Extracto
Objetivos
Para determinar la posible asociación entre la infección por el VPH y el componente de células escamosas de urotelial el carcinoma (UC) de la vejiga y para validar la sobreexpresión de p16 como un marcador sustituto para la infección por VPH en estos cánceres entre los coreanos.
Métodos
Se analizó la presencia de infección por VPH usando un ADN de VPH chip y la expresión de p16 mediante inmunohistoquímica en 47 sujetos entre julio de 2001 y marzo de 2011. el grupo de estudio (n = 35) incluyeron pacientes con diferenciación escamosa de la Universidad de California de la vejiga. El grupo control (n = 12) incluyó a pacientes con metaplasia escamosa de la vejiga.
Resultados
Las características basales de los grupos de control y de estudio fueron similares. las tasas de detección de ADN de VPH fueron aproximadamente 2 veces mayor en el estudio que el grupo de control (17,1% [6/35] frente a 8,3% [1/12], respectivamente), pero la diferencia no fue estadísticamente significativa. sobreexpresión de P16 se detectó en 16/35 (45,7%) y el grupo de estudio de muestras del grupo control 1/12 (8,3%) (p = 0,034). Tanto el VPH-positividad de p16 y sobreexpresión estaban presentes en 3/35 (8,8%) muestras del grupo de estudio, pero ninguno del grupo control (p = 0,295). En el grupo de estudio, el porcentaje de casos positivos de VPH que eran no fumadores fue 2 veces mayor que el porcentaje de los casos de VPH-negativas que eran no fumadores (66,7% [4/6] frente a 31,0% [9/29 ], respectivamente); Sin embargo, la significación estadística no se alcanzó debido al tamaño pequeño de la muestra.
Conclusiones
infección por VPH puede estar asociado con la Universidad de California de la vejiga con diferenciación escamosa, especialmente en los no fumadores. Sin embargo, la expresión de p16 no parece ser un fuerte marcador indirecto para detectar la infección por VPH en este tipo de cáncer
Visto:. Kim SH, Joung JY, Chung J, Parque WS, Lee KH, Seo HK ( 2014) la detección de la infección por virus del papiloma humano y p16 Expresión inmunohistoquímica en el cáncer de vejiga con diferenciación escamosa. PLoS ONE 9 (3): e93525. doi: 10.1371 /journal.pone.0093525
Editor: Hari K. Koul, centro de Louisiana State University Health Sciences, Estados Unidos de América
Recibido: 8 de Octubre, 2013; Aceptado: March 6, 2014; Publicado: 27 Marzo 2014
Derechos de Autor © 2014 Kim et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo el apoyo de una beca del Centro Nacional del cáncer (NCC-1110510), República de Corea. Sin embargo, los proveedores de fondos no tiene función alguna en el diseño del estudio, la recogida y el análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
El cáncer de vejiga (BC) representa el 3.2-4% de todos los cánceres en todo el mundo y aproximadamente el 90% de BC son carcinoma urotelial (CU). Aunque UC de la vejiga a menudo tiene diferenciación escamosa focal, que se diferencia de carcinoma de células escamosas (SCC) de la vejiga, que contiene células de carcinoma únicamente queratina que forman. BC compuesto por urotelial mixta y fenotipos escamosas se llama UC con diferenciación escamosa (UC /SCC) [1].
Entre los carcinógenos conocidos de la Universidad de California de la vejiga, el tabaquismo es el factor de riesgo más bien caracterizado. Es responsable de casi la mitad de los BC [2]. Otros factores de riesgo para BC incluyen la exposición a un número de aminas aromáticas; infección relacionada con la carcinogénesis, tal como infección schistosomal; y grandes dosis de ciertas drogas, incluyendo la ciclofosfamida y la fenacetina [3]. Sin embargo, un gran número de chalecos siguen sin explicación.
Recientemente, el papel de los virus ha recibido considerable atención como posibles carcinógenos, en especial el virus del papiloma humano (VPH). El VPH es un virus pequeño, circular, de doble cadena de ADN que infecta el epitelio escamoso estratificado y se ha estimado vinculado a casi 10% de todos los cánceres en todo el mundo, especialmente un subconjunto de los CE de la vulva, el pene, el ano, y la orofaringe [4] - [7]. Entre los diferentes tipos de HPV, ciertos tipos, tales como HPV-16 y HPV-18, tienen un papel etiológico establecido en desarrollo de cánceres anogenitales. Aunque el VPH-16 y /o secuencias genómicas -18 también se identificaron en el tracto urinario de los pacientes femeninos con recurrente y uretritis persistente y cistitis [8], [9], un número de estudios han investigado la posibilidad de que la infección por VPH es un riesgo factor que contribuye a la UC de la vejiga; Sin embargo, sus resultados han sido contradictorios, por lo que no hay conclusiones definitivas son posibles [10] - [13].
Un tema relacionado implica la posibilidad de que la proteína p16 se sobreexpresa en la CU de la vejiga. La expresión de p16 es bien conocida por estar asociada con la infección por VPH de alto riesgo en el cáncer de cuello uterino y cáncer de cabeza y cuello y se ha sugerido como un marcador sustituto cualificado para la identificación de la infección por VPH biológicamente activa [14] - [16]. Sin embargo, a pesar de muchos estudios recientes se centran en el componente de SCC de la Universidad de California de la vejiga, no queda claro si la sobreexpresión de la proteína p16 se asocia con la oncogénesis de la Universidad de California de la vejiga [5], [10], [17] - [19].
por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue determinar la presencia de infección por VPH y para validar la posibilidad de que la sobreexpresión de p16 como un marcador sustituto para la infección por VPH en la UC /SCC de la vejiga en los fumadores Coreanos y no fumadores .
Materiales y Métodos
Después de la aprobación del estudio por nuestra Junta de Revisión Institucional, 47 pacientes fueron seleccionados de los archivos del hospital entre julio de 2001 marzo de 2011 (IRB Nº NCCNCS-12 -643). Todos los pacientes dieron su consentimiento informado verbal. El consentimiento por escrito no se obtuvo debido a que el IRB del Centro Nacional del Cáncer aprobó eximir del procedimiento de consentimiento por escrito. Se examinaron muestras de tejido incluido en parafina obtenidos durante la resección transuretral de la vejiga o el recto. El grupo de estudio consistió en 35 pacientes con UC mixta /SCC de la vejiga y el grupo control consistió en 12 pacientes con metaplasia escamosa de la vejiga. De los pacientes del grupo de estudio, 33 tenían evidencia de mezclado UC /SCC y dos tuvieron una amplia SCC con una historia de la Universidad de California. La UC de los especímenes de vejiga fueron clasificados de acuerdo con la Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Sociedad Internacional de Patología (ISUP) criterios de clasificación por etapas urológicas y de acuerdo con la versión 2010 TNM. Ninguno de los pacientes había conocido o historias de la infección por Schistosoma heamatobium, SCC cuello uterino, o cabeza y cuello SCC sospecha.
Un componente SCC representante de cada muestra de bloque de parafina se selecciona en función de la presencia de la calidad y cantidad adecuada de ADN extraído. Se extrajo el ADN utilizando Qiagen BioRobot M48 estación de trabajo (Qiagen, CA) y la calidad y cantidad de ADN se midió usando Nanodrop ND 1000 (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE). La presencia de infección por VPH se analizó utilizando un chip de ADN de VPH. genotipado HPV se realizó según el protocolo del fabricante usando una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) sistema basado microarrays de ADN (Greencross, Gyeonggi, Corea), que consta de múltiples sondas de la secuencia de L1 de HPV [20]. Estas sondas incluyen sondas específicas para los tipos de VPH de alto riesgo (VPH-16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, y 68) y el VPH de bajo riesgo tipos (VPH 6, 11, 34, 40, 42, 43, 44, 54 y 70). productos Consenso de PCR se hibridó con las sondas en el chip, escaneada (escáner GX, PerkinElmer, MA), y después se analizan. La amplificación por PCR se realizó con 10 l de ADN purificado.
La inmunohistoquímica (IHC) tinción de la proteína p16 se realizó utilizando anticuerpos específicos E6H4 (DAKO, Carpinteria, CA). la expresión de p16 IHC se obtuvo usando un sistema de puntuación semicuantitativo compuesto de la siguiente manera: (1) intensidad de la tinción, definida como 0 para el negativo, 1+ para débil, 2+ para moderado, y 3+ para fuerte; (2) área positiva, definida como la (10 X) fracción de las células tumorales manchadas en todo el tumor; y (3) Puntuación expresión, definida como la intensidad de la tinción multiplicado por el área positiva. La puntuación más alta posible era 30. La sobreexpresión de p16 se definió como una puntuación & gt; 20 (Figura 1)
A:. Los componentes de carcinoma de células escamosas se encuentran por debajo del revestimiento urotelial. Las células tumorales son fuertemente positivas para p16 (x100). B: Este caso es un carcinoma papilar urotelial mixta (superior izquierda) y el carcinoma de células escamosas. El componente de carcinoma de células escamosas es fuerte positiva para p16. C:. La metaplasia escamosa no muestra la expresión de p16
Las relaciones entre la presencia de infección por VPH y parámetros clínico se evaluó a través de pruebas exactas y las pruebas de Mann-Whitney Fisher. Todos los análisis estadísticos se realizaron con STATA (versión 9.2, STATA Inc, Texas, EE.UU.). Los resultados fueron considerados estadísticamente significativos si el valor p de dos caras era. & Lt; 0,05
Resultados
características clinicopatológicas de los 35 pacientes del grupo de estudio de la UC /SCC y 12 pacientes del grupo control metaplasia escamosa se muestran en la Tabla 1. No se observaron diferencias demográficas entre los grupos de estudio y control, incluyendo la edad (71,2 ± 7,7 vs. 66,5 ± 10,1 años, p = 0,246), razón hombre-mujer (82,9% vs. 66,7%, p = 0,251) y la historia de tabaquismo (62,9% vs. 41,7%, p = 0,311). En el grupo de estudio, 4 (12,1%) pacientes tenían carcinoma de bajo grado y 29 (87,9%) tenían alto grado. Durante los 2 pacientes restantes, las muestras disponibles (obtenidas por resección transuretral de la vejiga) sólo contenían un componente SCC, prohibiendo así la asignación de una calificación.
ADN del VPH se detectó en 6 de los 35 (17,1%) muestras de grupos de estudio, y 1 de las muestras de 12 (8,3%) del grupo de control (Tabla 2). Todos los virus del papiloma humano tipo 18 eran, excepto para la muestra 1 grupo estudio, que era de tipo 35. La sobreexpresión de p16 se detectó en 16 (45,7%) muestras de grupos de estudio y 1 (8,3%) muestra del grupo de control (Tabla 2). Tanto la positividad del VPH y la sobreexpresión de p16 estuvieron presentes en sólo 3 (8,8%) muestras de grupos de estudio y ninguna de las muestras del grupo control.
En el grupo de estudio, no hubo diferencias en la edad, sexo, estadio, o grado entre el VPH-negativas y los casos positivos de VPH. De los 29 casos de VPH-negativas, 20 (69,0%) eran fumadores o ex fumadores, mientras que de los 6 casos positivos de VPH, sólo 2 (33,3%) eran fumadores o ex fumadores. Para los fumadores o ex fumadores, el porcentaje con BC VPH-negativo fue aproximadamente 2 veces mayor que el porcentaje con BC VPH-positivo. Por el contrario, las muestras de BC de los no fumadores demostraron una de aproximadamente 2 veces mayor porcentaje de positividad de VPH-HPV-negatividad (Tabla 3).
Discusión
Además de el tabaquismo, la exposición ocupacional a aminas aromáticas, y el uso de fármacos específicos, tales como la ciclofosfamida y la fenacetina, como factores de riesgo conocidos de antes de Cristo, la infección por VPH también se ha sugerido como un posible agente causal de la Universidad de California de la vejiga [21], [22 ]. La prevalencia de HPV en UC de la vejiga informado en estudios anteriores ha variado de 0% a 81,3% [23] - [25]. La disparidad se debe probablemente a problemas de muestreo, la contaminación, la sensibilidad de los sistemas de detección, y la variación geográfica [26].
Youshya et al. [21]. informó que el 60% de los pacientes fueron positivos para VPH L1 expresión de la proteína de la cápside por inmunotinción, aunque PCR utilizando GP5 consenso + /6 + cebadores no lograron detectar el ADN del VPH. La razón sugerida por la disparidad de las tasas de detección del VPH fueron los anticuerpos que se utilizaron y la sensibilidad del análisis para la detección de ADN [27]. En este estudio, se utilizó el sistema de chip microarrays de ADN del VPH. El sistema de HPV de microarrays de oligonucleótidos es una biotecnología de nuevo desarrollo que se puede aplicar en la práctica clínica para la detección y determinación del genotipo de VPH. El chip de microarray de ADN del VPH ha demostrado una mayor sensibilidad para la detección de ADN de VPH que la PCR solo bloque de tejido [28], [29].
El VPH tiene una afinidad por células escamosas y su asociación con SCC humana de cuello uterino, cabeza y cuello, y el ano ha sido bien establecida [7]. En el estudio actual, la tasa de detección de ADN del VPH fue 2 veces mayor en el grupo de estudio con mixto UC /SCC de la vejiga (17,5%) que el grupo de control con displasia escamosa (8,3%). Sin embargo, no hemos podido confirmar un aumento estadísticamente significativo en el riesgo de infección por VPH en el grupo de estudio, probablemente debido al tamaño relativamente pequeño de la muestra (Tabla 2). Nuestros resultados son consistentes con otros estudios en los que se detectó ADN de VPH en la UC de la vejiga y SCC de la vejiga [30]
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A pesar de que la infección por VPH se ha asociado con BC en muchos estudios, es importante darse cuenta de que tal asociación no es equivalente a la relación de causalidad. Ninguno de los estudios anteriores han demostrado la existencia de una relación directa entre la infección por el VPH y la carcinogénesis en BC, aunque la posibilidad de un papel causal ha sugerido debido a la similitud de cuello uterino y cáncer de cabeza y cuello, para lo cual ha sido una relación causal establecida [19] [31], [32]. Para abordar esta cuestión, hemos tratado de validar la sobreexpresión de p16 como un marcador sustituto para la infección por VPH activa en BC; Sin embargo, no hemos podido detectar una fuerte asociación entre la sobreexpresión de p16 y la infección por VPH en la UC /SCC de la vejiga (Tabla 2)
VPH codifica dos oncoproteínas:. E6 y E7 [33]. proteína E6 se une con el tipo salvaje (wt) p53, lo que desencadena la degradación mediada por ubiquitina de p53 o inactivar directamente WT-p53 por la formación de complejos [34], [35]. E7 se une a pRb y libera el factor de transcripción E2F, que posteriormente se facilita la proliferación celular. P16 es una quinasa dependiente de ciclina (CDK) inhibidor que bloquea la fosforilación de PRB y posterior G1 a S progresión CDK4-mediada. las células infectadas por el VPH sobreexpresan p16 en un intento de compensar la pérdida inducida por E7 de pRb. Debido a estos mecanismos de retroalimentación negativa entre pRb y p16, la sobreexpresión de p16 está a menudo se utiliza como un marcador sustituto de HPV expresión de oncogenes. En este estudio, p16 se sobreexpresa en el 45,7% de las muestras UC /SCC; Sin embargo, tanto el VPH-positividad de p16 y sobreexpresión estaba presente en sólo el 8,6%. Este hallazgo demuestra de este modo que la expresión de p16 podría no ser un marcador sustituto fuerte evidencia de infección por VPH en UC /SCC, que es coherente con los resultados de Alexander et al. [10].
Los resultados adicionales de interés en este estudio fueron los tipos de VPH y el mayor porcentaje de los no fumadores en el grupo de VPH-positivo que en el grupo de VPH-negativas. Casi todas las muestras positivas para el VPH en el grupo de estudio fueron de tipo 18. La única excepción fue una muestra con el VPH tipo 35, que ha sido considerada una variante de VPH 16 y que no ha sido previamente aislado de la vejiga [36]. Como es bien sabido que los tipos de VPH 16 y 18 son clasificados como de VPH arriesgado para una causa principal de cáncer entre los diversos tipos de VPH [7], [16], [37], [38], nuestros resultados con los tipos de VPH 18 y 35 sea compatible nuestra hipótesis de la infección por HPV en asociación con la carcinogénesis del cáncer de vejiga. Aunque el aumento de la probabilidad de VPH-positividad en los no fumadores no alcanzó significación estadística debido al pequeño tamaño de la muestra, este hallazgo sugiere que la infección por VPH aún podría estar asociado con el desarrollo de mezclado UC /SCC de la vejiga urinaria, especialmente en la no los fumadores debido a su mayor dos veces el porcentaje de positividad de VPH que la de los fumadores (p = 0,286, Tabla 3).
Este estudio tiene algunas limitaciones. Un estudio retrospectivo con un número relativamente pequeño de muestras limitó su poder estadístico y el sesgo potencial. La serología para HPV sugerido por Badawi no pudo realizarse debido al diseño del estudio, a pesar de que la respuesta de anticuerpos (inmunoglobulina [Ig] G) a cápsides L1 podría ser utilizado como un marcador de exposiciones acumulativas de HPV [9]. El grupo control tuvo metaplasia escamosa, mientras que un grupo de control con urotelio normal puede haber sido más apropiado para mostrar una fuerte asociación entre la infección por el VPH y la carcinogénesis de la UC /SCC. Sin embargo, este estudio es significativo en la determinación de la relación de la infección por HPV con prevalencia de BC como uno de los factores causantes en la carcinogénesis de la vejiga y esta es la primera documento que describe la importancia clínica de la posible asociación entre la infección por el VPH y el cáncer de vejiga en no los fumadores.
Conclusión
a partir de los resultados de este estudio, aparece la infección por VPH que se asocian con el desarrollo de mezclado UC /SCC de la vejiga urinaria, especialmente en los no fumadores entre los coreanos. Sin embargo, el papel de la infección por VPH en el desarrollo de este tipo de cáncer puede no ser tan importante como para SCC de cuello uterino o la cabeza y el cuello. Además, la expresión de p16 no parece ser un fuerte marcador sustituto para la evidencia de infección por VPH en UC de la vejiga con diferenciación escamosa.