Extracto
Antecedentes
La novela compuesto soluble en agua STA-1474 se metaboliza a ganetespib (anteriormente STA-9090), un inhibidor de HSP90 potente previamente demostrado para matar líneas de células tumorales caninas
in vitro
e inhibir el crecimiento del tumor en el contexto de xenoinjertos murinos. El propósito del siguiente estudio fue extender estas observaciones e investigar la seguridad y eficacia de STA-1474 en perros con tumores espontáneos.
métodos y las conclusiones
Este fue un ensayo de fase 1 en el que perros con tumores espontáneos recibieron STA-1474 en virtud de uno de los tres esquemas de dosificación diferentes. Se evaluó la farmacocinética, toxicidad, cambios de biomarcadores y respuestas tumorales. Veinticinco perros con una variedad de cánceres se inscribieron. Las toxicidades fueron principalmente de naturaleza gastrointestinal que consiste en diarrea, vómitos, falta de apetito y letargo. La regulación positiva de la expresión de la proteína HSP70 se observó en ambas muestras de tumor y PBMCs a menos de 7 horas después de la administración del fármaco. Se observaron respuestas objetivas medibles en perros con enfermedad de mastocitos malignos (n = 3), osteosarcoma (n = 1), melanoma (n = 1) y carcinoma de tiroides (n = 1), para una tasa de respuesta del 24% (6 /25). Enfermedad estable (& gt; 10 semanas) se observó en 3 perros, para una actividad biológica resultante global del 36% (9/25)
Conclusiones
Este estudio proporciona evidencia de que la STA-1474. actividad biológica exhibe en un modelo animal grande correspondiente de cáncer. Dadas las similitudes de canino y los cánceres humanos con respecto a la biología del tumor y la activación HSP90, es probable que STA-1474 y ganetespib demostrarán actividad anti-cáncer comparable en pacientes humanos
Visto:. London CA, Bear MD , McCleese J, Foley KP, Paalangara R, Inoue T, et al. (2011) Fase I Evaluación de la STA-1474, un profármaco de la novela inhibidor de HSP90 Ganetespib, en perros con cáncer espontáneo. PLoS ONE 6 (11): e27018. doi: 10.1371 /journal.pone.0027018
Editor: Mikhail V. Blagosklonny, Roswell Park Cancer Institute, Estados Unidos de América
Recibido: July 9, 2011; Aceptado: 7 Octubre de 2011; Publicado: 3 Noviembre 2011
Derechos de Autor © 2011 Londres et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Esta clínica ensayo fue financiado por fondos de Synta Pharmaceuticals Corp. los donantes contribuido al diseño del estudio, el análisis farmacocinético y la preparación del manuscrito, pero no tuvo ningún papel en el tratamiento y la evaluación de los perros en este estudio
Conflicto de intereses:. la autores han declarado que no existen intereses en competencia.
Introducción
proteína de choque térmico 90 (HSP90), una chaperona molecular que promueve la maduración conformacional y la estabilización de una amplia variedad de proteínas cliente, es una prometedor objetivo para la intervención terapéutica en el cáncer [1], [2], [3], [4]. Muchos clientes de HSP90 se conocen oncoproteínas, incluyendo miembros de la familia EGFR, Akt, de Bcr-Abl, p53 mutante, Kit, y se reunió, entre otros [1], [3]. La inhibición de la función de HSP90 promueve la degradación de estas proteínas cliente lo más a menudo a través de la vía ubiquitina proteasoma en última instancia resulta en la apoptosis [2], [3], [4]. Se cree Selectividad de los inhibidores de HSP90 para maligna frente a las células normales para ser conferida por el hecho de que la acumulación de sobre-expresado y proteínas cliente mutados promueve un giro a la, forma compleja super-chaperona activa de HSP90 en células de cáncer [5], [6 ], [7]. En este estado, una proteína HSP90 se asocia con el cliente con la ayuda de los compañeros de chaperonas tales como p23, HSP40, HOP, y HIP [3], [5], [6]. Esta super-chaperonas exposiciones complejos mejoran la actividad ATPasa, y por lo tanto a menudo se une pequeña molécula de ATP miméticos con una afinidad más alta que la forma no complejada de HSP90, lo que lleva a la acumulación en tumores en relación con los tejidos normales. Como tal, la actividad de HSP90 mejorada confiere una mayor sensibilidad de las células malignas a la pérdida de la función de HSP90 [5]. Orientación de HSP90 en el cáncer también es atractiva como no hay mutaciones de resistencia se han identificado en esta proteína en los cánceres humanos, lo que sugiere que representa un objetivo relativamente estable para el tratamiento de drogas [8]. Dado que la inhibición de HSP90 puede afectar múltiples vías que con frecuencia contribuyen al proceso oncogénico, los inhibidores de HSP90 tienen el potencial de demostrar actividad de amplio a través de múltiples tipos de tumores [1], [3].
La primera clase de inhibidores de HSP90 fue basado en geldanamicina, un antibiótico de ansamicina benzoquinona que se une a la N-terminal de bolsillo de unión a ATP de HSP90, bloqueando de este modo su función ATPasa. Geldanamicina y sus derivados semi-sintéticos 17-AAG y 17-DMAG prevenir la estabilización de las proteínas cliente, en última instancia, resulta en su degradación [9], [10], [11]. Sin embargo, geldanamicina y sus derivados tienen una serie de limitaciones incluyendo retos de formulación y los efectos secundarios tales como la hepatotoxicidad [12]. STA-1474 (Synta farmacéuticos Corp, Lexington, MA, EE.UU.) es un profármaco altamente soluble de ganetespib (anteriormente STA-9090), un nuevo compuesto que contiene resorcinol-no relacionado con geldanamicina que se une en el dominio ATP-biding en el extremo N-terminal de HSP90 y actúa como un inhibidor de HSP90 potente. Ganetespib induce la degradación de múltiples proteínas cliente de HSP90, matando a una amplia variedad de líneas celulares de cáncer humano a bajas concentraciones nanomolares
in vitro
, y muestra una actividad potente contra el cáncer en modelos de tumores de xenoinjertos en ratones ([13], [ ,,,0],14], [15] y no publicados, los datos Synta Pharmaceuticals Corp.).
En estudios anteriores, hemos demostrado que ganetespib y su profármaco soluble en agua STA-1474 tener actividad contra líneas celulares tumorales caninas [14], [ ,,,0],15]. El tratamiento del osteosarcoma (OSA) y tumores de mastocitos (MCT) líneas celulares, ya sea con ganetespib o la inhibición del crecimiento inducida STA-1474, la apoptosis que era caspase3 /7 dependiente, y la inactivación y /o baja regulación de PKIT /Kit, pMET /Met , pAkt /Akt, y pSTAT3. Tanto ganetespib y STA-1474 mostraron una actividad superior a la geldanamicina derivado 17-AAG. Ganetespib inhibió el crecimiento tumoral en un modelo de xenoinjerto MCT murino, mientras STA-1474 indujo la regresión del tumor,-3 caspasa activación y regulación a la baja de fosfo-Met (PMET) /Met y p-Akt /Akt en xenoinjertos de OSA [14], [15] . El propósito del siguiente estudio clínico era ampliar nuestros
in vitro
y murinos estudios e investigar la seguridad y eficacia de STA-1474 en perros con tumores espontáneos como un preludio para el futuro trabajo clínico en humanos con cáncer.
Materiales y Métodos
Elegibilidad
Este ensayo clínico fue aprobado por el Comité Ejecutivo del hospital veterinario de la Universidad del Centro Médico del Estado de Ohio en julio de 2007. consentimiento informado por escrito del propietario de cada perro fue solicitada de acuerdo con la IACUC y el Colegio de Medicina Veterinaria de la Universidad directrices del Estado de Ohio. STA-1474 se administró a los perros con tumores espontáneos que habían fracasado al tratamiento convencional o para el que no había alternativas terapéuticas, o para los que la terapia convencional no era deseado por el propietario. Para ser elegibles para el estudio, cada perro debe haber sido diagnosticada con una de un conjunto seleccionado de confirmación histológica de tumores malignos espontáneos, y se han cumplido todos los criterios de inclusión y ninguno de los criterios de exclusión. malignidades elegibles incluyen carcinomas, sarcomas, tumores de células cebadas, sarcomas histiocitarias, o linfomas. criterios de elegibilidad adicionales incluyen: & gt; 1 año de edad al inicio del estudio; la función del órgano adecuado; al menos 2 semanas desde la quimioterapia previa o la radiación con una recuperación completa de las toxicidades agudas de estos tratamientos (3 semanas para un procedimiento quirúrgico); al menos 1 semana antes ya que el tratamiento con cualquier otro fármaco en investigación; sin diagnóstico de la leucemia; y no hay evidencia de metástasis cerebrales o cualquier enfermedad sistémica grave incompatible con el estudio a discreción del investigador.
formulación STA-1474
STA-1474, un profármaco soluble de ganetespib, se proporcionó por Synta Farmacéutica Corp (Figura 1). Liofilizado STA-1474 producto farmacológico se almacenó a 4 ° C y protegido de la luz, hasta el día del tratamiento. Drogas se disolvió en 148 Plasmalyte USP y el pH se ajustó a la gama de 6,0 a 7,0, usando NaOH 0,1 N solución estándar para una concentración final de 3 mg /mL. La solución de fármaco se esterilizó por filtración con filtro de nylon de 0,2 μ y se carga en un camino fluido no DEHP IntraVia
TM 250 ml envase vacío. A continuación, la bolsa de infusión cargado estaba conectado a un conjunto de ventilación paclitaxel con revestimiento de polietileno, que contiene un filtro de 0,22 μ, para la administración. Tanto la bolsa de infusión y la línea se cubrieron para proteger de la luz. solución de fármaco se utiliza dentro de las 24 horas de preparación.
que se muestra es la estructura química de STA-1474, un profármaco de fosfato soluble en agua de ganetespib.
Diseño del estudio
Este estudio fue un ensayo de fase I escalada de dosis, la evaluación de etiqueta abierta de la seguridad y la farmacocinética de STA-1474 en los perros con tumores malignos propiedad del cliente espontáneas. Los perros se les administró STA-1474 en uno de los tres regímenes de dosificación y se evaluaron semanalmente o dos veces por semana depende del régimen utilizado. Evaluación de la toxicidad clínica y la respuesta del tumor se realizó en cada visita. Los perros fueron evaluados para hematológicos y bioquímicos toxicidades cada 7 días con análisis de sangre de rutina. La dosis inicial de STA-1474 se ajustó a 7 mg /kg sobre la base de los datos anteriores de los perros normales de laboratorio (datos no presentados) y aumento de la dosis se fijó en incrementos de 2,5 mg /kg en cohortes de 3 hasta limitante de la dosis de toxicidad (DLT) se identificado. El TDL se considera que cualquier hematológica de grado 3 o 4 o toxicidad no hematológica en base a los criterios establecidos VCOG-CTAE [16]. Además, que no sean del grado crónica 3 o 4 toxicidades que a deteriorar significativamente la calidad de vida (es decir, letargo, falta de apetito) fueron calificados como TLD. eventos adversos progresión o signos y síntomas relacionados con la enfermedad definitivamente la enfermedad no fueron considerados (EA).
Toxicidad evaluación
Cada paciente fue sometido a una historia completa línea de base, el examen físico y evaluación de laboratorio antes de la dosis que incluía un recuento sanguíneo completo (CBC), perfil bioquímico en suero y análisis de orina. Los pacientes fueron evaluados para los eventos adversos en los días 8, 15, 22 y 29, momento en el que tienen una cuenta de sangre completa se realizaron con diferencial y la química clínica. El análisis de orina se realizó al inicio y sólo repite si está indicado. Estipulaciones respecto a los requisitos mínimos hematológicos para continuar la dosificación se incluyeron en el protocolo: hematocrito & gt; 25%, neutrófilos & gt; 1.500 /L, las plaquetas & gt; 100.000 /L. Además, se pidió a las transaminasas hepáticas ser. & Lt; 4X límite superior de la normalidad con una bilirrubina y creatinina en suero normal total para continuar la terapia STA-1474
medicaciones concomitantes
Para prevenir o tratar la droga -relacionado toxicidades gastrointestinales, la atención de apoyo se administró como sea necesario para perros inscritos en las cohortes de dosis diarias. Esto normalmente consistía en famotidina, metronidazol, loperamida, metoclopramida, ondansetron, y /o maropitant. Los antihistamínicos se administraron a los perros con tumores de mastocitos, como se conoce a estos tumores para liberar histamina. Otro atención de apoyo se administra a perros consistió en medicamentos prednisona y no esteroides anti-inflamatorios para tratar la inflamación asociada a tumores, inapetencia, y para controlar el dolor.
La respuesta del tumor evaluación
evaluaciones tumorales se completaron antes de la entrada en el estudio, y los días 8, 15, 22 y 29. para los perros que continuaron más allá de las previstas 4 dosis de STA-1474, evaluaciones de la respuesta se realizaron cada 3-6 semanas siguientes, bien en el momento de la progresión del tumor sospechoso. Las respuestas se evaluaron por el investigador de acuerdo a criterios de protocolo predefinidos. La respuesta en perros con enfermedad evaluable se llevó a cabo mediante el examen clínico, radiografía, ecografía o tomografía computarizada. Muchas lesiones no eran susceptibles de imágenes radiográficas cuantitativa, pero fueron seguidos mediante un examen clínico de serie (lesiones superficiales; ganglios linfáticos palpables) o por ultrasonografía (ganglios linfáticos abdominales). lesiones torácicas fueron evaluados por radiografía torácica y lesiones nasales por tomografía computarizada
.
La respuesta en perros con enfermedad medible fue juzgado por el investigador sobre la base de criterios RECIST [17]. Una respuesta completa (CR) se definió como la desaparición de todas las enfermedades en dos mediciones separadas por un período mínimo de 3 semanas. Una respuesta parcial (PR) se definió como una reducción mayor que 30% en la suma del diámetro más largo de las lesiones diana documentados por dos evaluaciones separadas por al menos 3 semanas. Un aumento de & gt; 20% en el tamaño de todas las áreas tumorales medibles medida por la suma de los diámetros más largos de las lesiones diana tomadas como referencia la suma más pequeña desde el inicio del tratamiento, o la aparición de cualquier lesión nueva (s) calificaría como enfermedad progresiva (PD). Una respuesta mixta (MR) se define como relaciones públicas en algunas lesiones diana con EP en otras lesiones objeto de estudio. Enfermedad estable (SD) se define por la ausencia de criterios, ya sea para una respuesta o progresión. Los perros que no tenían evidencia de progresión del tumor y que no habían experimentado ninguna toxicidad inaceptable eran elegibles para los ciclos de tratamiento prolongados. Se permitió la escalada de dosis en un perro en particular si el perro estaba tolerando el tratamiento
farmacocinética Ganetespib
fueron recogidos
Las muestras de plasma en el día 1 y el día 22 de la terapia en los intervalos que se especifican:. antes y después de la dosificación a los 30, 60, 90, 120, 180, 300 (5 h), 540 (9 hr), y 1440 (24 hr) minutos en relación con el inicio de la dosificación. En el día 8, día 15, y el día 29, se recogió el plasma antes de la dosis única. Aproximadamente se elaboró 1 ml de sangre de un catéter permanente, colocado en un tubo de vidrio vacío heparina de sodio, y se colocaron en hielo hasta la centrifugación. Las muestras de sangre se centrifugaron a 3300 rpm durante 10 minutos, dentro de los 30 minutos de la colección. El plasma se transfiere mediante una pipeta en dos crioviales y se almacena a -80 ° C hasta su análisis.
Las concentraciones plasmáticas de ganetespib se determinaron utilizando una espectrometría de masas en tándem de cromatografía líquida cualificado método (LC-MS /MS). Las muestras se analizaron en un sistema HPLC que consta de un módulo de separación HP1100 de Agilent (Santa Clara, CA) acoplado a un detector AB SCIEX API400 MS /MS (Foster City, CA). Estable ganetespib marcado isotópicamente se utilizó como estándar interno. extracción de la muestra se realizó mediante un método de extracción líquido-líquido con 25 u muestras de plasma y 800 l metil ter-butil éter. La fase orgánica de las muestras se evaporó a sequedad en atmósfera de nitrógeno y se reconstituye con una solución de agua /acetonitrilo para inyección. La separación cromatográfica se consiguió en una columna analítica de fase inversa (4 micras de partículas, 50 × 2,0 mm de diámetro interno) con elución en gradiente de ácido fórmico de agua /0,1% y ácido fórmico en acetonitrilo /0,1% a una velocidad de flujo de 500 l /min. El tiempo total de ejecución fue de 4 min. La cuantificación se logra por detección MS /MS en el modo de ion positivo mediante la monitorización de reacción múltiple. El límite inferior de cuantificación (LLOQ) fue 1,00 ng /ml, con un intervalo de concentración desde 1,00 hasta 1.000 ng /mL.
Los parámetros farmacocinéticos para ganetespib se determinaron a partir de los datos de concentración de plasma utilizando el módulo de análisis no en WinNonlin, versión 5.2 (Pharsight Corporation, St. Louis, MO). Las muestras anteriores a la dosis que midieron por debajo de la LLOQ (BQL) fueron tratados como cero para los cálculos. La concentración máxima (Cmax) y el tiempo de concentración máxima (Tmax) se determinaron directamente a partir de los perfiles de concentración-tiempo observados. El área bajo la curva de concentración plasmática-tiempo (AUC) se calculó mediante la regla trapezoidal lineal. La vida media aparente (t
medio) se calculó como t
media = 0.693 /λ, donde λ era la constante de velocidad de eliminación estimada a partir de la regresión de la pendiente terminal de la curva de concentración frente el tiempo.
Evaluación de la expresión de HSP70
Las pequeñas biopsias se obtuvieron de un subconjunto de tumores de pacientes que eran accesibles a los 0, 7, y 24 horas después del tratamiento. Las biopsias se obtuvieron utilizando un instrumento de biopsia en sacabocados de 3 mm o de calibre 14 aguja Tru-cut. Todas las muestras se colocaron en crioviales, inmediatamente FLASH congelados en nitrógeno líquido y se almacenaron a -80 ° C hasta su análisis HSP70. Para evaluar los niveles relativos de HSP70 en las muestras tumorales recogidas, un HSP70-enzima disponible comercialmente ensayo inmunoenzimático (ELISA; del ensayo diseños, Ann Arbor, MI) se ha realizado. muestras tumorales congeladas se pulverizaron utilizando un mortero y mano de mortero congelado. El polvo resultante se volvió a suspender en nitrógeno líquido, se recogió, a continuación, dividido entre dos 15 conicals ml; uno cónica para ELISA y uno para Western blot (véase el método a continuación). Una vez que el nitrógeno líquido se evapora de distancia, las muestras se dejaron descongelar en hielo. Las muestras para ELISA fueron resuspendidas en (1X) reactivo de extracción que contiene 1 mg /ml de aprotinina, 1 mg /ml de leupeptina, 1 mg /ml de pepstatina A, PMSF 1 mM, ortovanadato de sodio 1 mM, and10 fluoruro de sodio mM, usando 1 ml para cada 0,5 cm
3 de tejido. Las muestras se incubaron en un agitador durante 1 hora a 4 ° C, se centrifugó durante 15 minutos a 4 ° C, y luego se recogieron los sobrenadantes. ensayo de cuantificación de proteínas de Bradford se realizó en los extractos utilizando BioRad reactivo (BioRad, Hercules, CA). Las muestras se igualaron a 250 ug /ml con (1X) reactivo de extracción, alícuotas, y se almacenaron a -80 ° C hasta su análisis. En una fecha posterior, donde las muestras congeladas se dejan descongelar en hielo, después se diluyeron en serie con diluyente de la muestra 2 (proporcionado en el kit) a 1:04, 1:16, y 1:32. 100 l de cada dilución se añadieron a los pocillos apropiados, por duplicado, de la placa de ELISA de 96 pocillos pre-revestido. El ELISA se realizó siguiendo las instrucciones del fabricante, y se midió la absorbancia dentro de los 30 minutos utilizando un lector de microplacas Spectramax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) con longitud de onda fijado en 450 nm y una longitud de onda de corrección en 540 nm.
Para evaluar los niveles de HSP70 en células mononucleares de sangre periférica, se recogieron 8 ml de sangre entera antes de la dosificación y 24 horas después del tratamiento (en algunos casos también en 7 horas después del tratamiento) en el día 1 y día 22 de la vena yugular en dos 4 ml BD Vacutainer tubos CPT (BD, Franklin Lakes, NJ). Las muestras se mantuvieron a temperatura ambiente hasta la centrifugación durante 1 hora a 1.600 RCF, dentro de 2 horas de recogida. Después de la centrifugación, la capa de células mononucleares en el plasma se transfirió a un cónico de 15 ml. PBMCs se lavaron mediante la adición de 15 ml de PBS y centrifugando durante 15 minutos a 300 RCF. Después de dos lavados, los sedimentos celulares se resuspendieron en 1 ml de PBS, y se transfirieron a un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. Las células se sedimentaron de nuevo por centrifugación a 13.000 RCF durante 1 minuto. Se eliminó el sobrenadante y los sedimentos celulares, donde se congelaron rápidamente en nitrógeno líquido y se almacenan a -80 ° C. Inmediatamente antes del análisis, los pellets PBMC se dejaron descongelar en hielo, a continuación, cada muestra se resuspendió en 500 l (1X) de tampón de extracción con inhibidores de proteasa. Utilizando el método descrito anteriormente, se analizaron las muestras para las concentraciones relativas de HSP70 utilizando el HSP70-ensayo de inmunoabsorción enzimática (Diseños de ensayo, Ann Arbor, MI).
Evaluación de las biopsias de tumores para la expresión de HSP90
muestras tumorales congeladas se procesaron tal como se ha descrito anteriormente, a continuación, se resuspendieron en 100 a 150 uL de tampón de lisis que consta de 20 mM Tris-HCl pH 8,0, NaCl 137 mM, 10% de glicerol, 1% de Igepal CA-630, 10 mM de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), 1 mg /ml de aprotinina, 1 mg /ml de leupeptina, 1 mg /ml de pepstatina A, 1 mM de fluoruro de phenylmethysulphonyl, ortovanadato de sodio 1 mM, 10 mM de fluoruro de sodio (todos de Sigma, St. Louis, MO). Muestra se sacudió a 4 ° C durante 1 hora, y después se centrifugó durante 15 minutos a 13.000 RCF. Un ensayo de proteínas de Bradford se realizó en los lisados utilizando BioRad reactivo (Hercules, CA). 60-100 g de proteína se separaron mediante SDS-PAGE y se transfirió a membranas de PVDF. Las membranas se incubaron durante la noche con anticuerpos anti-HSP90 (Cell Signaling Technology, Danvers, MA), se lavaron, después se incubaron con peroxidasa de rábano anticuerpo secundario unido. Las membranas se lavaron de nuevo, a continuación expuestos a Super Señal West Dura Extended Duration Substrato (Pierce, Rockford, IL) membranas fueron despojados, se lavaron y se volvieron a sondar para β-actina (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) usando el i.d. SNAP aparatos (Millipore, Billerica, MA) según las instrucciones del fabricante.
Resultados
Los sujetos
Un total de 25 perros con una variedad de cánceres espontáneos fueron incluidos en el estudio. demográficos del paciente y el tipo de tumor se enumeran en la Tabla 1. La mayoría de los perros que participaron en este estudio había fallado regímenes de tratamiento previo (n = 18, 72%), que incluye cirugía, radioterapia, quimioterapia o una combinación de estos tratamientos. Dados los datos anteriores que demuestran la actividad biológica de ganetespib en osteosarcoma canino (OSA) y líneas de células de tumor de mastocitos (MCT), así como la evidencia de la regresión del tumor /estabilización en modelos de xenoinjertos murinos de OSA canino y MCT, los perros con estos tipos de tumores eran enriquecida en este estudio de fase I. Los tipos de tumores representados incluyen OSA (n = 10), MCT (n = 4), carcinoma de tiroides (n = 3), linfoma (n = 3), de otro carcinoma (n = 2), condrosarcoma nasal (n = 1), oral melanoma maligno (n = 1), y el fibrosarcoma oral (n = 1).
Los grupos de tratamiento y análisis farmacocinético
Perros (n = 12) se introdujeron inicialmente en un régimen de tratamiento que consiste en STA-1474 administra por vía intravenosa durante una hora una vez por semana. Una segunda cohorte de perros (n = 6) se administró STA-1474 más de 8 horas una vez por semana. Este régimen de dosificación fue elegido sobre la base de una respuesta parcial al tratamiento observada en un perro con melanoma maligno en la primera cohorte tras la extravasación de drogas y la exposición prolongada del fármaco debido a la lenta absorción subcutánea. La tercera cohorte de perros (n = 7) recibió STA-1474 administrarse más de una hora dos veces por semana. Cada perro entró en el estudio estaba destinado a recibir por lo menos 4 dosis de STA-1474 con la opción de continuar el tratamiento en la cara de cualquiera enfermedad estable o una respuesta objetiva del tumor.
Los datos farmacocinéticos se resumen en la Tabla 2 . muestreo farmacocinético completo se llevó a cabo para todos los perros en este estudio en el primer día de administración del fármaco. La concentración media en plasma - perfiles de tiempo para los perros en los tres grupos de tratamiento se muestran en la Figura 2a, con los perfiles representativos de los 6 perros (2 en cada grupo de tratamiento) en la figura 2b. Para los perros que reciben cualquiera de los tres regímenes de dosificación, el AUC fue relativamente similar, que oscila entre 5013-5701 ng /ml ganetespib-hr. Sin embargo, las infusiones de fármacos por hora a 9,25 mg /kg o 5 mg /kg causaron un Tmáx más corto (0,7 horas y 1,1 horas, respectivamente) y mayor Cmax (3982 ng /ml y 3415 ng /ml, respectivamente) en comparación con el 8 horas de infusión (Tmáx de 5,7 horas, la Cmáx 802 ng /ml)
a) la media de la concentración plasmática ganetespib -. perfil de tiempo para cada régimen de dosificación b) la concentración plasmática ganetespib Representante - perfiles de tiempo para dos pacientes en cada régimen de dosificación.
evaluación de la seguridad
Los eventos adversos durante los ciclos de tratamiento (que se resumen en la Tabla 3) consistían casi en su totalidad de molestias gastrointestinales (anorexia, náuseas, vómitos, diarrea) y letargo. No hay hematológicos o bioquímicos toxicidades relacionadas con las drogas se observaron en ninguna de las dosis. Un perro con osteosarcoma metastásico desarrolló insuficiencia renal aguda anúrica lo que resulta en la eutanasia. necropsia posterior reveló la presencia de émbolos grandes tumor en ambas arterias renales, sin evidencia de los cambios inducidos por fármaco en el parénquima renal, y como tal enfermedad progresiva se determinó que era la causa de la falla renal observada. Un segundo perro desarrollado pruebas de función hepática aguda (ALT, ALP) y elevaciones de bilirrubina 24 horas después de la administración del fármaco. El perro vomita posteriormente un cuerpo extraño grande que consiste en gasas utilizadas para el vendaje de la zona del catéter y los valores bioquímicos volvieron a la normalidad dentro de las 72 horas; una obstrucción parcial temporal del conducto biliar común debido a cuerpo extraño se determinó que la causa de los cambios bioquímicos en este caso.
aumento de la dosis se realizó y toxicidades limitantes se identificaron utilizando la dosis una vez por semana de infusión por hora. Si bien casi todas las toxicidades gastrointestinales fueron principalmente de grado 1 o 2 en la naturaleza, a dosis superiores a 9,5 mg /kg, se encontró que los perros tener letargo y anorexia que los propietarios sintieron deteriorado de manera significativa la calidad de vida, lo que resulta en la interrupción de la administración del fármaco. Por ejemplo, los tres perros que recibieron 10,25 mg /kg de fármaco experimentado grado 2 diarrea, letargo, anorexia y y cada posteriormente recibido solamente una dosis del fármaco. Como tal, /kg se consideró 9,5 mg para ser la dosis semanal máxima tolerada de fármaco cuando se administra semanalmente durante 1 a 8 horas. A esta dosis, las toxicidades gastrointestinales fueron manejable con la adición de medicaciones concomitantes que consta de ondansetron, metoclopramida y /o maropitant para las náuseas /vómitos y metronidazol y /o loperamida para la diarrea. Todos los perros que continuaron el tratamiento con STA-1474 después del período inicial de 4 ciclos de tratamiento se mantuvieron en medicaciones concomitantes para la duración del tratamiento farmacológico.
La respuesta al tratamiento
Las tasas de respuesta se determinaron para perros introducidos en los 3 grupos de dosificación diferentes. Para los perros que recibieron una vez al régimen de dosificación semanas (n = 12), no hay respuestas objetivas se observaron con la excepción de un perro con una extensa melanoma maligno oral que experimentó un acontecimiento de extravasación durante la 4
TH tratamiento con STA-1474. Este perro tuvo una respuesta parcial en el tamaño del tumor y después de análisis farmacocinético (Figura 3), se determinó que la administración subcutánea inadvertida resultó en un Tmax prolongado, sin un cambio significativo en el AUC reales (datos no mostrados).
paciente#5 tenía un melanoma maligno oral de agresivo que había invadido en la cavidad nasal. Durante el 4
º ciclo de tratamiento con STA-1474, se produjo un acontecimiento de extravasación que resulta en la farmacocinética de medicamentos alterados. Una marcada disminución en la masa por vía oral se observó 7 días más tarde y una TC posterior confirmó una respuesta parcial a la terapia. Se muestran dos imágenes de TC representante igualada de tumor antes y después del tratamiento.
Sobre la base de pruebas de la actividad biológica asociada con un Tmáx más largo, se empleó modelos farmacocinéticos para determinar un modelo de dosificación que permita lograr un Tmáx similares cuando la droga fue entregada en un período de tiempo más largo a la misma velocidad de la dosis. Se predijo que 9,5 mg /kg de STA-1474 dada a través de una infusión de 8 horas daría lugar a concentraciones plasmáticas de ganetespib superiores a 100 ng /ml de plasma de 8-10 horas y, consecuentemente, los próximos 6 perros se introdujeron en una cohorte de evaluar esta el régimen de dosificación. Además, dos perros de la primera cohorte de dosificación (9,5 mg /kg una vez por semana) fueron cambiados al protocolo de infusión de 8 horas después de terminar las previstas 4 dosis de la droga. De los 6 perros tratados inicialmente con la infusión más tiempo, había dos respuestas parciales (carcinoma de tiroides metastásico, 36 semanas, la Figura 4a; OSA metastásico, 20 semanas, la Figura 4b), una respuesta mixta (MCT metastásico, 16 semanas), y dos perros experimentaron enfermedad estable (ambos con OSA metastásico, 12 semanas). Un perro con carcinoma de tiroides metastásico que conmutado desde la 1 hr a 8 hr infusión experimentó enfermedad estable durante 40 semanas, y el perro con el evento de melanoma y la extravasación maligno oral, experimentó una respuesta parcial continuó durante 12 semanas, mientras que en el protocolo de infusión de 8 horas.
a) el paciente número 14 tenía un carcinoma de tiroides localmente recurrente con metástasis en los pulmones. Este paciente recibió STA-1474 en el protocolo de infusión de 8 horas y se experimenta una respuesta parcial al tratamiento tanto de la localmente recurrente y enfermedad metastásica. Se demuestran las radiografías representativas antes y después de 15 tratamientos con STA-1474. Las flechas amarillas señalan los nódulos pulmonares metastásicos. b) Paciente#18 tenían AOS metástasis a los pulmones después de la amputación y quimioterapia para un OSA apendicular. Este paciente recibió STA-1474 en el protocolo de infusión de 8 horas y se experimenta una respuesta parcial a la terapia. Se demuestran las radiografías representativas antes y después de 4 tratamientos con STA-1474. Las flechas amarillas señalan los nódulos pulmonares metastásicos.
Dado que el protocolo de infusión ya parece estar asociado con la actividad biológica, quisimos determinar si la administración más frecuente de STA-1474 utilizando el protocolo de perfusión de 1 hora sería a la vez tolerable e inducir respuestas objetivas a la terapia. Una dosis de 5 mg /kg administrada durante una hora dos veces por semana se eligió basándose en los datos preliminares de la tolerabilidad en los perros normales y modelos farmacocinéticos (datos no mostrados). Como se muestra en la figura 2a y b, este régimen de dosis dio como resultado una Cmax y AUC ligeramente menor que el generado por la dosis 9,5 mg /kg. Las toxicidades observadas fueron similares a los de la dosis de una vez semanal más alta de STA-1474. De los 7 perros que recibieron este protocolo, 2 experimentaron una respuesta parcial al tratamiento (tanto los MCT, figura 5) y los dos perros pasó a tener su enfermedad restante extirpado quirúrgicamente. Un perro (OSA metastásico) experimentaron enfermedad estable durante un corto período de tiempo, pero el propietario decidió no continuar la terapia y como tal, este no cumplía los criterios RECIST. Los perros restantes (linfoma, n = 3; OSA metastásico, n = 1) experimentaron enfermedad progresiva
a) paciente nº 19 tenían grado recurrentes 3 MCT cutáneas.. Este paciente recibió STA-1474 en el protocolo de infusión de 1 hora dos veces por semana y se experimenta una respuesta parcial a la terapia de las lesiones cutáneas después de 7 tratamientos. b) El paciente número 24 tenía una gran MCT cutáneo no tratado previamente. Este paciente recibió STA-1474 en el protocolo de infusión de 1 hora dos veces por semana y se experimenta una respuesta parcial a la terapia de las lesiones cutáneas después de 4 tratamientos.
Evaluación de HSP90 y HSP70 expresión en muestras de tumores y PBMCs
Tras la inhibición de HSP90, la rápida regulación positiva de la expresión de HSP70 se observa a menudo [14], [15], [18]. Como tal, la regulación positiva HSP70 puede servir potencialmente como un biomarcador de la pérdida de la función de HSP90. Para determinar si el tratamiento con STA-1474 alteró la expresión de HSP70, HSP70 y si podía servir como un potencial biomarcador sustituto sensible para PBMCs de inhibición de HSP90 se recogieron pre y post-tratamiento y transferencia Western para HSP70 se realizó. Como se muestra en la Figura 6a, pequeños aumentos en la expresión de HSP70 fueron evidentes en las muestras de PBMC después del tratamiento, a pesar de estos cambios eran difíciles de cuantificar con precisión. En consecuencia, se utilizó un ensayo ELISA en muestras posteriores para evaluar con más precisión la regulación positiva de HSP70.