Extracto

Para identificar candidatos apropiados para un tratamiento agresivo como la prostatectomía radical o la radioterapia del cáncer de próstata (CaP) localizado, nuevos biomarcadores predictivos de la agresividad del CaP son esenciales. Core2 β-1,6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) es una enzima clave que forma la base 2-ramificado
O
-glycans. Su expresión se asocia con la progresión de varios tipos de cáncer. Establecimos un anticuerpo monoclonal IgG de ratón (mAb) contra GCNT1 y examinamos la relación de expresión GCNT1 al estado clínico-patológico del CP. especímenes CaP incluidos en parafina se analizaron mediante técnicas de inmunohistoquímica para la expresión GCNT1 usando un ratón recién establecida mAb anti-GCNT1 por nosotros mismos. GCNT1 positivo del tumor mostró el volumen del tumor significativamente mayor puntuación de Gleason y más grande. El número de casos GCNT1 positivos fue significativamente menor en los casos de enfermedad limitada al órgano que en los casos de extensión extracapsular. tumores GCNT1-negativas se asociaron con una supervivencia significativamente mayor exento de antígeno prostático específico (PSA) en comparación con los tumores GCNT1-positivo. El análisis multivariado reveló que la detección de la expresión GCNT1 fue un factor de riesgo independiente para la recurrencia de PSA. Hemos establecido nuevos métodos para la detección GCNT1 a partir de muestras de CaP. La inmunotransferencia se utilizó para examinar la orina post-digital de exploración rectal (DRE) de pacientes con CaP. Más del 90% de los pacientes con CaP GCNT1-positivos con altas concentraciones de PSA mostró extensión extracapsular. En conclusión, la expresión GCNT1 estrechamente asocia con el potencial agresivo del CaP. La investigación adicional tiene como objetivo desarrollar la detección GCNT1 en la orina después de la DRE como marcador de la agresividad del CaP

Visto:. Kojima S, T Yoneyama, Hatakeyama S, J Mikami, Sato T, Mori K, et al. (2015) La detección de Core2 β-1,6-
N
-Acetylglucosaminyltransferase en el examen rectal digital después de la orina es un indicador fiable de la extensión extracapsular del cáncer de próstata. PLoS ONE 10 (9): e0138520. doi: 10.1371 /journal.pone.0138520

Editor: Ming Tat Ling, Universidad de Tecnología de Queensland, AUSTRALIA

Recibido: Abril 27, 2015; Aceptado: 1 de septiembre de 2015; Publicado: 21 Septiembre, el año 2015

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Disponibilidad de datos:. Todos los datos relevantes se encuentran dentro del apoyo de sus archivos de información en papel y

Financiación: Sociedad Japonesa para la Promoción de la Ciencia (https://www.jsps.go.jp/), subvención-en-Ayudas a jóvenes científicos (B) y 24.791.631 subvención-en-Ayudas a la Investigación Científica (C) 15K10569 (YT); Sociedad Japonesa para la Promoción de la Ciencia (https://www.jsps.go.jp/), subvención-en-Ayudas a la Investigación Científica (B) 22390301, subvención-en-Ayudas a la Investigación Científica (A) y la Subvención en 15H02563 en-Ayudas para impugnar la investigación exploratoria 24659708 (CO); Subvenciones Nacional Institutos de Salud UO1 CA168924 (MF); La Fundación de Investigación de Urología Suzuki, beca de investigación 2014 (YT). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia

Abreviaturas : DRE, el tacto rectal; GCNT1, Core2 β-1,6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-1; HRP, peroxidasa de rábano picante; mAb, anticuerpo monoclonal; CaP, el cáncer de próstata; PSA, antígeno específico de la próstata; ULR, unidades de luz relativa

Introducción

En los Estados Unidos y Europa, el cáncer de próstata (CaP) es la neoplasia maligna más común en los hombres y la segunda causa principal de muerte relacionada con el cáncer [1 , 2]. La incidencia de CaP se informa bajo en los países asiáticos [3]. Sin embargo, su incidencia está aumentando rápidamente en la región de Asia y el Pacífico [4]. Algunos de los problemas más críticos relacionados con CaP en la práctica clínica son sobrediagnóstico y sobretratamiento [5]. La falta de especificidad de las pruebas de antígeno (PSA) específico de la próstata ha dado lugar a un debate sobre la utilidad de la detección basada en PSA CaP [6, 7]. Por otra parte, el tratamiento innecesario para indolente CaP con un bajo potencial maligno es un problema importante, ya que el tratamiento agresivo CaP a veces se asocia con eventos adversos. Una modalidad alternativa prometedora para evitar un tratamiento excesivo es la vigilancia activa [8]. Sin embargo, la identificación de los pacientes adecuados que son buenos candidatos para el tratamiento intensivo está relacionado con dificultades. Hasta la fecha, no existen herramientas perfectas para la detección precisa de un buen candidato para la vigilancia activa [9]. Por lo tanto, la identificación y validación de biomarcadores de CaP agresividad son importantes en la prevención de CaP sobretratamiento.

niveles preoperatorios séricos de PSA y biopsia puntuaciones de Gleason son predictores convencionales y de gran alcance de los resultados biológicos después de la prostatectomía radical para el CP [10, 11] . Para mejorar la estratificación del riesgo de CaP recurrencia después del tratamiento primario en pacientes con CaP localizado, muchos investigadores han buscado biomarcadores que reflejan el potencial agresivo del CP [12]. Sin embargo, la mayoría de los biomarcadores denunciados no han sido validados para proporcionar información que es más útil que la proporcionada por los parámetros clínico-patológicos convencionales. Con un nuevo marcador biológico que representa el potencial maligno de CaP, una predicción más precisa de recurrencia de PSA y la selección del tratamiento apropiado puede ser posible.

estructuras de carbohidratos de la superficie celular se alteran durante la carcinogénesis y jugar un papel importante en la metástasis del cáncer [13, 14 ]. La presencia de sialil Lewis X, que es uno de la estructura de la terminal funcional, en la superficie celular de cáncer colorrectal se correlaciona positivamente con un mal pronóstico [15]. De manera similar, la alta puntuación de Gleason especímenes de cáncer de próstata expresadas sialil Lewis X [16]. glicano de ramificación se han incrementado un estructura de la terminal funcional, y una afinidad de unión para las lectinas específicos [17]. En el estudio anterior, manosil (alfa-1,6 -) - glicoproteína β -1,6-
N-acetil
glucosaminyltransferase (MGAT5) y Core 2 β -1, 6 a
N
-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) formado GlcNAc β1,6 glicano ramificación aumento de la agresividad del CaP [18, 19].

GCNT1 [20, 21] es una enzima clave que sintetiza la base 2-ramificado
O
-glycans al catalizar la transferencia de
N
acetilglucosamina de uridina diphosphate-
N
acetilglucosamina con un β1, 6-a- vinculación con
N CD - acetilgalactosamina de un núcleo 1
O
-glycan (figura 1A). Un estudio previo analizado
GCNT1
la expresión de ARNm en muestras de tumores de colon frescas y mostró que la expresión de un eje de 2 ramificado
O
-glycans está estrechamente relacionada con el potencial maligno de cáncer colorrectal [22]. Esto también es cierto para el adenocarcinoma pulmonar [23]. En inmunohistoquímica utilizando un anticuerpo policlonal [21], hemos demostrado que la expresión GCNT1 está estrechamente relacionado con el potencial agresivo de CaP [18], cáncer testicular [24], y el cáncer de vejiga [25]. En estudio reciente, una matriz de expresión de genes mostró GCNT1 se sobreexpresa en el tejido de cáncer de próstata [26]. Sin embargo, el establecimiento de un anticuerpo monoclonal anti-GCNT1 es esencial para una mayor investigación, incluyendo estudios de validación para dilucidar la utilidad clínica de GCNT1 como biomarcador
.
(A) rutas biosintéticas para
O
-glycans. (B) muestras de CaP se incubaron con un anticuerpo anti-β-1,6-core2
N
-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) anticuerpo monoclonal (mAb), seguido por una peroxidasa de rábano picante (HRP) conjugado con anticuerpo secundario . Contratinción se realizó con hematoxilina. las células cancerosas GCNT1 positivos son de color marrón. (C) los períodos de supervivencia libre de antígeno específico de la próstata se compararon entre los especímenes GCNT1-positivas y negativas-GCNT1. La supervivencia se analizó mediante curvas de Kaplan-Meier.

A continuación, planteamos un anticuerpo monoclonal (mAb) contra GCNT1 mediante la inmunización de un ratón con péptido específico GCNT1 (Archivo S1) para evaluar el potencial de esta última como un indicador de CaP agresividad. En este estudio, hemos demostrado que los anticuerpos anti-GCNT1 mAb mostró una alta especificidad contra GCNT1 humana y que la expresión GCNT1 en muestras de PCA de la prostatectomía radical se correlaciona con CaP agresividad. Además, la detección de GCNT1 en el tacto rectal (DRE) de orina post-digital mediante el anticuerpo anti-GCNT1 mAb predijo extensión extracapsular del CaP. Por lo tanto, la detección de GCNT1 en la orina después de la DRE puede servir como un método mínimamente invasivo para predecir la agresividad del CaP.

Materiales y Métodos

Materiales

Segunda Reactivo ISOGEN fue adquirido de Nippon gene (Japón). Un anticuerpo anti-IgG de ratón de conejo purificado (cadena γ específica) fue adquirido de Zymed. Una peroxidasa de rábano picante (HRP) conjugado con IgG de cabra anti-conejo (H + L) de anticuerpo y un anticuerpo anti-IgG de ratón de cabra conjugado con HRP se adquirieron de Cell Signaling Technology. Un anticuerpo anti-IgG de ratón de cabra conjugado con HRP se adquirió de Millipore. Purificada de proteína de mieloma de ratón MOPC 21 de (IgG, κ), 2-mercaptoetanol, y albúmina de suero bovino (BSA) se adquirieron de Sigma-Aldrich. Tween-20 fue adquirido de Wako Pure Chemicals (Japón), como lo fueron DMEM y medio F12 de Ham. La penicilina G /estreptomicina solución era de Hyclone. estándares de precisión Plus Protein color dual eran de Bio-Rad, y leche descremada era de Yukijirushi (Japón).

Las células

ovario de hámster chino (CHO) se mantuvieron en la modificación alfa del águila medio esencial mínimo (α-MEM) suplementado con 100 U /ml de penicilina, 100 mg /ml de estreptomicina y suero bovino fetal al 10% (FBS).

El análisis inmunohistoquímico de CaP especímenes

Entre 2005 y 2011, 250 pacientes con CaP fueron tratados con prostatectomía radical en el Departamento de Urología de la Universidad de Hirosaki Facultad de Medicina, Hirosaki, Japón. Las muestras tumorales fueron fijados en formalina e incluidos en parafina. especímenes Deparaffinized se incubaron con 5 mg /ml de ratón anti-humano GCNT1 mAb (clon HU127), seguido de incubación con anticuerpo de cabra conjugado con HRP anti-IgG de ratón de anticuerpo (H + L; Millipore).

análisis de inmunotransferencia de post-DRE muestras de orina

post-DRE orina se introdujo en tubos cónicos de 50 ml, se congelaron inmediatamente y se almacenó a -80 ° C hasta su análisis. Las muestras de orina post-DRE se obtuvieron de 35 pacientes sometidos a prostatectomía radical 2010-2013 en el Departamento de Urología de la Universidad de Hirosaki Facultad de Medicina, Hirosaki, Japón. Las muestras congeladas se descongelaron durante la noche a 4 ° C y se centrifugaron brevemente (5000 x
g
, 5 min) para separar el sobrenadante y los sólidos. Cincuenta microlitros del sobrenadante fueron vistos a una membrana de nitrocelulosa. La membrana fija con proteínas en la orina después de la DRE se incubó con un anticuerpo anti-GCNT1 mAb (HU127), seguido por un anticuerpo secundario conjugado con HRP. Señales que representan GCNT1 se detectaron enzimáticamente usando el kit ECL NOVEX® quimioluminiscente reactivo de sustrato (Life Technologies) y se visualizaron en un sistema de + ChemiDocXRS (Bio-Rad). valores medios de señal se midieron mediante software Lab Image (Bio-Rad). Cantidad de expresión GCNT1 se calculó basándose en los valores medios de la señal de GCNT1 humana recombinante (R & amp; D systems, 7248-GT). señales de auto-chemiliminescent se restaron de las señales totales. La concentración total de proteína de las muestras de orina post-DRE se midieron mediante un kit de ensayo de proteínas BCA (Pierce). El consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes. Todos los pacientes dieron su consentimiento informado por escrito para participar en este estudio. El comité de ética de la Universidad de Hirosaki aprobó el protocolo de este estudio (el estudio sobre el cambio de la estructura de hidratos de carbono en la enfermedad urológica; Número de aprobación: 2014-195). El estudio se realizó de acuerdo con las normas éticas de la Declaración de Helsinki.

estadificación y la gradación de los tumores

Todos los pacientes fueron evaluados antes de la operación mediante tacto rectal, la prueba de PSA sérico, la gammagrafía ósea, la pelvis computarizada La tomografía y la ecografía transrectal. Con una aguja de 18 G, 6-12 muestras de biopsia de aguja de próstata se obtuvieron bajo control ecográfico. La estadificación se realizó a través del American Joint Committee 2002 en Cancer Staging Manual [27], mientras que el sistema de clasificación de Gleason se utiliza para la clasificación del tumor [28].

medición de PSA y de pacientes
de seguimiento
los niveles de PSA en suero se determinaron utilizando IMx (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL). Se consideraron los niveles de PSA postoperatorio que aumentarse (recurrencia PSA) si fueran ≥ 0,2 ng /ml durante dos visitas consecutivas en un intervalo de 1 mes. El tiempo cero fue definido como el día de la cirugía. Los pacientes con niveles constantemente detectables de PSA (& lt; 0.001 ng /ml) después de la cirugía se registraron como las recurrencias en el tiempo cero. los intervalos de seguimiento se calcularon a partir de la fecha de la cirugía para el último registró el seguimiento (mediana, 48,4 meses; rango, 13.2-82.9 meses).

El análisis estadístico

El chi-cuadrado se utilizó la prueba para analizar la asociación del estado GCNT1 con parámetros clínicos e histopatológicos. La supervivencia libre de PSA se evaluó mediante curvas de Kaplan-Meier y se evaluaron las diferencias entre los grupos utilizando la prueba de log-rank. Se utilizó el paquete estadístico SPSS 21.0 (SPSS, Chicago, IL) para todos los análisis estadísticos. Los valores de corte de PSA y óptima GCNT1 de expresión se calcularon utilizando la fórmula siguiente: cut-off = (1 - sensibilidad)
2 + (1 - especificidad)
2 [29, 30]

resultados

GCNT1 expresión en el CaP se correlaciona positivamente con la progresión del cáncer y la recurrencia de PSA

para confirmar la especificidad del anticuerpo para GCNT1, un anticuerpo GCNT1 ratón anti-humano se purificó a partir del sobrenadante de hibridoma. Dependiente de la dosis la unión del ratón anti-humano GCNT1 mAb (clon HU127) para inmovilizado GCNT1 humana recombinante (rhGCNT1) se detectó utilizando cabra conjugado con HRP anti-IgG de ratón en un inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) (S1A Fig). En ausencia de rhGCNT1 inmovilizado, se observó unión sin anticuerpo (Figura S1B). En el análisis de inmunotransferencia, la GCNT1 mAb HU127 anti-humano unido específicamente a rhGCNT1, pero no a rhGCNT3 (S1C Fig). HU127 GCNT1 mAb anti-humano también detecta específicamente la expresión transitoria de GCNT1 en células CHO (S1D y S1E FIG). En el caso de HU127 GCNT1 mAb anti-humano premezclado con antígeno peptídico GCNT1 antes de la incubación en inmunohistoquímica e inmunotransferencia, las señales GCNT1 disminuyeron (S1F y S1G Fig). Los resultados también sugieren que HU127 GCNT1 mAb anti-humano bien alta especificidad frente GCNT1.

Para evaluar el papel de GCNT1 en la progresión del CaP, las muestras de CaP se analizaron por inmunohistoquímica utilizando el anticuerpo monoclonal anti-humano GCNT1 HU127. Los resultados demostraron que GCNT1 se expresó débilmente en las glándulas prostáticas sanas. Por el contrario, un porcentaje de células de CaP expresa niveles significativos de GCNT1 (Fig 1B). Cuando cotejados con estos criterios, el CP 250 especímenes de pacientes exhibieron diferentes parámetros clínicos (S1 Tabla). GCNT1 expresión en piezas de prostatectomía correlacionó positivamente con la puntuación de Gleason postoperatorio. Más del 80% de las muestras tumorales con extensión extracapsular del CP (pT3 y pT4) expresó GCNT1, y los tumores GCNT1-positivos fueron significativamente mayores que los tumores GCNT1-negativas (S2 Tabla).

Como se muestra en la figura 1C, GCNT1 -positivos pacientes estaban en riesgo significativamente mayor de recurrencia de PSA después de la prostatectomía radical. Según el análisis multivariado, los niveles de PSA, estado de los márgenes, y la expresión GCNT1 en el tumor fueron factores independientes de riesgo de recurrencia de PSA (Tabla 1).

Detección de GCNT1 en la post-DRE orina de pacientes con CaP permite predicción de la extensión extracapsular del CP

para establecer una pantalla de alto rendimiento semi-cuantitativa para la expresión GCNT1, las muestras de orina post-DRE, que contienen altas concentraciones de proteínas con CaP, se analizaron por el método de punto-Blot utilizando el anticuerpo GCNT1 anti-humano (Fig 2). Predicción de la extensión extracapsular del CP es un buen predictor de recurrencia de PSA (Fig S2). El nivel de PSA inicial y la expresión GCNT1 están altamente correlacionados con la extensión extracapsular del CP en un análisis de regresión logística (Tabla 2). Los valores óptimos de corte para los niveles de PSA y expresión GCNT1 se determinó que eran 7,52 ng /ml y 79,36 pg /mg por la curva característica del receptor-operador para la predicción de la extensión extracapsular del CP utilizando la siguiente fórmula: cut-off = (1 - sensibilidad)
2 + (1 - especificidad)
2 [29, 30] (figura 3A-3C). Sobre la base de estos parámetros clínico, establecimos siguiente estratificaciones de riesgo de recurrencia: riesgo negativo doble (PSA & lt; 7,52 ng /ml, GCNT1 & lt; 79,36 pg /mg), en el riesgo único positivo (PSA & gt; 7,52 ng /mL o GCNT1 & gt ; 79,36 pg /mg) y de riesgo positivo doble (PSA & gt; 7,52 ng /ml y GCNT1 & gt; 79,36 pg /mg). Más del 90% de los pacientes dobles de riesgo positivo tenía extensión extracapsular del CP en esta estratificación del riesgo (Figura 3D). Estos resultados indican que una expresión de concentración y GCNT1 alto nivel de PSA en la orina después de la DRE son buenos predictores de la extensión extracapsular del CaP.

Se recogieron muestras de orina examen rectal post-digitales (A) y (B) se centrifuga. (C) se recogieron los sobrenadantes y vio a una membrana de nitrocelulosa. (D) Core2 β-1,6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) se detectó mediante un anticuerpo monoclonal anti-GCNT1, seguido por una peroxidasa de rábano picante (HRP) conjugado con anticuerpo. (E) Después del tratamiento con un reactivo de quimioluminiscencia, la señal GCNT1 fue grabado por un sistema de ChemiDoc +.

(A) El antígeno prostático específico (PSA) la concentración y (B) Core2 β-1,6 -
N
-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) los niveles de expresión fueron significativamente mayores en el cáncer de próstata (CaP) pacientes con extensión extracapsular que en los pacientes con enfermedad limitada al órgano. (C) del receptor-operador característica análisis de la curva de PSA y GCNT1 reveló que el área bajo la curva de PSA fue de 0,7455 y 0,7614 GCNT1 era. (D) la estratificación del riesgo se estableció mediante PSA y GCNT1 para predecir el resultado del CP local. negativa doble (DN) de Alto Riesgo (PSA & lt; 7,52 ng /ml, GCNT1 & lt; 79,36 pg /mg), único positivo (SP) de Alto Riesgo (PSA & gt; 7,52 ng /ml o GCNT1 & gt; 79,36 pg /mg) y el doble positivo (DP) de Alto Riesgo (PSA & gt; 7,52 ng /ml y GCNT1 & gt; 79,36 pg /mg) pacientes se comparan

Discusión

glicosilación aberrante de las células. glicoproteínas de la superficie desempeña un papel importante en la iniciación del cáncer, la proliferación, invasión y metástasis [31-33]. Biosíntesis de oligosacáridos en glicoproteínas se lleva a cabo en conjunto por varias glicosiltransferasas. La estructura de la terminal funcional tal como sialy Lewis X (sLeX) y sialil Lewis A (sLea) también está formado por glicosiltransferasas [16, 34]. El sLeX y sLea, que fueron ampliamente conocido ligando de las proteínas de unión a carbohidratos, están estrechamente relacionados con la metástasis [35]. No sólo los antígenos SLE, sino también las estructuras internas, en particular GlcNAc beta1,6 ramificación estructuras y polylactosamines, están estrechamente relacionados con la malignidad del cáncer [22, 31]. GCNT1 es una de las glicosiltransferasas que forma el núcleo 2
O
-glycans en la superficie de los linfocitos y las diversas células del cáncer [18, 24, 36, 37]. Anteriormente, se informó de que la expresión GCNT1 se asocia con el potencial metastásico de cáncer colorrectal [22], cáncer de pulmón [23], cáncer testicular [24] y CaP [18]. También se ha informado de que los cánceres que expresan GCNT1 pueden escapar de la respuesta inmune del huésped [25, 38], especialmente de las células asesinas naturales del huésped que se unen a la galectina-3 en el núcleo 2 de ramificación
O
-glycans [25 , 38].

en este estudio se estableció un mAB contra GCNT1 y se evalúa su potencial como un indicador de la agresividad del CaP. El análisis inmunohistoquímico de piezas de prostatectomía radical mostró que la expresión en células de CaP GCNT1 estrechamente relacionada con la extensión extracapsular del CP (Figura 1). Por otra parte, los pacientes con GCNT1-positivo CaP mostraron peor supervivencia libre de PSA en comparación con los pacientes con tumores GCNT1-negativo (figura 1). Estos resultados indican que la expresión GCNT1 correlaciona fuertemente con el potencial maligno de CaP.

Aunque inmunohistoquímica proporcionado mucha información sobre la expresión de proteínas en el CaP, el análisis no era cuantitativa. El uso de la orina después de la DRE, establecimos una proyección semi-cuantitativo y de alto rendimiento para el potencial maligno de CaP (Figuras 2 y 3). Estudios recientes informaron que el antígeno de cáncer de próstata 3 y un TMPRSS2: ERG fusión fueron dos de los indicadores más útiles de CaP. Estos marcadores se han centrado en la detección prospectiva CaP y la detección precoz del CP [39]. antígeno de cáncer de próstata 3 y la TMPRSS2: ERG fusión casi informaron estudio basado en la PCR y no presentó suficiente evidencia biológica de CaP agresividad. También se informó de que la detección de la glicosilación aberrante de PSA mejorado la detección del CaP, pero no predecir la agresividad del CaP [40]. En este estudio, la expresión GCNT1 en la orina después de la DRE se correlacionó con extensión extracapsular del CaP. Por otra parte, una combinación de la concentración de PSA inicial y la expresión GCNT1 podía predecir la extensión extracapsular en más del 90% de CaP. Por lo tanto, la detección GCNT1 en la post-DRE orina predicción de CaP invasividad mejoró
.
Debido a GCNT1 no es una proteína específica del cáncer, su expresión no era adecuada para la detección del CaP. Por lo tanto, una combinación de marcadores reportados detección de CaP y GCNT1 puede mejorar el desarrollo de estrategias terapéuticas de CaP. Aunque el mecanismo de regulación impulsada por GCNT1 en la progresión del cáncer es poco conocida, nuestro estudio demuestra que GCNT1 puede ser un factor de predicción del potencial maligno de CaP. La investigación clínica es necesaria para determinar la utilidad de GCNT1 como biomarcador del CaP.

Apoyo a la Información
S1 Fig. Preparación de un núcleo antihumano 2 β-1,6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-1 anticuerpo monoclonal.
(A) La unión del Core2 β-1,6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) anticuerpos específicos. Los sobrenadantes de cultivo se prepararon a partir de células de hibridoma HU127. La unión del anticuerpo GCNT1 monoclonal anti-humano (mAb, línea azul) o IgG de mieloma MOPC 21 (control, línea naranja) para inmovilizar GCNT1 humana recombinante de una manera dependiente de la concentración (eje de abscisas) se detectó usando una peroxidasa de rábano picante (HRP) - anticuerpo IgG anti-ratón conjugado. Las barras de error indican la desviación estándar de las mediciones por triplicado. Las concentraciones de anticuerpo en los sobrenadantes se determinaron utilizando un sándwich ELISA. Los resultados son representativos de dos experimentos. (B) El GCNT1 mAb anti-humanos reconocidos inmovilizado GCNT1 humana recombinante, pero no BSA. (C) para confirmar la especificidad mAb GCNT1 anti-humano, GCNT1 humana recombinante y GCNT3 se analizaron mediante electroforesis (SDS-PAGE) y se transfirió a una membrana de PVDF. El GCNT1 mAb anti-humano GCNT1 reconoció específicamente, pero no GCNT3. (D) La inmunotransferencia y (E) inmunocitoquímica reveló la GCNT1 mAb anti-humano GCNT1 también reconocido específicamente en las células CHO-sobreexpresados ​​GCNT1. ensayo de inhibición del péptido para (F) IHC y (G) métodos dot-blotting reveló las señales GCNT1 fueron inhibidas por mAb anti-humano GCNT1 péptido antigénico del pre-tratarse GCNT1
doi:. 10.1371 /journal.pone.0138520.s001
(TIF)
S2 Fig. La extensión extracapsular del cáncer de próstata fue uno de los fuerte predictor de recurrencia del antígeno específico de la próstata.
períodos de supervivencia libre de antígeno prostático específico se compararon entre la enfermedad limitada al órgano (pT2) y la extensión extracapsular (pT3 y pT4). La supervivencia se analizó mediante curvas de Kaplan-Meier
doi:. 10.1371 /journal.pone.0138520.s002 gratis (EPS)
S1 Archivo. materiales complementarios y métodos
doi: 10.1371. /journal.pone.0138520.s003 gratis (DOCX)
S1 tabla. . Core2 β-1,6-
N-1
-acetylglucosaminyltransferase de estado y los datos del paciente
doi: 10.1371 /journal.pone.0138520.s004 gratis (DOCX)
S2 tabla. . Core2 β-1,6-
N-1
-acetylglucosaminyltransferase de estado y parámetros patológicos
doi: 10.1371 /journal.pone.0138520.s005 gratis (DOCX)
S3 Tabla. Los datos del paciente de las muestras de orina de examen rectal post-Digital doi: 10.1371. /journal.pone.0138520.s006 gratis (DOCX)

Reconocimientos

Los autores agradecen al Dr. Shigeru Tsuboi útil para los debates.