Extracto
Antecedentes
En nuestro estudio reciente, el análisis proteómico del tejido de las lesiones orales premalignas (OPL) y la mucosa oral normal condujo a la identificación de un panel de biomarcadores, incluyendo protimosina alfa (PTMA), para distinguir OPLs de los tejidos orales histológicamente normal. Este estudio tuvo como objetivo determinar la importancia clínica de PTMA sobreexpresión en la hiperplasia de células escamosas oral, displasia y carcinoma de cabeza y cuello de células escamosas (HNSCC).
Metodología
La inmunohistoquímica de la proteína PTMA se realizó en HNSCCs (n = 100), hiperplasia de células escamosas (n = 116), la displasia (n = 50) y los tejidos orales histológicamente normales (n = 100). El análisis estadístico se llevó a cabo para determinar la asociación de la sobreexpresión PTMA con parámetros clínico y pronóstico de la enfermedad más de 7 años para los pacientes con CECC.
Resultados
Nuestro análisis inmunohistoquímico demostró la sobreexpresión significativa de PTMA nuclear de células escamosas hiperplasia (63,8%), displasia (50%) y el CECC (61%) en comparación con la mucosa oral normal (p
Trend & lt; 0,001). Chi-cuadrado análisis mostró asociación significativa de PTMA nuclear con etapas avanzadas del tumor (III + IV). el análisis de supervivencia de Kaplan-Meier indicó la enfermedad reducida supervivencia libre (DFS) en pacientes CECC (P & lt; 0,001; mediana de supervivencia de 11 meses). En particular, el análisis de Cox-multivariado reveló PTMA nuclear como un predictor independiente de mal pronóstico de los pacientes con CECC (p & lt; 0,001, coeficiente de Hazard, HR = 5,2; IC del 95% = 02/03 a 11/08) en comparación con el grado histológico, estadio T, el estado ganglionar y el estadio tumoral.
Conclusiones
Nuclear PTMA puede servir como marcador pronóstico en CECC para determinar el subgrupo de pacientes que son propensos a mostrar la recurrencia de la enfermedad.
cita: Tripathi SC, Matta A, Kaur J, J Grigull, Chauhan SS, Thakar A, et al. (2011) La sobreexpresión de protimosina alfa predice la evolución de la enfermedad Pobres en cáncer de cabeza y cuello. PLoS ONE 6 (5): e19213. doi: 10.1371 /journal.pone.0019213
Editor: Irina V. Lebedeva, Enzo Life Sciences, Inc., Estados Unidos de América
Recibido: 11 Octubre, 2010; Aceptado: March 29, 2011; Publicado: 5 Mayo 2011
Derechos de Autor © 2011 Tripathi et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. SCT es apoyado por una beca de investigación de alto nivel de Consejo indio de Investigación médica (ICMR), Nueva Delhi, India. AM es beneficiario de MITACS Acelerar Fellow. RR reconoce con gratitud el apoyo de José y el Centro de Enfermedades Sonshine Mildred cabeza y cuello y Temmy Latner /Family Foundation Dynacare, Canadá. RR y KWMS reconocen fondos de los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (CIHR), Ciencia y Tecnología Internacional Asociaciones Canadá (ISTP Canadá) y el Departamento de Biotecnología (DBT), la India. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
protimosina humano alfa (PTMA) es un, rico en ácido, la proteína nuclear no histonas 12,5 kDa, que comprende de 110 aminoácidos [1]. PTMA se sabe que juega un papel importante en la regulación del ciclo celular, proliferación, transcripción, remodelación de la cromatina, el estrés oxidativo-respuesta y la apoptosis [2] - [8]. La sobreexpresión de PTMA se ha informado en varios tumores malignos tales como cáncer de mama [5], hepatocarcinoma [9], cáncer de pulmón [10], neuroblastoma [11], cáncer de vejiga [12], gástrico [13] y el tracto urinario superior carcinoma de células transicionales [14]. Además, PTMA también sirvió como marcador pronóstico de los cánceres de mama, gástrico, de próstata y de vejiga [5], [13], [15], [16]. Recientemente, hemos identificado PTMA entre el panel de biomarcadores que pueden encontrar su utilidad en la distinción de OPL y HNSCCs de tejidos no malignos, el uso de etiquetas isobáricas para cuantificación relativa y absoluta (iTRAQ) el etiquetado y la espectrometría de masas de cromatografía líquida /tándem multidimensional (LC-MS /MS) [17].
CECC se encuentra entre los diez cánceres más prevalentes en el mundo, con una proporción más alta se produce en los países en desarrollo. El tabaco, el betel y el consumo de alcohol, así como el virus del papiloma humano (VPH) son los principales factores de riesgo asociados con el desarrollo de cáncer de cabeza y cuello [18] - [24]. carcinoma de células escamosas oral (CCCA), uno de los subtipos principales de HNSCC, es a menudo precedida por lesiones clínicamente bien definidos, tales como la leucoplasia, que está causalmente vinculados con la exposición crónica de la mucosa oral a agentes carcinógenos /promotores del crecimiento en tabaco y /o betel. En promedio aproximadamente el 1-2% de estas lesiones orales se transforman en cáncer anualmente [25] - [27]. Por otra parte, más de 50% de todos los pacientes HNSCC han avanzado de la enfermedad en el momento del diagnóstico [28]. Si bien, se han producido avances en las modalidades de tratamiento que mejoren la calidad de vida y tienen un valor paliativos, las tasas de supervivencia para los pacientes HNSCC no han mejorado notablemente (aproximadamente 50%), a menudo debido a la recurrencia o de segundos tumores primarios loco-regionales observadas comúnmente en los supervivientes [27] - [30]. En la actualidad, los factores pronósticos más importantes para la CECC son el grado histológico del tumor, el estadio, la profundidad de la invasión tumoral y la afectación de los ganglios linfáticos regionales en el momento del diagnóstico. Sin embargo, ninguno de estos factores puede predecir el pronóstico del CECC efectivamente, enfatizando así la importancia de identificar nuevos biomarcadores para la detección precoz, la evaluación de riesgos y la predicción precisa de recurrencia de este tipo de cáncer.
En este estudio, se tuvo como objetivo determinar la importancia clínica de PTMA sobreexpresión en la cabeza y el cuello tumorigénesis. Se analizó la expresión de PTMA en una gran cohorte de muestras clínicas incluyendo mucosa normal oral, la hiperplasia de células escamosas, displasia y HNSCC por inmunohistoquímica. Además, se investigó correlaciones de expresión PTMA nuclear con clinicopathological parámetros de hiperplasia de células escamosas, displasia y HNSCC para determinar su utilidad como un biomarcador.
Resultados
Correlación de PTMA nuclear en la hiperplasia de células escamosas, displasia y CECC con características clinicopatológicas
Para determinar la importancia clínica de la proteína PTMA en la tumorigénesis de cabeza y cuello, su expresión se analizó en la mucosa oral normal, hiperplasia de células escamosas, displasia y CECC mediante inmunohistoquímica. La Figura 1A muestra la distribución puntuación total de PTMA nuclear en mucosa normal oral, la hiperplasia de células escamosas, displasia y HNSCC. De los 100 tejidos histológicamente normales analizados, 88 tejidos (88%) no mostraron inmunotinción PTMA detectable en los núcleos de células epiteliales en tejidos normales (Tabla 1, Figura 1B (i)). se observó expresión PTMA en 5 de 43 (11,6%) emparejado tejidos normales y 7 de 57 (12,3%) sólo los tejidos normales no apareados. Chi cuadrado análisis de tendencias también mostró un aumento significativo en la expresión nuclear de PTMA en los tejidos obtenidos de diferentes etapas de la tumorigénesis de cabeza y cuello (hiperplasia de células escamosas, displasia y HNSCC, p
tendencia & lt; 0,001). Entre la hiperplasia de células escamosas (n = 116), 74 casos (63,8%) mostraron aumento significativo de la inmunorreactividad PTMA nuclear (p & lt; 0,001, OR = 12,9, IC 95% = 6,3 a 26,3) en comparación con los tejidos orales normales (Tabla 2 y Figura 1B (iii)). El aumento de expresión nuclear de PTMA también se observó en 50% displasia (25 de 50 casos, p & lt; 0,001, OR = 7,3, IC 95% = 3,2 a 16,6) en comparación con los tejidos orales normales (Tabla 3 y Figura 1B (v)) . Las Tablas 1, 2 y 3 se resumen las correlaciones de PTMA nuclear con parámetros clínico de la mucosa oral normal, hiperplasia de células escamosas y la displasia respectivamente. Curiosamente, PTMA nuclear mostró asociación significativa con los hábitos de consumo de tabaco de los pacientes con hiperplasia de células escamosas (p & lt; 0,001)
(a) análisis de Box-Plot:. Los diagramas de caja que muestran la distribución de las puntuaciones totales basado en inmunohistoquímica de la proteína PTMA en las secciones incluidas en parafina de los tejidos normales orales, la hiperplasia de células escamosas, displasia y HNSCC. El eje vertical muestra la puntuación total de la inmunotinción, obtenida como se describe en la sección Métodos. La figura muestra la distribución de la puntuación total de la expresión nuclear PTMA en la hiperplasia de células escamosas (escala de puntuación 0-7), displasia (escala de puntuación 0-7) y el CECC (rango de puntuación de 0-7). (B) El análisis inmunohistoquímico de PTMA en tejidos de cabeza y cuello: secciones incluidas en parafina de mucosa histológicamente oral normal, hiperplasia de células escamosas, displasia y HNSCC se tiñeron utilizando un anticuerpo policlonal anti-PTMA como se describe en la sección Métodos. (I) la mucosa oral normal que no muestran la inmunotinción PTMA; (Ii) la hiperplasia de células escamosas que no muestran la inmunotinción para PTMA; (Iii) la hiperplasia de células escamosas que muestra la inmunotinción PTMA nuclear en las células epiteliales; (Iv) la displasia que no muestran la inmunotinción PTMA nuclear; (V) la displasia que representa la inmunotinción PTMA nuclear en las células epiteliales; (Vi) la sección CECC que no muestran tinción nuclear PTMA; (Vii) sección HNSCC que ilustra la tinción PTMA nuclear en las células tumorales; (Viii) la sección de tejido de cáncer de vejiga que muestra la inmunotinción PTMA nuclear; (Ix) la sección HNSCC utiliza como un control negativo, que no muestra la inmunotinción PTMA en las células tumorales; (Aumento original I-IX × 200).
Entre los CECC, 61% de los casos mostraron localización nuclear de PTMA en las células tumorales en comparación con tejidos orales normales (P & lt ; 0,001, OR = 11,5, IC 95% = 5,7-23,7; Tabla 4 y la Figura 1B (vii)). Los parámetros clínico de CECC y su correlación con la expresión PTMA nuclear se muestran en la Tabla 4. Curiosamente, PTMA nuclear mostró una asociación significativa con el estadio tumoral avanzado (p = 0,03). Notablemente, ninguno de los tejidos HNSCC mostró citoplásmica inmunotinción PTMA. El control positivo (cáncer de vejiga) mostró expresión PTMA nuclear intensa (Figura 1B (viii)), mientras que no inmunotinción se observó en secciones de tejido utilizados como controles negativos en el que el anticuerpo primario fue sustituido por isotipo IgG específica (Figura 1B (ix)).
la capacidad de PTMA nuclear para distinguir la hiperplasia de células escamosas, displasia y HNSCC de la mucosa oral normal se determinó mediante la evaluación de la sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivos y negativos y el área bajo la curva (AUC) utilizando el análisis característico (ROC) de funcionamiento del receptor. Los valores de sensibilidad, especificidad y AUC para la hiperplasia de células escamosas, displasia y HNSCC se dan en la Tabla 5. El valor predictivo positivo (VPP) fueron 86,0, 67,6 y 83,6 para la expresión nuclear de PTMA, respectivamente, en estos tres grupos (Tabla 5).
PTMA sobreexpresión como un marcador pronóstico independiente para HNSCC
El poder de predicción estimado de expresión PTMA con mal pronóstico se evaluó mediante el análisis de supervivencia de Kaplan-Meier. HNSCC pacientes que albergan PTMA nuclear demostraron una reducción significativa de la supervivencia libre de enfermedad (p & lt; 0,001; mediana de supervivencia de 11 meses) en comparación con los pacientes que no muestran la inmunotinción PTMA nuclear (Figura 2d). Cox-multivariado análisis de regresión se llevó a cabo para determinar el potencial pronóstico de PTMA nuclear en HNSCC en comparación con otros parámetros clincopathological incluyendo edad, sexo, grado histológico, estadio T, el estado ganglionar y el estadio tumoral. Curiosamente, PTMA nuclear emergió como un predictor independiente y lo más importante de mal pronóstico en pacientes con CECC en el análisis multivariante (p & lt; 0,001, HR = 5,2; IC del 95% = 02/03 a 11/08).
(a) de Kaplan Meier estimación de la proporción acumulada de supervivencia libre de enfermedad, la mediana del tiempo de supervivencia libre de enfermedad (DFS: sin recurrencia /metástasis) en pacientes HNSCC que muestran la inmunotinción nuclear de PTMA fue de 11 meses en comparación con los pacientes que no muestran la inmunotinción PTMA nuclear (p & lt; 0,001); (B) Los valores predictivos positivo predictivo positivo: Valores [PPV (t)] para el tiempo hasta la recaída del cáncer de 51 pacientes con CECC PTMA (+) (línea continua) y para todos los pacientes con CECC 77 datos de supervivencia (línea discontinua); (C) Los valores predictivos negativos: valor predictivo negativo [VPN (t)] para el tiempo hasta la recaída del cáncer de 26 pacientes con PTMA (-) (línea continua), y para todos los 77 pacientes (línea discontinua) guía empresas.
en base a los datos, el valor pronóstico adicional de que la expresión PTMA nuclear prevista para predecir (PPV) o excluir (VPN) recurrencia del cáncer en pacientes HNSCC se midió mediante las relaciones: PPV
recaída /CECC (83 meses