primaria
Extracto
virus del papiloma humano de alto riesgo (VPH) tipos están asociados con el cáncer cervical. Está bien establecido que los tipos de HPV individuales varían en oncogenicidad, pero los datos actuales sobre su implicación pronóstica siendo controvertido. Se examinó la asociación entre los tipos de VPH /especies y la supervivencia de 236 mujeres chinas 26 a 87 años (media 54,4) años después de recibir el tratamiento primario para el cáncer de cuello uterino. En general, el 45,8% eran de la FIGO estadio I, el 41,9% en estadio II, y el 12,3% en estadio III. Los cuatro tipos más frecuentes encontrados fueron HPV-16 (60,2%), HPV-18 (21,6%), HPV-52 (11,9%), y el VPH-58 (9,3%). En general, el 19,5% de los pacientes tenían infecciones de tipo múltiple, el 78,4% albergado una o más especies de alfa-9, y el 28,8% albergado una o más alfa-7 especies. Después de una mediana de seguimiento de 8,0 años, 156 (66,1%) pacientes sobrevivieron. La tasa de supervivencia global a los 3 años fue del 75,5%. Los factores asociados de forma independiente con una peor supervivencia global de 3 años de edad fueron & gt; 60 años, el tamaño del tumor & gt; 4 cm, afectación ganglionar y tratamiento con radioterapia +/- quimioterapia. El análisis univariante mostró infección por VPH-16 de tipo único se asoció con una supervivencia ligeramente más pobre específica de la enfermedad (71,6% vs. 87,0%, HR: 1,71; IC 95% = 1,01-2,90), mientras que los no-VPH-16 alfa-9 especies se asoció con una supervivencia específica de la enfermedad mejor (90,0% vs. 76,2%, HR: 0,36; IC del 95%: 0,16 a 0,79 =). Sin embargo, en el análisis multivariado, el estado de infección por VPH con independencia de los diferentes métodos de agrupamiento, incluyendo los tipos individuales, especies, de tipo individual o co-infección, no realizó ninguna importancia pronóstica significativa. En conclusión, no se observó ninguna asociación entre la infección con un tipo de VPH /especies y la supervivencia en particular. Una estratificación basada en el tipo de VPH en el plan de tratamiento y el seguimiento no se podía recomendar
Visto:. Lau YM, TH Cheung, Yeo W, Mo M, Yu MI, Lee KM, et al. (2015) La diferenciación pronóstica de los tipos de virus del papiloma humano y las especies en pacientes con cáncer sometidos cervical tratamiento primario. PLoS ONE 10 (4): e0122557. doi: 10.1371 /journal.pone.0122557
Editor Académico: Rui Medeiros, IPO, Instituto Portugués de Oncología de Oporto, Portugal
Recibido: 9 de diciembre de 2014; Aceptado: 22 Febrero 2015; Publicado: 9 Abril 2015
Derechos de Autor © 2015 Lau et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
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financiación:.. los autores no tienen ningún soporte o financiación reportar
Conflicto de intereses: los autores han leído la política de la revista y tienen la siguiente competir intereses: Paul KS Chan está participando en ensayos clínicos apoyados por GlaxoSmithKline y F. Hoffmann-La Roche, y ha recibido honorarios como miembro de la junta consultiva, y el apoyo para viajes para asistir a conferencias académicas de GlaxoSmithKline. Esto no altera la adhesión de los autores a PLoS ONE políticas en los datos y materiales de uso compartido.
Introducción
A nivel mundial, el cáncer cervical es el cuarto cáncer más común en las mujeres, con 528.000 nuevos casos ocurrieron en 2012 [1]. En Hong Kong, el cáncer de cuello de útero es el cáncer más común en las mujeres novena con una tasa bruta de incidencia de 10,4 por cada 100.000 habitantes [2]. La asociación etiológica entre la infección por el virus del papiloma de alto riesgo humano (VPH) tipos y el cáncer cervical ha sido bien establecida [3]. Hasta la fecha, más de 150 tipos de VPH han sido identificados, que se clasifican en alfa, beta, gamma, mu-, y nu-géneros; en las que se agrupan más en especies y tipos [4]. tipos de VPH asociados con tumores malignos se conocen como "de alto riesgo", que incluye el VPH-16, -18, -31, -33, -35, -39, -45, -51, -52, -56, -58, -59, -68, -73 y -82. tipos "de bajo riesgo", incluyendo el VPH-6, -11, -40, -42, -43, -44, -54, -61, -70, -72 y -81 están asociados con lesiones anogenitales benignos [5, 6 ]. Múltiples tipos de VPH se encuentran comúnmente en muestras de cáncer de cuello uterino. Sin embargo, la implicación oncogénica de co-infección sigue siendo controvertida [7-9]. Las únicas características del tumor reconocidos a asociar con el tipo de VPH es la más alta prevalencia de VPH 18 en el adenocarcinoma de cuello uterino y carcinoma adenoescamosa en comparación con el carcinoma de células escamosas [10, 11].
tipos de VPH de alto riesgo demuestran una distribución sesgada en los cánceres de cuello uterino, como resultado de su diferencia de oncogenicidad y tal vez, a un cierto grado, su distribución ethnogeographical [12]. Los ocho tipos de VPH más comunes que se encuentran en los cánceres de cuello uterino en todo el mundo en orden descendente son el VPH-16, -18, -33, -45, -31, -58, -52, -35 y. Sin embargo, existe una variación geográfica en la prevalencia. Por ejemplo, el VPH-52 y -58 son más frecuentes en los cánceres de cuello uterino asiáticos en comparación con otras regiones [13, 14].
El pronóstico del cáncer de cuello de útero se ve afectada por la puesta en escena, el tamaño del tumor, los ganglios linfáticos y el parametrio enredo. En los tumores en etapa temprana, la invasión linfovascular y la invasión profunda del estroma (& gt; 10 mm o & gt; 70% de invasión) se asocia con un mal pronóstico. Estudios previos sugieren un peor resultado para el adenocarcinoma [15-17]. Aunque el potencial oncogénico de los tipos de VPH ha sido bien establecido, su significado pronóstico sigue siendo controvertido. Varios estudios han encontrado que el VPH-18 confiere un mal pronóstico en las primeras etapas de cáncer de cuello del útero [11, 18-20]. De Cremoux et al. informaron que los tipos de VPH de alto riesgo se asociaron con la supervivencia libre de enfermedad reducida en comparación con los tipos de riesgo intermedio [21]. Sin embargo, el estudio de Tong et al. no observó ninguna diferencia en la supervivencia global entre los de alto riesgo y los tipos de riesgo intermedio [22]. Lai et al. informaron una mejor tasa de supervivencia a 5 años para el VPH-58 y los tipos relacionados (VPH-52 /-33) en comparación con el VPH-16 /-18 y los tipos relacionados (VPH-31 /-68) [23]. Huang et al. informaron que el VPH-31 y los tipos relacionados (HPV-33, -35 y -67) podían predecir una mejor supervivencia [24]. Wang et al. pacientes infectados en comparación con alfa-7 especies solamente, sólo alfa-9 especies, y la co-infección con alfa-7 y 9 especies de alfa-; y llegaron a la conclusión de que estos grupos confieren más pobre, mejor y los resultados de supervivencia intermedia, respectivamente [25]. Sin embargo, las observaciones negativas han sido reportados por otros [22, 26-28].
Análisis sobre el pronóstico de los diferentes tipos de VPH se complica por el hecho de que la coinfección con múltiples tipos es común y se conoce poco acerca de la interacción entre los tipos de co-infectar. La prevalencia mucho más sesgada de ciertos tipos de VPH, por ejemplo, HPV52 y HPV58, también plantea desafío. Este estudio evaluó la importancia pronóstica de los tipos de VPH con un enfoque de co-infección y esos tipos, el VPH-52 y -58, encuentra comúnmente en nuestra localidad.
Método
Estudio de población
los pacientes que habían recibido operación de cáncer de cuello uterino en el Prince of Wales hospital entre 1997 y 2009 fueron reclutados con el consentimiento informado por escrito. Los registros médicos fueron revisados en 2012 a través del Sistema de Gestión Clínica electrónica para determinar los resultados. informes patológicos y radiológicos fueron recuperados para determinar los resultados de las historias clínicas. características patológicas incluyendo la etapa del tumor, el tamaño, el tipo histológico y grado, parametrio, la participación de la vagina y los ganglios linfáticos se registran en el momento del diagnóstico. La fecha de tratamiento primario define el inicio del recuento de supervivencia. La fecha de diagnóstico de la recaída por imágenes, biopsia o examen clínico definido la fecha de recaída. la muerte específica de la enfermedad se definió como muerte como consecuencia de cáncer de cuello uterino y las complicaciones relacionadas o toxicidad del tratamiento. El estudio fue aprobado por el comité local de ética institucional, la Universidad China de Hong Kong Joint-Nuevos territorios del este Cluster Clínica Comité de Ética de Investigación, con el número de homologación de CRE-2008.200.
detección de VPH y escribiendo
tejidos tumorales congelados frescos se recogieron por biopsia cervical o durante el funcionamiento. Los métodos de detección y tipificación del ADN del VPH se han descrito anteriormente [14, 26]. Brevemente, el ADN del VPH se detectó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) usando cebadores de consenso, PGMY09 /11. muestras positivas para el VPH se tipificaron por el Linear Array VPH prueba de genotipado (Roche, Molecular Systems, Inc., CA). Como de acuerdo con las instrucciones del fabricante, todas las muestras que muestran una banda positiva que pueden indicar la presencia de HPV52 se confirmó por PCR usando primers-HPV52 específica M13-HPV52-PE7-F2: 5'-TGT AAA ACG ACG GCC AGT GGA GGA TAC AGA TGG TGT GG-3 '; M13-VPH-52 PE7-R: 5'-CAG GAA ACA GCT ATG ACC ATG AAT GCA GCC GTA GTG-3 '. En vista de la tasa positiva bajo de HPV-45 entre los casos de adenocarcinoma, todas las muestras de adenocarcinoma fueron probados, además, por una PCR de HPV-45-específica en el gen E7 usando los cebadores: 5'-CCR RGM AAC ACT GCA AGA AAT T 3 'y 5'-CGC GCT GGT TGT AGT ACG TGA C-3'.
tipos de VPH se agrupan de acuerdo a la clasificación de las especies aprobadas por el Comité Internacional de Taxonomía de virus [29]. especies de alfa-9 incluye el VPH-16, -31, -33, -35, -52, -58 y -67; y alfa-7 especies incluyen el VPH-18, -39, -45, -59, -68, -70 y -85.
Tratamiento y seguimiento
Los pacientes fueron tratados de acuerdo con la el protocolo departamental, que se actualiza constantemente de acuerdo a las directrices actuales. Los planes de tratamiento se decidieron en las reuniones del comité de tumores ginecológicos que consisten en gynaeoncologists, médicos y oncólogos de radiación, así como patólogos. Se utilizó la Federación Internacional de Ginecología y Obstetricia sistema de estadificación (FIGO). En general, el tratamiento adyuvante con quimiorradioterapia concomitante (CCRT) se dan para resecado en estadio I de la enfermedad-IIA con factores de mal pronóstico, incluyendo compromiso de los ganglios linfáticos pélvicos, enfermedad del parametrio o márgenes de resección positivos. Post-operatorio radioterapia adyuvante (RT) solo se utiliza para los pacientes que eran aptos para el CCRT ni rechazado
CCRT primaria fue el tratamiento para el estadio IB /estadio IIA voluminosos. (& Gt; 4 cm) /fase IIB- IVA enfermedad o cualquier escenario con compromiso de los ganglios linfáticos pélvicos. RT sola primaria era una alternativa a la cirugía para los pacientes con enfermedad en estadio IA o IIA etapa no voluminosa que eran aptos para la cirugía. RT sola primaria era una alternativa de tratamiento para los pacientes con estadio IB /IIA voluminosos (& gt; 4 cm). /Estadio IIB a la enfermedad IVA o para aquellos con compromiso de los ganglios linfáticos pélvicos que eran aptos para el CCRT o disminuyó
Para los pacientes tratado con CCRT, semanal cisplatino 40 mg /m
2 de 6 ciclos se dan al mismo tiempo que la radioterapia externa como radiosensibilizador, comenzando 1 día antes del día 1-radioterapia. Para la radioterapia, la paciente fue sometida a un curso de radioterapia externa combinada con braquiterapia intracavitaria. irradiación de haz externo a toda la pelvis se le dio en el 1,8 Gy por fracción, 5 veces por semana con una dosis total de 45-54 Gy. braquiterapia intracavitaria (LPI) se le dio a la semana durante 3 dosis utilizando la alta tasa de dosis (HDR) de carga diferida técnica, la entrega de 7 Gy por fracción al punto A. impulso adicional parametrio (por lo general 5,4 a 9,0 Gy más de 3-5 fracciones) se dio con dosis calculada de acuerdo con el escenario y la tolerancia del tejido normal. región para-aórtico abdominal se irradiaron si se sospecha afectación de los ganglios linfáticos paraaórticos.
Los pacientes tenían la primera visita de seguimiento a las 6 semanas después del tratamiento, y luego cada 3 meses durante el primer año, cada 4 meses en el segundo año, cada 6 meses en el tercer al quinto año, y anualmente a partir del sexto año. Los exámenes físicos incluyendo per-vaginal y rectal por cada examen se realizaron en cada una de seguimiento. prueba de Papanicolaou y las imágenes fueron dispuestos como se indica clínicamente.
El análisis estadístico
Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el Sistema de Análisis Estadístico (SAS) versión 8.2. método de Kaplan-Meier se utilizó para el análisis de supervivencia. Las curvas de supervivencia se compararon mediante la prueba de log-rank. razón de riesgo (HR) se determinó mediante regresión de Cox en el análisis univariado. Las variables que muestran asociaciones significativas en el análisis univariado fueron probados en el modelo multivariante mediante regresión de Cox con selección por pasos. Todos los valores de p fueron de dos caras. Un valor de p & lt; 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.
Resultados
Un total de 271 pacientes con estadio FIGO recién diagnosticado enfermedades I-IV fueron reclutados, de los cuales 35 fueron excluidos del análisis de supervivencia a causa de la enfermedad en estadio IV 21 casos, enfermedad en estadio I-III, pero se negó el tratamiento en 10 casos, y el informe médico incompleta en 4 casos. Por lo tanto, se incluyeron un total de 236 pacientes en este estudio. La base de datos de información clínica se muestra en la Tabla S1.
Los 236 sujetos de estudio 26-87 años de edad (media 54,4, 95% intervalo de confianza [IC] = 52.7-56.1) años, y con un tiempo medio de seguimiento de 8,0 (IC del 95% = 7.2-8.7) años. Sesenta y un pacientes tuvieron recurrencia, con la recaída local en 6 casos, la recaída pélvica en 7 casos, y la recaída distante en 45 casos. La información sobre el sitio de la recaída no estaba disponible en 3 casos. La supervivencia a 3 años en general, la supervivencia libre de enfermedad y la supervivencia específica de la enfermedad fue de 75,5%, 78,5% y 79,9%, respectivamente. Hubo 80 muertes en el momento del análisis de estudio el 2 de abril de 2012, de los cuales 57 estaban relacionados con el cáncer de cuello uterino y 21 fueron debido a otras causas. La causa de la muerte había desaparecido en 2 casos, que fueron censuradas en la fecha de la muerte en el análisis de Kaplan-Meier. Aunque la edad & gt; 60 años tenían un poco mejor supervivencia a 3 años en general (78,3% vs 77,1%, p = 0,02), la edad avanzada tenían peor supervivencia global en el largo plazo (Figura 1). Otras características de los pacientes del estudio se muestran en la Tabla 1.
tipos de VPH de alto riesgo se encontraron en el 98,3% de los tumores, mientras que 4 (1,7%), los tumores contenían exclusivamente tipos de bajo riesgo incluidos uno de los casos de VPH-26, uno de los casos de VPH-70, y dos casos de VPH-53. Los 4 tipos de VPH más comunes detectadas fueron HPV-16 (60,2%), HPV-18 (21,6%), HPV-52 (11,9%) y HPV-58 (9,3%) (Tabla 2). En total, 185 (78,4%) especímenes albergaba el VPH de las especies de alfa-9, mientras que el 68 (28,8%) albergaban alfa-7 especies (Tabla 3). En general, 190 (80,5%) muestras contenían una infección de tipo individual, mientras que 46 (19,5%) albergaban múltiples tipos de VPH con 30 (12,7%) los especímenes que figura 2 tipos, 10 (4,2%) modelos contenidos 3 tipos, 2 (0,8%) muestras contenían 4 tipos, y 4 (1,7%) modelos contenidos 5 tipos. La coinfección tasa de HPV-16, HPV-18, HPV-52, HPV-58 tumores que contienen fueron 24,6%, 41,0%, 60,7% y 54,5%, respectivamente.
univariante El análisis
Seis características clínico-patológicos, incluyendo la etapa FIGO, tamaño tumoral & gt; 4 cm, parametrio, la participación de la vagina, la participación de los ganglios linfáticos y la modalidad de tratamiento primario, se asociaron significativamente con todos los parámetros de supervivencia, incluyendo 3 años de supervivencia global, la supervivencia específica de la enfermedad de 3 años y la supervivencia libre de enfermedad a 3 años por el análisis univariado ( Tabla 4).
los tumores que albergan la infección por VPH de tipo individual mostraron una supervivencia libre de enfermedad más pobre de 3 años en comparación con aquellos con múltiples tipos (76,1% vs. 88,8%), pero la diferencia fue sólo en el margen de la significación estadística (p = 0,05, HR = 0,44; IC del 95% = 0,19 a 1,02) (Tabla 5). VPH-16 (infección individual) se asoció con una supervivencia menor de 3 años específica de la enfermedad (71,6% vs. 87,0%, p = 0,04, HR = 1,71; IC del 95% = 1,01-2,90). La presencia de no-VPH-16 alfa-9 especies se asoció con una mejor supervivencia a 3 años específica de la enfermedad (90,0% vs. 76,2%, p = 0,01, HR = 0,36; IC del 95%: 0,16 a 0,79 =) y 3 -Año la supervivencia libre de enfermedad (87,1% vs. 75,3%, p = 0,02, HR = 0,45; IC del 95%: 0,22 a 0,91). VPH-18 ya sea solo o co-infectados con otros tipos no les conferían una diferencia significativa en la supervivencia.
El análisis multivariado
características clinicopatológicas que muestran una asociación significativa con cualquier parámetro de supervivencia en univariado El análisis se pusieron a prueba en el modelo multivariante mediante regresión de Cox con selección por pasos. Además, se añadieron los estados de la infección por VPH seleccionados individualmente para el modelo multivariado, incluyendo: (i) HPV-16, -18, -52, -58 estado de infección clasificado con respecto a un solo tipo o co-infección; (Ii) agrupados en alfa-7 y -9 especies
.
Se encontraron cuatro características clinicopatológicas ser factores pronósticos independientes para una peor supervivencia global de 3 años, incluyendo la afectación de los ganglios (i) linfático (HR = 4,17, IC del 95% = 2,51-6,94); (Ii) el tamaño del tumor & gt; 4 cm (HR = 1,83 IC 95% = 1.11 a 3.2); (Iii) la edad & gt; 60 años (HR = 2,53 IC 95% = 1,49-4,29); y (iv) la radioterapia /quimiorradioterapia adyuvante frente a la cirugía +/- (HR = 2,89; IC del 95% = 1,30-6,45). Por otra parte, la afectación ganglionar (HR = 4,19 IC 95% = 2,45-7,16), el tamaño del tumor (HR = 2,03; IC del 95% = 1,12-3,68), y la modalidad de tratamiento (HR = 2,77, IC del 95%: 1,15 a 6,69) fueron factores pronósticos independientes para la supervivencia específica de la enfermedad. Considerando que, con afectación ganglionar (HR = 4,23; IC del 95% = 2,54-7,05) y la modalidad de tratamiento (HR = 2,87; IC = 1,45-5,71 95%) fueron factores pronósticos independientes para la supervivencia libre de enfermedad. Sin embargo, la infección con diferentes tipos de HPV, independientemente de la agrupación de métodos, no fue predictivo de la supervivencia global, la supervivencia específica de la enfermedad o la supervivencia libre de enfermedad en el modelo multivariado.
Discusión
La distribución de tipos de VPH observadas en este estudio son consistentes con los informes anteriores de que la mayor prevalencia de HPV-52 y HPV-58 se encuentran en Asia y partes de china [13, 14, 30, 31]. Es de destacar que el 21,2% de los casos fue de adenocarcinoma, carcinoma de células adenoescamosa HPV18 en el que constituía una gran porción. No hemos podido observar ninguna asociación independiente entre los tipos de VPH más prevalentes (VPH-16, -18, -52 y -58) con la supervivencia después del tratamiento entre los pacientes con cáncer de cuello uterino. Aunque, el análisis univariado sugirió que el VPH-16 podría predecir una peor supervivencia, esta asociación no se pudo confirmar en el modelo multivariado. Del mismo modo, no HPV-16 alfa-9 especies, como grupo, se asoció con una supervivencia específica de la enfermedad más de 3 años en el análisis univariado, pero no en el análisis multivariante. Mientras que, para otros tipos comunes de VPH (HPV-18, -52, y -58), ninguna asociación significativa se observó incluso en el análisis univariado. Nuestros resultados están en línea con las observaciones negativas reportadas por Pilch et al. [26], Zampronha Rde et al. [27], y Ikenberg et al. [28], pero son en contrario a otros. Wang et al. analizado 1010 pacientes con cáncer cervical fueron sometidos a radioterapia primaria, y ha demostrado una mejor supervivencia para alfa-9 especies en comparación con alfa-7 especies, mientras que co-infecciones de alfa-9 y alfa-7 especies se encontró que tenían una supervivencia intermedio [25]. Aunque se observó una mejor supervivencia de alfa-9 especies, la asociación no pudo ser confirmado en el modelo multivariado. Lai et al. estudiados 1067 pacientes con cáncer de cuello uterino etapa temprana que se sometieron a cirugía primaria, y mostraron que el VPH-18 positividad fue un predictor independiente de la recaída [11]. De Burger et al. examinó 171 en estadio I y II pacientes sometidos a cirugía primaria, e informó de que el VPH-18 era un mal factor pronóstico [18]. En el presente estudio, se observó un pronóstico ligeramente mejor para el VPH-18, pero las diferencias no fueron estadísticamente significativas, incluso en el análisis univariado.
Tratamos de analizar la implicación pronóstica de las infecciones de tipo múltiple en su conjunto, así como subgrupos de acuerdo a la presencia de los cuatro tipos más frecuentes de HPV-16, -18, -52 y -58. Al igual que en consonancia con los estudios anteriores, ninguna asociación significativa independiente pudo demostrarse [11, 24, 25].
A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer estudio sobre la asociación entre la infección por VPH y la supervivencia en Hong Kong donde el VPH-52 y VPH-58 son más prevalentes. Se utilizó un método sensible capaz de detectar una amplia gama de tipos de VPH, así como co-infecciones, lo que permite un análisis en profundidad sobre diferentes estados de infección. Además, la duración suficiente de seguimiento proporciona una resistencia sustancial al estudio. Sin embargo, tenemos limitaciones. Por ejemplo, el número de sujetos de estudio fue relativamente pequeño, especialmente para los no-VPH-16 tipos, y la naturaleza retrospectiva en la recopilación de datos podría plantear sesgos. La razón de diversas observaciones entre los estudios no está claro. La mayoría de los estudios sólo fueron capaces de comparar un tipo común, a menudo HPV-16 /-18, con un grupo heterogéneo de diferentes tipos de HPV, en el que la composición varía geográficamente. Otra cuestión es sin explorar si la asociación con una peor supervivencia reportado en algunas localidades podría ser debido a la circulación de las variantes de mayor carcinogenicidad y confiriendo así una mayor probabilidad de recurrencia. Además, factores genéticos del huésped tales como polimorfismos de HLA que varían con grupos éticos, pueden influir en la susceptibilidad al cáncer de cuello de útero, así como los resultados clínicos después de la infección con ciertos tipos de VPH [32-36].
En conclusión, no observaron ningún valor pronóstico del tipo de VPH para los pacientes chinos de Hong Kong que reciben tratamiento primario para el cáncer de cuello uterino. No podría recomendarse el tratamiento del riesgo estratificado o estrategia de seguimiento basado en el tipo de VPH.
Apoyo a la Información sobre Table S1. base de datos de información clínica de los sujetos de estudio
doi:. 10.1371 /journal.pone.0122557.s001 gratis (XLSX)