Extracto
Este estudio tuvo como objetivo determinar la incidencia y los clínicos implicaciones de
HER2 estado
en cáncer colorrectal primario (CRC).
HER2
estado se investigó en dos cohortes retrospectivo de 365 pacientes consecutivos (CRC cohorte 1) y 174 pacientes CCR avanzado con metástasis a distancia síncrona o metacrónico (cohorte 2).
HER2
estado se determinó mediante la realización de plata de dos colores hibridación (SISH) in situ, el ARNm de hibridación in situ (ISH), e inmunohistoquímica (IHC). La incidencia de sobreexpresión de HER2 proteínas (IHC 2 + /3 +) fue de aproximadamente 6% (22 de 365 en la cohorte 1; 10 de 174 en la cohorte 2).
se observó HER2
amplificación de genes en el 5,8% de los pacientes de la cohorte 1 y el 6,3% de los pacientes de la cohorte 2.
HER2
amplificación de genes se observó con mayor frecuencia en los CRC ubicados en el recto de en el derecho y el colon izquierdo (
P = 0,013
en la cohorte 1;
P = 0,009
en la cohorte 2).
HER2
estado, determinado por IHC, ISH, y SISH de dos colores, no se asoció significativamente con la conducta agresiva CRC o el pronóstico de los pacientes, tanto en las cohortes. De la cohorte combinada con un total de 539 casos, la tasa de concordancia fue del 95,5% entre SISH de dos colores y los métodos de detección de IHC. En excluyendo los casos equívocamente inmuno (IHC 2+), la tasa de concordancia fue del 97,7%.
HER2
overtranscription ARNm, detectada por ISH, correlacionaron significativamente con la sobreexpresión de la proteína y la amplificación de genes (
P Hotel & lt; 0,001).
HER2
amplificación del gen fue identificado en una minoría de pacientes con CRC, con altas tasas de concordancia entre SISH de dos colores y los métodos de detección de IHC. Aunque
HER2
estado no predijeron el pronóstico de los pacientes, nuestros hallazgos pueden servir de base para futuros estudios sobre la selección de los pacientes para
HER2
terapia dirigida
Visto:. Seo AN , Kwak Y, Kim DW, Kang SB, Choe G, Kim WH, et al. (2014)
HER2
Estado en el cáncer colorrectal: su significado clínico y la relación entre
HER2
amplificación génica y de expresión. PLoS ONE 9 (5): e98528. doi: 10.1371 /journal.pone.0098528
Editor: Chad Creighton, Baylor College of Medicine, Estados Unidos de América
Recibido: 6 Marzo, 2014; Aceptado: 2 de mayo de 2014; Publicado: 30 de mayo de 2014
Derechos de Autor © 2014 Seo et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos se incluyen dentro de los archivos de información de manuscritos y de apoyo
Financiación:. Este estudio fue apoyado por la subvención número 02-2013-041 del Bundang Fondo de Investigación Nacional de Seúl Hospital Universitario. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:. Los autores han declarado no tener ningún conflicto de interés en
Introducción
a pesar de los avances en las técnicas quirúrgicas y los regímenes de quimioterapia adyuvante, el cáncer colorrectal (CCR) es una de las principales causas de muerte por cáncer en el mundo más de [1], [2]. Otras mejoras en la comprensión de la biología del tumor y la identificación de los conductores oncogénicos han llevado al desarrollo de nuevas dianas terapéuticas [2], [3]. Por lo tanto, la identificación de marcadores biológicos para la terapia dirigida continúa siendo una alta prioridad en el tratamiento del cáncer humano [4]. receptor del factor de crecimiento anti-epidérmico (EGFR) tratamiento con anticuerpos monoclonales, incluyendo que con cetuximab y panitumumab, se ha informado que mejora la supervivencia libre de progresión en pacientes con CCR avanzado de tipo salvaje
KRAS
[5] - [7 ]. A pesar del progreso terapéutico indiscutible, una proporción considerable de pacientes con cáncer responden mal al tratamiento y la respuesta terapéutica no puede predecirse con exactitud. Por lo tanto, es de gran interés para identificar biomarcadores moleculares para predecir el resultado, la respuesta terapéutica, y posibles objetivos terapéuticos en pacientes con CRC.
El factor de crecimiento epidérmico receptor humano 2 (HER2) es una tirosina quinasa receptor transmembrana, que es un miembro de la familia EGFR [8], [9]. La activación de
HER2
juega un papel clave en la proliferación celular, la diferenciación celular, la inhibición de la apoptosis, y la progresión tumoral [8] - [10]. Trastuzumab, un anticuerpo monoclonal humanizado, apunta el dominio extracelular de la
HER2
receptor. Su beneficio terapéutico se ha demostrado en
HER2-positivos
pacientes con cáncer de mama [11], [12]. Además, un estudio de referencia en 2010 informó que la combinación de trastuzumab con quimioterapia convencional mejoró significativamente la supervivencia de los pacientes en pacientes con
HER2-positivo avanzado
gástrico o gastroesofágico cáncer de unión [13].
se observaron HER2
amplificación génica y /o sobreexpresión de la proteína en el 15-20% de los casos de cáncer de mama y se correlacionaron con fenotipo agresivo, metástasis, y el resultado clínico adverso [14], [15]. Por otro lado,
se detectaron HER2
la amplificación del gen y /o sobreexpresión de la proteína en -22% de los pacientes con cáncer gástrico, pero significado pronóstico era controvertida [16]. Debido a trastuzumab ha mejorado significativamente la supervivencia global en cáncer de mama y gástrico, es de gran interés clínico si el bloqueo HER2 puede ser una estrategia clínica útil en otros tipos de cáncer humanos [17]. Aunque algunos estudios han informado de la incidencia y la implicación clínica de
HER2
estado en pacientes con CRC [18] -. [22], su significado clínico aún no ha sido completamente aclarada
Nosotros, por lo tanto, , llevado a cabo este estudio para determinar la incidencia y la importancia clínica de
HER2
estado -positivo en pacientes con CRC primarios consecutivos. Debido a que la quimioterapia dirigida se aplicó a pacientes con CCR avanzado en la práctica diaria y los casos avanzados no eran suficientemente incluidos en la cohorte consecutiva 1, que además incluyó a pacientes CCR avanzado con metástasis a distancia síncrona o metacrónico (cohorte 2). Evaluamos
HER2
amplificación de genes, el ARN mensajero (ARNm) de la transcripción, y el estado de expresión de la proteína en los tumores primarios de dos cohortes retrospectivos, y también se analizó la tasas de concordancia de los métodos de detección.
Materiales Métodos y
pacientes y muestras
Un total de 539 casos de CCR tratados con cirugía radical sin ningún tipo de tratamiento preoperatorio se inscribieron en el estudio del Departamento de Patología, hospital Bundang Universidad Nacional de Seúl. Cohorte 1 consistió en 365 pacientes con CRC consecutivos tratados entre enero de 2005 y diciembre de 2006. cohorte 2 compuesto por 174 pacientes con CCR avanzado con metástasis a distancia síncrona o metacrónico, que habían sido sometidos a resecciones quirúrgicas para el CRC primaria entre mayo de 2003 y diciembre de 2009, excepto cohorte 1. Todo los pacientes recibieron tratamiento de acuerdo con las guías de práctica estándar después de la cirugía, a menos que sea médicamente contraindicado. Todos los casos fueron revisados por 2 patólogos (A.N.S y H.S.L) y se organizaron de acuerdo a la 7
ª edición de la Comisión mixta de American
Manual Cancer Staging
[23]. características clinicopatológicas se obtuvieron de los registros médicos de los pacientes y los informes de patología. Se recogió información de seguimiento que incluye la evolución del paciente y el intervalo de tiempo entre la fecha de la resección quirúrgica y la muerte. Los casos perdidos durante el seguimiento y las muertes por causas distintas de la CRC se consideraron datos censurados para el análisis de supervivencia.
declaración ética
Todos los especímenes humanos se obtuvieron de los archivos de los casos examinados resecado quirúrgicamente en el Departamento de Patología, hospital Bundang Universidad Nacional de Seúl para el diagnóstico patológico. El estudio retrospectivo se realizó con las muestras almacenadas después de que el diagnóstico patológico, y todas las muestras se anónima antes del estudio. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital Bundang Universidad Nacional de Seúl (Referencia: B-1210 /174-301). Los participantes no proporcionaron consentimiento informado por escrito en este estudio. La Junta de Revisión Institucional renunciado a la necesidad de consentimiento informado por escrito bajo la condición de anonimato y de ninguna intervención adicional para los participantes.
muestras de tejidos primarios CRC matriz método
En ambas cohortes, fueron sometidos a resección quirúrgica de formalina -fixed y embebido en parafina (FFPE). Estos bloques de tumor primario se utilizaron para la construcción de bloques de la matriz de tejido. En resumen, a partir de las áreas representativas de los bloques cosechadas en cada caso, se obtuvo un solo núcleo con un diámetro de 2 mm y dispuesta precisamente en nuevos bloques de receptores usando un aparato de trépano, tal como se describe anteriormente por el grupo de autor (Superbiochips Laboratories, Seúl, Corea del Sur) [24]. Un caso adecuada se definió como un tumor que ocupa ≥20% de la superficie del núcleo
La inmunohistoquímica (IHC)
HER2 IHC se realizó utilizando CAMINO anti-HER2 /neu (4B5;. Monoclonal de conejo; pre-dilución, Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, EE.UU.) y el kit de anticuerpos ultraView universal DAB (Ventana Medical Systems) en una immunostainer automática (XT referencia, Ventana Medical Systems), de acuerdo con las instrucciones del fabricante. IHC puntuación se lleva a cabo de forma independiente por dos patólogos (A.N.S y H.S.L) sin conocimiento previo de la información clínico-patológico o los resultados obtenidos a través moleculares otros métodos. La puntuación se realizó de acuerdo con el DAKO HercepTest ™ directrices (DAKO) para el cáncer gástrico de la siguiente manera [25]: 0, ninguna reactividad o membrana tinción en & lt; 10% de las células tumorales; 1+, tinción débil /apenas perceptible parcial de la membrana en ≥10% de las células tumorales; 2+, débil a moderada tinción completa de la membrana basolateral o en ≥10% de las células tumorales; 3+, de moderada a fuerte tinción completa de la membrana en ≥10% de las células tumorales. Los dos patólogos completamente de acuerdo en todos los casos de IHC 3+, mientras consenso final se determinó mediante análisis por medio del microscopio de cabezales múltiples en algunos casos discrepantes con IHC 1+ o 2+. IHC 2+ y 3+ fueron considerados para indicar la sobreexpresión de la proteína.
HER2
ARNm hibridación in situ (ISH)
Para la detección de
HER2
overtranscription ARNm , RNAscope 2-plex (Diagnóstico avanzado de células, Hayward, CA, EE.UU.) se realizó de acuerdo a las recomendaciones estándar del fabricante. La interpretación se realizó de acuerdo con las instrucciones en el alcance RNA FFPE Kit de ensayo como se describe anteriormente [26]: no tinción (puntuación de 0); tinción de & lt; 10% de las células tumorales que era difícil identificar al lente objetivo x40 (puntuación de 1); tinción en ≥10% de las células tumorales que era difícil identificar al lente objetivo x20, pero nada fácil lente objetivo x40 (puntuación de 2); tinción en ≥10% de las células tumorales que era difícil identificar al lente objetivo x10, pero nada fácil lente objetivo x20 (puntuación de 3); tinción en ≥10% de las células tumorales que era fácil de identificar al lente objetivo x10 (puntuación de 4). Una puntuación de 4 indica
HER2
overtranscription. ISH se interpretó de forma independiente por dos patólogos (ANS y HSL) sin conocimiento previo de la información clínico-patológico o el estado de HER2 obtenido a través de otros métodos.
plata de dos colores
In situ
hibridación (SISH)
campo brillante análisis SISH de dos colores se ha realizado mediante el dispositivo de tinción automática SISH (XT referencia, Ventana Medical Systems), de acuerdo con los protocolos del fabricante para INFORM
ADN HER2
e informar a cromosoma 17 ( CEP17) sondas (Ventana Medical Systems).
señales sish HER2
/CEP17 fueron contados de acuerdo con la directriz interpretativa para Ventana INFORM
HER2
tinción sonda de ADN de las células de cáncer gástrico (Ventana Medical Systems). Las células tumorales se analizan en busca de puntos calientes mediante el uso de 20 × 40 × o objetivos, y se seleccionó el área con las señales más altas. Las señales fueron contados en 20 núcleos de las células del tumor que no se solapan de cada caso utilizando 60 × 100 × o objetivos por dos patólogos (A.N.S y H.S.L) que fueron cegados al estado de HER2 por otros métodos de detección e información clínica. grupos pequeños o grandes se consideraron 6 señales y 12 señales, respectivamente.
HER2
amplificación de genes se definió como un
HER2 relación
/CEP17 de ≥2.0 en 20 núcleos tumorales. El los casos dudosos (ratio: 1,8 a 2,2) se relata en al menos 20 no se solapan núcleos de diferentes células tumorales en una segunda zona de destino, y una nueva
HER2 relación
/CEP17 se volvió a calcular. células epiteliales de colon normales y otras células benignas adyacentes sirvieron como controles internos.
inestabilidad de microsatélites (MSI)
Resultados de la MSI se generaron por comparación de los perfiles alélicos de los 5 marcadores de microsatélites (BAT- 26, BAT-25, D5S346, D17S250 y S2S123) en muestras tumorales y normales correspondientes. Los productos de reacción en cadena de polimerasa para tejidos FFPE se analizaron mediante un auto-secuencia de ADN (ABI 3731 Genetic Analyzer; Applied Biosystems, Foster City, CA). De acuerdo con el protocolo descrito anteriormente [27]
análisis estadísticos
La asociación entre las características clínico-patológicos y
HER2
estado se analizó mediante el uso de Chi-cuadrado o la prueba exacta de Fisher, y la prueba de Wilcoxon /Mann-Whitney, en su caso. La correlación de Spearman o el test tau-b de Kendall se utilizó para evaluar la correlación entre los métodos de detección. La asociación entre el
HER2
estado y la supervivencia global se determinó usando el método de Kaplan-Meier y la significación de las diferencias entre los grupos se compararon mediante la prueba de log-rank test de Breslow o, si las curvas de supervivencia se cruzaron durante el seguimiento -up períodos. Los análisis de supervivencia multivariante se realizaron utilizando el modelo de riesgos proporcionales de Cox, y la razón de riesgo y su intervalo de confianza del 95% se calcularon para cada factor. Todas las pruebas fueron de dos caras, con
P
valor de & lt; 0,05 considerado estadísticamente significativo. Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando las estadísticas de IBM SPSS 20 (Armonk, Nueva York, EE.UU.) de software.
Resultados
características clínico-patológicas de los pacientes
La Tabla 1 proporciona los datos demográficos y la línea de base características clínico-patológicas de los pacientes incluidos en cada cohorte. Cohorte 1 incluyó 202 (55,3%) hombres y 163 (44,7%) mujeres con edad media de 65 años (rango: 20-95 años). Además, entre 353 pacientes con análisis de MSI disponibles, 321 (90,9%) tenían microsatélites estables (MSS) o la inestabilidad de microsatélites de bajo (MSI-L), mientras que 32 (9,1%) tenían la inestabilidad de microsatélites-alta (MSI-H). Por otro lado, la cohorte 2 incluye 94 (54,0%) hombres y 80 (46,0%) mujeres con edad promedio de 60 años (intervalo: 28-93 años). MSS /MSI-L se encontró en 159 (98,1%) y MSI-H en 3 (1,9%) de los 162 pacientes con análisis de MSI disponibles.
HER2
estado pacientes con CRC
la proteína HER2 fue débilmente o débilmente expresados en la membrana y /o citoplasma de epitelio del colon normal, mientras que la membrana de las células tumorales que se presentan diversos patrones de tinción (Figura 1). En cohorte consecutiva 1, 0 IHC se encontró en 296 de los 365 pacientes (81,1%), IHC 1+ en 47 (12,9%), IHC 2+ en 14 (3,8%), y IHC 3+ en 8 (2,2%). En la cohorte 2 de los casos avanzados, IHC 0 se observó en 139 de 174 pacientes (79,9%), IHC 1+ en 25 (14,4%), IHC 2 + en 5 (2,9%), y IHC 3+ en 5 (2,9% ). Se detectó la sobreexpresión de HER2 en el 6,0% de la cohorte 1 y el 5,8% de la cohorte 2.
(A) 0 IHC (40 × objetivo); (B) y marcó el 0 por mRNA ISH (40 × objetivo); (C)
HER2
disomía gen (60 × objetivo); (D) IHC 3+; (E) 4 puntos por mRNA ISH; (F)
HER2
amplificación de genes (relación de
HER2
/CEP17 ≥2).
No se observaron algunos puntos del puntiformes de color marrón dispersos en el núcleo y /o citoplasma de epitelio del colon normal utilizando
HER2
mRNA ISH, mientras que se observó varios tinción nuclear y /o citoplasmático en las células tumorales (Figura 1). En la cohorte 1, la puntuación de la ISH 0 se observó en 12 de los 365 pacientes (3,3%), la puntuación de 1 en 118 (32,3%), la puntuación de 2 en 160 (43,8%), la puntuación de 3 en 66 (18,1%), y la puntuación de 4 en 9 (2,5%). En la cohorte 2, la puntuación de la ISH 0 se observó en 11 de 174 pacientes (6,3%), la puntuación de 1 en 41 (23,6%), la puntuación de 2 en 93 (53,4%), la puntuación de 3 en 25 (14,4%), y la puntuación de 4 en 4 (2,3%).
se observó HER2
overtranscription mRNA en el 2,5% de la cohorte 1 y el 2,3% de la cohorte 2.
HER2
señales se detectaron como disomía en el epitelio normal del colon, por lo que se utilizado como los controles internos. Sin embargo,
HER2
señales variado a través de las células tumorales (Figura 1). La mediana
relación HER2
/CEP17 fue de 1,16 (intervalo de 0,68 a la 19.62) en la cohorte 1 y 1,19 (rango: 0,57 a la 21.89) en la cohorte 2.
HER2
amplificación de genes se detectó en el 21 de 365 pacientes (5,8%) en la cohorte 1, y 11 de 174 (6,3%) en la cohorte 2. no hubo diferencias significativas en la incidencia de
HER2 positividad
cohorte consecutiva entre 1 y casos avanzados cohorte 2 casos , independientemente del método de detección (IHC, ISH, o SISH). De un total de 32 casos amplificados, significa
HER2
número de copias de genes (GCN) fue de 6 o más en 16 casos. De acuerdo con los criterios establecidos por cáncer gástrico ToGA el juicio [13],
HER2
positividad se define como IHC 3+ o 2+ IHC con
HER2
amplificación de genes.
HER2
positividad se encontró en 3,6% (13 de 365 pacientes) de la cohorte 1 y 4,0% (7 de 174 pacientes de la cohorte) 2. También se investigó el cromosoma 17 (alteraciones CEP17) y observamos una señal homogénea CEP17 patrón. El CEP17 media fue de 2,15 (rango: 1.25 a la 3.50) en la cohorte 1 y 1,95 (rango: 0,83 a la 3.15) en la cohorte 2. CEP17 polysomy, que se definió como un valor de ≥3 CEP17 señales /núcleo, se observó en el 2,7% (10 de 365 pacientes) de la cohorte 1 y el 2,3% (4 de 174 pacientes) de la cohorte 2.
las tasas de concordancia entre los métodos de detección
con el fin de evaluar la concordancia entre los diferentes métodos, combinamos ambas cohortes. Del total de 539 casos,
HER2
amplificación de genes se asoció significativamente con la sobreexpresión de la proteína (ρ, 0.601;
P Hotel & lt; 0,001) y overtranscription ARNm (ρ, 0.626;
P
& lt; 0,001; Tabla 2). Todos los casos de IHC 3+ y toda la ISH puntuación de 4 casos mostraron
HER2
amplificación de genes por SISH de dos colores. La tasa de concordancia fue del 95,5% entre SISH de dos colores y los métodos de detección de IHC. Al excluir los casos equívocamente inmuno (IHC 2+), la tasa de concordancia fue del 97,7%.
HER2
ARNm overtranscription correlacionaron significativamente con la sobreexpresión de la proteína (ρ, 0,575; P
Hotel & lt; 0,001; Tabla S1).
De los 539 casos, 12 casos mostró
HER2
amplificación de genes, pero en IHC 0 o 1+, que se describe en detalle en la Tabla S2. En un caso, homogénea
HER2
amplificación del gen y el ARNm overtranscription se observaron durante todo el núcleo del tumor, pero no proteína HER2 se expresó en cualquier área específica del núcleo del tumor (Figura 2). En los otros 11 casos, la proteína HER2 se expresó focalmente con una puntuación de 1+ IHC, y
se observó HER2
amplificación de genes localizados en el área de expresión de la proteína (Figura 2).
(A- C) HER2 IHC 1+ en la esfera de actividad del cáncer (a), focal overtranscription ARNm (B) y
HER2
amplificación de genes (C) de acuerdo con el área de expresión de la proteína. (D-F) Ninguna expresión de la proteína HER2 (D), pero overtranscription ARNm difusa (E) y
HER2
amplificación de genes (F) en un caso.
Correlación entre
de estado y clínico-HER2
características
Para investigar la relevancia clínica de
HER2
estado, se evaluó la asociación entre las variables clinicopatológicas y
HER2
de estado. HER2 sobreexpresión de la proteína no se asoció con el estado de MSI o comportamiento agresivo incluidas las fronteras infiltrantes del tumor, la profundidad de la invasión, metástasis en los ganglios linfáticos, metástasis a distancia, y la invasión perineural (
P Hotel & gt; 0,05; Tabla S3), mientras que se asocia con la localización del tumor en el recto (
P
= 0,033 en la cohorte 1, Tabla 3).
HER2
overtranscription ARNm no se asoció con ninguna de las variables clinicopatológicas, excepto la ubicación del tumor en el recto (
P = 0,001
en la cohorte 1,
P = 0,026
en la cohorte 2; Tabla 3).
HER2
amplificación del gen también se asoció con la localización del tumor y se encontró con mayor frecuencia en el recto en el que en la derecha o hacia la izquierda dos puntos (
P = 0,013
en la cohorte 1,
P
= 0,009 en la cohorte 2;. Tabla 3, Tabla S4) guía empresas
Para determinar el significado pronóstico de
HER2-positivo
estado, hemos realizado análisis de supervivencia en cada cohorte. Todos los pacientes de la cohorte 1 y 2 fueron seguidos con éxito para el análisis de supervivencia. El tiempo medio de seguimiento fue de 68 meses (rango: 1-85 meses); 98 pacientes (26,8%) murieron de cáncer en la cohorte 1. En la cohorte 2, el tiempo medio de seguimiento fue de 66 meses (rango: 1-105 meses); 72 pacientes (41,4%) murieron de cáncer.
HER2
amplificación de genes, overtranscription ARNm, o sobreexpresión de la proteína no se asoció con la supervivencia específica de la enfermedad en la cohorte 1 y la cohorte 2 (
P Hotel & gt; 0,05; Figura S1). En la cohorte 1, la edad, el tamaño del tumor, el estadio del tumor, el grado histológico, invasión linfática, invasión perineural, invasión venosa, y el borde del tumor infiltrante se asociaron significativamente con el pronóstico de los pacientes (
P Hotel & lt; 0,05) por la supervivencia univariante análisis. la diferenciación histológica, la invasión perineural, la edad y el estadio del tumor se identificaron como factores pronósticos independientes para la supervivencia específica de la enfermedad (
P Hotel & lt; 0,05; datos no mostrados). Sin embargo, en la cohorte 2 casos, la localización del tumor, el estadio tumoral, la diferenciación histológica, la invasión linfática y la invasión perineural predicho el pronóstico de los pacientes mediante el análisis univariante de supervivencia (
P Hotel & lt; 0,05), de los cuales el estadio tumoral (
P = 0,018
) y la invasión linfática (
P = 0,024
) eran factores de riesgo independientes de acuerdo con el análisis multivariado (datos no mostrados).
Discusión
La propósito de este estudio fue identificar la incidencia de
HER2-positivo
estado en dos cohortes retrospectivos, incluyendo CRC CRC consecutivos y avanzados con metástasis a distancia, y para aclarar su significado clínico. En esto, se observó que
HER2
amplificación génica y sobreexpresión de la proteína se encontraron en alrededor del 6% de los CCR de ambas cohortes, los CRC con
HER2
amplificación de genes se localizaron con mayor frecuencia en el recto que en el colon derecho o izquierdo,
HER2
estado no se asoció con las características clínico-agresivos o peor pronóstico, y las tasas de concordancia entre los métodos de detección eran muy altas. A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer informe para evaluar
HER2-positivo
estado usando varias técnicas en un estudio a gran escala de los pacientes de Asia Oriental CRC.
Hasta la fecha, varios estudios han informado de que la frecuencia de HER2 sobreexpresión de la proteína varía ampliamente, desde 0% a 80% en el CCR [28], [29], y su significado pronóstico es controvertido [28], [30] - [32]. Este debate podría ser atribuido por varias causas, como la diferencia anticuerpo primario, la diferencia en los sistemas de puntuación para la expresión de la proteína HER2, una diferencia de enfoque técnico, tamaño de la muestra, las diferencias raciales, y la heterogeneidad de la población de estudio. Cuando se utilizaron técnicas de tinción y de puntuación aceptados, se informó de la tasa de la sobreexpresión de la membrana citoplasmática y de HER2 en aproximadamente el 5% y 30%, respectivamente [29]. Se utilizó aceptó métodos de tinción y de puntuación, y se observó la sobreexpresión de HER2 membranosa en aproximadamente el 6%. Estos hallazgos sugieren que trastuzumab puede ser eficaz en una minoría de pacientes con CRC [33]. Alternativamente, los compuestos de HER2-focalización intracelulares podrían ser atractiva opción de tratamiento en un tercio de los pacientes con CRC, si HER2 citoplasmática está realmente implicado activamente en la carcinogénesis de CRC [29], [33].
Vale la pena señalar que la tasa de concordancia fue del 95,5% entre SISH de dos colores y los métodos de detección de IHC en el presente estudio. Al excluir los casos equívocamente inmuno (IHC 2+), la tasa de concordancia fue del 97,7%. Estas tasas de concordancia fueron suficientes para utilizar sólo el método de IHC para la selección de
HER2
amplificación de genes, y similar a las tasas observadas en el cáncer gastroesofágico en los estudios anteriores [4], [34], [35]. Entre los casos discrepantes, un caso tenía
HER2
amplificación de genes con una distribución homogénea, pero la proteína HER2 no se expresó. Este hallazgo ha sido reportado en el cáncer gastro-esofágico representa el 2% a 33% de los casos [4], [34] - [37]. Este fenómeno requiere más estudios, pero la siguiente hipótesis podría explicar que: los procesos de post-traducción errónea, como incorrecto plegamiento tridimensional, localización disfuncional de la proteína a la membrana celular, y no apropiado proteína de glicosilación, lo que lleva a la disminución de expresión de la proteína HER2, incluso aunque el
HER2
gen se amplifica [4]. En nuestro caso,
HER2
ARNm se overtranscribed con distribución homogénea que apoya la hipótesis se ha indicado anteriormente. Sin embargo, pese a las altas tasas de concordancia entre los métodos de detección en el presente estudio,
HER2
mRNA ISH actualmente no es un método estándar para la evaluación de los
HER2
de estado y de corte todavía no se ha establecido off para definir mRNA overtanscription. De acuerdo con ello, son necesarios para validar
más estudios HER2
método de mRNA ISH.
Recientemente, Conradi et al. [21] examinados para
HER2 positividad
usando los mismos métodos y criterios como el nuestro, e informó de que
HER2
positividad se observó en el 12,4% de las muestras de biopsias rectales y el 26,7% de pieza de resección rectal. Por otra parte,
HER2
positividad en muestras resecadas independientemente correlacionada con la supervivencia específica del cáncer prolongada en pacientes con cáncer rectal. Sclafani et al. [22] evaluó también para
HER2 positividad
en alto riesgo, localmente avanzado pacientes con cáncer rectal en el ensayo EXPERTO-C de capecitabina y oxaliplatino neoadyuvante y quimiorradioterapia (CRT) con o sin cetuximab. Sin embargo, en su estudio,
HER2 positividad
era sólo el 4,3%, y no tenía ninguna asociación con parámetros clínico y los resultados del paciente. Nuestro estudio incluyó a derecha e izquierda cánceres de colon y cánceres de recto; por lo tanto, hemos sido capaces de analizar la frecuencia de
HER2
amplificación y sobreexpresión de acuerdo con la ubicación principal.
HER2
amplificación se encontró con mayor frecuencia en el cáncer de recto que en cualquier otro sitio primario, y
HER2 positividad
del cáncer de recto fue de 8,0% en la cohorte 1 y el 7,5% en la cohorte 2. La inconsistencia de frecuencia de
HER2 positividad
probablemente refleja el posible efecto de varios factores como el origen étnico, la población de estudio diferente, y la heterogeneidad del tumor. Sobre todo, en dos estudios anteriores, el desacuerdo de
se observó positividad HER2
entre la biopsia y la pieza de resección [21], [22]. A la luz de estos resultados, se sugiere que intratumoral
HER2
heterogeneidad pueden existir en los CRC, que también ha sido reportado en estudios de cáncer gástrico [10]. Se requieren más estudios para clarificar.
Tradicionalmente, las alteraciones CEP17 han afectado a la medición de la
HER2
relación /CEP17. En consecuencia algunos casos fueron clasificados erróneamente como no amplificado. En el presente estudio, CEP17 polysomy era un acontecimiento raro que representa el 2,6% de los casos, por lo tanto, no indujo la interpretación engañosa en
HER2
amplificación de genes. CEP17 polysomy no fue clínicamente significativa en pacientes con CRC.
A pesar de dos ensayos clínicos habían intentado investigar el beneficio de la terapia anti-HER2 en el CCR avanzado o metastásico, los ensayos se cerraron antes de tiempo debido a la baja de acumulación en relación con la baja incidencia de sobreexpresión de HER2 en pacientes con CCR avanzado [38], [39]. Sin embargo, un estudio reciente mostró que
HER2
sirvió para predecir la resistencia al anticuerpo monoclonal anti-EGFR en xenoinjertos derivados de pacientes de CCR metastásico, lo que lleva a los autores a sugerir la posibilidad de terapias combinadas en pacientes con CRC cetuximab resistente [ ,,,0],40]. Por otra parte, un estudio reciente HERACLES (HER2 amplificación para la estratificación mejorada cáncer colorrectal) está investigando el uso de trastuzumab más lapatinib o pertuzumab en los CCR metastásico con
HER2
amplificación [41]. Por lo tanto, nuestros hallazgos podrían ser útiles en el desarrollo y la aplicación de
HER2
terapia dirigida en pacientes con CCR. Dado que los resultados de mutación de
KRAS
y
BRAF
no fueron incluidos en el presente estudio, no hemos podido dilucidar la relación entre el
HER2
estado y
KRAS
o
Hoteles en BRAF CRC. Es la limitación de que se trate de nuestro estudio, ya
KRAS
y
BRAF ¿Cuáles son muy importantes para determinar enfoque de tratamiento en pacientes con CCR. Además, nuestro estudio tiene debilidades potenciales, tales como estudio retrospectivo diseñado, evaluación de
HER2
utilizando un método de matriz de tejido, heterogénea población de estudio en una sola institución, y la selección de los pacientes en la cohorte 2. Se incluyó a los pacientes con CRC disponibles tejidos de cáncer resecado quirúrgicamente de tumores primarios en la cohorte 2. no todos los pacientes con enfermedades avanzadas CRC metastásico y se incluyeron los casos avanzados hasta el momento no se inscribieron a causa de su inoperatividad. Por lo tanto, los prejuicios no reconocidos podrían haber influido en nuestros resultados de supervivencia. Además, un pequeño número de
HER2
tumores positivos podría impedir el análisis estadístico robusto, por lo tanto se les exigen más estudios a gran escala para validar nuestros resultados.
En conclusión,
HER2
la amplificación de genes y la sobreexpresión de la proteína fueron identificadas en aproximadamente un 6% de los pacientes con CCR y no tiene ninguna implicación clínica excepto en la localización del tumor en el presente estudio. Se demostró además altas tasas de concordancia entre IHC y los métodos sish de dos colores en las cohortes combinadas. Aunque una minoría de pacientes con CRC exhibió
HER2
amplificación de genes, estos pacientes serían candidatos potenciales para la terapia anti-HER2, y IHC podría ser prueba de detección primaria para la selección de los pacientes.
Apoyo a la Información
Figura S1.
curvas de supervivencia de Kaplan-Meier de acuerdo con el estado de HER2 por cada método de detección. (A-B) Curvas de supervivencia de acuerdo con HER2 estado de expresión de la proteína en la cohorte 1 (A) y la cohorte 2 (B). (C-D) Curvas de supervivencia por
HER2
estado de la expresión de ARNm en la cohorte 1 (C) y la cohorte 2 (D). curvas (E-F) de supervivencia por
HER2
estado de amplificación de genes en la cohorte 1 (E) y la cohorte 2 (F)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0098528.s001 gratis ( JPG)
Tabla S1.
La relación entre la inmunohistoquímica y el ARNm hibridación in situ para
HER2 Hoteles en los CRC de la cohorte combinada
doi:. 10.1371 /journal.pone.0098528.s002 gratis (DOCX) sobre Table S2.
Los detalles de los casos con
HER2
de amplificación de genes, pero IHC 0 ó 1+: Resultados de la doi:. 10.1371 /journal.pone.0098528.s003 gratis (DOCX)
Tabla S3.
La asociación entre la expresión de la proteína HER2 y las variables clínico-patológicas en los CRC de cada cohorte
doi:. 10.1371 /journal.pone.0098528.s004 gratis (DOCX) sobre Table S4.