Extracto
Objetivo
Para estudiar la asociación de una variante de la línea germinal funcional en la 3'-UTR de
KRAS
con el riesgo de cáncer de endometrio, así como la asociación de microARN (miARN firmas y) el
KRAS
-variant con características clínicas y los resultados de supervivencia en dos ensayos de cáncer de endometrio posibles RTOG.
Métodos /Materiales
la asociación de la
KRAS
-variant con el riesgo de cáncer de endometrio se evaluó mediante el análisis de casos y controles de 467 mujeres con diabetes tipo 1 o 2 cáncer de endometrio y 582 controles emparejados por edad. miARN y el ADN se aislaron de perfiles de expresión y genotipificación de las muestras de tumor de 46 mujeres con cáncer de endometrio tipo 1 incluidos en los ensayos RTOG 9708 y 9905. miARN niveles de expresión y
KRAS-
genotipo variante se correlaciona con las características del paciente y del tumor , y los resultados de supervivencia se evaluaron según el tipo de alelo variante.
resultados
El
KRAS
-variant no se asoció significativamente con el riesgo general de cáncer de endometrio (14% y 17% de los controles tipo 1 cánceres), aunque se enriqueció en el tipo 2 cánceres del endometrio (24%, p = 0,2). En el análisis combinado de RTOG 9708/9905, miARN expresión difiere según la edad, la presencia de invasión linfovascular y
KRAS
estado -variant. Las tasas de supervivencia a los 3 años para los pacientes con la variante de alelos y de tipo salvaje fueron del 100% y el 77% (HR 0,3, p = 0,24), respectivamente, a favor de la variante.
Conclusiones
el
KRAS-
variante puede ser un marcador genético de riesgo para el cáncer de endometrio tipo 2. Además, la expresión de los genes miARN tumor parece estar asociada con la edad del paciente, la invasión linfovascular y el
KRAS-
variante, apoya la hipótesis de que las alteraciones en la biología del tumor se puede medir mediante la expresión de los genes miARN, y que el
KRAS-
variantes posibles impactos de biología de tumores de endometrio
Visto: Lee. LJ, Ratner E, M Uduman, invierno K, M Boeke, Greven KM, et al. (2014) El
KRAS-
Variant y miARN expresión en los ensayos clínicos del cáncer endometrial RTOG 9708 y 9905. PLoS ONE 9 (4): e94167. doi: 10.1371 /journal.pone.0094167
Editor: Shannon M. Hawkins, Baylor College of Medicine, Estados Unidos de América
Recibido: December 2, 2013; Aceptado: March 12, 2014; Publicado: 14 de abril 2014
Copyright: © 2014 Lee et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyado por el NCI-NIH subvención 5R01CA098346. Esta investigación también fue apoyada por Radiation Therapy Oncology Group /American College of Radiology (RTOG /ACR) Programa de Becas y RTOG otorga U10 CA21661 y CA37422 subvención COOP U10 del Instituto Nacional del Cáncer (NCI) y por el NCI-NIH subvención 5R01CA098346. JW fue apoyada por R01 CA131301-04, CA-157749-01A15 y 5R01CA131301-05. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses: Dra. Weidhaas y el Dr. Slack descubrieron el gen KRAS de variante, que está patentado por Universidad de Yale. Esta patente se llama "lesión genética asociada con el cáncer", y el número es 8221980. Se ha autorizado a una empresa, Mira Dx, que el Dr. Slack y el Dr. Weidhaas co-fundada. Ni el Dr. Slack ni el Dr. Weidhaas están empleados o pagado por Mira Dx, sino que actúan como asesores científicos pendientes de pago. Esto no altera la adhesión de los autores a PLoS ONE políticas en los datos y materiales de uso compartido.
Introducción
La heterogeneidad clínica y biológica del cáncer de endometrio ha sido bien reconocido desde la descripción de dos subtipos principales por Bokhman en 1983 [1]. Tipo 1 cáncer endometrial, el subtipo endometrioide, se asocia con la exposición sin oposición estrógeno, anovulación crónica, nuliparidad y la obesidad. Tipo 2 cáncer de endometrio incluye los subtipos no-endometrioid menos comunes de carcinoma seroso papilar uterino y claro. Tipo 2 cánceres no se ven con frecuencia en las mujeres mayores, surgen en el endometrio atrófico, y no son sensibles estrógenos. La clasificación de dos niveles de cáncer de endometrio en base a factores clínicos y patológicos también se apoya en un nivel molecular. Además clasificación molecular ha sido recientemente presentada por la publicación del Genoma del Cáncer Atlas [2]. Pérdida del supresor de tumores
PTEN
ha sido reportado en el 30-50% de los cánceres de tipo 1 [3] - [5], pero pocas veces se ve en los subtipos de células serosas o claras [6]. El HER2 /neu proto-oncogén, un receptor transmembrana del factor de crecimiento, se amplifica comúnmente o sobre-expresa en cánceres de tipo 2 [7], [8]. Perfiles de expresión génica de análisis de microarrays también ha confirmado la presencia de distintos subtipos de cáncer de endometrio [9]. Otras alteraciones moleculares característicos incluyen la inestabilidad de microsatélites [10] y la mutación de
beta-catenina
[11] en los carcinomas de endometrio endometrioide, y la pérdida de E-cadherina expresión y mutaciones de p53 en cánceres serosos [5]. Tumorales mutaciones adquiridas en
KRAS
han sido identificados en el 15-30% de los cánceres de endometrio tipo 1 pero que raramente observada (0-5%) en el tipo 2 tipos de cáncer [12]. La prevalencia de tumores adquirido
KRAS mutaciones
ha sido variable asociada con el estadio, grado y supervivencia en el cáncer de endometrio [13] - [16].
KRAS
mutaciones también se han detectado en la hiperplasia endometrial, y puede representar un evento temprano en la tumorigénesis para el tipo 1 de cáncer de endometrio.
Mientras que la terapia adyuvante para el tipo 2 cánceres de endometrio con frecuencia implica la quimioterapia, el papel de quimioterapia y radioterapia combinadas (RT) de alto riesgo y el tipo de cáncer en estadio avanzado 1 es más controvertida. Las mujeres con diabetes tipo 1 cánceres uterinos con factores de riesgo patológicos como la invasión profunda del miometrio, alto grado tumoral, invasión cervical y /o propagación extrauterina-pélvica confinados tienen un riesgo de recurrencia de 15-30% a pesar de la radioterapia adyuvante (RT) pélvica [17]. El Radiation Therapy Oncology Group (RTOG) llevó a cabo dos ensayos prospectivos multi-institucionales (9708 y 9905) que fueron diseñados para evaluar la viabilidad y la eficacia de la quimioterapia concurrente y postoperatorio RT para las mujeres con la Federación Internacional de Ginecología y Obstetricia (FIGO) etapas IC-IIIC, de alto riesgo, tipo 1 cáncer de endometrio. Teniendo en cuenta las tasas de respuesta informadas de 30-35% con quimioterapia sola, se llevaron a cabo estos ensayos para evaluar los resultados de seguridad y de supervivencia para un enfoque de modalidad combinada de alto riesgo y cáncer de endometrio en estadio avanzado. RTOG 9905, la comparación aleatoria de quimiorradioterapia adyuvante en comparación con la RT sola, se cerró antes de tiempo debido a la falta de quórum y por lo tanto no se analizaron los puntos finales de supervivencia. Sin embargo, se recogió el tejido para la exploración de nuevos biomarcadores y correlaciones clínicas
.
Los microARN (miRNA) son una clase de ARN no codificante pequeña que inhiben la expresión de genes de abajo objetivos por los sitios complementarios en las regiones no traducidas 3 'vinculante (UTR) del ARN mensajero. Como genes reguladores globales, la función de miRNAs como una nueva clase de oncogenes o supresores de tumores en función del contexto celular. Las alteraciones en los niveles de expresión de genes miARN han sido implicados en la oncogénesis, así como la biología del tumor en casi todos los tipos de cáncer [18]. Distintas firmas de expresión de los genes miARN también se han descrito para los cánceres de tipo 1 y tipo 2 de endometrio [19], apoyando su capacidad de reflejar la biología inherente tumor. Además, heredan variantes en los genes miARN sitios de unión oncogenes han demostrado para predecir el riesgo de cáncer, la biología del tumor y una alteración de firmas miARN [20].
El primer ejemplo de un miARN mutación sitio de unión funcional es un alelo variante en la la 3'-UTR de
KRAS gratis (rs61764370), una mutación germinal encontrado para interrumpir
let-7
unión, aumentar la
KRAS
expresión [21] y predecir el riesgo de cáncer [21] - [24]. Esta mutación, además, se ha asociado con el gen alterado y la expresión de los genes miARN en tumores [21] - [23], [25]. Curiosamente, el
KRAS-
variante predice el riesgo de cáncer de ovario en las mujeres post-menopáusicas [22], el cáncer de mama triple negativo en las mujeres pre-menopáusicas [22], y la biología del tumor de mama agresivo en las mujeres posmenopáusicas con una historia de la terapia de reemplazo hormonal [26], lo que sugiere que hay un posible impacto de los estrógenos sobre la función asociada al tumor de la
KRAS-
variante. Además, la
KRAS-
variante parece predecir la biología del cáncer en todos los tipos de cáncer así estudiado ahora, incluyendo aquellos para los que no parece predecir un mayor riesgo [27] - [28].
los objetivos de este estudio fueron múltiple: 1) para determinar si el
KRAS-
variante se asocia con el riesgo de cáncer de endometrio; 2) evaluar la asociación de miARN expresión firmas con características clínicas en las muestras de tumor de RTOG 9708 y 9905; y 3) para determinar si el
KRAS
-variant se asocia con la biología del cáncer de endometrio mediante la evaluación de las dos asociaciones de expresión clínica y miARN en estas mismas pruebas.
Materiales y Métodos
los datos de casos y controles
los sujetos del estudio de casos y controles fueron los residentes de Connecticut diagnosticadas con cáncer de endometrio primario entre octubre de 2004 y septiembre de 2008. el personal del estudio del brazo de Comprobación rápida caso del Centro de cáncer de la Universidad de Yale visitó al general de Connecticut hospitales para determinar la elegibilidad caso e información de identificación. Los controles fueron identificados por la marcación de dígitos al azar. Las muestras de sangre o muestras de saliva se recogieron a partir de estos sujetos de estudio. A partir de muestras recogidas, se aisló el ADN utilizando el kit Magna pura de ácido nucleico (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN) para las células de la sangre buffy-coat, y Oragene kit (ADN Genotek Inc, Canadá) para muestras de saliva. La presencia de la
KRAS
-variant se detectó utilizando un ensayo TaqMan PCR para identificar el tipo salvaje (T) o alelo variante (G) utilizando sondas específicas de alelo, tal como se describe anteriormente [21]. Debido a la frecuencia del alelo menor, el heterocigoto (TG) y formas homocigotos (GG) se combinaron para el análisis para comparar con el alelo de tipo salvaje (TT).
Declaración de Ética para los datos de casos y controles
Este protocolo fue aprobado por el Comité de Investigación Humanos de Yale y del Departamento de Estado Comité de Investigación humana de la Salud Pública de Connecticut. Ciertos datos utilizados en este estudio se obtuvieron del Registro de Tumores de Connecticut en el Departamento de Salud Pública de Connecticut.
RTOG 9708 y 9905
RTOG 9708 fue un brazo único estudio de fase II de RT adyuvante combinada con cisplatino y paclitaxel quimioterapia, en el que participaron 45 pacientes con tipo I FIGO 1988 Etapa IC-IIIC endometrioide adenocarcinoma de útero. El ensayo sucesor, RTOG 9905, fue un estudio aleatorio de dos brazos de fase III de RT adyuvante con o sin el mismo régimen de quimioterapia, en el que participaron 42 pacientes. Todos los pacientes que participaron en los dos estudios comenzaron la radioterapia adyuvante dentro de las 8 semanas de la cirugía (histerectomía abdominal total y salpingo-ooforectomía bilateral). Los pacientes elegibles tenían grado 2 o 3 adenocarcinoma con mayor que 50% invasión miometrial, la participación del estroma cervical o enfermedad extrauterino-pélvica confinado y /o citología peritoneal positiva. Los pacientes con histología no endometriod, tales como células serosas o clara papilar, fueron excluidos de estos estudios.
Tratamiento
adyuvante incluido RT pélvica a una dosis de 45 a 50,4 Gy seguido de braquiterapia vaginal. El cisplatino (50 mg /m2) fue entregado al mismo tiempo en los días 1 y 28. Tras la finalización de RT, los pacientes recibieron 4 ciclos de cisplatino adyuvante (50 mg /m
2) y paclitaxel (160 a 175 mg /m
2) administrada cada 4 semanas. Los pacientes fueron vistos en el seguimiento de cada 4 meses durante 2 años, luego cada 6 meses durante 1 año y después anualmente. Una prueba de Papanicolaou y la radiografía de tórax se llevaron a cabo todos los años.
Ética se obtuvo Declaración de RTOG 9708 y 9908
escrito el consentimiento informado de todos los pacientes antes de la inscripción. Los datos de los resultados clínicos y de toxicidad para RTOG 9708 han sido publicados anteriormente [17], [29]. RTOG 9905 se dio por terminado antes de tiempo debido a la falta de quórum y el seguimiento se interrumpió después de al menos 12 meses de seguimiento para cada paciente.
El aislamiento de ADN y ARN y pruebas de la
KRAS
-variant y miRNAs
tumor especímenes de bloques fijado en formol e incluidos en parafina se microdissected después de la identificación de áreas con suficiente celularidad tumoral por un patólogo. secciones de los tumores se de-parafinadas utilizando xileno y se aisló el ADN para el genotipado de la
KRAS
-variant como se describe anteriormente. ARN total fue aislado de las muestras de tumor embebidas en parafina utilizando el kit Ambion recuperar todos (Life Technologies, Grand Island, NY) según las instrucciones del fabricante. miARN se ejecuta en la plataforma ABI TaqMan TLDA. Las muestras fueron genotipo para el
KRAS-
variante. Los datos estaban en equilibrio de Hardy-Weinberg.
Análisis estadístico
El análisis estadístico se realizó utilizando el software estadístico JMP, v. 8.0.1 (SAS Institute, Cary, NC). Para el análisis de casos y controles, la prevalencia del alelo variante (TG /GG) se comparó con los controles para los casos de cáncer de endometrio y de población utilizando la prueba exacta de Fisher. características clínicas, patológicas y tratamiento de pacientes en los ensayos RTOG se compararon según el tipo de alelo (de tipo salvaje frente a la variante) usando un t-test o la prueba exacta de Fisher. estimaciones actuariales de supervivencia libre de enfermedad (DFS) y supervivencia global (SG) se calcularon utilizando el método de Kaplan-Meier. El método de incidencia acumulada se utilizó para estimar las tasas de fracaso local-regional (LRF) y la insuficiencia distante (DF). OS se calculó a partir de la fecha de la asignación al azar hasta la muerte por cualquier causa. DFS se define como el intervalo de la fecha de la aleatorización hasta el desarrollo de metástasis a distancia, el fracaso local-regional o muerte por cualquier causa. LRF se definió como la recidiva o progresión primaria, la recurrencia vaginal y /o recurrencia nodal o la progresión. DF se definió como metástasis a distancia y /o insuficiencia paraaórticos. El análisis univariante se realizó a través de Cox modelos de riesgos proporcionales. las tasas de prevalencia estimadas para el alelo variante se utilizaron para calcular la potencia. Un error de tipo 1 (α) de menos de 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.
Para obtener los datos de expresión de genes miARN, todos los análisis estadísticos de pre-procesamiento y se llevó a cabo en el entorno de programación estadística R, usando funciones personalizadas y la limma Bioconductor paquete. Cada muestra se normalizó por separado utilizando los ocho ARN de control endógenos y, a continuación las intensidades fueron escalados a través de las muestras que tienen distribuciones similares. Los cambios estadísticamente significativos en la expresión de los genes miARN entre las muestras agrupadas por edad, raza, presencia de invasión del espacio linfovascular, DFS y
KRAS
estado -variant se determinaron utilizando limma con p & lt; 0,05 ajustados por una corrección de Bonferroni, y una absoluta veces -cambio ≥2. La agrupación jerárquica se basa en la distancia métrica euclidiana y la vinculación de Ward.
Resultados
El
KRAS
-variant y cáncer endometrial Riesgo
En el caso-control estudio, para evaluar el papel de la
KRAS-
variante en la predicción del riesgo de cáncer de útero, los datos se obtuvieron de los alelos de 583 controles de población, 430 pacientes con diabetes tipo 1 el cáncer de endometrio y 37 pacientes con cáncer de tipo 2. La prevalencia del alelo variante era 13,9% entre los controles y 16,5% para los pacientes con cáncer de endometrio (p = 0,29). Como se muestra en la Tabla 1, la prevalencia de la variante apareció mayor en pacientes con cáncer de útero tipo 2 de la histología no endometrioide (24,3%) en comparación con el tipo 1 el cáncer de endometrio (16,7%) o controles de la población (13,9%). Sin embargo, ninguna de estas diferencias alcanzó significación estadística probablemente debido al pequeño número de cánceres de tipo 2 en este estudio.
Mirna Expresión en RTOG 9708 y 9905
Se evaluaron los patrones de expresión de miARN a partir de muestras tumorales de pacientes incluidos en el RTOG 9708 y 9905 y probados para la asociación con características clínicas y patológicas. No se encontraron diferencias significativas en la expresión de los genes miARN entre las muestras de los dos ensayos (datos no mostrados), por lo tanto, las muestras se combinaron para el análisis posterior. los patrones de expresión de genes miARN diferían entre los tumores con invasión linfovascular (LVI) frente a los que no. miRNAs expresados diferencialmente (valor de p & lt; 0,05 y pliegue de cambio & gt; 2) incluyen el miR-194, miR-192, miR-203, miR-345, miR-30e-3p, miR-210 y miR-301 (Tabla S1, Figura 1), todos los cuales fueron sobreexpresa en los tumores con LVI presente. Del mismo modo, no hubo diferencias en la expresión de los genes miARN función de la edad del paciente: tumores en mujeres de edad avanzada (≥51 años) mostraron sobreexpresión de miR-20b, miR-10a y miR-187 y disminución en la expresión de miR-432 y let-7d (Tabla S2 , Figura 2) en comparación con los tumores de las mujeres más jóvenes (& lt;. 51 años)
El amarillo representa los pacientes con LVI, y el azul representa los pacientes sin LVI
El amarillo representa los pacientes más jóvenes que. 51 años de edad, y el azul representa a los pacientes iguales o mayores de 51 años de edad.
Asociaciones clínicas de la
KRAS
-variant en los ensayos RTOG 9708 y 9905
se disponía de datos de alelos para 46 de 87 pacientes evaluables (53%) inscritos en el RTOG 9708 y 9905. La disponibilidad de datos alelo fue similar para los dos ensayos, que incluyeron 22 pacientes (49%) a partir de 9708 y 24 pacientes ( 57%) a partir de 9905. la prevalencia de la
KRAS
-variant fue del 22% en general, y fue 18% (n = 4) y 25% (n = 6) a partir de 9708 y 9905, respectivamente. El
KRAS-
variante se encontró en sólo 1 de cada 11 (10%) mujeres menores de 51 años de edad en el momento del diagnóstico de cáncer de útero, y en 9 de los 35 (28%) mujeres que eran mayores, aunque estas tasas de prevalencia no fueron estadísticamente diferentes (p = 0,41), probablemente debido al pequeño tamaño de la muestra.
la mediana del tiempo de seguimiento de los pacientes con datos de los alelos en el análisis combinado fue de 29,3 meses (min-max, 6.8-124.1 meses). Características de los pacientes, incluyendo la edad, el estado funcional ECOG, y la raza, no fueron significativamente diferentes entre las mujeres con y sin el
KRAS-
variante (Tabla 2). La distribución de 1.988 estadio FIGO, la histología, la profundidad de la invasión miometrial superior al 50% y la presencia de LVI también fueron similares entre los grupos.
Las tasas de SG a 3 años fueron del 100% para el
KRAS-
pacientes variantes y el 77% (95% intervalo de confianza [IC] del 58% -87%) de los pacientes no variante (hazard ratio [HR] = 0,3; IC del 95%: 0,04 a 2,29, p = 0,24). Uno de 10 pacientes (10%) con el
KRAS-
variante había LRF y 2 (20%) habían DF comparado con 7 (19%) y 13 (36%), respectivamente, entre los pacientes con la no alelo -variant. Los CRI para la LRF y DF fueron de 0,45 (IC del 95%: 0,05 a 3,65; p = 0,45) y 0,44 (IC del 95%: 0,10 a 1,97; p = 0,28) para los portadores de variantes. Estas tendencias no fueron significativas, tal vez porque el poder del estudio fue sólo 14-41% para detectar una diferencia significativa en los criterios de valoración clínicos debido al tamaño pequeño de la muestra y un seguimiento limitado.
miARN expresión y el
KRAS
-variant en RTOG 9708 y 9905
Debido a que el
KRAS-
variante ha sido previamente demostrado ser asociados con genes alterados, así como los genes miARN expresión en los tumores, se evaluaron los miARN firmas de los tumores con y sin el
KRAS-
variante. Por otra parte, dado que las firmas de miARN diferían entre los tumores basada en la edad del paciente (punto de corte de 51 años), y que la mayoría de los pacientes con el
KRAS-
variante fueron post-menopáusica, evaluamos estas diferencias sólo en los tumores de los pacientes mayores de 51 años. Se encontraron diferencias significativas en las firmas de miARN entre los tumores de pacientes con
KRAS-
variante y los que no tienen el
KRAS-
variante. Estos incluyen una menor expresión de miR-181b, miR-324-3p y miR-518b en
KRAS-
tumores variantes de los pacientes (Tabla 3, Figura 3).
El amarillo representa los pacientes sin la
KRAS-
variantes, y los pacientes de color azul con el
KRAS-
variante.
Discusión
Este estudio representa el primer análisis de la asociación de la
KRAS-
variante con cáncer de endometrio. Aunque el
KRAS
-variant no fue un predictor de riesgo general de cáncer de endometrio, que se enriqueció en pacientes con cánceres de tipo 2, con una prevalencia del 24,3%. Además, en dos ensayos de cáncer de endometrio posibles RTOG, firmas de miARN, así como la
KRAS-
variante se asociaron con características clínicas distintas. miARN firmas fueron diferentes entre los tumores con o sin LVI, entre los tumores en pre frente a los pacientes post-menopáusicas, y entre los
KRAS-
pacientes variantes y los pacientes no variante. Aunque RTOG 9708 y 9905 no tuvieron el poder para detectar una asociación estadísticamente significativa entre el
KRAS
resultado -variant y, la tendencia es que el
KRAS-
variante se asoció con un mejor resultado, aunque la confirmación de esta hipótesis requiere pruebas en un estudio más grande con mayor poder estadístico.
a pesar de que la asociación de la expresión de los genes miARN y las características clínicas alterados de un tumor ha sido bien documentada, puede parecer sorprendente que el
KRAS
-variant, una línea germinal, no codificantes de proteínas de mutación que altera la secuencia de unión miARN, predice alterada firmas de miARN en un tumor y también altera el pronóstico. Sin embargo, la asociación de la
KRAS-
variante con alteración de firmas de miARN se ha encontrado en todos los tumores en los que se ha analizado, incluyendo el cáncer de pulmón [21], el melanoma [10], cáncer de cabeza y cuello [30 ] y el cáncer de mama triple negativo [23]
.
la asociación de la
KRAS-
variante con el pronóstico en todos los tipos de tumores también se ha informado ampliamente. En una cohorte de 344 pacientes con cáncer de cabeza y cuello, aunque no se observó una asociación con el riesgo de cáncer, portadores de variantes tenían un peor resultado clínico cuando se ajusta por edad y etapa (HR 1,6, IC 95% 1,0-2,5) [30], con tasas de supervivencia más bajas más pronunciadas entre los pacientes con cáncer de cavidad oral en comparación con los sitios de la faringe y la laringe. Varios estudios han encontrado que el
KRAS
-variant predice alteración de la respuesta a cetuximab en pacientes con cáncer colorrectal metastásico [28], [31]. En el cáncer de ovario, el
KRAS-
variante predice un peor pronóstico debido a la resistencia de platino [23]. resistencia de platino también se encontró en los pacientes que recibieron quimioterapia sola para cabeza y cuello metastásico (Chung, presentado). resistencia de platino es particularmente interesante en el contexto de los ensayos RTOG examinados en este estudio, donde una proporción de los pacientes recibieron cisplatino aplicada simultáneamente con la radiación y en combinación con paclitaxel. Se podría plantear la hipótesis de que la adición de radiación para agentes de platino podría superar la resistencia asociada, una hipótesis que actualmente está siendo evaluado en ensayos adicionales RTOG.
Entre KRAS
-variant tumores positivos y negativos en este estudio, 3 miRNAs fueron expresados diferencialmente, incluyendo el miR-181b, miR-324 y miR-518b. En estudios preclínicos, el miR-181b se ha demostrado para promover la proliferación celular y reducir la apoptosis en células de cáncer de cuello del útero [32], mediar en la tumorigénesis a través de STAT3 [33], e inducir resistencia a la gemcitabina en las células de cáncer de páncreas [34]. En los tumores de células germinales humanas, sobre regulación de miR-518b se asoció con un fenotipo resistentes al cisplatino [35]. Estos estudios pueden explicar los mejores resultados se observan en nuestro trabajo que favorecía a los
KRAS
pacientes -variant, como
KRAS-
tumores variantes tenían menores niveles de expresión de miR-518b. En un estudio de carcinoma nasofaríngeo, regulación a la baja de miR-324 se asoció con radioresistance [36]. En nuestro estudio,
KRAS-
tumores variantes tenían niveles más bajos de miR-324, aunque no había una clara radioresistance ya que estos pacientes habían mejorado las tasas del control local-regional.
Para obtener una visión global de lo que el miARN expresión diferencial se encuentra en nuestros tumores puede representar, se utilizó sistema MIR, que combina 7 algoritmos y 2 bases de datos validados para identificar potenciales objetivos de genes de miRNAs y su función, así como la vía de análisis utilizando KEGG (Kyoto Enciclopedia de genes y genomas) [37]. Los genes diana de miR-181b incluyen
MAP3K3 gratis (activada por mitógenos proteína quinasa 3, la parte superior hit),
ESR1 gratis (1 receptor de estrógeno, un objetivo validado), y
KRAS
, mientras que los de miR-518b incluyen
CTNNBIP1 gratis (interacción proteína β-catenina) y
MAP3K7IP3 gratis (activada por mitógenos proteína quinasa 7 interacción de proteínas 3). Por vía de análisis de los genes diana enriquecidas, la expresión diferencial de los miRNAs enumerados anteriormente estaban asociados con la potenciación a largo plazo, las vías en el cáncer, y el cáncer de endometrio, así como las siguientes vías de señalización: TGF-β, ErbB, MAPK, y Wnt . La vía de señalización /β-catenina Wnt se ha demostrado que se dysregulated en 10-45% de los cánceres de endometrio y está íntimamente regulado por los estrógenos y la progesterona [38]. Además, KRAS es un importante mediador de aguas arriba de la vía MAPK, y la sobreexpresión puede conducir a una mayor activación de la vía RAF /MEK /MAPK y así promover la tumorigénesis. El trabajo previo ha demostrado que la vía MAPK se activa en el cáncer de mama triple negativo con el
KRAS
-variant, y se asocia con menor señalización de estrógenos [24]. Estos resultados y otros indican que el papel de la
KRAS
-variant del riesgo de cáncer y la biología puede depender de ambiente hormonal tales como el estado menopáusico, un tema en curso de estudio.
También realizó la vía de análisis para los 10 miRNAs expresados diferencialmente en los tumores con y sin invasión linfovascular. De interés, predicho vías implicadas en la adhesión focal, la regulación del citoesqueleto de actina, y la brecha de la salida de unión adherente eran los mejores éxitos de KEGG, así como el Wnt, MAPK, TGF-β, y ErbB vías de señalización.
Si bien nuestro estudio estaba limitado por el tamaño pequeño de la muestra de los ensayos RTOG hemos utilizado, que proporcionaron suficiente poder estadístico para nosotros desarrollar conclusiones sólidas con respecto al papel potencial de la
KRAS-
variante en la predicción del riesgo de cáncer de endometrio o de los resultados , hemos sido capaces de ver a través de una asociación potencial miARN expresión alterada en los tumores. Además, hemos sido capaces de recoger muestras de tejido de forma prospectiva en un grupo cooperativo y llevar a cabo un estudio de investigación traslacional, que ha producido la validación de los datos preliminares pena en cohortes más grandes. Estos resultados apoyan la hipótesis de que hay formas medibles para evaluar la heterogeneidad de cáncer de endometrio, que podría proporcionar información pronóstica importante en el futuro para que los practicantes terapia del paciente más adecuada y directa de forma individual.
Apoyo a la Información
Tabla S1.
Asociación entre la expresión de los genes miARN y la invasión linfovascular
doi:. 10.1371 /journal.pone.0094167.s001 gratis (DOCX)
Tabla S2.
Asociación entre la expresión de los genes miARN y la edad
doi:. 10.1371 /journal.pone.0094167.s002 gratis (DOCX)
Reconocimientos
La cooperación de los 28 hospitales de Connecticut, incluyendo el hospital Charlotte Hungerford, el hospital de Bridgeport, Danbury hospital, hospital de Hartford, Middlesex hospital, el hospital general de New Britain, Bradley Memorial hospital, /el hospital Yale New Haven, hospital de San Francisco y el Centro Médico, hospital de Santa María, hospital de San Rafael , Centro de San Vicente de Medicina, hospital de Stamford, hospital William W. Backus, hospital de Windham, Red de Salud de Connecticut del Este, Griffin hospital, hospital de Bristol, Johnson Memorial hospital, hospital de Día Kimball, hospital de Greenwich, y Lawrence Memorial hospital, hospital de Milford, Nueva Milford hospital, hospital Norwalk, MidState Centro Médico, hospital John Dempsey y el hospital Waterbury, al permitir el acceso del paciente, se agradece. Nos gustaría dar las gracias a Barbara de plata y Corinne muñeca para la lectura crítica de este manuscrito.