). Desconocido Etapa: 28A (SCC), 28B (BAC), 28C (SCC), 28D (SCC), 28G (SCC), 28O (m, ADC), 28P (m, BAC), 28Q (SCC), 28R (carcinoide ), 28S (ASC), 28T (SCC), 28U (SCC).
8. Riñón. Etapa III: 32D (carcinoide). Desconocido Etapa: 32A (células de carcinoma de células renales, CC-CCR), 32B (RCC), 32C (RCC), 32E (RCC), 32F (carcinoma de células transicionales), 32G (RCC), 32H (m, RCC), 32I (oncocitoma), 32J (RCC), 32K (RCC), 32L (m, RCC), 32M (RCC), 32N (m, RCC), 32O (RCC), P32 (RCC), 32Q (RCC), 32R (RCC), 32S (RCC), 32T (RCC).
9. Recto. Todos los tumores son ADC. Etapa I: 36G. Etapa II: 36J, 36F. Etapa III: 36C, 36H, 36I, 36L. Coordenadas de 6 tumores metastásicos son 36B, 36E, 36L, 36M, 36Q, 36R. Coordinar de metástasis es 36K.
10. Intestino delgado. 36Y (m, ADC), 36Z (ADC).
11. Glándula tiroides. Todos los tumores papilares son ADC, Etapa II: 40D. Etapa III:. 40C, 40E
12. Próstata. Todos los tumores son ADC. Etapa I:. 40M
13. Páncreas. Desconocido Etapa:. 40U (ADC)
La información para las muestras de la matriz de cáncer de perfiles II se muestra a continuación
1.. Pecho. Etapa I: 6E (DC), 6G (ADC mucinoso), 6M (DC). Etapa II: 6I (DC), 6K (m, DC), 6L (DC), 6 N (DC). Etapa III:. 6F (m, DC), 6H (m, DC), 6J (m, LC)
2. Útero. Etapa I: 6T (ADC), 6Z (SCC), 6BB (ADC). Etapa II: 6X (SCC), 6AA (ADC). Desconocido Etapa:. 6V (SCC)
3. Ovario. Etapa I: 10E (cistoadenoma papilar seroso), 10K (cystadenocarcinoma mucinoso). Etapa II: 10I (ADC), 10J (leiomioma). Etapa III: 10G (ADC), 10H (CC-ADC), 10M (carcinoma papilar seroso superficie), 10N (cistoadenoma papilar seroso). Etapa IV: 10L (ADC). Desconocido Etapa:. 10F (leiomioma)
4. Cerviz. Etapa I: 10Z (ADC), 10AA (SCC), 10BB (SCC). Etapa II: 10V (SCC). Etapa III:. 10S (m, SCC)
5. Colon. Etapa I: 14E (adenoma túbulo, otros tumores son ADC), 14F. Etapa II: 14L. Etapa III: 14H (m), 14I (m), 14J, 14K (m), 14M, 14N (m). Estómago. Vejiga. Intestino delgado. Hígado. Páncreas. .