Extracto
Antecedentes
Los microARN (miARN) han sido considerados como un factor crítico en la selección oncogenes o genes supresores de tumor en la tumorigénesis. La predisposición genética de las vías de miRNAs señalización relacionados con el desarrollo de carcinoma oral de células escamosas (COCE) permanece sin resolver. Este estudio examinó las asociaciones de polimorfismos con cuatro miRNAs con la susceptibilidad y clinicopathological características del COCE.
Metodología /Principales conclusiones
Un total de 895 sujetos masculinos, incluyendo 425 controles y 470 cáncer oral masculina pacientes, se seleccionaron. cadena de la polimerasa de longitud de fragmentos de restricción polimórficos-reacción (PCR-RFLP) y la PCR en tiempo real se utiliza para analizar miRNA146a, miRNA196, miRNA499 y miRNA149 polimorfismos genéticos entre el grupo control y el grupo de casos. Este estudio determinó que una asociación significativa de miRNA499 con genotipo CC, en comparación con los sujetos con el genotipo TT, tenían un riesgo más alto (AOR = 4,52; IC del 95% = 1,24 a 16,48) de la CEI. Por otra parte, también se reveló un impacto de los cuatro miRNAs polimorfismo del gen de la susceptibilidad de la nuez de betel y el consumo de tabaco que conduce al cáncer oral. Hemos encontrado un efecto protector entre el desarrollo clínico de fase (AOR = 0,58, 95% CI = 0,36-0,94) y el crecimiento del tamaño del tumor (AOR = 0,47; IC del 95% = 0,28-0,79) en los pacientes más jóvenes (edad & lt; 60).
Conclusiones
Nuestros resultados sugieren que el polimorfismo genético de miRNA499 está asociado con la carcinogénesis oral, y la interacción de la polimorfismo genético miRNAs y carcinógenos ambientales también está relacionada con un mayor riesgo de cáncer oral en Taiwán.
Visto: Chu YH, Tzeng SL, Lin CW, Chien MH, Chen MK, Yang SF (2012) Impactos de los microARN polimorfismos del gen de la susceptibilidad de los factores ambientales que conducen a la carcinogénesis en el cáncer oral. PLoS ONE 7 (6): e39777. doi: 10.1371 /journal.pone.0039777
Editor: Brock C. Christensen, Escuela Geisel de Medicina de Dartmouth, Estados Unidos de América
Recibido: 7 Enero, 2012; Aceptado: 25-may de 2012; Publicado: 28 Junio 2012
Derechos de Autor © 2012 Chu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Los autores no tienen el apoyo o la financiación para reportar
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
MircoRNAs (miRNAs) son pequeños RNAs de fragmentos, los cuales contienen aproximadamente 20 a 22 nucleótidos, pueden dirigirse a ARNm específicos y negativamente regular su eficacia de la traducción y la estabilidad [1]. hallazgos anteriores han demostrado que uno de los genes miARN podría influir en la expresión de varios genes diana. De acuerdo con la regulación de diferentes ARN diana, miRNAs puede participar en los procesos celulares incluyendo la proliferación, la diferenciación y la supervivencia [2]. miARN expresión alterada se ha observado en varias enfermedades, especialmente en el cáncer [3].
En Taiwán, el cáncer oral es el cuarto cáncer más común entre los hombres. Un rápido aumento de la incidencia de cáncer oral se produjo en los últimos años y la tasa bruta de mortalidad del cáncer oral fue de 10,1 por 100.000 en 2007 y clasificada como la sexta causa de muerte por cáncer [4]. En los últimos años, la incidencia de cáncer oral fue particularmente alta en el sur de Asia. Este fenómeno aparece sobre todo en poblaciones acostumbradas a masticar nueces de areca (betel) tuerca [5]. Los estudios epidemiológicos han sugerido también que la susceptibilidad de cáncer oral está mediada por ambos carcinógenos ambientales (incluyendo el consumo de alcohol, el consumo de tabaco y de betel de mascar nuez) y los factores genéticos [6]. Cada vez más evidencia muestra que los miRNAs están asociados con cáncer de cabeza y cuello /oral, [7], y varios miRNAs han demostrado ser no regulada en el cáncer de cabeza y cuello [8]. Esta relación también se ha determinado en la investigación de laboratorio [9].
polimorfismo de nucleótido único (SNP) es una variación en la secuencia de ADN que se produce cuando el cambio nucleótidos (A, T, C o G) en al menos 1 % de una población determinada. Cierta evidencia epidemiológica demuestra que los genes miARN variaciones genéticas se asocian con la progresión a cáncer oral [10], [11]. Mientras que los miRNAs han recibido considerable atención en los últimos años, SNPs en los genes miARN y secuencias pre-miARN se han descubierto para ser conectado a sus genes candidatos [12]. En la base de datos dbSNP, más de 400 miRNAs SNPs se han documentado. Para obtener la potencia adecuada para evaluar la posible asociación, se investigó miRNA146a (rs2910164), miRNA149 (rs2292832), miRNA196 (rs11614913), y miRNA499 (rs3746444), los que tienen frecuencias de alelos menores ≥5% y que también se encuentra en las regiones pre-miARN en las poblaciones chinas [13], [14]. En otro aspecto, estos cuatro genes miARN SNPs se han reportado tan importante para la tumorigénesis debido a su orientación en varios genes importantes [15]. Por lo tanto, se seleccionaron estos cuatro SNPs miARN en este estudio. También se consideró un fenómeno único en el sur de Asia, donde la mayoría de las personas con cáncer oral tienen la costumbre de mascar nuez de betel. Se combinaron los resultados del estado y de laboratorio clínico para determinar la relación entre estos SNPs y la susceptibilidad de cáncer oral.
Resultados
El análisis estadístico de las características demográficas se muestra en la Tabla 1. No hubo diferencias significativas en la distribución de mascar betel quid (
p Hotel & lt; 0,001), el consumo de alcohol (
p Hotel & lt; 0,001), y el consumo de tabaco (
p Hotel & lt; 0,001 ) entre los sujetos de control sanos y pacientes con COCE. Debido a estas diferencias entre los dos grupos pueden ser factores de confusión, ajustamos estas características en su posterior análisis estadístico.
La distribución de genotipos SNP miARN se describen en la Tabla 2. En los controles sanos, los polimorfismos de los genes miARN (rs2910164 , rs11614913 y rs3746444) se ajustaba al equilibrio de Hardy-Weinberg, a excepción de rs2292832 (
p Hotel & lt; 0,001). Se utilizó el modelo de regresión logística para estimar los odds ratios ajustados (AORs). Después de ajustar la edad, el tabaquismo, la ingesta de alcohol y la nuez de betel hábitos de masticación, se encontró que los genotipos CC miRNA499 mostraron significativamente (
p Hotel & lt; 0,05) mayores riesgos de 4.52- (IC del 95% = 1,24 a 16,48) de teniendo CCCA en comparación con el correspondiente de tipo salvaje (WT) homocigotos. Sin embargo, no hubo significativamente mayor riesgo de cáncer oral, para los individuos con el miRNA146a, y miRNA149 gen polimórfico miRNA196 en comparación con aquellos con el gen WT.
Teniendo en cuenta que los factores de riesgo, tales como mascar nuez de betel puede modificar el susceptibilidad genética al cáncer oral, y los efectos de interacción entre los factores de riesgo ambientales y los polimorfismos genéticos de miRNAs se muestran en la Tabla 3, Tabla S1 y S2 tabla. Los sujetos con al menos un alelo C de miRNA499 y un hábito de betel nuez de mascar tenían respectivos riesgos más altos de 17.33- (IC 95% = 9.63-31.17) de tener cáncer oral (Tabla 3). Los sujetos con al menos un alelo G del miRNA146a, el alelo C del miRNA149, o el alelo C del miRNA196, y un hábito de mascar betel nuez tenían respectivos riesgos más altos de 9.93- (IC del 95% = 6,01 a 16,41), 8.67- ( IC del 95% = 5,06 a 14,89), y 10.98- (IC del 95% = 6,21 a 19,39) de tener cáncer oral (Tabla S1). Del mismo modo, el consumo de tabaco significativamente elevado el riesgo de cáncer oral en sujetos polimórficos para miRNA146a, miRNA149, miRNA196 y miRNA499 comparación con los individuos con el gen WT pero sin fumar (Tabla 3 y la Tabla S2). Además, evaluó la interacción gen-ambiente estadística entre el miARN polimorfismos, el tabaquismo y betel en el cáncer oral (Tabla 3, Tabla S1 y el cuadro S2). Se encontró significación estadística para la interacción entre todos los miARN polimorfismos, el tabaquismo y betel en el desarrollo del cáncer oral (p & lt; 0,05). Los resultados anteriores sugieren que los polimorfismos de genes miARN tienen un fuerte impacto en la susceptibilidad del cáncer oral en la nuez de betel y /o consumidores de fumar.
Para explorar los impactos de los genotipos polimórficos de miRNAs en el estado clínico del CCCA, clasificamos más pacientes CCCA en dos subgrupos: un subgrupo con al menos un alelo polimórfico, y el otro subgrupo con alelos homocigotos WT. Los datos del análisis estadístico mostró que que tienen gen polimórfico miRNA499 tenía un efecto protector de el crecimiento del tamaño del tumor (AOR = 0,46, IC del 95% = 0,29-0,72) en comparación con los pacientes con el tipo salvaje (Tabla 4). Sin embargo, no se observó ninguna asociación significativa entre miRNA416a, miRNA149 y polimorfismos de genes miRNA196 y las covariables clínico-patológicas (datos no mostrados). Por otra parte, en comparación con el genotipo WT (T /T), los pacientes con al menos un alelo C polimórfica de miRNA499 mostraron un efecto protector entre el desarrollo clínico etapa (AOR = 0,58, 95% CI = 0,36 a 0,94) y el crecimiento del tamaño de tumor ( AOR IC = 0,47, 95% = ,28-,79), en los pacientes más jóvenes (age≤60), como se muestra en la Tabla S3. Sin embargo, no se observó ninguna asociación significativa entre los polimorfismos del gen miRNA499 y las covariables clínico-patológicas en pacientes de edad avanzada (edad & gt; 60). (Tabla S4) guía empresas
Discusión
En este estudio, hemos proporcionado información novedosa de SNPs de miRNA499 en la asociación de la susceptibilidad del cáncer oral. Después de combinar el factor de riesgo principal de cáncer oral, éstos genética afecta también puede aumentar la susceptibilidad de cáncer oral. Teniendo en cuenta los resultados anteriores, miRNA499 se ha determinado que exhibir alta expresión en el corazón y los tejidos del músculo esquelético [16]. En particular en el corazón, los estudios anteriores también han encontrado que la alta expresión de miRNA499 aumenta el riesgo de hipertrofia de los cardiomiocitos y la miocardiopatía. Por otra parte, algunas evidencias sugieren que miRNA499 puede regular la dinámica mitocondrial a través de la orientación proteínas específicas tales como p53 [17]. Estudios previos han demostrado también que miRNA499 está muy asociada con enfermedades del corazón por regular la diferenciación y la proliferación [18] celular, [19]. Estos hallazgos muestran que miRNA499 está posiblemente asociada con enfermedades del corazón y también la carcinogénesis.
Sobre la base de la situación clínica, estudios previos han encontrado que los genes miARN-486, miARN-30d, miARN-1, y miRNA-499 exhibieron alta expresión en suero y también se asociaron con la supervivencia en el cáncer de pulmón de células no pequeñas [20]. Otros estudios han encontrado que la variante genética en la pre-miARN puede contribuir al proceso de la carcinogénesis en el cáncer de mama [14], [21], cáncer gástrico [22], cáncer de cuello uterino [23], [24], y la cabeza y el cuello cáncer [15]. En este estudio, hemos demostrado que el polimorfismo primera de miRNA499 se asocia con el cáncer oral.
Estudios previos han encontrado que miRNA146a puede contribuir a la progresión tumoral, metástasis, el pronóstico y la supervivencia en el cáncer gástrico y el cáncer oral [25 ], [26]. Otro hallazgo también mostró que miRNA146a polimorfismo puede regular miRNA146a expresión [27]. Varios estudios de laboratorio han descubierto también que miRNA146a podría inhibir la diferenciación celular y la supervivencia en el sistema hematopoyético [28]. Por otra parte, conectado a cáncer, miRNA146a podría suprimir la invasión de células en el cáncer de páncreas [29]. En detalle, alguna evidencia conecta miRNA146a con factores de transcripción tales como NF-kB [30]. Estos resultados proporcionan una nueva visión que miRNA146a podría afectar a la progresión del cáncer mediante la regulación de la diferenciación celular, pero puede no afectar a la apoptosis. Aunque no encontramos ninguna asociación entre miRNA146a y varios estados clínicos en nuestro estudio, en base a estos hallazgos, los estudios futuros podrían considerar el estado de pronóstico conjunta o incluso la tasa de supervivencia.
Los estudios recientes han identificado que miRNA196 puede interactuar con varios factores de transcripción e involucrar en el desarrollo y progresión del cáncer [31], [32]. Algunos hallazgos sugieren que la sobreexpresión de miRNA196 conduce a más pronóstico favorable y la supervivencia en la leucemia [33]. Además, miRNA196 se asocia con la inflamación en tipos específicos de cáncer [34]. Por otra parte, Christensen et al., Informa un polimorfismo en la secuencia madura de miRNA196a2 en un estudio de casos y controles (n = 1.039) de la cabeza y el carcinoma de células escamosas del cuello (CECC) [35]. Cuando los autores estratificaron en el sitio del tumor no observaron una asociación significativa entre el cáncer oral y miRNA196a2, aunque la estimación del efecto era protectora, similar a los resultados presentados en este estudio. Aunque no es muy conocido el motivo de estas discrepancias, los diferentes resultados del informe y el presente estudio pueden estar relacionadas con la diferencia racial /étnico.
Teniendo en cuenta que las causas de los carcinomas son complejos, se analizaron varios riesgos factores, tales como el consumo de tabaco y hábitos de mascar nuez de betel, en este estudio. Esperamos que estos polimorfismos de genes podrían influir en la susceptibilidad de cáncer oral. Basándose en los resultados, se observó que estos polimorfismos aumentaron significativamente la razón de posibilidades en cada grupo, posiblemente debido a que las funciones de estos miRNAs regulan las diferenciaciones y proliferaciones en la progresión del tumor. También se encontró que el polimorfismo genético de miRNA499 se asocia con metástasis distal de CCCA. Un estudio previo para el cáncer colorrectal ha encontrado que la sobreexpresión de miRNA499 puede facilitar la migración y la invasión de las células cancerosas in vitro, así como la metástasis en pulmón e hígado in vivo [36]. Caja Además, este estudio también identificó forkhead O4 (foxo4) y la muerte celular programada 4 (PDCD4) como objetivos directos y funcionales de miRNA499 [36]. Por otra parte, Reis et al., También informa que PDCD4 como supresor de la migración y la invasión y puede ser un biomarcador clínicamente relevante con valor pronóstico en CCCA [37]. Estos hallazgos mencionados anteriormente pueden proporcionar una explicación preliminar con nuestro hallazgo de la asociación entre miRNA499 y metástasis distal del COCE. mecanismos detallados pertinentes pueden justificar estudios adicionales.
Una de las limitaciones de nuestro estudio es que la información sobre el alcohol, la nuez de betel, y el consumo de tabaco es una dicotomía en la "siempre-usuario" frente a "no-usuario." A medida que la en consecuencia, un análisis más detallado basado en la cantidad, la duración y la historia pasada de la nuez de betel, el alcohol y el consumo de tabaco no fueron capaces de llevar a cabo. La recolección de datos se basó en auto-informes, para el que algunos individuos pueden ser reacios a informar de su uso habitual de este tipo de sustancias. Por lo tanto, puede haber confusión efecto residual de la nuez de betel, el alcohol y el consumo de tabaco clasificación errónea. Por otra parte, el papel funcional de los genes miARN en el crecimiento o la metástasis del cáncer oral es la pena para una mayor investigación, que será incluido en nuestro trabajo futuro. Los clones que contienen diferentes genotipos de miRNA499 SNPs serán construidos para dilucidar los posibles funciones de miRNA499 (proliferación, la regulación del ciclo celular, la migración y la invasión) en líneas celulares de cáncer oral, así como los mecanismos subyacentes. Por otra parte, este estudio reveló que la no conformidad de los genes miARN 149 (rs2292832) genotipos de Hardy-Weinberg en el grupo de control. Un estudio previo con 107000 genotipos generados a partir de 443 SNPs ha encontrado que las distribuciones de genotipo para 36 de los 313 ensayos (11,5%) se desvió de HWE (P & lt; 0,05) [38]. A la búsqueda de las posibles razones, los ensayos para SNPs demostraron errores no específicos o genotipado se han identificado. Sin embargo, también encontraron la desviación de HWE para los 10 SNPs restantes fue inexplicable. Aunque la razón de la no conformidad de miARN 149 genotipos de HWE en nuestro grupo de control no se aprovecha sin embargo, los resultados del estudio antes mencionado pueden proporcionar una cierta dirección para nuestro estudio futuro.
En conclusión, hemos descubierto una asociación significativa entre miRNA499 polimorfismos de genes y la susceptibilidad de cáncer oral. Sin embargo, no hay conexiones entre el SNP y el estado clínico. Después de considerar mascar nuez de betel, que es el factor más influyente del cáncer oral, se encontró que los cuatro miRNAs, que llevan el genotipo de la mutación pueden aumentar la susceptibilidad de cáncer oral. Estas mutaciones de genes pueden afectar a la eficiencia de los genes miARN objetivo y la estabilidad y aumentar la incidencia de cáncer oral, pero los mecanismos detallados de los niveles de genes a los niveles de proteína que en última instancia afectan al desarrollo de tumores deben ser clasificadas, tal vez trazar un nuevo rumbo para la terapia de destino.
Materiales y Métodos
sujetos y Recogida de las muestras
Se reclutaron 470 pacientes del sexo masculino al Chung Shan del hospital Médico Universitario de Taichung y hospital cristiano de Changhua y espectáculo en el hospital Memorial Chwan en Changhua, Taiwan como un caso grupo entre 2007 y 2011. Por su parte, los controles estaban incluidos en el examen físico durante los tres hospitales, que son también las instalaciones que se han recogido casos de. Al final de la contratación, con un total de 425 participantes masculinos que no tenía ni la libre informado de antecedentes de cáncer de se incluyeron sitios. Además, los sujetos con enfermedad precancerosa oral, tales como fibrosis submucosa oral de, leucoplasia, eritroplasia, hiperplasia verrucosa, etc. fueron excluidos del grupo de control. La tasa de participación fue de aproximadamente el 91% de los casos y el 76% de los controles. Dado que todos los casos y los controles fueron recogidos de forma consecutiva sin selección alguna, y con base en la información proporcionada en los cuestionarios, se encontró ninguna relación genética o familiar significativa historia.
En cuanto a los casos y controles, información sobre la exposición, incluyendo masticar betel quid ( en constante vs. no-usuario), el consumo de tabaco (fumador frente a no-fumador) y el consumo de alcohol (bebedor actual, definido por el CDC como el consumo de un promedio de más de 2 bebidas al día frente a la corriente no Bebo mucho), fueron todos obtenidos a partir de cuestionarios. Si bien la información médica de casos, incluyendo la estadificación clínica TMN, el tamaño del tumor primario, los ganglios linfáticos y el grado histológico, se obtuvieron de los registros médicos. los pacientes con cáncer oral se realizaron clínicamente en el momento del diagnóstico de acuerdo con el sistema de estadificación TNM del Comité Americano Conjunto sobre el Cáncer (AJCC) [39]. la diferenciación del tumor examinado por el patólogo según la clasificación de la AJCC. Este estudio ha sido revisado y aprobado por la Junta de Revisión Institucional y el consentimiento informado por escrito se obtuvo de cada individuo.
Extracción de ADN
Las muestras de sangre entera, recogidas de controles sanos y pacientes con cáncer orales, eran colocado en tubos que contenían EDTA, después se centrifugaron y se almacenaron a -80 ° C. La sangre venosa de cada sujeto se introduce en tubos vacutainer que contienen EDTA y se almacenó a 4 ° C. ADN genómico fue extraído por ADN QIAamp Mini sangre kits (Qiagen, Valencia, Estados Unidos) según las instrucciones del fabricante. ADN se disolvió en tampón TE [Tris 10 mM (pH 7,8), EDTA 1 mM] y, a continuación cuantifica mediante una medición de la OD260. La preparación final se almacenó a -20 ° C y utilizarse como plantillas para la reacción en cadena de la polimerasa.
Reacción en cadena de polimerasa-polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (PCR-RFLP)
El miRNAs rs2910164 del gen, rs11614913, y los polimorfismos rs3746444 se determinaron por el ensayo de PCR-RFLP [15]. Las secuencias de los cebadores y la enzima de restricción para el análisis de esos miRNAs polimorfismos de genes se describen en la Tabla S5. PCR se realizó en el volumen total 10 l que contiene 100 ng de molde de ADN, 1,0 l de 10 x tampón de PCR (Invitrogen, Carslbad, CA, EE.UU.), 0,25 U de Taq ADN polimerasa (Invitrogen), 0,2 mM dNTPs (Promega, Madison, WI , EE.UU.) y 200 nM de cada cebador (MdBio Inc. Taipei, Taiwán). Las condiciones de los ciclos de PCR fueron 5 min a 94 ° C seguido de 35 ciclos de 1 min a 94 ° C, 1 minat 58 ° C para miRNA146a, 1 min a 63 ° C para miRNA196a2, y 1 min a 67 ° C para miRNA499, y 2 min a 72 ° C, con una etapa final a 72 ° C durante 20 min para permitir una extensión completa de todos los fragmentos de PCR. Los resultados se muestran en la Figura 1. Para cada ensayo, los controles apropiados (nontemplate y el genotipo conocido) se incluyeron en cada ejecución de escribir para supervisar la contaminación de los reactivos. Para validar los resultados de la PCR-RFLP y de control de calidad, el 10% de los ensayos se repitió de diferentes lotes y varios casos de cada genotipo fueron confirmados por el análisis de la secuencia de ADN.
(A) Para miRNA146a polimorfismo rs2910164 del gen , los alelos homocigotos de tipo salvaje (C /C) se obtuvo un 25 y 122-bp productos, los alelos heterocigotos (C /G) rindieron 25-, 122- y productos 147 pb, mientras que los de tipo mutado alelos homocigotos (G /G ) produjo un producto de 147 pb. (B) Para miRNA196 (rs11614913) polimorfismo del gen, los alelos homocigotos de tipo salvaje (T /T) produjo un producto 149 pb, los alelos heterocigotos (C /T) produjo 24-, 125- y productos 149 pb, mientras que el tipo mutado alelos homocigotos (C /C) dio un productos de 24 y 125 pares de bases (C) Para miRNA499 (rs3746444) polimorfismo del gen, el tipo silvestre (T /T) produjo 26- y los productos de 120 pb; los alelos heterocigotos (C /T) produjo 26-, 120- y productos 146 pb, mientras que los alelos homocigotos de tipo mutado (C /C) se obtuvo un producto de 146 pb.
En tiempo real PCR
la discriminación alélica de los polimorfismos del gen rs2292832 miRNA149 se evaluó con el sistema ABI ™ StepOne real-Time PCR (Applied Biosystems) y se analizó usando el software v3.0 SDS (Applied Biosystems), utilizando el ensayo TaqMan. El volumen final para cada reacción fue 5 l, que contiene 2,5 l TaqMan Genotipado Master Mix, 0.125 l TaqMan sondas de mezcla, y 10 ng de ADN genómico. La reacción de PCR en tiempo real incluye un paso inicial de desnaturalización a 95 ° C durante 10 min, seguido de 40 ciclos, cada uno consistente en 95 ° C durante 15 seg y 60 ° C durante 1 min.
Análisis estadístico
la distribución de las características demográficas y genotipo frecuencias entre casos y controles, así como las características clínico-patológicos en diferentes genotipos se analizaron mediante la prueba exacta de Fisher, ya que el tamaño pequeño de la muestra estuvo presente en algunas categorías de variables. El odds ratio (OR) con sus intervalos de confianza del 95% (IC) de la asociación entre el genotipo y frecuencias de cáncer oral se estimaron por múltiples modelos de regresión logística, después de controlar para covariables. método no paramétrico debido a la no distribución normal de algunas variables estimadas. Hemos montado un modelo de regresión logística con efectos principales (miRNAs polimorfismo genético, el consumo de tabaco y de betel estado de mascar libras), así como un término de interacción entre ellos (los genotipos miRNAs * características demográficas), comparando el modelo frente a un modelo con sólo los efectos principales . efecto de interacción se define como la diferencia de su desviación, y se evaluó adicionalmente mediante la prueba de razón de verosimilitud para calcular χ
2 y
valores de p
[40]. Un
p valor Red de menos de 0,05 fue considerado significativo. Los datos se analizaron con el software estadístico R.
Apoyo a la Información sobre Table S1.
Asociación del genotipo y de betel de mascar nuez de estado de miARN.
doi: 10.1371 /journal.pone.0039777.s001 gratis (DOC) sobre Table S2.
Asociación de miARN genotipo y el hábito de fumar.
doi: 10.1371 /journal.pone.0039777.s002 gratis (DOC) sobre Table S3.
Relación del estado clínico y genotipos en pacientes con cáncer oral miRNA499 (≤60 solamente, N = 332).
doi: 10.1371 /journal.pone.0039777.s003 gratis (DOC) sobre Table S4.
Relación del estado clínico y genotipos miRNA499 en pacientes con cáncer oral (& gt; 60 solamente, N = 138).
doi: 10.1371 /journal.pone.0039777.s004 gratis (DOC) sobre Table S5.
secuencias de cebadores y condiciones de PCR para la amplificación de los genes miARN SNPs.
doi: 10.1371 /journal.pone.0039777.s005 gratis (DOC)