Extracto
Antecedentes
para investigar la importancia predictiva de
KRAS
,
BRAF, PIK3CA
estado mutacional,
AREG- EREG
la expresión del ARNm, la expresión de proteína PTEN y erupciones en la piel en el cáncer colorrectal metastásico (CCRm ) de los pacientes tratados con cetuximab que contiene la quimioterapia de rescate. se analizaron
Métodos
Los tumores primarios de 112 pacientes con CCRm. Se registró el peor toxicidad de la piel durante el tratamiento.
Resultados
KRAS
,
BRAF
y
PIK3CA
mutaciones estaban presentes en el 37 (33%), 8 (7,2%) y 11 (9,8%) casos, respectivamente, PTEN se perdió en 21 (19,8%) casos,
AREG
y
EREG
se sobreexpresa en el 48 (45%) y 51 (49%) casos. En toda la población de estudio, el tiempo hasta la progresión tumoral (TTP) y la supervivencia global (SG) fue significativamente menor en los pacientes con
KRAS gratis (
p = 0,001
y
p
= 0,026, respectivamente) o
BRAF gratis (
p = 0,001
y
p Hotel & lt; 0,0001, respectivamente) mutante tumores, regulación a la baja de
AREG gratis (
p = 0,018
y
p = 0,013
, respectivamente) o
EREG gratis (
p = 0,002
y
p = 0,004
, respectivamente) y de grado 0-1 erupciones en la piel (
p Hotel & lt; 0,0001 y
p Hotel & lt; 0,0001, respectivamente). En
KRAS
pacientes en peso de TTP y OS fue significativamente menor en los pacientes con
BRAF gratis (
p = 0,0001
y
p Hotel & lt; 0,0001, respectivamente) tumores mutantes, regulación a la baja de
AREG gratis (
p = 0,021
y
p = 0,004
, respectivamente) o
EREG gratis (
p
= 0,0001 y
p Hotel & lt; 0,0001, respectivamente) y erupción cutánea grado 0-1 (
p Hotel & lt; 0,0001 y
p Hotel & lt; 0,0001, respectivamente). TTP fue significativamente menor en los pacientes con
PIK3CA mutaciones
(
p
= 0,01) o se pierde PTEN (
p
= 0,002). El análisis multivariado reveló
KRAS gratis (hazard ratio [HR] 4.3,
p Hotel & lt; 0,0001),
mutación BRAF gratis (HR: 5,1,
p
& lt; 0,0001),
EREG
baja expresión (HR: 1,6,
p = 0,021
) y la ausencia de erupción cutánea grave /moderada (HR: 4,0,
p & lt
; 0,0001) como factores pronósticos independientes para disminuyeron TTP. Del mismo modo,
KRAS gratis (HR 2,9,
p
= 0,01),
mutación BRAF gratis (HR: 3,0,
p = 0,001
),
EREG
baja expresión (HR: 1,7,
p = 0,021
), absecence de erupción cutánea severa /moderada (HR: 3,7,
p Hotel & lt; 0,0001) y la presencia de tumores undifferantited (HR: 2,2,
p = 0,001
) se revelaron como factores pronósticos independientes para OS disminuido
Conclusiones
Estos resultados ponen de manifiesto que
KRAS-BRAF.
mutaciones y
EREG
expresión se puede utilizar como biomarcadores para seleccionar más pacientes sometidos a tratamiento anti-EGFR
Visto:. Saridaki Z, Tzardi M, Papadaki C, Sfakianaki H, F Pega , Kalikaki A, et al. (2011) Impacto de
KRAS, BRAF, PIK3CA mutaciones
, PTEN,
AREG, EREG
Expresión y erupción cutánea en ≥2
ª Línea Cetuximab basada en Terapia de Pacientes con Cáncer Colorrectal. PLoS ONE 6 (1): e15980. doi: 10.1371 /journal.pone.0015980
Editor: Meenhard Herlyn, Wistar Institute Programa, España Estados Unidos
Recibido: 23 Septiembre, 2010; Aceptado: 1 de diciembre de 2010; Publicado: 20 de enero 2011
Derechos de Autor © 2011 Saridaki et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación: Dra. Z. Saridaki es un receptor de una Asociación para la investigación Biomédica de Creta (CABR) beca de investigación. No actuales fuentes externas de financiación para este estudio
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
A pesar de los progresos realizados en la gestión de las metástasis cáncer colorrectal (CCRm) en los últimos años, la enfermedad sigue siendo un problema importante de salud pública en el mundo occidental con un estimado de 146,970 nuevos casos de CCR y 49.920 muertes en 2009 en los Estados Unidos [1].
Dos anticuerpos monoclonales dirigidos EGFR (anti-EGFR anticuerpos monoclonales), tanto mediante la unión al dominio extracelular, y por lo tanto, conduce a la inhibición de su señalización aguas abajo, la quimérico cetuximab IgG1 Moab y los completamente humanizado panitumumab IgG2 Moab, han entrado en la práctica clínica en el cáncer colorrectal metastásico ajuste y han demostrado proporcionar un beneficio clínico modesta en pacientes previamente tratados, ya sea utilizado solo o en combinación con quimioterapia [2] - [5]. Sin embargo, desde el principio quedó claro que no todos los pacientes se benefician de la incorporación de estos agentes en las combinaciones de tratamiento; estudios retrospectivos de hecho, no aleatorios [6] - [11], así como el análisis retrospectivo de los ensayos aleatorios [12] - [16] demostraron que la presencia de
KRAS
mutaciones fueron predictivos de la resistencia a anti- Los anticuerpos monoclonales y la terapia de EGFR se asociaron con un peor pronóstico y una supervivencia más corta. Sobre la base de este conocimiento, de un tumor primario
KRAS
estado mutacional es ahora obligatorio para el tratamiento de la enfermedad metastásica con una en Moab (Agencia Europea del Medicamento anti-EGFR - EMEA-HC-741 y HC-558 y Alimentos de Estados Unidos y Drug Administration - FDA Aplicación No. (BLA) y Nº 125084 (BLA) 125147)
sin embargo, no todos los pacientes con tumores
KRAS WT
se benefician de un tratamiento anti-EGFR los anticuerpos monoclonales, significado. que existen los determinantes genéticos adicionales de resistencia [7], [9], [17] - [19]. De hecho, a partir de tres estudios retrospectivos CCRm esporádicos [20] - [22], el
BRAF
mutación V600E se ha demostrado para identificar un subgrupo (& lt; 10%) de los pacientes que no sólo está presente la resistencia a la anti-EGFR terapia MoAbs, pero, también se caracteriza por pronóstico especialmente desfavorable, independientemente de la administración del tratamiento [20] - [22]. Por otra parte, aunque no del todo claro, sin embargo,
PIK3CA
tumores -mutant parecen derivar poco o ningún beneficio del tratamiento anti-EGFR MoAb [20], [23] - [26].
Además de
KRAS-BRAF-PIK3CA
estado mutacional, epirregulina EGFR (
EREG
) y ampiregulin (
AREG
) la expresión de ligandos 'en los tumores primarios de CRC se ha demostrado que predicen significativamente el resultado clínico en pacientes
KRAS WT
CCRm tratados con cetuximab, lo que indica ligando impulsada autocrina oncogénico de señalización del EGFR [27], [28]. Además, PTEN (fosfatasa y homólogo de tensina) expresión de la proteína, y específicamente su pérdida, parece estar asociado en una serie de estudios con resistencia al tratamiento con tratamiento anti-EGFR MoAbs [21], [29] - [31]. la supervivencia libre de progresión Además, desde un punto de vista clínico, el único parámetro que se ha asociado constantemente con una alta probabilidad de respuesta, prolonga (PFS) y la mediana de supervivencia global (MOS) de anti-EGFR tratamiento MOAB es el desarrollo de la piel exantema [2], [5], [32].
los parámetros clínicos parecen ser inadecuadas para la selección de pacientes, pero, análisis de biomarcadores 'ya se han incorporado en el tratamiento de pacientes con CRC. El objetivo del presente estudio fue determinar e investigar la relevancia clínica de los biomarcadores conocidos al mismo tiempo,
KRAS
exón 2,
BRAF V600E
,
PIK3CA
exón 9 y 20 estado mutacional en conjunción con
AREG
,
EREG
la expresión del ARNm, la proteína PTEN expresión inmunohistoquímica, así como, el desarrollo de erupciones en la piel, en pacientes con CCRm tratados con cetuximab que contiene el salvamento de quimioterapia de combinación.
materiales y Métodos
diseño de la población y el estudio de pacientes
ciento doce pacientes consecutivos, con diagnóstico histológico de cáncer colorrectal metastásico y material tumoral disponible para el análisis molecular, que fueron tratados con cetuximab que contiene la quimioterapia de rescate en el Departamento de Oncología médica, hospital Universitario de Heraklion (Creta, Grecia) entre 1/2005 - 12/2008, se inscribieron. El estudio fue aprobado por los Comités de Ética y Científicas del Hospital General Universitario de Heraklion y todos los pacientes dieron su consentimiento informado por escrito para el uso del material de tejido para la investigación traslacional.
Evaluación de los pacientes se realizó al inicio y cada cuatro ciclos de quimioterapia. Estado de la enfermedad se codificó, sin el conocimiento de los análisis de laboratorio.
selección de tejidos, extracción de ADN y ARN
Fijado en formol (FFPE) secciones de tumores incluidas en parafina fueron revisados por un patólogo ( MT) para confirmar el diagnóstico y definir áreas enriquecidas con el tumor para la disección. Diez secciones en serie de 5 m de espesor fueron teñidos con rojo rápido nuclear (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE.UU.) y raspan la disección bajo un microscopio binocular se realizó en las muestras con células tumorales ≥80%; para muestras con & lt; 80% de células malignas, microdisección con el piezoeléctrico microdissector Eppendorf (Eppendorf, Hamburgo, Alemania) se realizó. La extracción de ADN se realizó con el uso del ADN completa Epicentre® Biotecnologías MasterPure ™ y el Kit de purificación de ARN de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Epicentre, Madison, WI, EE.UU.) después de que las células cancerosas aisladas se lisaron en tampón que contenía proteinasa K a 60 ° C por 72 h. Para la extracción de RNA, las células cancerosas se resuspendieron en 400 l de tampón de lisis de ARN suplementado con 300 mg de proteinasa K (QIAGEN, Valencia, CA, EE.UU.) y se incubaron a 60 ° C durante 16 horas hasta que el tejido estaba completamente solubilizado. RNA se purificó por Trizol LS (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.) y, posteriormente, se trató con DNasa (libre DNΑ-, Ambion, Austin, TX, EE.UU.) con el fin de evitar la contaminación de ADN genómico y se almacena a -80 ° C hasta usado.
KRAS Opiniones y análisis de mutaciones PIK3CA
KRAS Opiniones y análisis de mutaciones PIK3CA se realizó mediante secuenciación de Sanger después de la amplificación por PCR del exón 2 del gen KRAS y PIK3CA exones 9 y 20. Las condiciones de la PCR con cebadores conjuntos que han sido reportados previamente [22].
análisis de mutaciones de BRAF
El V600E
BRAF mutación
fue detectado por PCR en tiempo real utilizando el método de discriminación alélica como se describe anteriormente [33], [34]. En resumen, el ADN extraído de las células tumorales se amplificó con el uso de un conjunto de cebadores y dos sondas de hidrólisis en el sistema ABI PRISM 7900T de detección de secuencias (AB; Applied Biosystems, Forest City; CA; EE.UU.). Las dos sondas de hidrólisis fueron etiquetados a 5 con VIC y FAM fluoróforos reporteros para el peso y el alelo mutante, respectivamente. El software SDS 2.3 se utilizó para el análisis de los resultados.
AREG
y
EREG
la expresión del ARNm
El superíndice III transcriptasa inversa (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.) se utilizó para preparar cDNA a partir de 50 ng de ARN total para cada gen analizado como se describe anteriormente [35]. la cuantificación de cDNA relativa para
AREG, EREG
y ambos
β-actina
y
PGK
como genes de referencia interna se realizó utilizando el sistema ABI Prism 7900HT de detección de secuencias (AB), como se describe anteriormente [35]. Los cebadores y la sonda fija fueron diseñados utilizando Primer Express 2.0 Software (AB), de acuerdo con la Sec Ref NM_001657.2 para
AREG Opiniones y NM 001.432,2 para
EREG gratis (http: //www. ncbi.nlm.nih.gov/LocusLink). La secuencia de los cebadores y sondas 5 'marcado fluorescente del tinte reportero (6FAM) para todos los genes de referencia y de destino se muestran en la Tabla 1.
relativa cuantificación de la expresión génica se realizó de acuerdo con el método comparativo Ct usando
β-actina
y
PGK
como controles endógenos y controles de ARN comercial (Stratagene, La Jolla, CA, EE.UU.) como calibradores. Los resultados finales se determinan como sigue: 2
- (Ct de la muestra-Ct del calibrador), donde? C
valores T del calibrador y muestra se determina restando el C
valor T del gen diana de la media valor de los dos genes de referencia. En todos los experimentos, solamente por triplicado con una desviación estándar (SD) del valor Ct & lt; 0,25 fueron aceptadas. Además, la contaminación de ADN genómico de cada muestra ha sido excluido por la transcripción no inversa del ARN [35].
expresión de la proteína PTEN
de tres a 4 a
μ
se seleccionaron m cortes de tejido tumoral de las muestras incluidas en parafina de cada paciente para la tinción de PTEN IHC usando el anticuerpo monoclonal 17.A ratón (dilución 1:25, Neomarkers; ThermoFisher Scientific Inc, Fremont, CA), como se describe anteriormente [28], [36]. Después de deparaffinization e hidratación de las secciones, los antígenos fueron desenmascarados por calor en tampón de EDTA. La inmunotinción se realizó a través de UltraVision LP de gran volumen de detección del sistema de AP Polímero (Thermo Scientific, Waltham, MA, EE.UU.). Los portaobjetos de control negativo se prepararon mediante la omisión del anticuerpo primario. Los cánceres de próstata y células endoteliales se utilizaron como controles positivos externos e internos, respectivamente.
tinción de PTEN se debió principalmente citoplasmática. Como se ha descrito anteriormente [28], la intensidad se puntuó de acuerdo a un sistema de cuatro niveles: 0, sin manchas; 1, débil; 2, moderado; y 3, fuerte. Uno, dos o tres puntos adicionales se atribuyeron si el porcentaje de positivos fue & lt; 25%, 25-50% o & gt; 50%, respectivamente. Las muestras con un puntaje acumulado de ≥4 se caracterizaron como positiva [28].
Diseño del estudio y el análisis estadístico
El presente estudio fue un análisis retrospectivo con el objetivo de explorar el valor predictivo de extensas biomarcadores el análisis de la evolución de los pacientes con cáncer colorrectal metastásico tratados con cetuximab más quimioterapia como tratamiento de rescate. Todas las biopsias disponibles del tumor primario con más de 100 células por sección se incluyeron en el análisis. RT-qPCR análisis de los valores que se expresan como cocientes entre dos mediciones absolutas (: medias de los genes de referencia internos gen de interés) rindió. El análisis de la compra ha sido utilizado para la estimación de los puntos de corte de
AREG
y
EREG
la expresión del ARNm, con el fin de clasificar los casos en grupos de un dependiente (TTP y MOS) variable. Las muestras con la expresión del ARNm por encima o igual que el punto de corte se consideraron como muestras con alta expresión, mientras que los que tienen valor por debajo de la mediana como muestras con baja expresión. Las asociaciones entre los
KRAS, BRAF
,
PIK3CA
estado de mutación,
AREG
y
EREG
la expresión del ARNm y la expresión de PTEN IHC con las características basales fueron evaluados utilizando la la prueba exacta de Fisher para las variables categóricas o de regresión logística para las variables continuas. Se utilizó la prueba exacta de Spearman para evaluar la correlación entre la
AREG
y
EREG
la expresión del ARNm. Tiempo hasta la progresión tumoral (TTP) y la supervivencia global (SG) se mide a partir de la fecha de la iniciación que contiene cetuximab línea de tratamiento para la primera documentación radiográfica de progresión de la enfermedad o la muerte, respectivamente. Las curvas de Kaplan-Meier se utiliza para describir la proporción de pacientes que permanecieron libres de eventos durante el período de seguimiento. Las asociaciones entre los factores pronósticos y TTP o OS fueron examinadas usando Cox modelos de regresión de riesgos proporcionales. Todos los reportados
p
-valores son de doble cara y no ajustados para múltiples pruebas.
Resultados
Datos demográficos del paciente
El estado mutacional de
KRAS
exón 2,
BRAF
exón 15, y
se determinó PIK3CA
exones 9 y 20 de los 112 pacientes consecutivos con cáncer colorrectal metastásico, mientras que.
AREG
y
EREG
expresión de ARNm se determinó en 106 y 105 pacientes en los que se disponía de material tumoral, respectivamente, mientras que la expresión de PTEN se evaluó en 106 pacientes. Todos los pacientes fueron tratados con cetuximab en combinación con quimioterapia (73% en combinación con irinotecan, el 27% con oxaliplatino) como tratamiento de rescate (Tabla 2). Sesenta y seis (59%) de los pacientes habían recibido tratamiento en la configuración de la línea 2 nd
y los restantes 46 (41%) como 3
ª línea de tratamiento. No había ningún paciente que recibió los anti-EGFR Los anticuerpos monoclonales en el 1
st configuración de la línea. Características de la enfermedad eran las típicas de cáncer colorrectal metastásico en el mundo occidental; edad media de los pacientes fue de 66 años y el 60% eran de sexo masculino (Tabla 2). La mediana de SSA de 1
st línea de tratamiento fue de 8,9 meses (IC del 95% 8.1 a 9.9) y el tiempo medio de recidiva a la línea de tratamiento previo hasta que la administración de cetuximab fue de 1,1 meses (IC 95% 0,7-1,8).
de estado y de expresión de los valores mutacional resultados
KRAS
mutaciones se detectaron en 37 (33%),
BRAF
mutaciones en ocho (7.2%) y
PIK3CA
mutaciones en 11 (9,8%, 8 en el exón 9 y 3 en el exón 20) Los tumores primarios, respectivamente.
KRAS
y
BRAF
mutaciones eran mutuamente excluyentes, mientras que, tres tumores llevaron a ambos
KRAS Opiniones y
PIK3CA
mutaciones.
AREG
y
EREG
se sobreexpresa en 48 (45%) y 51 (49%) pacientes, respectivamente, mientras que, PTEN se calificó como negativo (es decir, pérdida de la función) en 21 (19,8 %) pacientes (Figuras 1A y 1B). Cuando
PIK3CA
mutaciones y expresión PTEN se analizaron juntos, activación de la vía (definida como la pérdida de PTEN o
PIKECA
mutación) se detectó en 25 (23,5%) pacientes. Una tendencia de disminución en la incidencia de
se observó KRAS
mutaciones en los tumores de recto (
p = 0,097
) desde el 31 de los 83 tumores (37%) situados en el colon y seis de los 29 ( 20%), los tumores localizados en el recto albergaban un
KRAS
mutación. No hubo correlación entre la presencia de
KRAS
mutaciones con el género de los pacientes, la edad (& gt; 70 años de edad en comparación con ≤ 70 años), etapa al momento del diagnóstico, el grado histológico, estado mucinoso, pérdida de PTEN y
AREG Network -
EREG
expresión (todos los
p-valores
& gt; 0,05). Además, se observó una correlación estadísticamente significativa entre la presencia de
BRAF
mutaciones y el grado histológico (bueno /moderado en comparación con indiferenciada) (
p = 0,049
) y
EREG
regulación a la baja de ARNm (
p = 0,013
). No hubo correlación entre la presencia de
BRAF
y
PIK3CA
mutaciones con el género de los pacientes, la edad (& gt; 70 años de edad en comparación con ≤ 70 años), etapa de diagnóstico, localización del tumor , estado mucinoso, la pérdida de PTEN y
AREG
expresión (en ambos casos todos los
p-valores
& gt; 0,05)
Panel a:. Muestra de una diferenciadas adenocarcinoma moderado de el colon anotó como PTEN positivo (x100) Panel a:. Muestra de un adenocarcinoma diferenciado moderada del colon anotó como PTEN negativo (x100)
impacto de los valores de estado y de expresión de mutaciones en el resultado de salvamento el tratamiento con cetuximab
resultados en la población todo el de los pacientes (Tabla 3).
Tablas 3 y 4 resumen el impacto de las alteraciones genéticas en el resultado del tratamiento de rescate que contiene cetuximab. La mediana del TTP de todo el grupo de pacientes fue de 4,9 meses (IC del 95% 4.1 a 5.7) y los correspondientes mediana de supervivencia global (OS) de 14,5 meses (IC del 95%: 10,0-18,9). TTP y OS fueron significativamente inferiores en los pacientes cuyos tumores llevadas a
KRAS mutaciones
(3,1 vs 6,4 meses,
p = 0,001
y 10,6 vs 16,3 meses,
p =
0,026, respectivamente) (Figura 2A y 2B). Del mismo modo, TTP y OS fueron significativamente inferiores en los pacientes cuyos tumores llevadas a
BRAF
mutaciones (2,1 frente a 5,2 meses,
p = 0,001
y 4,3 vs. 15,1 meses,
p
& lt; 0,0001, respectivamente) (Figura 3 y 4). No hubo correlación significativa en términos de PTT de acuerdo con
PIK3CA
estado mutacional o expresión de PTEN en todos los pacientes tratados (4,9 vs 5. 7 meses,
p = 0,427
y 5,2 vs 6,03 . meses,
p
= 0,102, respectivamente) (Figura 4A y 4B); de manera similar, no hubo diferencia en términos de mediana de la SG entre los pacientes con
PIK3CA
mutante (13,6 meses) y en peso (15,0 meses) tumores primarios (
p
= 0,44; Figura 5A), como se así como entre los pacientes con perdida (14,3 meses) o normal (15,1 meses) la función de PTEN (p = 0,82; Figura 5B). Sin embargo, cuando
PIK3CA
estado y la expresión de PTEN mutacional se tuvieron en cuenta en conjunto, la activación de la vía a través de
PIK3CA
mutaciones y /o la pérdida de PTEN se correlacionó con una tendencia a la disminución de TTP en todos los pacientes (3,8 frente a 5,0 meses,
p = 0,051
) (Figura 4E), mientras que no se observó ninguna diferencia en la mediana de SG (13,9 frente a 14,5 meses,
p = 0,878
) (Figura 5E)
Panel a:. Tiempo para la progresión tumoral (TTP) Grupo B: la mediana de la supervivencia global (OS) guía empresas
Panel a:. Tiempo para la progresión tumoral (TTP) en el la población de los pacientes enteros. Panel B: La mediana de supervivencia global (SG) en el conjunto de la población de los pacientes Panel C: Tiempo para la progresión tumoral (TTP) en pacientes con
KRAS
tumores primarios en peso. Grupo D: La mediana de supervivencia global (SG) en pacientes con
KRAS
tumores primarios wt
Panel A:. De acuerdo con
PIK3CA
estado de mutaciones en el conjunto de pacientes ' población. Panel B: según la expresión de PTEN en la población de todo el de los pacientes. Panel C: en función del estado de activación del eje PIK3-PTEN (
PIK3CA
estado de mutaciones y la expresión de PTEN) en la población de todo el de los pacientes. Grupo D: según
PIK3CA
estado de mutaciones en pacientes con
KRAS
tumores primarios en peso. Grupo E: de acuerdo a la expresión de PTEN en pacientes con
KRAS
tumores primarios en peso. Grupo F: en función del estado de activación del eje PIK3-PTEN (
PIK3CA
estado de mutaciones y la expresión de PTEN) en pacientes con
KRAS
tumores primarios wt
Panel A. : según
PIK3CA
estado de mutaciones en la población enteros los pacientes. Panel B: según la expresión de PTEN en la población de todo el de los pacientes. Panel C: en función del estado de activación del eje PIK3-PTEN (
PIK3CA
estado de mutaciones y la expresión de PTEN) en la población de todo el de los pacientes. Grupo D: según
PIK3CA
estado de mutaciones en pacientes con
KRAS
tumores primarios en peso. Grupo E: de acuerdo a la expresión de PTEN en pacientes con
KRAS
tumores primarios en peso. Grupo F: en función del estado de activación del eje PIK3-PTEN (
PIK3CA
estado de mutaciones y la expresión de PTEN) en pacientes con
KRAS
tumores primarios wt
Una correlación altamente significativa entre los
AREG
y
se observó EREG
expresión de ARNm (Spearman ρ
2 = 0,736,
p & lt; 0,001
). En todo el grupo de pacientes,
AREG
sobreexpresión de ARNm se correlacionó significativamente con el aumento de TTP y OS (5,0 vs 3,8 meses,
p = 0,018
y 20,2 vs 10,7 meses,
p
= 0,013, respectivamente]) (figuras 6A y 6B). Por otra parte,
EREG
sobreexpresión de mRNA fue también significativamente correlacionado con el aumento de TTP y OS (6,1 vs 3,6 meses,
p = 0,002
y 17,6 vs 10,7 meses,
p
= 0,004, respectivamente) (Figuras 7A y 7B)
Panel a:. Tiempo para la progresión tumoral (TTP) en la población de todo el de los pacientes. Panel B: La mediana de supervivencia global (SG) en el conjunto de la población de los pacientes Panel C: Tiempo para la progresión tumoral (TTP) en pacientes con
KRAS
tumores primarios en peso. Grupo D: La mediana de supervivencia global (SG) en pacientes con
KRAS
tumores primarios wt
Panel A:. Tiempo para la progresión tumoral (TTP) en la población de todo el de los pacientes. Panel B: La mediana de supervivencia global (SG) en el conjunto de la población de los pacientes Panel C: Tiempo para la progresión tumoral (TTP) en pacientes con
KRAS
tumores primarios en peso. Grupo D: La mediana de supervivencia global (SG) en pacientes con
KRAS
tumores primarios wt
Tabla 3 y las figuras 8A y 8B demuestran las diferencias en la TTP y OS acuerdo con
KRAS-BRAF
estado mutacional y
AREG
expresión. Se muestra que el
KRAS-BRAF
WT y
AREG
perfil sobreexpresión se correlacionó significativamente con el aumento de TTP y la SG en comparación con cualquier otra combinación. Del mismo modo, las figuras 8C y 8D y en la Tabla 3 ilustran las diferencias en el TTP y OS acuerdo con
KRAS-BRAF
estado mutacional y
EREG
expresión; de nuevo, el
KRAS-BRAF
WT y EREG perfil sobreexpresión se correlacionó significativamente con el aumento de TTP y la SG en comparación con cualquier otra combinación
Panel A:. Tiempo para la progresión tumoral (TTP) de acuerdo con
KRAS-BRAF
estado de mutaciones y
AREG
la expresión del ARNm. Panel B: La mediana de supervivencia global (OS) de acuerdo con
KRAS-BRAF
estado de mutaciones y de la expresión de ARNm
AREG
. Panel C: Tiempo para la progresión tumoral (TTP) de acuerdo con
KRAS-BRAF
estado de mutaciones y
EREG
ARNm. El panel D La mediana de supervivencia global (OS) de acuerdo con
KRAS-BRAF
estado de mutaciones y
EREG
ARNm.
Por último, se correlacionó el impacto de la piel inducida cetuximab erupción cutánea con el resultado del tratamiento. Los pacientes con erupción cutánea grave o moderada (grado 2-3) de la piel presentado TTP significativamente mayor (7,5 meses) en comparación con aquellos con insuficiencia renal leve (grado 1) (4,5 meses;
p Hotel & lt; 0,0001) y no hay erupciones en la piel (2,3 meses,
p Hotel & lt; 0,0001), así como una mayor OS (24,1 vs 13,2 meses,
p Hotel & lt; 0,0001, y frente a 4,9 meses,
p
& lt; 0,0001) (Tabla 3 y las Figuras 9A y 9B)
Panel a: Tiempo de la progresión tumoral (TTP) de acuerdo con el peor grado erupción de la piel desarrollados durante el tratamiento con cetuximab + quimioterapia.. Panel B: La mediana de supervivencia global (OS) de acuerdo con la peor calificación desarrollado erupciones en la piel durante el tratamiento con cetuximab + quimioterapia
Resultados de la
Población 'KRAS WT
pacientes (Tabla. 4)
Cuando los pacientes sólo
se analizaron KRAS WT
casos cuyos tumores portaban el
BRAF mutación
tenido más significativamente menor incluso TTP y OS (TTP:. 2.1 vs. 6.4 meses,
p Hotel & lt; 0,0001; OS: 4,3 frente a 16,3 meses,
p Hotel & lt; 0,0001) (Figura 3C y 3D) en comparación con los resultados en toda la población. Además, cuando sólo el
se consideraron KRAS WT
casos, disminución de TTP se asoció significativamente con la presencia de
PIK3CA
mutación (4,3 vs 6,4 meses,
p =
0,01) (Figura 4C) y la regulación a la baja de PTEN (3,7 frente a 5,0 meses,
p
= 0,002) (Figura 4D). Sin embargo, en este grupo particular de pacientes con tumores
KRAS
WT, no se encontró correlación significativa en la mediana de la SG entre los pacientes con o sin
PIK3CA
mutaciones (13,5 frente a 16,3 meses, respectivamente; p = 0,345) o aquellos con PTEN downregulated o funcional (15,3 frente a 14,5 meses, respectivamente; p = 0,862) (Figuras 5C y 5D). Pero, en
KRAS WT
pacientes cuando
PIK3CA
estado mutacional y la expresión de PTEN se tuvieron en cuenta en conjunto, una significativa disminución de TTP se observó con la activación de la vía a través de
PIK3CA
mutaciones y /o la pérdida de PTEN, en comparación con su presencia inactivada con peso
PIK3CA
y /o PTEN funcional (3.8 vs. 6.4 meses,
p
= 0,001) (Figura 4F); por el contrario, una relación que no podía ser revelado en términos de la mediana de SG (13,9 frente a 16,2 meses;
p = 0,987
). (Figura 5F)
KRAS
WT pacientes,
AREG
sobreexpresión de ARNm se correlacionó significativamente con el aumento de TTP y OS (5,8 vs 4,3 meses,
p = 0,021
y 23,2 vs 10,7 meses,
p
= 0,004, respectivamente) (figuras 6C y 6D), así como,
EREG
sobreexpresión de ARNm (7,0 frente a 3,8 meses,
p
= 0,0001 y 20,2 vs. 10,5 meses,
p
. & lt; 0,0001, respectivamente) (Figuras 7C y 7D)
univariante y multivariante análisis
En lo que se refiere a la TTP, el análisis univariante (Tabla 3 y 4) demostrado una asociación significativa con: i)
KRAS
mutaciones (
p
= 0,001); ii)
BRAF
mutaciones (
p
= 0,001); iii)
AREG
expresión de ARNm (
p = 0,018
); iv)
EREG
expresión de ARNm (
p
= 0,002) y v) el desarrollo de la erupción cutánea grave moderada (
p Hotel & lt; 0,0001). Además, TTP en
KRAS
pacientes wt se correlacionó significativamente con
PIK3CA mutación
(
p
= 0,01), la expresión de PTEN (
p = 0,002
) y el
PIK3CA
-PTEN la activación del eje (
p
= 0,001). Por lo que se refiere a la OS análisis univariante (Tabla 3 y 4) demostraron asociaciones significativas con: i)
KRAS
mutaciones (
p = 0,026
); ii)
BRAF
mutaciones (
p Hotel & lt; 0,0001); iii)
AREG
expresión de ARNm (
p = 0,013
); iv)
EREG
expresión de ARNm (
p = 0,004
) y v) el desarrollo de la erupción cutánea grave moderada (
p Hotel & lt; 0,0001). Por último, la diferenciación tumoral (tumores indiferenciados) se correlacionó significativamente con la disminución de la mediana de SG (cociente de riesgos instantáneos: 1,9;
p = 0,003
)
En el análisis multivariado,
KRAS
(HR 4.3,
p Hotel & lt; 0,0001),
BRAF gratis (HR 5,1,
p Hotel & lt; 0,0001) mutación y baja
EREG
la expresión del ARNm (HR 1,6,
p = 0,021
) surgió como factores independientes asociados con la reducción de TTP. Por otra parte, la ausencia de erupción severa y moderada (grado 2-3) surgió de la piel, así, como un factor pronóstico independiente de la disminución de TTP (HR 4.0,
p Hotel & lt; 0,0001) (Tabla 5). Además,
KRAS gratis (HR 2,9,
p
= 0,01),
BRAF gratis (HR 3.0,
p = 0,001
) mutación y baja
EREG
expresión de ARNm (HR 1,7,
p = 0,021
) surgió como factores independientes asociados con OS reducida. Además, la diferenciación del tumor de grado 3 surgió, así, como factores pronósticos independientes para OS reducida (HR 2.2,
p
= 0,001). Por otra parte, la ausencia de grave y moderada (grado 2-3) erupciones en la piel surgió como un factor pronóstico independiente de la disminución de la SG (CRI 3,7,
p Hotel & lt; 0,0001, respectivamente). (Tabla 5)
Discusión
Tras el descubrimiento de
KRAS
mutaciones en asociación con la resistencia anti-EGFR los anticuerpos monoclonales, el
KRAS
caracterización de mutaciones de los tumores CCRm es, en la actualidad , preformada en forma rutinaria antes de cualquier decisión sobre el tratamiento. Aunque la presencia de
KRAS mutaciones
es un biomarcador predictivo específico para la falta de eficacia Los anticuerpos monoclonales anti-EGFR [6] - [9], [14], [37] Existen pruebas convincentes de que los eventos genéticos adicionales están involucrados en este proceso, ya que aproximadamente la mitad de la
KRAS
pacientes wt son resistentes a este tratamiento [38]. Además, varios biomarcadores se han propuesto en asociación con
KRAS mutaciones
como marcadores predictivos de la eficacia de los MoAb anti-EGFR, incluyendo
BRAF
[19], [22] o
PIK3CA
mutaciones [21], el EGFR ligandos sobreexpresión [23], [27], expresión de la proteína PTEN [28] y el número de copias de EGFR [10], [11]. En el presente estudio se evaluó la importancia predictiva de otras mutaciones comunes observados en los CRC y se PTEN expresión de la proteína EGFR y ligandos (
EREG
y
AREG)
mRNA expresión, así como el impacto de erupciones en la piel en una cohorte de pacientes con cáncer colorrectal metastásico tratados con anti-EGFR más quimioterapia como tratamiento de rescate. A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer estudio que combina todos estos parámetros juntos. las características de los pacientes, la incidencia de mutaciones y los regímenes de tratamiento fueron todos típico para CCRm [22], [37];