Extracto
Desde hace tiempo se considera que el cáncer de páncreas (CP) es un tumor maligno que amenaza la vida. Por lo tanto, mucha atención se ha pagado por factores, especialmente moléculas relativos, predictivos para el pronóstico del PC. Sin embargo, la expresión de c-fos en PC fue menos investigada. Además, se desconoce su asociación con variables clínico-patológicas y pronóstico. En el presente estudio, la expresión de c-fos se detectó por tinción inmunohistoquímica basada en microarrays de tejidos en el cáncer y tejidos adyacentes de 333 pacientes con PC. Los resultados de la tinción se correlacionaron con parámetros clínico y la supervivencia global. Por otra parte, también se evaluó la importancia pronóstica de c-fos en subconjuntos de PC. Se ha demostrado que la baja expresión de c-fos fue más a menudo en el cáncer de que en los tejidos adyacentes de PC (
P
& lt; 0,001). Además, la alta expresión de c-fos canceroso se asoció significativamente con el sitio del tumor y el estadio T, mientras que la invasión perineural era de una relevancia significativa límite. Log-rank test reveló que la alta expresión de c-fos en tejidos de cáncer era un marcador significativo de la supervivencia global pobre, acompañado de algunas variables clínico-patológicas convencionales, tales como el sexo, el grado, invasión perineural, el estadio T y N. Más importante, la expresión de c-fos canceroso se identificó como un pronosticador independiente en el análisis multivariante. Por último, la implicación pronóstica de la expresión de c-fos se probó en cuatro subgrupos de pacientes con PC. Estos datos sugirieron que la expresión de c-fos era de relaciones con la progresión y pronóstico sombrío de PC
Visto:. Guo J-C, Li J, Zhao Y-P, Zhou L, Cui Q-C, Zhou W-X, et al. (2015) La expresión de c-fos se asoció con características clínico y pronóstico en el cáncer de páncreas. PLoS ONE 10 (3): e0120332. doi: 10.1371 /journal.pone.0120332
Editor Académico: William B. Coleman, Universidad de Carolina del Norte Facultad de Medicina, Estados Unidos |
Recibido: 17 de octubre de 2014; Aceptado 30 de enero de 2015; Publicado: 19 Marzo 2015
Derechos de Autor © 2015 Guo et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del papel
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por el Programa de Desarrollo (Programa 863, 2014AA020609, http://program.most.gov.cn/), china alta Tecnología de Investigación y Nacional. La fuente de financiación no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de páncreas (CP) es uno de la mayoría de las neoplasias sólidas que amenazan la vida, ya que este tipo de malignidad lleva la mortalidad casi igual a su incidencia [1]. Recientemente se ha resumido que la mejora en el pronóstico a largo plazo de PC, aunque la resección quirúrgica fue cada vez más aplicada, no se logró dentro de dos décadas [2]. Por lo tanto, la exploración de marcadores pronósticos de PC ha sido el punto de acceso de estudio. Hasta ahora, muchas otras clínicas y patológicas, como el estado de los ganglios linfáticos, invasión neural, los niveles de marcadores tumorales y margen de resección, se identificaron [3-8]. Por otro lado, los impactos de las moléculas involucradas en la patogénesis y progresión tumoral en el pronóstico de PC fueron valoradas de forma gradual y revisado recientemente [9,10]. Por supuesto, los pronosticadores más moleculares necesitan ser descubierto
Ha sido bien conocido que c-fos (el homólogo humano del oncogen retroviral v-Fos), uno de los componentes principales de la proteína activadora (AP). - 1 complejo, media el crecimiento del cáncer, la angiogénesis, la invasión y la metástasis, mediante la regulación de expresiones de genes corriente abajo [11]. Los hallazgos de que la expresión de c-fos se asoció significativamente con la recurrencia, metástasis y mal pronóstico en el cáncer pulmonar de células escamosas, cáncer de mama y el osteosarcoma, siempre que su potencial como un proto-oncogén [12-14]. Sin embargo, otros datos sugieren que los pacientes con alta expresión de c-fos llevaron supervivencia favorable en colorrectal, de ovario y de cáncer gástrico [15-18]. Por lo tanto, la expresión de c-fos y sus efectos biológicos pueden ser del tipo de tejido específico. En PC, se informó anteriormente bastante diferentes tasas positivas de c-fos y sus asociaciones adversos con fenotipos malignos, tales como metástasis en los ganglios linfáticos y la resistencia a múltiples fármacos, [19-22]. Sin embargo, sus significados clínico-patológicas y pronósticas de PC siguen siendo desconocidos.
En el presente estudio, los autores estén dirigidos a resolver los problemas, basados en una gran cohorte de China con PC.
Materiales y Métodos
Los pacientes
La cohorte del estudio consistió en 333 pacientes con PC, incluyendo 206 hombres y 127 mujeres. Edades fue del 34 por a la 85 (mediana: 60 años). criterios de selección de pacientes: (1) el adenocarcinoma histológicamente probada; (2) ejemplares disponibles resecado quirúrgicamente; (3) los datos clínico-patológicas disponibles. La Tabla 1 resume las características clínico-patológicas de los pacientes. Se utilizaron los cancerosas y no cancerosas parafina de tejidos fijados con formol emparejados para los pacientes. Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de todos los pacientes. El proyecto (incluyendo su procedimiento de consentimiento) fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital Peking Union Medical College.
Construcción de Tejido de microarrays (TMA)
Se llevó a cabo la construcción de microarrays de tejidos de acuerdo con la métodos y normas mismos con los que se informó anteriormente [23]
tinción inmunohistoquímica
Un anticuerpo policlonal de conejo anti-humano de c-fos (SC-52, dilución:. 1: 50, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA) y un kit de la inmunotinción de dos pasos (EnVision
TM + kit, Dako, Dinamarca) se usaron para la tinción. Se aprueba el péptido de bloqueo (Santa Cruz) para la validación de la especificidad del anticuerpo primario. Los portaobjetos se tiñeron de acuerdo con el método que se aplicó anteriormente [23]. suero de conejo no inmune a la misma dilución fue adoptado como el control negativo.
Evaluación de la tinción Resultados
Dos patólogos independientes que fueron cegados a los datos clínico-patológicos y supervivencia (CCC y WXZ) evaluó resultados de la tinción. La coloración nuclear y /o citoplasma marrón se definió como la señal positiva. De acuerdo con anterior sugerido [24], la proporción de células positivas se dividió en tres grados (0 a 10%, grado 1; & gt; 10-≥50%, grado 2; & gt; 50%, grado 3). Por otra parte, la intensidad de tinción también se anotó en tres grupos (débiles, la puntuación de 1; moderadas, grado 2, un uso intensivo, puntuación 3). La calificación final se obtiene mediante la multiplicación del grado de relación positiva y puntuación de intensidad (que se muestra en la Tabla 1), y se separó en baja (calificación final & lt; 6). Y expresiones altas (calificación final ≥6)
siguiente hasta
Seguimiento (mediana: 14 meses, rango: 2 a 87 meses) se realizó para 229 pacientes, principalmente a través de consultas externas, teléfono y correo electrónico. Durante el período de seguimiento, 170 pacientes han muerto.
Análisis estadístico
prueba de McNemar y el análisis de correlación de Pearson se utilizaron para comparar la expresión de c-fos entre el cáncer y tejidos no cancerosos adyacentes, y para mostrar la correlación entre ellos. La asociación entre la expresión de c-fos y características clínico se reveló mediante la prueba de Chi-cuadrado. el método de ensayo y log-rank de Kaplan-Meier se aplicaron para estimar la supervivencia global y sus diferencias. Multivariado de regresión de Cox (modelo de riesgo proporcional) se realizó un análisis para la identificación de factores pronósticos independientes. Todos los análisis estadísticos fueron acabados a SPSS11.5 paquete de software (SPSS Inc, Chicago, IL). Un
valor de p inferior a 0,05
se definió como estadísticamente significativo.
Resultados
La expresión de c-fos y su asociación con características clínico-patológicas en PC
se demostró que la señal positiva localiza principalmente en núcleo de la célula, y ser también visto en el citoplasma (Fig. 1). Después del tratamiento con el péptido de bloqueo, el hallazgo de que la señal positiva desapareció (S1 Fig.) Valida la especificidad del anticuerpo primario. expresiones bajas y altas se encontraron en tejidos de cáncer de 167 y 166 pacientes con PC, y los tejidos no cancerosos adyacentes de 63 y 270 individuos. Bajo la expresión de c-fos fue más frecuente en el cáncer que en los tejidos adyacentes (
P Hotel & lt; 0,001, prueba de McNemar). Había una correlación significativa entre la expresión de c-fos en tejidos de cáncer y que en los tejidos no cancerosos adyacentes (
P
& lt; 0,001, análisis de correlación de Pearson). Chi-cuadrado análisis mostró que la alta expresión de c-fos canceroso fue significativamente más frecuente en no tumores de cabeza y T3, en comparación con la cabeza y los T1-2, respectivamente (Tabla 2,
P = 0,013 y
0,017). Por otra parte, la expresión de c-fos en tejidos de cáncer era de la relación marginalmente significativa con la invasión perineural (Tabla 2,
P = 0,069
). La expresión de c-fos en los tejidos adyacentes no estaba relacionada con parámetros clínico incluido (datos no mostrados).
(A) de alta expresión en el tejido canceroso (aumento original × 200). (B) de alta expresión en tejido no canceroso adyacente (aumento original × 200).
Significado pronóstico de c-fos en toda la cohorte de PC
El análisis univariante en toda la cohorte de PC mostró que la alta expresión canceroso c-fos predijo acorta la supervivencia global (
P
= 0,020; Fig. 2 y la Tabla 3), además de sexo, grado histológico, invasión perineural, T y N etapas (
P
& lt; 0,05; Tabla 3). de regresión multivariante de Cox se define la expresión de c-fos como uno de los indicadores pronósticos independientes para la supervivencia global de PC (
P = 0,022
, Tabla 3).
Influencias de c- fos expresión en la supervivencia global en los subgrupos de PC
Debido a que el presente estudio se evaluaron las variables clínico-patológicas ocho, los pacientes fueron divididos en dieciséis subconjuntos. El análisis univariante define expresión canceroso c-fos como un predictor significativo de la supervivencia global en cuatro más, es decir, pacientes masculinos, los tumores ≤4cm, tumores N0 y aquellos sin invasión perineural (
P
& lt; 0.05; Fig. 3) . El análisis de regresión de Cox estableció que la expresión de c-fos en tejidos de cáncer era de implicación pronóstica independiente en los hombres, los tumores N0 y aquellos sin invasión perineural (
P Hotel & lt; 0,05; Tabla 4).
( A) Los pacientes masculinos (
P
= 0,006). (B) Los tumores ≤4cm (
P = 0,026
). (C) Los tumores sin invasión perineural (
P = 0,039
). (D) los tumores N0 (
P
= 0,008). N, ganglios linfáticos.
Discusión
Como un miembro importante de la familia de factores de transcripción fos, c-fos se demostró que es un regulador clave de la proliferación, la diferenciación , la angiogénesis, la invasión y la metástasis de cáncer, a través de mecanismos relacionados-AP-1 [11]. Sin embargo, es interesante que c-fos desempeña diferentes roles, incluso opuestos en diferentes tipos de cáncer. En los cánceres de mama y de vejiga, así como células de glioma [25-28], c-fos parece tener propiedades pro-oncogénicos, al contrario que en el cáncer de ovario [29]. A pesar de que en un mismo tipo de tumor maligno, PC, los resultados relativos a la expresión y fenotipos de c-fos siguen siendo incompatibles. El uso de inmunohistoquímica para unos pocos individuos, Lee et al. [19] encontró que c-fos fue altamente expresado en los tejidos de PC, pero sólo se observó expresión débil en un pequeño número de pacientes incluidos en otro estudio [20]. Por otra parte, los hallazgos de que c-fos se redujo reguladas en PC con metástasis en los ganglios linfáticos y el aumento de c-fos inducida por la expresión resistencia a múltiples fármacos 1 (MDR1) en células PC indican las complejas funciones de la molécula en PC [21,22]. Otras investigaciones que mostraron que c-fos contribuye a la motilidad celular [30] y funciona como uno de los objetivos de algunos genes supresores de tumores [31,32], apoyar su potencial oncogénico en PC. En la presente investigación, la expresión de c-fos se detectó por primera vez hace más de 300 pacientes con PC. Es inesperado que la baja expresión de c-fos es más frecuente en el cáncer que en los tejidos adyacentes no cancerosos (prueba de McNemar). A continuación, se muestran las asociaciones positivas /potencialmente positivas entre la alta expresión de c-fos y más tarde el estadio T, así como la presencia de invasión perineural. Los resultados indican que c-fos podrían desempeñar un papel crucial tanto en la iniciación y progresión de la PC. El trabajo previo se encontró que el c-fos inducida por la inflamación mediada por la tumorigénesis [33]. Además, pancreatitis crónica (CP) fue bien conocido como un factor etiológico importante de PC [34]. Por lo tanto, si c-fos juega un papel importante en el proceso de CP a PC puede ser de interés. Se sugirió que K-ras, un gen mutado crucial tanto en CP y PC, que se activa Raf /MEK /señal extracelular regulada quinasa (ERK) y la vía a través de una compleja cascada [34], mientras que ERK, un tipo de proteína activada por mitógeno quinasa (MAPK), estuvo involucrado en la activación de c-fos [35]. Por lo tanto, la alta expresión de c-fos en los tejidos no cancerosos adyacentes en el presente estudio podría proporcionar una pista preliminar de su impacto sobre la conversión de la inflamación a la malignidad en el páncreas. Por otro lado, la expresión de c-fos canceroso se reveló a ser significativamente y marginalmente significativamente asociado con la etapa T y la invasión perineural, lo que indica que este factor transcripcional puede ser un promotor de la progresión de PC. Tomados en conjunto, nuestros datos apoyan que c-fos sirve como un proto-oncogén en el curso de la transformación maligna de progresión en PC, diferente con la anterior que muestra la baja regulación de c-fos en PC con metástasis en los ganglios linfáticos [21]. En el futuro, las exploraciones detalladas de fenotipos y mecanismos relativos vale la pena hacer.
Se ha demostrado que el c-fos se vinculó a la mala o buena prognosis en muchos tipos de cáncer [12-18]. Sin embargo, su impacto sobre el resultado de la PC no ha sido dilucidado. Aquí, mostramos que la alta expresión de c-fos en tejidos de cáncer se asoció con la supervivencia global satisfactorio en ambos análisis univariante y multivariante, la presentación de su poder como un fuerte predictor de pronóstico sombrío en el PC. Los resultados que c-fos fue de significación de pronóstico independiente en algunos subconjuntos de PC fortalecer su papel pronóstico. Estos resultados, apoyados por la relación positiva entre la expresión de c-fos y fenotipos malignos de PC establecida en el presente estudio, son consistentes con las derivadas de osteosarcoma, de pulmón y de mama [12-14]. Sin duda estos resultados de análisis de supervivencia indican también la función de c-fos como un proto-oncogén.
En conclusión, nuestros datos demuestran que la expresión de c-fos se relaciona con la progresión y pronóstico sombrío de PC. Por lo tanto, esta proteína podría ser un fabricante molecular novela del PC.
Apoyo a la Información
S1 Fig. validación Especificidad del anticuerpo primario contra c-fos en el cáncer de páncreas.
(A) con el bloqueo de péptido (aumento original x 200). (B) sin bloquear péptido (aumento original × 200)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0120332.s001 gratis (TIF)