Extracto
Antecedentes
El cáncer de próstata (CaP) es el cáncer más común entre los hombres en el oeste países. Si bien se utiliza cada vez más la vigilancia activa, la mayoría de los pacientes son tratados actualmente con prostatectomía radical. Con el fin de evitar el exceso de tratamiento, existe una necesidad indiscutible de biomarcadores fiables para identificar los casos potencialmente agresivos y letales. proteínas de filamentos intermedios nucleares llamados laminas juegan un papel en la organización de la cromatina, la expresión génica y la rigidez de la célula. La expresión de la lamina A se asocia con un peor pronóstico en el cáncer colorrectal, pero hasta la fecha el valor pronóstico de las laminas no ha sido probado en otros tumores sólidos.
Métodos
Se estudió la expresión de diferentes laminas con inmunohistoquímica en un material de microarrays de tejidos de 501 pacientes con CaP sometidos a prostatectomía radical y disección de ganglios linfáticos. Los pacientes fueron divididos en dos categorías de tinción (bajo y alto de expresión). La correlación de la expresión de la lamina con variables clínico fue probado y la asociación de la condición de la lamina con recurrencia bioquímica (BCR) y la supervivencia específica de la enfermedad (DSS) se analizó adicionalmente.
Resultados
Baja expresión de lamina un asociado con positividad ganglionar (p & lt; 0,01), pero no con otras variables clinicopatológicas y baja expresión tuvo una asociación significativa con el límite independiente DSS (HR = 0,4; IC del 95%: 0,2-1,0; p = 0,052). Del mismo modo, la expresión bajo la lamina C asocia con una peor supervivencia (HR = 0,2, IC 95% 0,1-0,6; p = 0,004). expresión lamina B1 no asoció con variables clinicopatológicas pero una alta expresión predijo de forma independiente BCR en el análisis multivariable de regresión de Cox (HR = 1,8; IC 95% 1,1-2,9; p = 0,023). Baja expresión de laminina B2 correlacionada con positividad ganglionar (p & lt; 0,01) y predijo DSS desfavorable. (HR = 0,4; IC 95% 0,2-1,0; p = 0,047)
Conclusiones
Estos resultados sugieren papeles diferenciales para las laminas en la progresión del CaP. cantidades reducidas de la lamina A /C y B2 aumento del riesgo de metástasis en los ganglios linfáticos y enfermedad de mortalidad específica, posiblemente a través del aumento de deformación nuclear, mientras que la alta expresión de lamina B1 predice recurrencia de la enfermedad
Visto:. Saarinen I, Mirtti T, H Seikkula , Boström PJ, Taimen P (2015) Roles predictivos diferenciales de A y tipo B láminas nucleares en el cáncer de próstata progresión. PLoS ONE 10 (10): e0140671. doi: 10.1371 /journal.pone.0140671
Editor: Pavel Strnad, RWTH Aachen, Alemania |
Recibido: 22 Julio, 2015; Aceptado: September 29, 2015; Publicado: 15 Octubre 2015
Derechos de Autor © 2015 Saarinen et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del papel y su archivo de información de apoyo
Financiación: el trabajo fue apoyado por el texto siguiente:. Fundación Päivikki y Sakari Sohlberg, http://www.pss-saatio.fi/, PT; Sigrid Jusélius, http://www.sigridjuselius.fi/foundation/, PT; La Fundación Médica de Finlandia, http://www.laaketieteensaatio.fi/, PT; El Distrito de Hospitales y del suroeste de Finlandia, http://www.vsshp.fi/en/Pages/default.aspx, PT. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de próstata (CaP) es la neoplasia maligna más común entre los hombres y un notable problema de salud pública en los países occidentales. En Estados Unidos, se espera que más de 230 000 nuevos casos y 29 000 muertes relacionadas con CaP a ser diagnosticados en el año 2014 [1]. Los principales factores de riesgo de CaP incluyen la edad, la historia familiar positiva y la raza afroamericana [2]. La mayoría de los pacientes son tratados actualmente con prostatectomía y /o radioterapia radical mientras que la vigilancia activa puede ser beneficioso para los pacientes de bajo riesgo. En la mayoría de los casos, la enfermedad es local y sólo ~ 7% de los pacientes tratados con prostatectomía radical (PR) mueren a causa de CaP durante un seguimiento de 15 años [3]. Por otra parte, parece claro que el tratamiento de cáncer de bajo grado (Gleason de 6 o más adelante) confiere ningún beneficio de supervivencia en comparación con otras causas de muerte. El uso del antígeno prostático específico (PSA) ha revolucionado el diagnóstico de CaP durante los últimos 25 años y más recientemente la prueba de PSA sistemática se ha demostrado que disminuye la mortalidad relacionada con CaP [4]. Sin embargo, carece de la especificidad del PSA para detectar cánceres clínicamente significativos y el inconveniente es el exceso de diagnóstico de los cánceres que no tendrían efecto sobre la calidad y la esperanza de la vida si no se tratan [5]. Esto a su vez conduce a un tratamiento excesivo con efectos secundarios potenciales. Con el fin de evitar el exceso de tratamiento, existe una necesidad indiscutible de biomarcadores fiables para identificar los casos potencialmente agresivos y letales de los que quedan local.
laminas nucleares son proteínas de tipo V de filamentos intermedios (IF). Ellos son los componentes principales de la lámina nuclear, una malla fibrosa de proteínas que subyace en la membrana nuclear interna [6]. Las laminas están divididos en dos subgrupos, de tipo A y de tipo B lamininas. Un solo gen,
LMNA
, codifica las laminas todo de tipo A que incluyen la lamina A, C lamina, una isoforma C2 lamina prueba específica y menor AΔ10 isoforma lamina. Los principales laminas de tipo B, lamina B1 y B2 lamina, son codificadas por dos genes (
LMNB1
y
LMNB2
, respectivamente) [7]. Además, una lamina B3 específica de células germinales se genera a partir de
LMNB2
través de splicing alternativo [8]. Al menos una lamina de tipo B se expresa en todas las células de metazoos, mientras que las laminas de tipo A se expresan principalmente en las células diferenciadas [7].
Las laminas tienen múltiples funciones en el núcleo de la célula. Ellos proporcionan soporte mecánico para el núcleo y juegan un papel en la replicación y reparación del ADN, la transcripción, la organización de la cromatina y la regulación de genes [7]. Numerosas mutaciones en
LMNA
causan un grupo de enfermedades o trastornos humanos heredados comúnmente llamado los laminopathies. Estos incluyen, por ejemplo, las miopatías cardíacas y esqueléticas, lipodistrofias, neuropatía periférica y la enfermedad envejecimiento prematuro conocido como síndrome de progeria [9]. Mientras que la patobiología fundamental de estas enfermedades es en su mayoría mal entendido, las anomalías de forma nuclear (por ejemplo hernias y lobulaciones) se presentan comúnmente en las células que llevan mutaciones asociadas a la enfermedad lamina. Curiosamente, los cambios morfológicos similares del núcleo se observan con frecuencia en las células cancerosas, incluyendo células de CaP [10]. Por lo tanto, es posible que la expresión alterada y modificaciones en las laminas contribuyen transformación maligna de las células del cáncer [11].
Sólo unos pocos estudios retrospectivos han fundamentado la asociación entre la expresión alterada lamina y la evolución del paciente. En el estadio I-III de cáncer colorrectal (CCR), los pacientes con tumores que expresan la lamina A incrementaron significativamente el riesgo de morir por cáncer colorrectal en comparación con los pacientes con tumores negativos lamina A [12]. Sobre la base de
in vitro
estudios, los autores concluyeron además que esto se debe al aumento de la motilidad celular, la invasión y la madre fenotipo de células como promovido por la lamina A /C. Por el contrario, la correa et al. informaron que la pérdida de lamina A /C en la etapa del cáncer de colon II-III se asocia con recurrencia de la enfermedad [13]. En nodal de células B grandes linfoma inactivación del gen de la lamina A /C por el promotor CpG isla hipermetilación difusa se asocia a peor supervivencia [14].
El papel de las laminas en el CaP se ha estudiado más recientemente. El uso de espectrometría de masas (MS) y la inmunohistoquímica, Skvortsov et al. reportado disminución de la expresión de la lamina A en bajo grado (puntuación de Gleason 6), los tumores en relación con pares de muestras de tejido normal histológicamente mientras que se detectó un aumento de la expresión en alto riesgo (puntuación de Gleason 8) tumores [15]. Además, la lamina A /C se sobreexpresa en el frente invasivo de tejido CaP y promueve el crecimiento celular, la migración y la invasión a través de la PI3K /AKT vía /PTEN en condiciones de cultivo [16]. La expresión de las laminas de tipo B, por otro lado, se aumenta en el tejido de próstata canceroso y fuertemente se correlaciona con la puntuación de Gleason [17]. MS análisis sugiere además que se lamina B1 hiperfosforilada en andrógenos células PC-3 independientes [18]. Curiosamente, las regiones cromosómicas asociadas con el riesgo de CaP se localizan en microdominios B con deficiencia de lámina nuclear (ldmd) que exhiben reducido la transcripción de genes (10). Si bien la naturaleza de estas estructuras es claro en la actualidad, la frecuencia de LDMDs se correlaciona con la agresividad CaP línea celular, la motilidad celular y grado de Gleason [10]. En resumen, las laminas sufren alteraciones significativas durante la transformación maligna, pero hasta la fecha no está claro si alguno de estos cambios tienen un valor predictivo en el CaP, especialmente en el cáncer de alto grado.
En el presente estudio se estudió la expresión de diferentes laminas en el CaP en detalle utilizando microarrays de tejidos (TMA) de material que cubre más de 500 pacientes tratados con prostatectomía radical y disección de los ganglios linfáticos. Nuestros resultados muestran que la disminución de la expresión de las laminas de tipo A se asocia con un riesgo elevado de metástasis en los ganglios linfáticos y la muerte específica de la enfermedad, mientras que el aumento de expresión de lamina B1 se asocia con BCR y la diseminación local. Además, la expresión bajo la lamina B2 predijo un mayor riesgo de mortalidad por CaP. También se discuten los posibles mecanismos biológicos celulares y su importancia para la estratificación del riesgo clínico.
El material tisular
parafina embebido material de tejido fijado en formalina Materiales y Métodos En venta 501 pacientes operados con prostatectomía radical y linfadenectomía pélvica limitada en el hospital central de la Universidad de Turku entre enero de 2000 y septiembre de 2005 se utilizaron para la construcción de los bloques de TMA tal como se describe anteriormente [19]. En breve, de tres a doce (mediana 3,0) núcleos adyacentes de 1 mm de diámetro se obtuvieron de la lesión carcinoma índice que se considera el más significativo (basado en el patrón de grado de Gleason, el volumen de la lesión del cáncer y la extensión /o extra-prostática ). Además, un núcleo de tejido de la próstata histológicamente benigna se obtuvo de la misma paciente. Estos núcleos de tejido fueron transferidos de los bloques donante al receptor TMA bloques que contenían un total de 63 núcleos por el bloque de control incluyendo tejidos de hígado normal. Todos los casos en los finales TMA bloques fueron clasificados sobre la base de la Sociedad Internacional de Patología Urológica actualizado sistema de clasificación de Gleason [20]. En el momento de la cirugía, no se obtuvo el consentimiento de los participantes para este estudio específico. En el momento del estudio, el uso de material de tejido y de los correspondientes datos clínico-patológicos y de seguimiento fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital de Distrito del suroeste de Finlandia (130/180/2008) y la Autoridad Nacional para el Bienestar y la Salud (Valvira 394 /05.01.00.06 /2009) de acuerdo con la legislación nacional. La información del paciente se convierte en anónima y no identificable antes del análisis.
Los datos clínicos
Ninguno de los pacientes recibió privación de andrógenos o radioterapia antes o inmediatamente después de la cirugía. El seguimiento se realizó por examen rectal y digitales de medición de PSA post-operatorio por lo menos tres veces durante el primer año después de la cirugía y por lo menos una vez al año durante los años siguientes. De los 501 pacientes, 158 (31%) tuvieron una recurrencia bioquímica (BCR) se define como el nivel de PSA de 0,2 mg /L o superior después de la cirugía.
La puesta en escena de la PCA se realizó de acuerdo a la OMS pTNM sistema de clasificación [21]. 28 pacientes (4,4%) fallecieron por CaP durante el seguimiento, mientras que el 39 (7,8%) fallecieron por otras causas. Debido al largo intervalo de tiempo entre las operaciones, la puntuación de Gleason clínico inicial de cada paciente (SG) fue re-evaluado por el patólogo experimentado genitourinario acuerdo con los criterios actuales del sistema de clasificación de Gleason [20] utilizando secciones de hematoxilina-eosina de las piezas de prostatectomía radical originales. Esta puntuación se utilizó en el análisis de supervivencia y se presenta en la Tabla 1.
La inmunohistoquímica y microscopía
Con el fin de realizar la evaluación inmunohistoquímica (IHC), parafina se elimina primero con xileno y las secciones se rehidrataron con serie graduada de alcohol. Todos los anticuerpos fueron probados en bloques de ensayo de próstata TMA antes de su uso en el material final TMA con el fin de optimizar la dilución y el pre-tratamiento más adecuado. desenmascaramiento Epítopo se llevó a cabo en el microondas las diapositivas de tejido, ya sea en tampón de Tris-HCl (pH 9; lamin B1, B2 y C anticuerpos) o tampón a base de citrato (pH 6; Lamin Un anticuerpo) durante 10 min. Los anticuerpos primarios utilizados fueron monoclonal de ratón anti-lamin A (1: 1000, clon 133A2, Abcam), policlonal de cabra anti-lamin B1 (1: 4000, C-20, Santa Cruz), monoclonal de ratón anti-lamin B2 (1: 500, LN43, Abcam) y policlonal de conejo anti-lamina C (1: 150, RALC, Novus). Debido a la variación en la tinción entre los diferentes parches de anticuerpo lamin C, sólo los 199 pacientes teñidas con el mismo parche se incluyeron en el análisis estadístico final. Las tinciones se realizaron usando la máquina de tinción de Ventana automatizado y se detectaron los anticuerpos primarios con Vectastain anti-ratón o anti-cabra anticuerpos secundarios conjugados con HRP. Las diapositivas se counterstained con hematoxilina y se observaron con microscopio Olympus BX60 (Olympus Optical Co., Ltd., Tokio, Japón).
Las diapositivas TMA se calificaron visualmente en cuanto a los grados de IHC, sin el conocimiento de las características clínico-patológicas de la pacientes. Las intensidades de tinción de cada núcleo se calificaron como 0 (sin tinción específica en las células de carcinoma, una tinción intensa en las glándulas benignas y las células estromales), 1 (baja intensidad de la tinción lámina nuclear en células de carcinoma, tinción más intensa en las glándulas benignas o células del estroma), 2 (intensidad moderada y la lámina claramente visible en células de carcinoma, pero tinción más intensa en las glándulas benignas y las células del estroma) o 3 (alta intensidad de la tinción lámina equivalente a, o superior a la intensidad de las glándulas normales y las células del estroma). Los pacientes cuyo tejido muestras fueron teñidas mal (sobre la base de los controles internos) o separado de las diapositivas durante el proceso de tinción fueron excluidos del análisis. Los valores de intensidad media de 3 o más núcleos de carcinoma se determinaron para cada paciente y, finalmente, los pacientes fueron dicotomizadas en baja (IHC grado 0 y 1) y alta (grados IHC 2 y 3) que expresan los grupos para su posterior análisis estadístico (a excepción de lamina B1 y C, véase la Tabla 2). Dicotomización se basa en la distribución de los diferentes subgrupos en cada una tinción lamina con el fin de tener grupos comparables con número suficiente de pacientes (ver Tabla 2).
El análisis estadístico
El análisis estadístico se llevó a cabo con SPSS 20 (IBM). Las correlaciones entre las variables clinicopatológicas y biomarcadores se analizaron mediante la prueba de chi-cuadrado. La correlación entre la expresión media de la lamina en el tejido prostático benigno y canceroso de los mismos pacientes se analizaron con T para muestras independientes de pruebas. El método de Kaplan-Meier, log-rank test y Cox modelo de regresión de riesgos proporcionales se utilizaron para analizar la asociación de intensidad de la tinción con el resultado. Para los análisis de los resultados, el tiempo para la supervivencia BCR-libre se calculó a partir del día de la cirugía para el día de la detección de PSA de 0,2 g /L o superior. El tiempo de supervivencia específica de la enfermedad se calculó a partir de la fecha de la cirugía a la fecha de la última visita de seguimiento o la muerte.
El análisis de supervivencia se realizaron para toda la cohorte (a excepción de la lamina C, véase más arriba) y para una subpoblación de alto riesgo, incluyendo pacientes con tumores GS 7-10. Todas las pruebas estadísticas fueron de dos caras y los valores de p ≤0.05 fueron considerados estadísticamente significativos.
Resultados
Con el fin de estudiar si la expresión de diferentes laminas se asocia con CaP progresión bioquímica y la supervivencia específica de la enfermedad (DSS), el material de TMA que contiene al menos por triplicado muestras cancerosas y una muestra morfológicamente benignos de los 501 pacientes con CaP operados radicalmente se tiñó con anticuerpos de detección diferentes laminas (a, C, B1 y B2) y las intensidades de tinción se compararon con las variables clinicopatológicas. Los datos demográficos de los pacientes se presentan en la Tabla 1. En el análisis de estimación de Kaplan-Meier, las características clinicopatológicas bien conocidos, tales como GS alto y PSA preoperatorio, categoría T, extensión extra (EPE) y la invasión de vesículas seminales (SVI) fueron estadísticamente asoció significativamente con BCR que indica que nuestra cohorte es muy representativa para probar la correlación entre las proteínas de interés y los resultados del paciente (datos no mostrados). Del mismo modo, GS alto, categoría T, el margen quirúrgico positivo, EPE, SVI y la positividad de los ganglios linfáticos (LN) pronosticó hora de la muerte específica de la enfermedad acortados (datos no mostrados). En el análisis multivariable de regresión de Cox que se llevó a otros marcadores de pronóstico en cuenta, GS alto, PSA preoperatorio y T-categoría fueron predictores independientes de BCR (Tabla 3), mientras que GS alto, T-categoría y positividad LN valor predictivo de mortalidad por CaP (Tabla 4).
Además de toda la cohorte de estudio, una subpoblación de pacientes con GS & gt; 6 tumoral se analizó por separado
Además de toda la cohorte de estudio, una subpoblación de pacientes con GS & gt; 6. tumor se analizó por separado.
la tinción con un anticuerpo específico lamin mostró que la lamina a se expresa en tanto basal y las células epiteliales luminales de glándulas prostáticas normales y se enriquece en la región de lámina nuclear como se esperaba (Fig 1A ). Sin embargo, hubo diferencias significativas en la intensidad de la tinción entre carcinomas de pacientes individuales (de grado 0 a 3). Las intensidades medias de tinción de núcleos de células de carcinoma fueron significativamente mayores en comparación con el epitelio normal en muestras benignas de los mismos pacientes (T para muestras relacionadas a la prueba, con una media intensidad de la tinción +/- SEM 1,97 +/- 0,03 y 1,45 +/- 0,03 para carcinoma y benigna, respectivamente, p & lt; 0,001). Bajo la expresión lamina A (grado 0-1) fue estadísticamente significativamente asociado con la positividad de los ganglios linfáticos (prueba de chi-cuadrado de Pearson, p = 0,009), pero no hay otras variables clínico probados. En el análisis de estimación de Kaplan-Meier, no hubo correlación entre la expresión de la lamina A y BCR (datos no mostrados). Cuando se utilizó DSS como punto final, una tendencia entre la baja expresión de la lamina A y los pobres resultados se observó en toda la población, pero esta diferencia no mostró significación estadística (Figura 1B; p = 0,27). Sin embargo, en la subpoblación de GS & gt; 6 tumores con comportamiento potencialmente agresivo, bajo la lamina A expresión se asoció significativamente con un peor pronóstico (figura 1C; p = 0,044). Estos resultados sugieren que la disminución de cantidad de lamin A puede promover la invasión linfovascular y la progresión de la enfermedad potencialmente metastásico.
(A) Los ejemplos representativos de TMA diapositivas teñidas para la lamina A con inmunohistoquímica. se muestran imágenes de campo de baja potencia y alta de ambos tumores que expresan altos y bajos. análisis (B-C) de Kaplan-Meier muestra una tendencia entre la baja expresión de la lamina A y pobres DSS en toda la cohorte (B; p = 0,27). Sin embargo, en la subpoblación de pacientes con puntuación de Gleason & gt; 6 tumores, hay una diferencia estadísticamente significativa. (C; p = 0,044) guía empresas
Lamin C es otro importante lamina A de tipo codificado por
LMNA
través de splicing alternativo. Esta isoforma es de 92 aminoácidos más corta que la lamina A y lleva una cola única C-terminal que se retira de pre-lamina A durante la modificación postraduccional. La tinción con anticuerpo lamin C (detectar el dominio de la cola C-terminal específica lamin C solamente) mostró que la lamina C se expresa de manera similar y presente en la lámina nuclear tanto en las células epiteliales basales y luminales normales, así como en la mayoría de (pero no todos) los carcinomas de baja intensidad (S1 a FIG) a moderada. Un ensayo T por parejas demostró que la intensidad de la tinción de medias para lamin C fueron significativamente mayores en muestras de carcinoma (1,30 +/- 0,06) con relación al epitelio normal (1,04 +/- 0,05, p = 0,001). No hubo correlación entre la expresión de la lamina C y clinicopathological variables (datos no mostrados). En el análisis de Kaplan-Meier, hemos encontrado ninguna correlación entre la expresión de la lamina C y BCR (datos no mostrados) similar a la lamina A. Se observó una tendencia entre la expresión indetectable bajo lamina C (grado 0) y DSS menos favorable cuando los pacientes con toda la se estudiaron diferentes grupos de Gleason (S1B Fig; p = 0,14). Por otra parte, en el GS & gt; 6 subpoblación los pacientes con tumores negativos lamina C (grado 0) tuvieron estadísticamente un riesgo significativamente mayor de morir de CaP (Fig S1C; p = 0,009). Estos resultados sugieren que la lamina A y C, ambos producidos a partir de
LMNA
gen, pueden tener efectos biológicos similares en la transformación maligna de CaP.
La expresión de lamina B1 se detecta generalmente en todos los eucariotas las células y su pérdida tiene consecuencias graves durante la embriogénesis como se destaca con anormalidades en el desarrollo de los pulmones y el cerebro y la muerte perinatal temprana en
ratones knockout LMNB1
[22]. En nuestro material, todas las muestras histológicamente benignos mostraron leve a moderada intensidad de la tinción de lamina B1. Todas las muestras de carcinoma eran lamin B1 positivo también (Fig 2A), pero 65% de los carcinomas mostraron alta expresión (grado 3) de lamin B1. prueba t pareada reveló que no fue significativamente más lamin tinción B1 en carcinomas relativas a las muestras benignas normales (2,7 +/- 0,03 vs. 1,7 +/- 0,03, p & lt; 0,001). No se encontró correlación significativa entre la expresión de lamina B1 y variables clínico probados. En el análisis de Kaplan-Meier, la alta expresión de lamin B1 se asoció con BCR en toda la cohorte (Fig 2B; p = 0,038) y en la subpoblación de GS & gt; 6 (p = 0,034, datos no mostrados). Sin embargo, no hubo correlación entre la expresión de lamin B1 y DSS, ya sea en toda la cohorte (Fig 2C; p = 0,55) o en la subpoblación de pacientes con GS & gt; 6 tumores (p = 0,57, datos no mostrados). En el análisis multivariable de regresión de Cox expresión B1 alta lamina siguió siendo un predictor independiente de la BCR en toda la cohorte cuando se ajusta por el PSA preoperatorio y el grado de Gleason (HR 1,8, IC 95% 1,1-2,9, p = 0,023, Tabla 3). Estos resultados sugieren que la alta expresión de lamin B1, por razones desconocidas, aumenta el riesgo de CaP recurrencia pero no tiene efecto significativo sobre la supervivencia CaP.
(A) Los ejemplos representativos de TMA diapositivas teñidas para lamin B1 con inmunohistoquímica. se muestran imágenes de campo de baja potencia y alta de ambos tumores que expresan altos y bajos. análisis (BC) de Kaplan-Meier indica que la expresión de B1 alta lamina predice un menor tiempo de BCR en toda la cohorte (B; p = 0,038), pero no tiene correlación con DSS (C; p = 0,55) guía empresas
Lamin B2 se expresó en todas las glándulas de próstata normales y malignas (Fig 3A). Sin embargo, similar a otros laminas, no fue estadísticamente significativamente mayor intensidad IHC de lamin B2 en las glándulas cancerosas en relación con las glándulas normales benignos (1,74 +/- 0,03 vs. 1,48 +/- 0,03, p & lt; 0,001). baja expresión lamin B2 se asoció con la positividad de los ganglios linfáticos (Chi-cuadrado, p = 0,005) y hubo una tendencia entre la expresión de B2 bajo lamina y la categoría T (p = 0,076) y EPE (p = 0,098). En el análisis de Kaplan-Meier, no hubo correlación entre la expresión de lamin B2 y BCR (datos no mostrados). Sin embargo, cuando se utilizó DSS como punto final, hubo una tendencia entre la expresión bajo la lamina B2 y pobres DSS en toda la cohorte (Figura 3B; p = 0,099) y una significación estadística marginal en GS & gt; 6 subpoblación (Figura 3C; p = 0,051). Estos resultados muestran que la lamina B1 y B2 lamin predicen diferentes resultados en el CaP que puede ser debido a la diferencia de funciones en las células cancerosas de próstata.
(A) Los ejemplos representativos de TMA diapositivas teñidas para lamin B2 con inmunohistoquímica. se muestran imágenes de campo de baja potencia y alta de ambos tumores que expresan altos y bajos. análisis (B-C) de Kaplan-Meier muestra una tendencia entre la expresión bajo la lamina B2 y DSS acortada en toda la cohorte (B; p = 0,099). En la subpoblación de pacientes con puntuación de Gleason & gt; 6 tumores, el análisis de Kaplan-Meyer poco no muestra diferencia estadísticamente significativa, pero una fuerte tendencia se ve (C; p = 0,051).
Discusión
Las láminas nucleares son altamente conservados entre las especies y el análisis filogenético sugiere que representan antepasados de toda SI familia de proteínas [23]. Hay pruebas de que las laminas no sólo apoyan forma física del núcleo, sino también contribuyen varias funciones nucleares fundamentales tales como la organización del genoma y la transcripción a través de interacciones con la cromatina y múltiples factores de transcripción [7]. Disfunción en estos mecanismos puede tener efectos deletéreos
in vivo
como se evidencia por varias enfermedades humanas hereditarias debido a mutaciones lamina [9]. Sin embargo, el papel y las alteraciones de las laminas en enfermedades malignas son menos conocidas.
En el presente estudio se investigó la expresión de diferentes laminas de CaP y su uso potencial en la estimación de la evolución del paciente utilizando una gran cantidad de material y TMA un detallado los datos del paciente clínico con una mediana de seguimiento de más de 8 años. Si bien se detectó la expresión de todos los principales laminas en el epitelio prostático, el análisis estadístico reveló algunos cambios interesantes que son relevantes a la luz de
in vitro
hallazgos recientes sobre la función de la lamina. Swift et al. han demostrado que la cantidad de la lamina A y la relación de A y B de tipo laminas se correlaciona con la rigidez del tejido (por ejemplo, músculo tiene más lamina A de cerebro) para estabilizar núcleo y la cromatina de la tensión física [24]. Además, los bajos niveles de laminas de tipo A aumentan la deformabilidad nuclear y mejorar la migración celular a través de las constricciones de microfluidos
in vitro
[25] y
in vivo
en un modelo de tumor de ratón [26]. Esto es consistente con nuestro resultados que muestran que cantidades reducidas de lamin A /C están asociados con la metástasis de los ganglios linfáticos y DSS desfavorable, presumiblemente debido a aumento de la invasión linfovascular. La asociación entre el bajo lamina A expresión y DSS desfavorable fue estadísticamente significativo en el análisis de Kaplan-Meier llevado a cabo en pacientes con potencialmente agresivos GS & gt; 6 la enfermedad (figura 1C). Sin embargo, en el análisis multivariante de regresión de Cox, que también tiene otras variables clinicopatológicas en cuenta, lamina A no ligeramente para alcanzar significación estadística (p = 0,052, Tabla 4) lo que sugiere que no es un marcador predictivo independiente diferente de lamin B1. Los datos de otros sugieren que la lamina A se sobreexpresa en el frente invasivo en CaP y puede aumentar la migración local y la invasión [16]. Si este fuera el caso, sería de esperar que los altos niveles de expresión de la lamina A /C se correlacionan con el BCR, pero no hemos podido confirmar tal fenómeno. Estas diferencias pueden ser, al menos en parte, debido a la variación en el muestreo. A pesar de que se obtuvieron tres muestras por triplicado desde el tumor índice, estos núcleos de tejido representan los niveles globales de expresión tumoral y no fueron atacados intencionalmente a las zonas de frente invasivo
.
Los resultados de este y otros estudios sugieren que los cambios en la expresión de la lamina y su impacto en la biología del tumor y el resultado clínico puede ser compleja y específica de órgano. Anteriormente, el valor pronóstico de las laminas en la progresión del cáncer se ha establecido en el cáncer colorrectal (CRC), donde la expresión de la lamina A predice un mal resultado si se compara con la lamina A cánceres negativos [12]. Sin embargo, se sabe poco sobre el papel pronóstico de las laminas en otros tumores sólidos y nuestros resultados sugieren papel junto a la lamina A en el CaP progresión (figura 1C). Una diferencia fundamental entre estos dos tipos de adenocarcinomas es que el 30% de los CRCs eran prácticamente desprovista de lamin A [12], pero al menos algunos lamin Se detectó una expresión en todos los PCAS incluido en el presente estudio. Los resultados de
in vitro
estudios sugieren que el silenciamiento de la lamina A en realidad puede sensibilizar a las células para la tensión mecánica y reducir la supervivencia celular [26]. Por lo tanto, la presencia de lamina A en CRC puede proteger mecánicamente las células cancerosas que migran y reducir la muerte de células tumorales en comparación con la lamina A tumores negativos, mientras que en el caso de CaP moderadamente baja cantidad de lamin A puede proporcionar simultáneamente una deformabilidad nuclear ideal y una protección suficiente contra la tensión mecánica en la invasión de células
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a y de tipo B laminas tienen roles diferenciales en las células normales. Mientras que las laminas de tipo A se expresan principalmente en las células diferenciadas terminalmente, uno o ambos de los laminas de tipo B se expresan en todas las células animales. Los ratones que carecen lamin B1, B2 lamin o ambos tienen defectos en pulmón y el desarrollo del cerebro y estos ratones mueren al nacer que sugiere una función de desarrollo esencial [22]. Curiosamente, la mayor producción de una lamina de tipo B no rescata la pérdida de la otra lamina de tipo B indica que lamin B1 y B2 tienen también funciones celulares diferenciales [27]. Del mismo modo, nuestros resultados sugieren papeles diferenciales para lamin B1 y B2 en la progresión del CaP. tejidos con CaP contenían significativamente más lamina B1 que los tejidos benignos de los mismos pacientes. Alta expresión B1 lamin asociado a BCR en toda la cohorte, así como en el GS & gt; 6 subpoblación (Fig 2B), y en multivariable Cox análisis de regresión lamin B1 apareció un factor pronóstico independiente para BCR (Tabla 3). Sin embargo, no hubo correlación estadísticamente significativa entre la expresión de lamina B1 y DSS (Figura 2C y la Tabla 4). Aunque nuestra cohorte es relativamente grande, es importante notar que sólo el 4,4% de los pacientes murió por CaP durante el seguimiento, mientras que el 31% mostró BCR. En la mayoría de los casos, este último puede deberse a un mínimo de tumor residual local que no tiene impacto en el DSS después de la radioterapia de rescate [28]. Por lo tanto, la expresión B1 lamina alta es más probable que la promoción del crecimiento y /o la proliferación local, en lugar de permitir que el comportamiento metastásico través de la invasión linfovascular. En apoyo a esto, un estudio reciente ha demostrado que la reducción moderada de lamina B1 en el cáncer de células retrasos progresión del ciclo celular [29]. Además, el silenciamiento de lamin B1 en las células normales diploides WI-38 de pulmón causa la senescencia replicativa mientras que la sobreexpresión aumenta la tasa de proliferación [30]. Coradeghini et al. han informado anteriormente de que la expresión de lamin B1 se correlaciona con GS y podría ser utilizado como un marcador biológico en la diferenciación del tumor y pronósticos [17]. No se pudo confirmar la correlación con la GS pero aún más importante, nuestros resultados sugieren claramente que lamin B1 es un predictor independiente que podría utilizarse para determinar el riesgo de crecimiento y la proliferación local.
Se sabe poco sobre el papel de lamin B2 y su asociación con el cáncer.