Extracto
La miosina IC es un solo miembro de la superfamilia de cabeza de la miosina. Recientemente hemos identificado una nueva isoforma y demostramos que el
MYOIC
gen en células de mamíferos codifica tres isoformas (isoformas A, B, y C). Además, hemos demostrado que la miosina IC isoforma A, pero no isoforma B exhibe un patrón de expresión específica de tejido. En este estudio, hemos ampliado nuestro análisis de la miosina IC patrones de expresión isoforma mediante el análisis de la proteína y la expresión de ARNm en diversas líneas celulares de mamíferos y en varios especímenes de próstata y los tejidos tumorales de la próstata de ratón transgénico modelo (TRAMP) por inmunotransferencia, QRT-PCR, y por tinción inmunohistoquímica indirecta de embebidos en parafina de muestras de próstata. El análisis de un panel de líneas celulares de mamífero mostró un aumento en la expresión del ARNm y la proteína de miosina IC específicamente isoforma A en un panel de líneas celulares de cáncer de próstata humano y de ratón pero no en próstata no cancerosas o no (Próstata) líneas celulares de cáncer . Además, demostramos que la miosina IC isoforma Una expresión es significativamente mayor en muestras de próstata TRAMP ratones con lesiones de neoplasia intraepitelial prostática (PIN) y en las metástasis distantes del sitio en pulmón e hígado en comparación con los tejidos normales emparejados. Nuestras observaciones demuestran cambios específicos en la expresión de miosina IC isoforma A que son concurrentes con la aparición de cáncer de próstata en el modelo de cáncer de próstata TRAMP de ratón que imita el cáncer de próstata clínico. Estos datos sugieren que niveles elevados de miosina IC isoforma A puede ser un marcador potencial para la detección de cáncer de próstata
Visto:. Ihnatovych I, Sielski NL, Hofmann WA (2014) Expresión diferencial de miosina IC Isoforma A en ratón y líneas celulares humanas y de ratón de cáncer de próstata tejidos. PLoS ONE 9 (9): e108609. doi: 10.1371 /journal.pone.0108609
Editor: Craig N. Robson, Instituto del Norte para la Investigación del Cáncer, Reino Unido
Recibido: 11 Julio, 2014; Aceptado: 1 de septiembre de 2014; Publicado: 26 Septiembre 2014
Derechos de Autor © 2014 Ihnatovych et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos relevantes se encuentran dentro del papel
Financiación:. Este estudio fue financiado por el Departamento de Defensa, dirigido programas de investigación médica por el Congreso (http://cdmrp.army.mil/default.shtml) (subvención#W81XWH -12-1-0234) en Wah y con una donación de inicio Universidad de Buffalo en Wah. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de próstata es el cáncer más común diagnosticado en los hombres en todo el mundo y la segunda causa más común de muerte por cáncer en los EE.UU. [1], [2]. El cáncer de próstata puede ser con frecuencia indolente pero también puede ser muy agresivo y letal en algunos pacientes. Actualmente no existe ningún marcador fiable para la detección temprana, la confirmación del diagnóstico o pronóstico de la enfermedad disponibles [3]. Por lo tanto, la identificación de nuevos biomarcadores que tienen la capacidad de identificar y discriminar con precisión el cáncer de próstata es de importancia para la gestión precisa de la enfermedad.
miosina IC es un miembro de la superfamilia de la miosina [4] que se localiza en el citoplasma y el núcleo y está implicado en una variedad de procesos en los dos compartimentos. En el citoplasma, la miosina IC está implicado en la formación de balsas de lípidos [5], el transporte de vesículas que contienen proteínas de membrana [6], y en la regulación de los canales iónicos en las células ciliadas del oído interno [7] - [9]. En el núcleo, la miosina IC está involucrado en varios aspectos de la transcripción [10] - [13], en la remodelación de la cromatina [14], [15], y en la organización dinámica de estructuras cromosómicas [16]. Recientemente hemos identificado una isoforma hasta ahora desconocido de la miosina IC y demostramos que el
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gen en células de mamíferos codifica tres isoformas que se llaman miosina IC isoformas A, B, y C [17].
nuestro análisis anterior de la miosina expresión isoforma IC en los tejidos murinos reveló un patrón de expresión específica de tejido de la miosina IC específicamente isoforma a con altos niveles de expresión en el riñón, glándula suprarrenal, páncreas, y en epidídimo y depósitos adiposos retroperitoneales [18]. Por el contrario, la miosina IC isoforma B muestra un patrón de expresión ubicua en todos los tejidos analizados y líneas celulares [17] - [19]
Esta expresión específica de tejido de la miosina IC isoforma A nos llevó a explorar los perfiles de expresión de. la miosina IC isoformas más. Presentamos aquí la evaluación de la miosina IC isoformas A y B expresión en una variedad de líneas celulares de cultivo de tejidos de mamíferos. Se demuestra que la expresión de miosina IC isoforma A es significativamente mayor en líneas celulares de cáncer de próstata en comparación con otros (no-próstata) líneas celulares de cáncer o a una línea celular de próstata no cáncer. El análisis posterior de los tejidos tumorales de cáncer de próstata a partir del modelo TRAMP murino que refleja estrechamente la patogénesis de cáncer de próstata humano [20] - [23] revela un aumento significativo en la isoforma A de expresión en comparación con los tejidos normales. Tomados en conjunto, nuestros datos implican cambios específicos en la miosina IC isoforma Una expresión que son concurrentes con la aparición de cáncer de próstata.
Materiales y Métodos
Anticuerpos
Los anticuerpos que reconocen específica isoformas de la miosina IC: 1. el anticuerpo anti-NMI es un anticuerpo policlonal de conejo que se planteó contra el ácido 16 amino largo péptido N-terminal de NMI, aquí llamado isoforma B [5], [24] (Sigma-Aldrich, St Louis, MO); 2. La miosina IC-isoforma Un anticuerpo es un anticuerpo monoclonal de ratón que se planteó en contra de la miosina IC isoforma un péptido específico N-terminal y reconoce exclusivamente la miosina IC isoforma A [17] (Figura 1A). Los anticuerpos monoclonales de beta-actina y el antígeno T grande de SV40 (SV40-TAG) se obtuvieron de Sigma (Sigma-Aldrich, St Louis, MO) y Merck Millipore (Merck Millipore Corporation, Billerica, MA), respectivamente. anticuerpos anti-ratón o anti-conejo conjugado con peroxidasa secundaria se obtuvieron de Jackson ImmunoResearch Laboratories (West Grove, PA).
La detección de miosina IC isoformas A y B de proteínas en diversas líneas de células de mamíferos mediante análisis de inmunotransferencia usando anticuerpos específico para la miosina IC isoformas a, isoforma B, gran SV40 T-antígeno (TAG) y actina (control). A) Representación esquemática de secuencias específicas de miosina IC isoforma y sitio de reconocimiento de anticuerpos. Representado es la región 5 'del
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gen de mamífero con los exones que codifican péptidos específicos para la isoforma N-terminales. Los sitios de inicio de traducción para las isoformas se indican como son las secuencias de aminoácidos N-terminales. Subrayadas son las secuencias de péptidos usados como inmunógeno para crear anticuerpos isoforma específica. B) inmunoblot Representante de extractos celulares que fueron analizadas usando los anticuerpos indicados. marcadores relevantes de peso molecular se indican a la izquierda en kD. C) Histograma que presenta la intensidad densitométrica promedio de miosina IC isoforma A expresión normalizado a la actina. D) Histograma que presenta la intensidad densitométrica promedio de expresión isoforma B normalizado a la actina. La miosina IC isoforma Una proteína es altamente expresado en células COS-7 y las líneas celulares de cáncer de próstata humano y de ratón PC-3 y TRAMP-C2. Por el contrario, la proteína miosina IC isoforma B se expresa a niveles comparables en todas las líneas celulares analizadas. Los resultados se presentan como media ± desviación estándar; n = 3 experimentos independientes.
Líneas celulares y cultivo de tejidos
COS-7, A-431, MCF-7, vagabundo-C1, DU 145, 22Rv1, RWPE-1 y PC-3 células se obtuvieron de la American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA, EE.UU.). OVCAR-3 células, obtenidas originalmente de la ATCC, fueron generosamente proporcionadas por el Dr. Arthur M. Edelman (Departamento de Farmacología y Toxicología de la Universidad de Buffalo, Buffalo, Nueva York, EE.UU.). As4.1 células [25] eran una especie de regalo del Dr. Kenneth W. Bruto [Dept. de Biología Molecular y Celular, Roswell Park Cancer Institute (RPCI), Buffalo, Nueva York, EE.UU.]. células TRAMP-C2 [26] eran una especie de Dr. Barbara Foster (Departamento de Farmacología y Terapéutica, RPCI, Buffalo, NY, EE.UU.). COS-7, A431, y As4.1. las células se cultivaron en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con 10% de suero bovino fetal (FBS). 145 células MCF-7 y DU se cultivaron en DMEM suplementado con 10% de FBS y 0,01 mg /ml de insulina (Sigma-Aldrich, St Louis, MO). las células PC-3 y 22Rv1 se cultivaron en medio RPMI suplementado con 10% FBS. OVCAR-3 células fueron cultivadas en medio RPMI suplementado con 20% de FBS y 0,01 mg /ml de insulina. células TRAMP-C1 y C2-TRAMP fueron cultivadas en DMEM con alto contenido de glucosa suplementado con FBS al 5%, 5% Suero Nu IV (BD Biosciences, San Jose, CA, EE.UU.) 5 mg /ml de insulina y 10 nmol /L dihidrotestosterona (Sigma Aldrich, St Louis, MO, EE.UU.). células RWPE-1 se cultivaron en queratinocitos medio libre de suero (Invitrogen Carlsbad, CA, EE.UU.; Kit Catálogo#17005-042) suplementado con 0,05 mg /ml de extracto de pituitaria bovina (BPE) y 5 ng /factor de crecimiento epidérmico recombinante humano ml (EGF ). Además, todas las células se complementaron con 1% de penicilina /estreptomicina y se cultivaron a 37 ° C con 5% de CO
2.
Muestras de tejidos
congeladas muestras de tejido de 22 semanas de edad TRAMP ratones, así como los ratones de tipo salvaje emparejados por edad fueron comprados a partir del tumor de ratón Modelo de recursos en RPCI (Buffalo, Nueva York, EE.UU.). Los tejidos se recogieron en estricta conformidad con las recomendaciones de la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio de los Institutos Nacionales de la Salud bajo el protocolo de banca tumor 890m de RPCI para los modelos tumorales de ratón de recursos. El protocolo fue aprobado por del Instituto del Cáncer Roswell Park IACUC (Institucional Cuidado de Animales y el empleo). Los animales fueron sacrificados por sobredosis de anestesia, seguido por dislocación cervical. Todos los tejidos de la próstata y tumores habían sido microdissected en la necropsia, flash-congelado en nitrógeno líquido, y se almacenaron a -80 ° C hasta su uso. secciones de tejidos embebidos emparejados cinco micrones de espesor de parafina se compraron a la misma fuente.
Immunohistrochemistry
secciones de tejidos embebidos en parafina se des-con parafina con xileno, rehidratada con alcohol, y se colocan en DH
2O antes de someterse a la recuperación de antígeno estándar (tampón citrato, pH 6). la actividad de peroxidasa endógena se bloqueó mediante el uso de 3% H
2O
2 antes de la incubación con cualquiera de miosina IC isoforma A o anticuerpos SV40-etiqueta para inmunohistoquímica de acuerdo con métodos estándar. Las imágenes se obtuvieron con un Zeiss Axio Imager Z1 (Carl Zeiss Inc, Thornwood, NY, EE.UU.) y se procesaron usando el software Adobe Photoshop.
inmunotransferencia análisis
Para la preparación de extracto celular crudo, un igual número de células se lisaron en SDS-buffer de muestra. Para cada análisis con una línea celular, se realizaron tres experimentos independientes. extracto de tejido se preparó como se describe anteriormente [18]. Para cada análisis basado tejido, se analizaron los tejidos de tres a seis ratones. Volúmenes iguales de extracto de células en bruto o cantidades iguales de extractos de proteínas de tejidos (40 g) se separaron por 10% SDS-PAGE (electroforesis en dodecilsulfato de sodio en gel de poliacrilamida) y se transfirieron a membrana de nitrocelulosa. Después de la transferencia, la membrana se corta en tamaños apropiados y se incubaron con anticuerpos específicos. Las bandas inmunorreactivas se detectaron por un aumento de quimioluminiscencia. El análisis densitométrico se realizó en las bandas seleccionadas en base a sus intensidades relativas utilizando el software ImageJ.
PCR cuantitativa en tiempo real (QRT-PCR)
El ARN total se aisló a partir de células o muestras de tejido utilizando Trizol reactivo (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.) siguiendo las instrucciones del fabricante. 1 g de ARN total de cada línea celular se utiliza para invertir transcribir en ADNc usando transcriptasa inversa SuperScript III y oligo dT cebador de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Invitrogen, Carlsbad, CA). QRT-PCR se realizó con el Sistema iCycler iQ PCR en tiempo real de detección (Bio-Rad, Hercules, CA, EE.UU.) y el cebador que reconoce específicamente ratón y miosina humana IC isoforma A (
homo sapiens:
NM_033375. 4;
mus musculus
: XM_006532429.1) y el ratón y la miosina IC humana isoforma B (
homo sapiens:
NM_001080950.1;
mus musculus:
NM_001080775). Para la cuantificación, los triplicados se normalizaron a la media del gen GAPDH limpieza. El cebador utilizado para QRT-PCR se describen en [18].
El análisis estadístico
Todos los datos se presentan como media ± desviación estándar. La normalidad de los datos se probó con la prueba de Kolmogorov-Smirnov. La diferencia entre los conjuntos de datos se probó con la prueba t de Student. Las desviaciones se consideraron significativas a nivel de
p Hotel & lt; 0.01.
Resultados
Se han analizado previamente los patrones de expresión de la miosina IC isoformas en 33 órganos y tejidos de ratón y encontramos que la miosina IC isoforma A, pero no isoforma B se expresa de una manera específica de tejido [ ,,,0],18]. Ahora hemos ampliado nuestro análisis de la expresión de la proteína y el ARNm de la miosina IC isoformas a un panel de líneas celulares de mamífero. Para analizar la expresión de proteínas, se realizó un análisis de inmunotransferencia de los extractos celulares totales utilizando miosina IC anticuerpos isoforma específica (Figura 1A). Como se muestra en la Figura 1B y C, además de en la línea celular de riñón de mono verde africano COS-7 (en la que se detecta y caracteriza por primera vez [18]) miosina IC isoforma una proteína es altamente expresado en el cáncer de próstata humano y de ratón líneas de células TRAMP C1, C2-TRAMP, DU 145, 22Rv1, y PC-3, pero no en la línea celular de cáncer de próstata no RWPE-1. Además, la miosina IC isoforma A muestra sólo bajos niveles de expresión en otras líneas celulares de cáncer, incluyendo la piel humana (A-431), mama (MCF-7), y de ovario (OVCAR-3) líneas celulares de cáncer. Debido a que la línea celular COS-7 se obtuvo mediante la transformación con un origen mutante defectuosa de SV40 que aún codifica el antígeno T grande de SV40 (SV40-TAG) [27], también a prueba la línea celular As4.1 que se estableció a partir de células de un ratón transgénico con un tumor de riñón intraparenquimatosa que fue inducida por la tumorigénesis apuntado con una construcción de fusión SV40-tag y también expresa SV40-etiqueta [25]. Como se muestra en la Figura 1A, las dos líneas celulares, células COS-7 y As4.1, expresa SV40-Tag pero sólo células COS-7 muestran un alto nivel de expresión de la miosina IC isoforma A. En contraste con esta expresión de células de la línea específica de la miosina IC isoforma a, miosina IC isoforma B se expresa de forma ubicua en niveles comparables en todas las líneas celulares analizadas (Figura 1 a & amp; B).
Para determinar si la expresión de proteínas se correlaciona con la expresión de ARNm, a continuación analizaron la expresión del ARNm de las isoformas usando PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) con isoforma específica de cebador (Figura 2A). Como se muestra en la Figura 2, se encontró que los perfiles de expresión de ARNm de miosina IC isoformas A y B correlato a los perfiles de expresión de proteínas. Comparable a los datos de proteínas, la expresión del ARNm de la miosina IC isoforma A es sólo de alta en células COS-7, vagabundo-C1, vagabundo-C2, DU 145, 22Rv1, y las células PC-3, mientras que la miosina IC isoforma B ARNm se expresa de forma ubicua en todos analizado líneas celulares.
Detección de miosina IC isoformas niveles a y B de ARNm en diversas líneas de células de mamífero por qRT-PCR usando el cebador-isoforma específica. A) Esquema que representa la región 5 'del
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gen y la isoforma resultante A y B ARNm. La ubicación secuencia diana de cebador usado para QRT-PCR para detectar isoformas de miosina IC se indican mediante flechas. B) Cuantitativo en tiempo real PCR análisis de ARNm niveles de expresión de la miosina IC isoforma A normalizaron a GAPDH. C) Análisis de PCR cuantitativa en tiempo real de los ARNm niveles de expresión de miosina IC isoforma B normalizado a GAPDH. La miosina IC isoforma A la expresión de ARNm es alta en células COS-7 y las líneas celulares de cáncer de próstata humano y de ratón PC-3 y TRAMP-C2. Por el contrario, la miosina IC isoforma B mRNA se expresa a niveles comparables en todas las líneas de ELL analizados. Los resultados se presentan como medios
± desviación estándar
; n = 3 experimentos independientes.
Una observación sorprendente de nuestro análisis de la miosina isoforma expresión IC en estas líneas celulares son los altos niveles de expresión de la miosina IC isoforma A en el ratón y líneas celulares de cáncer de próstata humano cuando en comparación con el (no cáncer) línea normal de células de próstata RWPE-1 y a otras (no-próstata) líneas celulares de cáncer tal como se resume en la Tabla 1. Esto es particularmente interesante porque nuestro análisis previo de tejidos de ratón y de los órganos mostró una expresión muy baja de miosina IC isoforma a en la próstata normal de ratón [18]. En combinación con los de los bajos niveles de expresión de la isoforma A en la línea celular de próstata humana normal RWPE-1, estos datos sugieren que los cambios en la miosina IC isoforma A expresión podría estar asociada con el desarrollo de cáncer de próstata.
Para explorar esta posibilidad, analizamos la miosina IC isoforma expresión en diversos tejidos de ratón TRAMP. TRAMP es una línea transgénica de ratones C57BL /6, que expresan una construcción que contiene el -426 /+ 28 elemento regulador mínima del promotor de probasina de rata para dirigir la expresión del antígeno T grande de SV40 de epitelio prostático [21]. El modelo TRAMP es un modelo de cáncer de próstata ampliamente utilizado ya que imita el cáncer de próstata de cerca humano. la progresión tumoral espontánea en la próstata TRAMP comienza a las 8 a 12 semanas de edad, y 100% de los ratones desarrollan cáncer de próstata a la edad de 20 semanas. Posteriormente, se puede producir metástasis en sitios distantes como los tumores progresan [20], [28], [29].
La figura 3 muestra el análisis inmunohistoquímico de tipo y representante de próstata TRAMP salvaje del ratón de los ratones de 22 semanas de años. Los tejidos TRAMP exhiben características morfológicas típicas que se asocian con lesiones PIN y se tiñen positivo para SV40-Tag nuclear [23] (Figura 3A & amp; B). Nuestro análisis de la miosina expresión isoforma IC en estos tejidos reveló un marcado aumento de la presencia de la miosina IC isoforma A en células asociadas con lesiones PIN característicos de ratones TRAMP, en comparación con las células de tejido tipo próstata salvaje en el que la miosina IC isoforma A es apenas detectable (Figura 3C & amp; D). Por el contrario, tanto normales como de manchas de tejidos TRAMP de próstata positivo para la isoforma B (Figura 3 E & amp; F).
Imagen representativa solo del análisis inmunohistoquímico de SV40-Tag (A & amp; B), la miosina IC isoforma A (C & amp; D), y la isoforma B (e & amp; F) expresión en próstatas de 22 semanas de edad de tipo salvaje (columna izquierda) y el vagabundo (ratones) de la columna derecha. Las diapositivas se counterstained con hematoxilina. Las imágenes fueron tomadas a 20 aumentos. Los cambios histológicos de la próstata del ratón TRAMP que están asociados con lesiones PIN son obvias (columna izquierda, B, D, F). Como era de esperar, la inmunotinción de SV40-TAG es negativo en la próstata de tipo salvaje (A) y fuertemente nuclear en la próstata TRAMP (B). La miosina IC isoforma A muestra la inmunotinción muy débil en el tejido de tipo salvaje de la próstata (C) pero fuerte, predominantemente tinción citoplásmica en la próstata TRAMP con lesiones PIN (D). La miosina IC isoforma B muestra fuerte tinción en ambos, de tipo salvaje y vagabundo, tejido de la próstata (E & amp; F).
Para confirmar la presencia de miosina IC isoforma A en los tejidos asociados con el cáncer de próstata, se analizaron diversos tejidos tumorales de próstata TRAMP que estaban compuestos ya sea de lateral y ventral (LV) o de dorsal, más adelante, y la próstata ventral (DLV). Como se muestra en la Figura 4, la miosina IC la isoforma a los niveles de proteína fueron significativamente mayores en los tejidos de tumor de próstata de ratones TRAMP, en comparación con tejidos de la próstata de tipo salvaje que mostrar sólo miosina apenas detectable IC la isoforma a los niveles de expresión (Figura 4A & amp; B y [18] ). Además, se analizaron los tejidos tumorales de metástasis sitio distante, es decir, de pulmón y tumores de hígado. Al igual que en los tejidos de la próstata, tumores de hígado y de pulmón mostraron un aumento significativo en la miosina IC isoforma A expresión de la proteína cuando se compara con los niveles de expresión en el tipo salvaje de pulmón e hígado tejidos normales [Figura 4A & amp; B y [18]]. Un examen más detallado de la miosina IC isoforma Una expresión de QRT-PCR confirmó que la expresión de la proteína aumentado en próstata TRAMP y metástasis sitio distante se correlaciona con un aumento significativo de la miosina IC isoforma A la expresión de ARNm en estos tejidos (Figura 4C).
extractos de tejido de próstata que consisten en dorsal, lateral y ventral (DLV) o (LV) de próstata lateral y ventral de 22 semanas de TRAMP edad o emparejados por edad ratones de tipo salvaje se analizaron para la proteína y la expresión del ARNm al igual que extractos de tejidos de pulmón e hígado metástasis de TRAMP y tejidos emparejados de ratones de tipo salvaje. A) inmunotransferencias representativas de extractos de tejidos de ratón que fueron analizadas usando los anticuerpos indicados. marcadores relevantes de peso molecular se indican a la izquierda en kD. B) Histograma que presenta la intensidad densitométrica promedio de la isoforma A expresión normalizada a la actina. C) Análisis de PCR cuantitativa en tiempo real de los ARNm niveles de expresión de miosina IC isoforma A normalizaron a GAPDH. Los resultados se presentan como media ± desviación estándar; n = 3-6 (número de tejidos a prueba cada uno de un animal diferente). * P & lt;. 0,01 en comparación con el tejido normal
Discusión
Un análisis de miosina IC isoforma A expresión en tejido de próstata y metástasis sitio distante en ratones TRAMP o ratones de tipo salvaje emparejados por edad mostró que la miosina IC isoforma a es significativamente más alto expresado en tumores de próstata en relación con tejidos de la próstata, pulmón o hígado murinas normales. Esto es, a nuestro entender, el primer informe que documenta un cambio de una expresión de la isoforma de miosina IC en relación con el cáncer. Las posibles consecuencias biológicas y fisiológicas de la sobre-expresión de la miosina IC isoforma A en los tejidos tumorales están actualmente bajo investigación en nuestro laboratorio
.
Además de establecer un vínculo entre la miosina IC isoforma expresión y el cáncer, nuestros datos sugieren que miosina IC aberrante la isoforma a los cambios de expresión pueden ser vinculados específicamente a transcripcional cambios asociados con la aparición de cáncer de próstata. Esta hipótesis está apoyada por varias observaciones. Nuestro análisis anterior de la miosina IC isoforma A expresión en muestras de tejido de ratón [18] reveló que esta isoforma específica muestra una alta expresión sólo en el riñón, glándula adrenal, páncreas, y un subconjunto de los tejidos adiposos. Ahora nos muestran un aumento significativo en la expresión de próstata, de pulmón y cáncer de próstata los tejidos tumorales de hígado de ratón TRAMP en comparación con los tejidos de tipo salvaje.
El modelo de cáncer de próstata TRAMP se basa en la expresión específico de la próstata de el SV40-Tag oncogénica [21]. El antígeno T grande de SV40 actúa a través de varias vías, incluyendo la inactivación de proteínas supresoras de tumores p53 y Rb, así como la activación transcripcional de un número de proteínas implicadas en la oncogénesis [22]. Debido SV40-TAG es un universal en lugar de un oncogén específico del cáncer de próstata que se ha utilizado ampliamente como un modelo de muchos otros tipos de cáncer [30], que podría haber sido posible que los cambios en la miosina IC isoforma se indujo una expresión a través de las acciones de SV40-Tag independientemente del tipo de cáncer. Sin embargo, nuestro análisis mostró que la isoforma Una expresión no se alteró en la línea celular As4.1 que se estableció a partir del fluido ascítico de un seis meses de edad ratones transgénicos con un tumor de riñón intraparenquimatosa que fue inducida por la tumorigénesis transgén objetivo a través de SV40-tag fusionada al promotor de la renina [25]. Además, hemos encontrado miosina IC isoforma Una expresión alterada en las líneas de células TRAMP-C2 que TRAMP-C1 y, aunque procedentes de ratones TRAMP, no expresan SV40-etiqueta [26]. Por otra parte, también encontramos una mayor isoforma Una expresión en el SV40-Tag líneas celulares de cáncer de próstata humano independientes PC-3, DU 145, y 22Rv1 pero no en la línea celular de próstata humano no canceroso RWPE-1 o en cualquiera de los otros no líneas celulares de cáncer -prostate. Tomados en conjunto, estos datos sugieren fuertemente que la miosina IC la isoforma a los cambios de expresión son concurrentes con alteración específica del cáncer de próstata en los perfiles de expresión celular en lugar de SV40-TAG-específicas cambios de expresión.
Mientras que el patrón de expresión de la miosina isoforma A IA para ello es necesario analizar más a fondo, el cáncer de próstata humano y de ratón nuestros resultados aquí, que muestran una sobreexpresión en cáncer de líneas celulares de próstata humano y el ratón y en la próstata cáncer asociado tejidos murinos, sugieren fuertemente que la miosina específicamente IC isoforma a podría ser un posible marcador diagnóstico para la detección de cáncer de próstata.
Reconocimientos
Agradecemos Ellen Karasik por su excelente asistencia técnica con el análisis inmunohistoquímico. Nos gustaría agradecer al Dr. Wade Sigurdson y el Dr. Joan Baizer para obtener ayuda con imágenes microscópicas.