Extracto
Nuestros estudios previos sugieren que las células Th17 se acumulan en los tejidos tumorales y se correlacionan con la recurrencia de pacientes con cáncer de cuello uterino. Sin embargo, la fuente del aumento de las células Th17 infiltrantes de tumores sigue siendo poco conocida. Hemos investigado la propiedad prevalencia, fenotipo y el tráfico de las células Th17 en pacientes con cáncer de cuello uterino. Nuestros resultados mostraron que las células Th17 altamente agregadas dentro de los tejidos tumorales en un fenotipo activado con notablemente mayor expresión de CCR6. En consecuencia, el nivel de CCL20 en los tejidos tumorales era significativamente más alta que en la no-tumor y los tejidos normales de control, y fuertemente asociada positivamente con las células Th17. Además, ensayo de migración in vitro mostraron CCL20 tenía quimiotaxis eficaz de las células Th17 en circulación. En conclusión, las células Th17 son reclutados en los tejidos tumorales preferentemente a través de la vía CCR6-CCL20, que puede servir como una nueva diana terapéutica para el cáncer de cuello de útero
Visto:. Yu Q, Lou Xm, Él Y (2015) La contratación preferencial Las células Th17 de cáncer de cuello uterino a través de Camino CCR6-CCL20. PLoS ONE 10 (3): e0120855. doi: 10.1371 /journal.pone.0120855
Editor Académico: Javier S. Castresana, Universidad de Navarra, ESPAÑA
Recibido: Octubre 15, 2014; Aceptado: 27 de enero de 2015; Publicado: 13 Marzo 2015
Derechos de Autor © 2015 Yu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
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financiación:.. Estos autores no tienen ningún soporte o financiación reportar
Conflicto de intereses:. los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer cervical es el segundo cáncer más común en las mujeres en todo el mundo [1]. Existe una creciente evidencia de que las células CD4
+ T-helper (Th) células juegan un papel importante en el mantenimiento de la respuesta inmune contra el cáncer [2, 3]. células Th17 son una novela subconjunto de interleucina IL-17 de producción de CD4
+ células T [4] que se han demostrado que desempeñan un papel crucial en la inflamación y la enfermedad autoinmune [5-7], mientras que también se acumula en los tumores tales como carcinoma hepatocelular [8], cáncer gástrico [9], cáncer de pulmón [10], y carcinoma de esófago [11]. Nuestro estudio anterior también encontró un mayor número de células Th17 en los tejidos tumorales de cáncer de cuello uterino y su asociación independiente con la recurrencia después de la operación [12]. Estos estudios sugieren que las células Th17 pueden contribuir a la inmunopatogénesis de muchos tipos de cánceres
.
Antes de células T pueden ejercer sus efectos sobre células de cáncer, que tienen que llegar a sitio de destino. La migración de las células T en el sitio diana es un procedimiento de múltiples etapas, en el que las señales de las quimiocinas /receptores de quimiocinas desempeñan un papel fundamental [13]. A diferencia de CD4
+ poblaciones de células T en humanos y ratones muestran distintos patrones de expresión de receptores de quimioquinas. En microambiente del tumor, las células Th1 expresan CCR5 y CXCR1, las células Th2 expresan CCR4 y CCR8, mientras que las células T reguladoras expresan principalmente CCR4 [14]. Estudios recientes sugieren que las células Th17 expresan CCR2, CCR4, CCR6 y en la sangre periférica de adultos de humano [15, 16]. Sin embargo, los determinantes migratorias para la migración de las células Th17 en los tejidos tumorales de pacientes con cáncer de cuello uterino sigue siendo desconocido. En este estudio, se encontró que el eje de CCR6-CCL20 determina principalmente la migración de las células circulantes Th17 en los tejidos tumorales en pacientes con cáncer de cuello uterino.
Pacientes y métodos
Declaración de Ética
el protocolo de estudio fue aprobado por la Junta de Revisión Institucional de Hangzhou hospital de Obstetricia y Ginecología. Consentimiento informado, se obtuvo de los pacientes de acuerdo con la Declaración de Helsinki.
Los sujetos
Un total de 35 pacientes con cáncer de cuello uterino, que fueron sometidos a resección quirúrgica en el Hospital de los primeros Popular de Hangzhou entre 2012 y 2013, se inscribieron en este estudio. sangre Matched periférica (PB), los tumores, y los correspondientes tejidos no tumorales se obtuvieron de estos pacientes. Ninguno de los pacientes recibió tratamiento contra el cáncer u otras intervenciones médicas. Las características del paciente (como se observa en la Tabla S1).
Aislamiento de PBMC, TIL, y NIL
Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se aislaron por Ficoll-Hypaque (Sigma-Aldrich , St. Louis, MO) de separación en gradiente de densidad. Se aislaron los linfocitos infiltrantes de tumor (TIL) y linfocitos no tumorales infiltrantes (cero) como se describe por Pang y su colega [17]. Brevemente, el tejido se cortó en trozos pequeños y se incubaron en una mezcla de enzimas que contiene 0,05% de colagenasa IV (Invitrogen, Carlsbad, CA) y 0,001% de DNasa I (Sigma-Aldrich) durante 1 h. tejidos disociadas se muelen a través de un tamiz de 70 micras, y las células mononucleares se obtuvieron mediante la separación por gradiente de densidad utilizando Ficoll-Hypaque.
citometría de flujo
PBMC, TIL y NIL se tiñeron con fluorochrome- anticuerpos monoclonales conjugados contra CD3 humano, CD4, CD45RO, HLA-DR, CCR2, CCR4, CCR6, CD11a, CD49d, CD103, PD-1, granzima B, y IL-17 (BD PharMingen, San Diego, CA). Las células fueron estimuladas para secretar citoquinas durante 4 h con 100 ng /ml de forbol miristato acetato (PMA), 1 mg /ml de ionomicina (Sigma-Aldrich) y 2 M monensina (Enzo, Plymouth, PA). Para la tinción intracelular, se permeabilizaron las células y se fijaron utilizando Cytofix /Cytoperm (BD PharMingen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Después de la tinción, tres o cuatro colores citometría de flujo se realizó mediante el flujo LSR II citómetro (Becton Dickinson, San Jose, CA), y los datos fueron analizados utilizando el software FlowJo (Árbol Star, Inc., Ashland, Oregón).
tinción inmunohistoquímica
incluido en parafina, tejido hepático fijado con formalina se cortó en secciones de 4 micras. La recuperación del antígeno se preformados a través de la cocción a presión durante 10 minutos en tampón de citrato (pH 6,0). Los anticuerpos de FoxP3 anti-humano de ratón (dilución, 1: 200; Abcam, Cambridge, Reino Unido) y de conejo anti-humano IL-17 (dilución, 1: 150; R & amp; D System, Minneapolis, MN) se utilizaron para los anticuerpos primarios . Diaminobencidina se utiliza para el sustrato después de la tinción de contraste con hematoxilina de tinción única.
-PCR en tiempo real
ARN fue extraído utilizando el RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Alemania) y se sintetiza cDNA utilizando para QuantiTech kit de transcripción inversa (Qiagen). Quantitative PCR en tiempo real se realizó en SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA) utilizando el ABI Prism 7500 sistema de PCR en tiempo real (Applied Biosystems). Se utilizaron los siguientes cebadores: GAPDH: CTC TCT GCT CCT CCT GTT CGA C (adelante), TGA GCG ATG TGG CTC GGC T (inversa); CCL17: CCA GGG ATG CCA TCG TTT (hacia adelante), GGT GGT GGA CCC AGG TAG TC (inversa); CCL20: GCA GCC ATA CAA CAG GAA AAA (hacia adelante), el GAC AAG TCC GAG AGT GCA CAA (inversa); y CCL22: GGA GGC AAA GAG TAG GGT GTA AT (hacia adelante), TCA GCC AGA AAG GCA TAG ATA GA (al revés). Las muestras se analizaron por triplicado, y su expresión relativa se calculó de la siguiente fórmula usando GAPDH como controles endógenos:. 2
-ΔΔCt
Ensayo de quimiotaxis
Migración ensayos se realizaron en PBMC usando el sistema Transwell, como se describe anteriormente [18]. PBMC (1 × 10
6) en un volumen de 200μl se añadieron a los pocillos superiores (inserto de tamaño de poro, 5μm; Millipore, Billerica, MA). quimiocinas humanos (CCL20, CCL21 y CCL22, 100 ng /ml de cada uno; todos de amplificador de investigación y desarrollo; D System, Minneapolis, MN), o el sobrenadante de las células HeLa, las células SiHa o células C-33A (Cell Research Institute de la Academia China de Ciencias, Shanghai, china) se añadieron a la cámara inferior en un volumen de 900μl. Las células HeLa (-18 VPH líneas de células cervicales infectadas), células SiHa (líneas de células cervicales infectadas por VPH-16) y las células C-33A (células de cáncer cervical negativos VPH) se cultivaron en medio RPMI-1640 suplementado con 10% de FCS en una humidificado 5% de CO2 a 37 ° C. El sobrenadante de las células de cáncer que se usan para el ensayo de quimiotaxis se recogió después de un cultivo de 3 a 5 días de edad. Se añadieron justo antes de los experimentos de quimiotaxis a una concentración de 500 ng saturado /ml; anticuerpos frente a CCL20, CCL21 y CCL22 (D Sistema R & amp). Después de 4 h de la quimiotaxis en 37 ° C, se recogieron las células en los pocillos inferiores, y se estimularon con 100 ng /ml de PMA y 2 M monensina durante 4 h. Después las células se permeabilizaron y se fijaron utilizando Cytofix /Cytoperm (BD PharMingen) y se tiñeron con conjugado a un fluorocromo contra IL-17. El número absoluto de células se cuentan y se calcula utilizando el Sistema de Conteo perfecta (CYTOGNOS, Salamanca, España). Para calcular el índice de migración, el número de células que migraron para quimiocinas se dividen por el número de células que migraron para el medio de control [19].
Análisis estadístico
Todos los datos estadísticos se analizaron con el programa SPSS , versión 16.0. Las diferencias entre grupos se analizaron mediante un solo sentido ANOVA, de Mann-Whitney o la prueba χ2 en su caso. coeficiente de Pearson se calculó para evaluar la asociación entre los niveles de quimioquinas y células Th17 en el ambiente del tumor. Los datos se expresan como medias ± S.E.M. La significación estadística se fijó en
P Hotel & lt; 0.05.
Resultados
Distribución de las células Th17 en pacientes con cáncer de cuello uterino
Para estudiar la distribución de las células Th17 en el sitio del tumor, NIL y TIL fueron aisladas de no tumoral y emparejado tejidos tumorales en 35 pacientes con cáncer de cuello uterino y caracterizados por medio de citometría de flujo (Fig. 1A). Como era de esperar, la frecuencia de las células Th17 en el tejido tumoral, lo que representa 11,49 ± 1,19% de CD4
+ células T, fue significativamente más alta que las de tejido no tumoral (3,68 ± 0,48%,
P & lt
; 0,001), y la sangre periférica de pacientes con cáncer de cuello uterino (4,96 ± 0,72%,
P Hotel & lt; 0,01) y de donantes sanos (1,67 ± 0,19%,
P Hotel & lt; 0,001; Fig . 1B). Además, la proporción de células Th17 circulante fue también mayor en pacientes con cáncer de cuello de útero en comparación con los donantes sanos (
P
& lt; 0,001). La tinción inmunohistoquímica también se observó células Th17 sustanciales en el tejido tumoral de cáncer de cuello uterino, incluso mayores que las células T reguladoras (Tregs) en el mismo entorno (Fig. 1C). Estos resultados sugieren colectivamente que las células Th17 son altamente enriquecido en pacientes con cáncer de cuello uterino, especialmente en el tejido tumoral.
células Th17 fueron cerrada de CD3 + células T
mediante citometría de flujo. (A) Representante de IL-17 en los perfiles de expresión de CD4
+ células T de los cuatro grupos estudiados. Los porcentajes representan la frecuencia de las células Th17 entre CD4
+ células T. (B) Análisis estadístico muestran que la frecuencia de las células Th17 fue mayor en los pacientes con cáncer de cuello uterino, especialmente entre los linfocitos infiltrantes de tumor (n = 35). **
P Hotel & lt; 0,01, ***
P Hotel & lt; 0.001. (C) Imágenes representativas de las células Th17 (IL-17
+) y células T reguladoras (FoxP3
+) la infiltración en el tejido de cáncer cervical del mismo paciente. células inmuno (marrón, negro indicados por la flecha) y células tumorales (Azules). Ampliación, × 100.
Además, la prevalencia de las células Th17 fue mayor en los tumores en estadio avanzado que en los tumores en fase inicial (8,12 ± 1,31% en I FIGO vs 14,18 ± 2,78% en FIGO II vs. 15,50 ± 1,73 en FIGO III; Fig. 2). Sin embargo, no hubo diferencias significativas en la prevalencia de las células Th17 para la edad, el estado del VPH, el tamaño del tumor, profundidad de infiltración, el estado de los ganglios linfáticos, la linfa-invasión vascular espacio y la diferenciación del tumor (Fig. 2).
la comparación de la frecuencia de las células infiltrantes de tumor Th17 en pacientes con cáncer de cuello uterino en diferentes edades, estado del VPH, tamaño tumoral, el estadio FIGO, la profundidad de infiltración, los ganglios linfáticos, invasión del espacio linfático vascular (LVSI) y la diferenciación del tumor. El análisis estadístico mostró la frecuencia de células Th17 en los tejidos tumorales se incrementó de FIGO I de la FIGO III, pero no asociado con los otros parámetros clínicos. *
P Hotel & lt; 0.05.
Las características fenotípicas de las células infiltrantes de tumor Th17
A continuación, analizamos la expresión de marcadores relacionados con la función de activación /efector (CD45RO y HLA-DR) y la supresión inmune (granzima B y PD -1). células Th17 tumorales infiltrantes expresaron alta CD45RO, HLA-DR, pero bajo la granzima B y PD-1 (Fig. 3A). Granzima-B dependiente de citolisis [20] y B7-H1 /PD-1 vía [21] contribuir a la supresión inmune en el microambiente tumoral. Estos resultados indicaron que las células Th17 infiltrantes de tumor exhibieron un fenotipo de memoria activada (CD45RO
+ HLA-DR
+), pero no puede mediar la función efectora a través de la granzima B o B7-H1 /vía de PD-1 (granzima B
- /PD-1
-.)
(A) los perfiles de expresión representativos de CD45RO, HLA-DR, granzima B y PD-1 en las células Th17 tumor infiltrante. Los porcentajes representan las frecuencias de diversos marcadores en células Th17. (B) los perfiles de expresión representativos de CCR4, CCR6 y CD49d sobre las células Th17 de sangre periférica (línea punteada larga), no tumorales (línea de puntos) y los tejidos tumorales (línea continua). Los porcentajes representan las frecuencias de varios marcadores de células Th17 tumor infiltrante. (C) El análisis estadístico de la expresión en superficie de CCR4, CCR6, CD49d en células Th17 de los tejidos de la sangre periférica, no tumorales y tumorales (n = 25). *
P Hotel & lt; 0,05, **
P Hotel & lt; 0,01, ***
P Hotel & lt; 0.001.
migración de linfocitos se produce a través de un proceso de múltiples etapas, en donde la señalización del receptor de quimiocina /quimiocina es un evento esencial, seguido de la adhesión mediada por integrina a paredes de los vasos [13]. Por lo tanto, se analizaron además las expresiones superficiales de los receptores de quimiocinas (CCR2, CCR4 y CCR6) e integrinas (CD49d, CD11a y CD103) sobre las células Th17. células Th17 tumorales infiltrantes expresan altos niveles de CCR4 (cPBMC: 38,83 ± 3,90%, NIL: 42,76 ± 2,84%, TIL: 57,61 ± 2,99%;
P Hotel & lt; 0,001 y & lt; 0,01 para TIL vs. cPBMC y frente a NIL, respectivamente), CCR6 (cPBMC: 22.17 ± 2.04%, NIL: 42.89 ± 3.23%, TIL: 72,97 ± 2,45%;
P Hotel & lt; 0,001 para TIL vs. cPBMC y frente NIL), y CD49d (cPBMC: 63,13 ± 3,74%, NIL: 56.59 ± 3.10%, TIL: 74,24 ± 2,69%;
P Hotel & lt; 0,05 y & lt; 0,001 para TIL vs. cPBMC y NIL vs. , respectivamente) (Fig. 3B y 3C), pero no CCR2, CD103, y CD11a (datos no mostrados). Las moléculas mensajeras expresadas pueden estar asociados con la migración de células Th17 y retención dentro del tumor [22].
Asociaciones de los niveles de quimioquinas con células Th17 intratumorales
Dado que las células Th17 CCR6 y altamente expresado CCR4, nos la hipótesis de que las células Th17 podrían migrar en respuesta a CCL20, CCL22 y CCL17. Se determinó la expresión de CCL20, CCL22 y CCL17 por PCR en tiempo real. Encontramos significativamente mayor expresión de ARNm de CCL20 en los tejidos tumorales en comparación con tejidos no tumorales y tejidos de control normales (
P
. & Lt; 0,01, Fig 4A). Además, se observó una correlación fuertemente positiva entre la prevalencia de las células Th17 y la expresión intratumoral de CCL20 (R = 0,795,
P
& lt; 0,001; Fig. 4C). Estos datos sugirieron que CCL20 es una señal importante para mediar en el tráfico de células Th17 a los tumores. Por el contrario, no hemos encontrado una mayor expresión de CCL17 y CCL20, los dos ligandos específicos de CCR4, en el tejido tumoral (Fig. 4A). Además, el análisis de regresión sólo se encuentra débil correlación de las células Th17 con CCL22 (R = 0,385,
P
& lt; 0.05; Fig. 4D), pero no con CCL17 (
P
& gt; 0,05, Fig. 4B), en el mismo microambiente tumoral. Los resultados indican que colectivamente CCR4-CCL17 /CCL22 eje puede no ser el principal responsable de la migración de células Th17
.
(A) PCR de CCL17 de quimioquinas, CCL20 y CCL22 en el tumor (T) y no en tiempo real tumor (nT) regiones de pacientes con cáncer de cuello uterino y en el control normal (NC). El valor se normalizó a GAPDH, multiplicado por 10
5, y log transformado. *
P Hotel & lt; 0,05, **
P Hotel & lt; 0.01. (B, C, D) Las correlaciones de quimiocina CCL17 (B), CCL20 (C) y CCL22 (D) con la frecuencia de las células Th17 tumor infiltrante. El análisis estadístico mostró una fuerte correlación de CCL20 con células Th17 en el tumor.
No se observaron efectos de quimioquinas de las células Th17 contratación
respuestas quimiotácticas significativo de células Th17 que circula a CCL20 humana recombinante en dosis -dependiente (Fig. 5A). Además, un anticuerpo neutralizante monoclonal a CCL20 no marcadamente bloqueado migración CCL20 inducida de células Th17 (
P
. & Lt; 0,001, Fig 5A). Aunque CCL17 y CCL22 también pueden inducir la migración de las células Th17, su efecto fue significativamente más débil que CCL20 hizo (índice de migración en la concentración de 100 ng /ml: CCL20, 45,5 ± 10,6 vs. CCL17, 19,1 ± 6,5 vs. y CCL22, 26,1 ± 7,9, ambos
P Hotel & lt; 0,001; Fig. 5A). A fin de determinar si las quimiocinas secretadas a tumores tuvieron un efecto sobre el reclutamiento de células Th17, quimiotaxis se realizó ensayo utilizando sobrenadantes de cultivo de líneas de células del cuello uterino. Las células HeLa son células cervicales infectadas con el VPH 18, son células SiHa células cervicales infectadas por VPH-16 y C-33A células son VPH negativo células de cáncer cervical. Todas las tres células cervicales podrían altamente secretan CCL20 con más alto nivel de CCL20 por las células HeLa (Fig. 5B y 5C), y una importante migración inducida de células Th17 (Fig. 5D). Esto puede ser bloqueado de manera eficiente por el anticuerpo contra CCL20 solo o en combinación con CCL17 y CCL22 (
P
& lt; 0,001), pero significativamente menos efectiva por el anticuerpo contra CCL17 o CCL22 (Fig 5B.). Estos resultados indican que colectivamente CCL20 puede inducir la migración efectiva de las células Th17 en los tejidos tumorales. Se realizaron
Migración ensayos en un sistema Transwell. células (A) Th17 migran en respuesta a CCL17 recombinante humana, CCL20 y CCL22 en forma dependiente de la dosis (n = 5). Los anticuerpos específicos a las quimioquinas inhiben significativamente la migración de células Th17 ***
P
. & lt; 0.001. (B y C) Expresión de CCL20 por HeLa, Siha, y las células C-33A detectado utilizando en tiempo real PRC (B) y ELISA (C). Todas las tres células cervicales podrían altamente secretan CCL20 con más alto nivel de CCL20 por las células HeLa. las células (D) Th17 también migran hacia sobrenadantes de cultivo de HeLa, Siha, y las células C-33A, que pueden ser bloqueados de manera eficiente por el anticuerpo contra CCL20 solo o en combinación con CCL17 y CCL22, pero significativamente menos efectiva por el anticuerpo contra CCL17 o CCL22 ( n = 3). *
P Hotel & lt; 0,05, **
P Hotel & lt; 0,01, ***
P Hotel & lt; 0.001.
Discusión
Como se informó en otros tumores sólidos [8, 10, 11, 19, 23-25], el presente estudio mostró que las células Th17 sustanciales, que exhibe una activan fenotipo de memoria, se concentran en el tejido de cáncer cervical. Sin embargo, el papel de las células Th17 en la inmunidad del cáncer sigue siendo desigual. La acumulación de pruebas indica que aunque los pacientes con cáncer presentan un estado de inmunosupresión generalizada, la reacción inflamatoria en el sitio del tumor puede promover el crecimiento y progresión tumoral. La perpetuación de la inflamación crónica se logra en gran medida a través de bucles de retroalimentación positiva, que incluyen células inflamatorias que producen citocinas que inducen la síntesis de quimioquinas en las células malignas y estromales que conduce al reclutamiento prolongada de células inflamatorias en el microentorno del tumor [26]. células Th17 son uno de los subconjuntos de células inmunes más críticos en este sentido y por lo tanto tener un efecto promotor de tumores. En los pacientes con carcinoma hepatocelular, cáncer colorrectal o carcinoma esofágico, se encontraron altos niveles de células Th17 intratumorales ser una asociación positiva con un mal pronóstico [8, 24, 27]. Por otro lado, las células Th17 a veces pueden proporcionar ayuda importante para aumentar la inmunidad citotóxica y así ejercer efectos de tumor supresor [28, 29]. Nuestro estudio anterior ha demostrado que las células Th17 intratumorales elevados disminuyeron predicen la recidiva local en pacientes con cáncer de cuello uterino [12], en consonancia con los informes anteriores en el cáncer de ovario [25] y el melanoma [30]
.
Las fuentes de Th17 las células en los tejidos de cáncer cervical pueden incluir el tráfico de células Th17 en circulación a los tumores y las células Th17 inducidos localmente. La migración de las células T está estrechamente regulada por la interacción del receptor de quimiocina /quimiocina [31]. Estudios anteriores mostraron que el reclutamiento de células Th17 se rige por múltiples vías, incluyendo CCR2-CCL2, CCR4-CCL17 /CCL22 y CCL20 CCR6-[15, 16, 19, 32]. En este contexto, hemos encontrado que circula el tráfico de células Th17 en el tejido tumoral del cáncer de cuello de útero era preferentemente a través de la vía CCR6-CCL20. Esta conclusión se basa en dos descubrimientos. En primer lugar, CCL20 había elevado notablemente la expresión en el tejido tumoral y fuertemente asociada con la prevalencia de las células Th17 en el mismo microambiente. En segundo lugar, la Th17 circulación de pacientes con cáncer de cuello uterino altamente expresado CCR6, y migrar selectivamente en respuesta a CCL20 in vitro. En el pasado, CCR6 fue implicado principalmente a ser responsable de la contratación inflamatoria de las células Th17. Fox ejemplo, CCR6 es esencial para el reclutamiento óptimo de las células Th17 a los sitios de la inflamación mediada por Th17 en la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) [7]. Sin embargo, la acumulación de los hallazgos recientes muestran que la CCR6 en las células Th17 también juega un papel crítico en el desarrollo de tumores [8, 24]. Es bien aceptado que el efecto de las células inmunes en el desarrollo del tumor se determina no sólo por su pro- o anti-potencial sino también la localización apropiada [33]. Todos estos resultados, junto con nuestros datos, muestran Th17 CCR6 expresado por células es funcional y juegan un papel importante en el desarrollo de cáncer cervical. Además, aunque CCR4 también puede estar relacionado con Th17 célula-migración, el efecto es mucho más débil que CCR6 de acuerdo con menos expresión de CCR4, los niveles intratumorales inferiores de CCL17 y CCL22, y más débiles respuestas chemotacitc a CCL17 y CCL22.
En conclusión, hemos demostrado aquí que la vía CCR6-CCL20 es quimioatrayente preferencial por los que circula el tráfico de células Th17 en el tejido tumoral de cáncer de cuello uterino. Los resultados amplían nuestra comprensión de los mecanismos de la carcinogénesis cervical y proporcionan una estrategia potencial para el tratamiento de cáncer de cuello uterino.
Apoyo a la Información sobre Table S1. Características de los pacientes
doi: 10.1371. /Journal.pone.0120855.s001 gratis (DOC)