Extracto
Objetivo
jugadas IL-17A un papel importante en muchas enfermedades inflamatorias y cáncer. El objetivo fue examinar el efecto de la IL-17A en la invasión de células de cáncer cervical y estudiar sus mecanismos relacionados.
Métodos
ensayos de curación de heridas y Transwell Matrigel se utilizaron para examinar el efecto de la IL -17A sobre la migración de células de cáncer cervical y la invasión por un panel de líneas celulares de cáncer de cuello uterino. Los niveles de metaloproteinasas de la matriz (MMPs) y el inhibidor tisular de las metaloproteinasas (TIMPs) se investigaron mediante Western Blot. La actividad de p38 y la vía de señalización del factor nuclear-kappa B (NF-kB) se detectó también.
Resultados
A continuación, mostramos que la IL-17A podría promover la migración y la invasión de cuello de útero Células cancerígenas. análisis molecular mostró además que la IL-17A-hasta podría regular las expresiones y actividades de MMP2 y MMP9, y regular a la baja la expresión de TIMP-1 y TIMP-2. Además, la IL-17A también activa la vía de señalización de p38 y p50 y p65 aumento de la expresión nuclear. Además, el tratamiento de células de cáncer cervical con los inhibidores farmacológicos /p38 NF-kB vía de señalización, SB203580 y PDTC, potentemente restaura las funciones de la invasión y la regulación positiva de las MMP inducida por la IL-17A.
Conclusión
IL-17A podría promover la migración y la invasión de células de cáncer cervical a través de sobre regulación de la expresión de MMP2 y MMP9, y abajo de la regulación de TIMP-1 y TIMP-2 de expresión a través de la vía de señalización de p38 /NF-kB. IL-17A puede ser un objetivo potencial para mejorar el pronóstico de los pacientes con cáncer de cuello uterino
Visto:. Feng M, Wang Y, Chen K, Z Bian, Jinfang Wu, Gao Q (2014) de IL-17A Promueve la migración y la invasión de células de cáncer cervical mediante la activación de las MMP Coordinadamente Expresión a través de la p38 /NF-kB Camino de señal. PLoS ONE 9 (9): e108502. doi: 10.1371 /journal.pone.0108502
Editor: Masaru Katoh, Centro Nacional del Cáncer, Japón
Recibido: 23 de julio de 2014; Aceptado: August 31, 2014; Publicado: 24 Septiembre 2014
Copyright: © 2014 Feng et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos relevantes se encuentran dentro del papel
Financiación:. El proyecto fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Nº 81.070.536) y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de la provincia de Shaanxi (núm 2014JM4143). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer cervical es la segunda causa más común de muerte por cáncer en mujeres en todo el mundo [1] y es uno de los cánceres conocidos solamente causadas por un virus que puede ser transmitido sexualmente. Investigaciones recientes encuentran que las células inmunes y sus citoquinas secretadas no sólo puede contribuir a la eliminación de las células cancerosas, sino que también proporcionan un microambiente apropiado para el desarrollo de tumores, así como promover la progresión tumoral [2], en la que el microambiente local del tumor y el estado de función de las células inmunes juegan un papel importante [3].
interleucina 17A (IL-17A) es una citoquina pro-inflamatoria, y se ha encontrado contribuyó a muchas enfermedades crónicas. Recientemente, IL-17A ha sido también encuentra con frecuencia en muchos tipos de cáncer como el cáncer de ovario [4], cáncer de mama [5], cáncer gástrico [6], y carcinoma hepatocelular [3]. El papel de la IL-17A en el desarrollo y la progresión de estos cánceres sigue siendo controvertido. Utilizando el modelo animal, algunos estudios encuentran que la IL-17A inhibió el crecimiento tumoral y la metástasis a través de IFN-c produciendo NK y células T [6], [7]. Otros estudios muestran que la IL-17A promovido el crecimiento del tumor y la metástasis [8], [9]. El efecto puede ser correlacionada con la inducción de microambiente promotor de tumores en el sitio de tumor [10].
metástasis del tumor es la causa principal de mortalidad asociada a cáncer [11]. Las células cancerosas necesitan para degradar el ECM e invadir en los sistemas linfático y vascular para la difusión a sitios distantes [12]. En este proceso, proteasas tales como la metaloproteinasa de matriz (MMPs), juegan un papel importante [12]. Producción y la activación de MMPs es dependiente de diversas citoquinas, incluyendo TNF-α y la IL-1 secretada por las células tumorales [13], [14], los fibroblastos [15], [16] y macrófagos [16]. Estudios previos han encontrado que la IL-17A podría regular MMPs, IL-1 y TNF en periodontitis [17], y se encontró que la deficiencia de IL-17 receptor en deterioro de expresión de IL-1 y MMP 3 /MMP9 /MMP13 en la artritis reumatoide [18] , lo que indica que la IL-17A también juega un papel importante en la regulación de las MMP. la vía de señalización MAPK y NF-kB juegan un papel importante en la regulación de la producción y la actividad de las MMP [10], [19]. Y muchos efectos de la IL-17A se correlacionan con la vía de señalización MAPK y NF-kB [10], [20], [21].
En nuestro estudio, encontramos que la IL-17A podría aumentar la motilidad celular y la invasión de la sobre regulación de MMP2 y MMP9 a través de la activación de la vía de señalización de p38 NF-kB.
Materiales y Métodos
Ética declaración
Esta investigación fue aprobado por la Ética Comité del Segundo hospital Afiliado de la Facultad de Medicina de la Universidad de Xi'an Jiaotong. Todos los participantes de pacientes con cáncer de cuello uterino con el examen del tejido siempre que su consentimiento informado por escrito para participar en este estudio.
muestras de cáncer de cuello uterino
especímenes de cáncer de cuello del útero para ARNm se obtuvieron de 50 pacientes con cáncer de cuello uterino en el departamento de Obstetricia y Ginecología, Segundo hospital Afiliado de la Facultad de Medicina de la Universidad de Xi'an Jiaotong. Todos los pacientes habían dado su consentimiento para la recogida de tejidos en el momento de la cirugía. Y todas las muestras fueron diagnosticados como el cáncer escamoso de cuello uterino por el departamento de patología. Entre ellos, 11 eran de biopsia cervical y no se incluyeron en el análisis estadístico de la profundidad de la invasión y la metástasis linfática. Ninguno de los pacientes habían recibido quimioterapia, inmunoterapia o radioterapia antes de la toma de la muestra. El estadio clínico y las clasificaciones histológicas se basaron en la Federación Internacional de Ginecología y Obstetricia sistema de clasificación (FIGO). Las muestras de tejido fueron divididos en dos partes: una parte se congeló en -80 ° C para el aislamiento de ARN y se utilizó la izquierda para el diagnóstico patológico
Líneas celulares y reactivos experimentales
El HeLa, C33A. líneas celulares, y Caski se obtuvieron de American Type Culture Collection (ATCC) y se mantuvieron en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con suero bovino fetal al 10% a 37 ° C, 5% de CO
2. Anti-MMP2, MMP9, TIMP-1, TIMP-2, β-actina, p38 y p-p38 se obtuvieron de Cell Signaling Technology (Beverly, MA). Anti-NF-KB-p50, p65 anticuerpos /Rel A y histona H1 se compraron desde Santa Cruz de Biotecnología (Santa Cruz, CA, EE.UU.). 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, bromuro de 5-difeniltetrazolio (MTT) y todos los otros productos químicos se obtuvieron de Sigma (St Louis, MO), a menos que se indique lo contrario.
La migración celular y ensayo de invasión
migración celular y la invasión habilidades fueron probados mediante ensayos de curación de heridas y la invasión. La migración celular se evaluó mediante un ensayo de cicatrización de heridas. Las células se cultivaron en placa de 6 pocillos hasta alcanzar una confluencia tasa de 70 a 80% y después se trataron con o sin IL-17A (50 ng /ml). La capa de células fue herido se observó utilizando una punta estéril y la propagación de cierre de la herida y se fotografiaron. ensayo de invasión se realizó con 24 pocillos BioCoat Matrigel Invasión Chambers (Becton Dicknson, Bedford, MA) según las instrucciones del fabricante. Después se cultivaron en medio con o sin IL-17A (50 ng /ml), las células fueron sembradas en pozo interior y el número de células que invadieron a través de la Matrigel fue contado.
aislamiento de ARN y análisis en tiempo real PCR
ARN total fue extraído de las células cultivadas con el reactivo TRIzol (Invitrogen), y los niveles de expresión de mRNA fueron medidos por qRT-PCR utilizando un iQ5 multicolor en tiempo real Sistema de Detección de PCR (Bio-Rad) con SYBR Premix EX. La transcripción inversa se realizó con el kit de reactivos PrimeScript RT (Perfect tiempo real; Takara) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para el análisis de mRNA, los niveles de ARNm de GAPDH se utilizaron como control de normalización interna. Plegables cambios se calcularon y se normalizaron utilizando el método CT. Los cebadores utilizados fueron los siguientes: GAPDH (GCACCGTCAAGGCTGAGAAC y TGGTGAAGACGCCAGTGGA); MMP1 (ACTCTGGAGTAATGTCACACCT y GTTGGTCCACCTTTCATCTTCA); MMP2 (CCGTCGCCCATCATCAAGTT y CTGTCTGGGGCAGTCCAAAG); MMP3 (AGTCTTCCAATCCTACTGTTGCT y TCCCCGTCACCTCCAATCC); MMP9 (GGGACGCAGACATCGTCATC y TCGTCATCGTCGAAATGGGC); MMP10 (CCCACTCTACAACTCATTCACAG y TCAGATCCCGAAGGAACAGAT); MMP13 (TGCCAGTGCCCTTAAATTCCA y CAACAGGGTCTCAAACCCCA); IL-17A (CAATCCCACGAAATCCAGGATG y GTGGAGATTCCAAGGTGAGG).
Zymography
Las células fueron tratadas con IL-17A a 37 ° C durante 24 h, y se recogieron muestras de medios acondicionados. volúmenes apropiados de las muestras no sometidas a ebullición se separaron mediante electroforesis SDS-PAGE 0,1% de gelatina-8%. Después de la electroforesis, los geles se lavaron dos veces en 2,5% de Triton X-100 a temperatura ambiente durante 30 min y después se incubaron en tampón de reacción (mM CaCl2 10, 40 mM Tris-HCl y 0,01% de NaN3, pH 8.0) a 37 ° C durante 12 h. A continuación se usó azul brillante de Coomassie R-mancha gel 250 para teñir el gel. Las intensidades de las bandas en los geles se calcularon usando un sistema de análisis de imágenes (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA).
Cuantificación de MMP-2 y MMP-9 proteínas
Las células se sembraron a una densidad de 1 × 10
5 células /ml en placas de 6 pocillos un día antes del experimento. Las células se cultivaron en medio DMEM fresco suplementado con 1% de FBS y las células parentales se cultivaron en DMEM fresco suplementado con 1% de FBS con o sin IL-17A (50 ng /ml). Después de 48 h de incubación, se recogieron los sobrenadantes de las células, y luego las concentraciones de MMP2 y MMP9 se cuantificaron utilizando los kits de ELISA (Shanghai Westang Bio-Tech Co., Ltd., Shanghai, China).
Análisis de Western Blot
1 × 10
6 células de cáncer cervical se suspendieron en 250 l de tampón de lisis (40 mmoles /l de Tris-HCl, 1 mmol /l EDTA, 150 mmol /l KCl, 100 mmol /l NaVO3, 1 % de Triton X-100, 1 mmol /l de PMSF, pH 7,5). Los lisados nucleares se cosecharon con Proteína NucBuster Extration Kit (Novagen, Alemania) según las instrucciones del fabricante. Las proteínas (50 g) se separaron por electroforesis en gel de SDS-poliacrilamida al 10% y se transfirieron a membranas de PVDF. Las membranas se bloquearon posteriormente en leche sin grasa (5% en solución salina tamponada con Tris con, TBST TWEEN-20) tampón a 37 ° C durante 1 h para bloquear la unión no específica y después se incubaron durante la noche con anticuerpos contra p38, p -p38, MMP2, MMP9, TIMP-1, TIMP-2, NF-kB-p50, p65 /de RelA, histona H1 o β-actina en TBST que contiene 5% de leche desgrasada a 4 ° C. A continuación, se incubaron segundos anticuerpos. Las bandas se detectaron con un kit de quimioluminiscencia (Amersham, ECL Plus, Freiburg, Alemania) y se expusieron por autorradiografía. El análisis de densitometría se realizó utilizando el software Image J (GE Healthcare, Buckinghamshire, Reino Unido).
El análisis estadístico
Todos los datos se muestran como la media ± desviación estándar y se analizaron con el programa SPSS 13.0 (SPSS Inc., IL). La significación estadística se analizó mediante la prueba t de estudiante.
P
. & Lt; 0,05 fue considerado estadísticamente significativo
Resultados
La expresión de IL-17A se asocia positivamente con la metástasis del cáncer de cuello uterino
IL-17A la expresión de ARNm se midió en 50 tejidos de cáncer de cuello uterino por PCR en tiempo real. estudio de asociación se aplicó para investigar aún más la importancia clínica de la expresión de IL-17A en 50 muestras de cáncer de cuello uterino. El resultado mostró que la expresión de IL-17A no se correlacionó con los pacientes 'edad, estadio FIGO, y el tamaño del tumor, mientras que la expresión de IL-17A se correlacionó de manera significativa a los pacientes de la profundidad de la invasión y metástasis linfática estado (
P
& lt; 0.01, prueba t de Student, Tabla 1). Estos resultados indican que la IL-17A podría desempeñar un papel importante en la metástasis del cáncer de cuello uterino.
IL-17A aumento de la motilidad de las células de cáncer de cuello uterino
ensayos de curación de heridas y la invasión de matrigel se llevaron a cabo a probar aún más el papel de la IL-17A en la motilidad celular cervical. Los resultados del programa de curación de las heridas que las migraciones de HeLa, células C33A y Caski fueron mejoradas por la IL-17A (fig. 1A y B). Además, transwell ensayo mostró que el tratamiento con IL-17A promueve la invasión celular a través de la matrigel (Fig. 1C y D).
(A, B) en comparación con las células del grupo de control, IL-17A se trató células de cáncer cervical ( HeLa, C33 a y Caski) mostraron una mayor movilidad en un ensayo de cicatrización de heridas. (C) por el ensayo invasivo de células, el efecto de la IL-17A en la invasión de células se detectó (magnificación 100 x). (D) Número total de células invasoras en cada cámara se resumió. Los valores se representan como media ± desviación estándar de tres experimentos independientes realizados por triplicado. *
p Hotel & lt; 0,05 y **
p
. & Lt; 0,01 en comparación con el grupo control, respectivamente
IL-17A hasta reguladas MMP2 y MMP9 expresión y las reguladas TIMP-1 y TIMP-2 expresión en células de cáncer cervical
Como la sobreexpresión de MMPs juegan un papel importante en la metástasis del cáncer [22], el papel de la IL-17A en la expresión de MMPs en líneas celulares de cáncer de cuello uterino se investigó (C33A y Caski). Expresiones de MMP1, MMP2, MMP3, MMP9, MMP10, MMP13 y se detectaron por análisis de PCR en tiempo real entre las células tratadas y no tratadas IL-17A. Como se muestra en la Fig. 2A, IL-17A incrementó la expresión tanto de MMP2 y MMP9, lo que indica que la motilidad promoción de papel de la IL-17A podría estar involucrado con la remodelación de la matriz extracelular (ECM).
expresión MMPs (A) se detectó por bienes análisis PCR -El tiempo en las células de cáncer cervical tratados con y sin IL-17A. (B) Después de tratar con IL-17A durante 24 horas, la expresión de MMP2, MMP9, TIMP-1, TIMP-2 y se detectaron por análisis de transferencia Western en células de cáncer de cuello uterino. (C) Cuantificación de los niveles de proteína de MMP-2, MMP-9, TIMP-1, TIMP-2 y. MMP2 (D) y las concentraciones de MMP9 (E) en las células de forma sobrenadantes tratados con o sin IL-17A se analizaron por ELISA. (F) Los efectos de la IL-17A sobre las actividades de MMP2 y MMP9 se analizaron mediante el ensayo de zimografía. (G) Cuantificación de la actividad de MMP-2 y MMP-9. Los valores se representan como media ± desviación estándar de tres experimentos independientes realizados por triplicado. *
p Hotel & lt; 0,05 y **
p
. & Lt; 0,01 en comparación con el grupo control, respectivamente
MMP2 y MMP9 desempeñar un papel importante para la metástasis del cáncer [12 ], y la IL-17A puede afectar a la expresión de MMP2 y MMP9 [10]. TIMPs, los inhibidores naturales endógenos de MMP, puede regular la actividad y la expresión de MMPs [23]. Después de tratar con la IL-17A, la expresión de proteínas de MMP2 y MMP9 en líneas celulares de cáncer de cuello uterino (C33A y Caski) aumentó, mientras que la expresión de TIMP-1 y TIMP-2 de proteínas se redujo (Fig. 2B y C).
IL-17A aumentó la secreción y la actividad de MMP2 y MMP9
MMPs tienen el papel de la degradación de ECM, y están fuertemente implicados en la invasión y la metástasis de células tumorales malignas [22]. A la luz de esto, la expresión de MMP2 y MMP9 en los sobrenadantes de células se analizó por ELISA. Como se muestra en la Fig. 2D y E, las células C33A secretadas 425,55 ± 49,35 pg /ml /10
5 células de la MMP-2 y 75,01 ± 9,80 pg /ml /10
5 células de MMP9. tratamiento con IL-17A aumentó significativamente los niveles de MMP2 a 773,12 ± 60,12 pg /ml /10
5 células (
P Hotel & lt; 0,05) y los niveles de MMP9 a 148,89 ± 11,18 pg /ml /10
5 células (
P Hotel & lt; 0,05). Se observaron resultados similares en las células Caski. Claramente, el tratamiento con IL-17A promovido notablemente la expresión tanto de MMP2 y MMP9.
Además, la actividad de MMP2 y MMP9 secretada por células de cáncer cervical se examinó mediante ensayo de zimografía. Los resultados mostraron que la IL-17A podría aumentar significativamente la actividad de degradación de MMP2 y MMP9 en C33A y líneas de células Caski (Fig. 2F y G).
IL-17A MMPs regulados expresión y la invasión de células de cáncer cervical a través la activación de la vía de señalización de p38 /NF-kB
la vía de señalización de p38 juega un papel importante en la invasión de células de cáncer cervical. Después del tratamiento con IL-17A, el nivel de fosforilación de p38 se incrementó (Fig. 3A-B, E-F). Sin embargo, la expresión de p38 total que no se vio afectada. Como se informó vía de señalización NF-kB ser un blanco de abajo de la señalización de p38, y fue capaz de regular positivamente la expresión de MMP-2 andMMP9, NF-kB /p50 y p65 /También se detectó la expresión de RelA. Hemos observado que el tratamiento con IL-17A aumentó significativamente la expresión nuclear de tanto NF-kB /p50 y p65 /de RelA (Fig. 3 C-D, G-H). Para definir mejor el punto de la vía de señalización p38 /NF-kappa B en la que IL-17A regula la invasión de células de cáncer cervical, se trataron células de cáncer cervical con SB203580 (un inhibidor de la p38) y PDTC (un inhibidor de NF-kB), y analizado la capacidad invasiva. Tanto SB203580 y PDTC puede revertir la invasión aumentado por la IL-17A (Fig. 4A-B, E-F). Además, el análisis de transferencia Western reveló que el pre-tratamiento de SB203580 y PDTC abrogó la regulación al alza de MMP2 y MMP9 inducida por la IL-17A (Fig. 4C-D, G-H), demostrando además que IL-17A regula la expresión de MMPs y invasión de células de cáncer cervical a través de la activación de la vía de señalización p38 /NF-kB.
la expresión de p38 y p-p38 se detectaron por análisis de Western blot en C33A (a) y las células Caski (e) tratado con o sin IL -17A durante 24 horas. La cuantificación de los niveles de proteína de p38 y p-p38 en C33A (B) y Caski (F). Los valores se representan como media ± desviación estándar de tres experimentos independientes realizados por triplicado. * P & lt; 0,05 y ** p & lt; 0,01 comparado con el grupo control, respectivamente. Se utilizó el análisis de transferencia de Western para detectar p50 nuclear y la expresión de p65 en C33A (C) y las células Caski (G) tratadas con IL-17A (50 ng /ml) en los puntos de tiempo indicados. La cuantificación de los niveles de proteína nuclear de p50 y p65 en C33A (D) y las células Caski (H). Los valores se representan como media ± desviación estándar de tres experimentos independientes realizados por triplicado. *
p Hotel & lt; 0,05 y **
p
. & Lt; 0,01 en comparación con el grupo control, respectivamente
C33A (A) y células Caski (E) eran pretratado con SB (20 M) y PDTC de 30 min, a continuación se incubaron en presencia o ausencia de IL-17A (50 ng /ml) durante 24 h. Las habilidades invasivos de células se realizaron mediante el ensayo de cámara de Boyden invasión. El porcentaje de la frecuencia invasivo de C33A (B) y las células Caski (F) se expresó como un porcentaje de control. células C33A (C, D) y Caski (G, H) se trataron y después se sometieron a transferencia de Western para analizar los niveles de proteína de MMP2, MMP 9. Los valores se representan como media ± SD de tres experimentos independientes realizados por triplicado. *
p Hotel & lt; 0,05 y **
p
. & Lt; 0,01 en comparación con el grupo control, respectivamente
Discusión
pruebas fehacientes de que ciertos pacientes de cáncer presentan un estado inmunosupresor generalizada, pero la reacción inflamatoria en el sitio de tumor pueden fomentar el crecimiento del tumor y la progresión [24], [25]. La infección persistente por el virus del papiloma humano (VPH) es una causa necesaria del cáncer de cuello de útero [26]. las infecciones por VPH son comunes, y el cáncer cervical pueden ser considerados como una complicación poco frecuente de esta infección común [27]. IL-17A es una citoquina inflamatoria importante en el desarrollo de muchas enfermedades inflamatorias y también se detecta con frecuencia en microambiente tumoral [8], [28], [29]. Pero hasta ahora, poco se sabe sobre el efecto de la IL-17A en la progresión del cáncer de cuello uterino. Souza y sus colaboradores han estudiado la correlación de la concentración de IL-17 en el suero de los pacientes y los diferentes grados de lesiones intraepiteliales escamosas y carcinoma de cuello uterino invasivo [30], por no mencionar el efecto pro-metastásico e invasivo de la IL-17A sobre el cáncer de cuello uterino, así como su mecanismo subordinado. En este sentido, reveló que la IL-17A promovió significativamente la capacidad invasiva y metastásica de las células de cáncer de cuello uterino mediante el control de balance de MMP /TIMP a través de la activación de la vía de señalización de p38 /NF-kB.
En el presente estudio, encontramos que IL-17A podría mejorar las capacidades de migración y la invasión de células de cáncer cervical. Investigaciones anteriores encontraron que la IL-17A podría promover las capacidades de migración y la invasión de cáncer de mama humano y células de carcinoma hepatocelular [8], [10]. Estos resultados sugieren que la IL-17A está estrechamente correlacionada con la invasión de células de cáncer cervical. Con el fin de aclarar los mecanismos relacionados, se investigó si el efecto promotor de la IL-17A en la invasión de células es a través de la regulación de la expresión de MMPs y TIMPs.
Durante el proceso de la metástasis, las células cancerosas necesitan para degradar el ECM y invadir en los vasos sanguíneos o linfáticos, y llegar a otros tejidos y órganos, a continuación, generar un nuevo tumor. MMPs y TIMPs juegan papeles importantes en ECM degradantes [31]. MMP2 y MMP9 se han detectado con frecuencia para ser sobreexpresada en tumores sólidos y se asocia con la invasión tumoral y la metástasis [22], [32]. Así se investigó el efecto de la IL-17A en la expresión de MMP2 y MMP9. Los resultados muestran que la IL-17A puede regular por incremento la expresión de MMP2 y MMP9. TIMPs actúan a través de la formación de un complejo apretado y no covalente con sus enzimas afines y son capaces de afectar a las actividades biológicas de MMPs [33], [34]. En este estudio, encontramos IL-17A podría bajar-regualte la expresión de TIMP-1 y TIMP-2. Estos resultados indican que el efecto promotor de IL-17A se correlaciona con las MMPs y sus inhibidores
.
La vía de señalización de p38 también juega un papel importante en la regulación de la expresión y la actividad de MMPs y TIMPs [35], [ ,,,0],36]. La actividad de la vía de señalización de p38 puede regular por incremento la expresión de MMP-2 y MMP9 [10]. estudio previo encontró que la IL-17A puede activar la señal vía p38 [37], [38]. Para aclarar aún más posible mecanismo (s) de IL-17A en la promoción de la invasión de células de cáncer cervical, investigamos el efecto de la IL-17A en la fosforilación de p38. Los resultados mostraron que la IL-17A-hasta podría regular el nivel de fosforilación de p38. Los resultados también mostraron que el tratamiento de inhibidor de p38 reduce la invasión de células significativamente, acompañado por un aumento de MMP2 y expresión de proteínas MMP9, y la disminución de TIMP-1 y la expresión de proteínas TIMP-2, lo que sugiere que el papel de la regulación de IL-17A en MMP2 y MMP9 expresión podría ser a través de la activación de la vía de señalización de p38. NF-kappa B se ha encontrado para ser un factor de transcripción clave en la regulación de MMP2 y expresión MMP9 [10], [39] y la IL-17A se ha informado que ser capaz de activar NF-kB señal vía [40], [41 ], el próximo estudiamos si la IL-17A podría activar la vía de señalización NF-kB. Los resultados mostraron que la IL-17A podría activar NF-kappa B, lo que sugiere que el papel de la regulación de IL-17A en MMP2 y MMP9 expresión podría ser a través de la activación de la vía de señales NF-kB.
En conclusión, el efecto de la IL-17A en la invasión de células de cáncer de cuello uterino y la metástasis puede conducir a la identificación de nuevos marcadores de diagnóstico y dianas terapéuticas.
Reconocimientos
el proyecto fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (No.81070536) y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de la provincia de Shaanxi (No.2014JM4143).