Extracto
Antecedentes
Bajo la dirección y el patrocinio del Instituto Nacional del Cáncer, informe sobre el primer ensayo preclínico de los ensayos de oncología comparativa Consortium (COTC). El COTC es una novela infraestructura para integrar los cánceres que se desarrollan de forma natural en los perros de compañía en el camino hacia el desarrollo de nuevos fármacos humanos. Los ensayos están diseñados para hacer frente a preguntas difíciles en modelos preclínicos convencionales y ensayos en humanos de fase temprana. Grandes modelos de cáncer espontáneas animales pueden ser una adición valiosa al éxito de los estudios de la biología del cáncer y novedoso fármaco terapéutico, la imagen y el desarrollo de dispositivos.
Metodología /Principales conclusiones
A través de esta infraestructura establecida, el primer ensayo de la COTC (COTC001) evaluó un vector AAV-fago dirigido entrega de factor de necrosis tumoral (RGD-A-
TNF
) a integrinas alpha v en el endotelio del tumor. progreso ensayo y los datos fueron revisados simultáneamente usando un sistema de notificación electrónica por Internet creados para el consorcio. De escalada de dosis en cohortes de 3 perros (n = 24) determina una dosis óptima de seguridad (5 × 10
12 unidades de transducción por vía intravenosa) de RGD-A-
TNF
. Esto demostró la orientación selectiva de la vasculatura y preservación de los tejidos normales evaluó a través de la biopsia en serie de ambos tumor y el tejido normal asociado a un tumor. dosificación repetitiva en una cohorte de 14 perros, a la dosis óptima definida, fue bien tolerado y dio lugar a la regresión tumoral objetiva en dos perros (14%), enfermedad estable en seis (43%), y la progresión de la enfermedad en seis (43%) a través de los criterios de evaluación de respuesta en tumores sólidos (RECIST).
Conclusiones /Importancia
el primer estudio de la COTC ha demostrado la utilidad y la eficiencia de la infraestructura establecida para informar el desarrollo de nuevos fármacos contra el cáncer dentro de animal grande que ocurre naturalmente modelos de cáncer. La evaluación preclínica de RGD-A-
TNF Bienvenidos en esta red proporciona datos valiosos y necesarios para completar el diseño de los estudios, primero en su chica en
Visto:. Paoloni MC, Tandle A, Mazcko C, Hanna E, Kachala S, LeBlanc A, et al. (2009) Inicio de una Infraestructura Novel preclínica: Los ensayos de oncología comparativa Consorcio Dirigido terapéutica focalización de TNFa al cáncer vasculatura. PLoS ONE 4 (3): e4972. doi: 10.1371 /journal.pone.0004972
Editor: Alfred Lewin, Universidad de Florida, Estados Unidos de América
Recibido: Diciembre 10, 2008; Aceptado: 19 Febrero 2009; Publicado: 30 Marzo, 2009
Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la declaración Creative Commons Public Domain que estipula que, una vez colocado en el dominio público, este trabajo puede ser libremente reproducido, distribuido, transmitirse, modificarse, construida sobre, o de otra forma utilizado por cualquier persona con cualquier objeto lícito
Financiación:. Nos gustaría dar las gracias al Centro para la Investigación del cáncer, Instituto Nacional del cáncer, NIH por su apoyo a este trabajo. Esta investigación fue posible en parte por el Programa de Investigación Intramural del NIH, Instituto Nacional del Cáncer, Centro de Investigación del Cáncer. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
La ruta de desarrollo de fármacos actual del cáncer implica un plan de desarrollo lineal que incluye la evaluación de la eficacia en animales pequeños y evaluaciones de seguridad en no portadores de tumores animales grandes que conducen a ensayos clínicos primera in man. Por muchas razones este proceso de desarrollo preclínico ha sido criticada por su incapacidad para identificar fármacos que tienen más probabilidades de tener éxito en la clínica humana. Por ejemplo el uso de una especie (es decir, roedores) para definir la eficacia y una segunda especie para definir de seguridad (es decir, el perro) se opone a la evaluación de índice terapéutico hasta que un agente entra realmente los estudios en humanos de fase temprana. La complejidad biológica y la heterogeneidad de cáncer no es adecuadamente representados por el número de modelos de tumores de roedor comúnmente utilizados en el cribado de la eficacia preclínica [1]. Las relaciones complejas entre la exposición al fármaco y cambios biológicos necesarios en el tejido tumoral o en el espacio de circulación no se modelan fácilmente en los cánceres murinos. Como resultado, muchas preguntas son contestadas antes de los estudios en humanos en fase temprana. Similar, si no preguntas más urgentes persisten después de los primeros ensayos en humanos de fase que pueden limitar significativamente el diseño óptimo de los estudios en humanos de fase posterior.
cánceres espontáneos en compañero (PET) perros ofrecen una oportunidad única de investigación traslacional, y en gran parte sin explotar imagen del cáncer, el dispositivo y el desarrollo de fármacos [2], [3]. Este campo de estudio, conocido como oncología comparada, tiene una larga historia de avanzar en las técnicas quirúrgicas, como la preservación del miembro de pacientes con sarcoma pediátrico, la aclaración de la hipertermia y la radiobiología y la evaluación de nuevos agentes contra el cáncer y los mecanismos de entrega, incluyendo citoquinas inhalación y estrategias de quimioterapia [4], [5], [6], [7], [8], [9]. Las características y uso de los tipos de cáncer en perros que pueden contribuir a nuestra comprensión de la patogénesis del cáncer, la progresión y la terapia también se han revisado recientemente [2]. La oportunidad de evaluar la exposición al fármaco, toxicidad y eficacia (índice terapéutico) en un único modelo animal grande es muy informativo. Estos cánceres recapitulan con mayor precisión la heterogeneidad y complejidad de tumores malignos humanos y como resultado están relacionados con los problemas de recurrencia, la resistencia y la metástasis. El tamaño del perro y los tumores en estos perros hacer evaluación de los puntos finales correlativos tales como cambios farmacodinámicos en un tumor o tejido secundario bastante factible. En consecuencia, estos modelos son muy adecuadas para integrarse con los enfoques modelo existente y optimizar la ruta de desarrollo de fármacos.
Con el fin de aprovechar las oportunidades de modelo proporcionado por los perros que se han desarrollado de forma natural el cáncer, el Instituto Nacional del Cáncer de centro para la Investigación del cáncer del Programa de Oncología-comparativo (CCR-CP) ha desarrollado recientemente una infraestructura que es capaz de ensayos a escala nacional en múltiples centros en los perros portadores de tumores utilizando fármacos contra el cáncer que se encuentran en fase de desarrollo para los pacientes humanos. Conocido como los ensayos de oncología comparativa Consortium (COTC), esta infraestructura incluye 18 centros de oncología veterinaria académica del estado de la técnica. COTC ensayos son administrados y diseñados para incluir varios puntos finales que definen la seguridad, la actividad biológica y clínica de nuevos agentes para el tratamiento de forma centralizada.
La primera prueba completa del COTC es un ejemplo de un estudio realizado farmacodinámica enfocada a informar directamente al lado decisiones paso en el desarrollo clínico de un fago virus adeno-asociado [10], [11], [12] entrega de factor de necrosis tumoral-α (RGD-A-
TNF
) para alpha v integrinas a tumor y tumor-asociados endotelio vascular. El desarrollo de agentes anti-angiogénicos y vasculares orientada ha sido complejo y con resultados inconmensurables de los estudios en ratones portadores de tumores y los pacientes de cáncer humano [13], [14]. Es razonable que que algunos de los atributos del enfoque oncología comparativa pueden ser particularmente informativo en la evaluación de ambos agentes anti-angiogénicos y nuevos métodos de administración de genes [15]. En consecuencia, el primer ensayo de la COTC ha evaluado este sistema ligando-focalización directa de suministro de genes [10], [11], [12], [16], [17], [18]. A través de un diseño de ensayo paso a paso hemos demostrado la seguridad, el tráfico-selectiva del tumor, y la actividad antitumoral de RGD-A-
TNF
a los vasos sanguíneos del tumor y específica la expresión de TNF en un entorno clínico relevante. Estos resultados proporcionan una fuerte base preclínico para los estudios de primer en-hombre en pacientes humanos con cáncer. En un contexto más amplio, este informe del primer ensayo clínico de la COTC, sugiere que la población existente de los perros con tumores espontáneos y esta infraestructura ensayo clínico avanzado puede servir como un paso intermedio eficiente en el traslado de los nuevos tratamientos contra el cáncer desde la pre-clínica modelos para el hombre.
resultados
de escalada de dosis y la fase de ensayo clínico de seguridad de una sola dosis
reglas de Fibonacci modificadas de escalada de dosis fueron seguidos dentro de los cinco cohortes de dosis (n = 3) cada uno recibió una sola administración de RGD-A-
TNF gratis (figura 1A, Tabla 1). Todos los perros fueron sometidos a biopsia pre-tratamiento de tumor y los tejidos normales (Fig 1B). Los perros en los cinco cohortes iniciales (n = 18) recibieron RGD-A-
TNF
seguida por resección quirúrgica definitiva de sus tumores cuatro días más tarde (tumor y controlar los tejidos normales se recogieron tratamiento post); una sexta cohorte adicional (n = 6) recibió RGD-A-
TNF
y se sometió a cirugía definitiva en el mismo día (4-6 horas después de la administración intravenosa) (Fig 1B). En la inscripción en el ensayo de fase de escalada de dosis del estudio, hubo 9 sarcomas óseos primarios y 15 sarcomas de tejido blando (cavidad bucal 3; axiales o apendicular 12) (Tabla 1). Edad (rango, 2.7-14.1 años; mediana de 9,7 años), peso (rango, 15-61.2 kg; mediana de 34,4 kg) y raza (11 de raza mixta y 13 de raza pura) de los perros que entraron en esta fase de prueba se registraron
(a) Este estudio se estructuró como una escalada de dosis, utilizando un diseño de Fibonacci modificado para gobernar aumento de la dosis hacia una MTD. (B) Tres perros fueron inscritos en la cohorte de dosis de partida, y tres perros por cohorte se inscribieron allí después de cada uno de los cinco niveles de dosis previstas. Los perros estaban programados para recibir RGD-A-
TNF
en el día cero y someterse a una resección tumoral definitiva 4 días más tarde. Este grupo inicial de 4 días fue diseñado (i) para evaluar la localización y expresión del vector TNFa dentro de los tumores y (ii) para verificar que el programa de seguimiento provisional de RGD-A-
TNF
Administración en una semana intervalos de dosificación era biológicamente apropiado. Después de un grupo de perros (n = 18) fueron tratados de acuerdo a este horario, un grupo adicional fue inscrito por criterios de inclusión para recibir equivalentes RGD-A-
TNF
en el mismo día de la resección quirúrgica definitiva. En este subgrupo de perros (n = 6), la cirugía se llevó a cabo de 4-6 horas después de la administración de RGD-A-
TNF, España este mismo día subgrupo experimental fue diseñado para establecer la selectividad aguda de RGD-A -
TNF
tráfico y su localización vascular del tumor
Todos los datos fueron comunicados por la notificación electrónica contemporánea de tal manera que los eventos adversos fueron monitoreados de manera uniforme y se gestionen en este multicéntrico COTC. diseño de los ensayos. Monodosis de RGD-A-
TNF
eran en su mayor parte bien tolerado en todas las cohortes de escalada de dosis previstas para esta fase del estudio. El único efecto adverso significativo observado ocurrió durante la infusión intravenosa de RGD-A-
TNF
en la cohorte de dosis más alta (10
13 UT), donde se observó una única toxicidad limitante de dosis (DLT) ( perro#1.18; Grado 3 reacción de hipersensibilidad); este evento (náuseas, taquicardia e hipotensión) fue transitoria y se resolvieron con medidas de soporte mínimo. Tres perros adicionales se introdujeron en esta cohorte de dosis sin mayor toxicidad observada. No se llegó a la dosis máxima tolerada (DMT), ya que la dosis más alta, no se consiguió ningún toxicidades limitantes de la dosis. No hubo clínicamente significativa neurológico, cardíaco, respiratorio, gastrointestinal, renal, o toxicidades hematológicas relacionadas con el tratamiento de los perros introducidos en esta fase del estudio. Además, no había retrasos en la cicatrización de heridas (incisión quirúrgica) detectada, o episodios febriles asociados con solo-dosis de RGD-A-
TNF
Estos datos sugieren que RGD-A-
TNF
era seguro después de la administración intravenosa de una dosis única de RGD-A-
TNF
hasta 10
13 TU. Desde que se logra no MTD, es posible que las dosis individuales más altas de RGD-A-
TNF
también se pueden administrar de forma segura.
Entrega TNFa
Tráfico al endotelio vascular del tumor y dirigido
para determinar si RGD-A-
TNF
de trata de tumor frente tejidos normales, se analizaron pre-tratamiento y post-tratamiento (después de 4-6 horas y después de 4 días) biopsias de tejidos tumorales y normales ( es decir, la mucosa oral, la piel y el músculo) después de una sola dosis de RGD-A-
TNF
por inmunofluorescencia de dos colores (IF) para la tinción de fagos (la Fig. 2A, B). El patrón de tinción de todas las muestras de biopsia se calificaron como positivo o negativo como se describe (Métodos). Claro co-localización de RGD-A-
TNF
partículas se observaron sólo en el endotelio vascular del tumor en biopsias de tumores, pero no en los vasos sanguíneos de los tejidos normales, tan pronto como 4 a 6 horas después del tratamiento (Fig . 2A) y a los 4 días después del tratamiento (Fig. 2B). La especificidad del ensayo de IF fue apoyada por la falta de tinción visto en las biopsias pre-tratamiento en ningún perros (Fig. 2A, B). En segundo lugar, no había células tumorales RGD-A-
TNF
tinción evidente, sólo el tumor vascular tinción endotelio. Hemos observado heterogénea RGD-A-
TNF
patrones de coloración en diferentes secciones de la misma biopsia del tumor y en diferentes biopsias de tumores dentro de las mismas. Esto refleja la heterogeneidad de la biología vasculatura tumoral en el cáncer espontáneo que condujo a la diferencia de absorción de RGD-A-
TNF
en los tejidos tumorales. tráfico consistente de RGD-A-
TNF
a los vasos sanguíneos del tumor se observó en las dos cohortes que recibieron las dosis más altas; En concreto, dos de cada tres perros (67%) en la cohorte que recibió 5 x 10
12 TU y cinco de los seis perros (83%) en la cohorte que recibió 1 × 10
13 TU. No hubo asociación aparente entre la histología tumoral y vascular del tumor objetivo.
(A, B) RGD-A-
TNF
vasculatura asociada a tumores dirigidos selectivamente (flechas) y estuvo ausente de los tejidos normales a las 4-6 horas (a) y a los 4 días (B). Magnificación, 400 veces; barra de escala, 100 mM. pre-tratamiento biopsias tumorales, biopsias de tumores después del tratamiento, y los tejidos normales después del tratamiento en perros que recibieron una sola dosis de RGD-A-
TNF
doble teñidas con un anticuerpo específico anti-CD31 más una anti-bacteriófago anticuerpo específico. La detección se realizó con Alexa Fluor 488 (verdes, los vasos sanguíneos), Alexa Fluor 594 (rojo, AAVP) y DAPI (azul, núcleos de las células). (C) biopsias de tumores Pre-tratamiento (día 0), se utilizaron biopsias post-tratamiento normales (día 4) y biopsias de tumores después del tratamiento (día 4) para la extracción de RNA total. RT-PCR se realizó para medir los niveles de transcripción de TNFa humano por cuadruplicado. El eje Y representa los niveles relativos de expresión TNFa en las biopsias normales post-tratamiento y biopsias de tumores después del tratamiento en comparación con biopsias de tumores pre-tratamiento después de la normalización de la expresión de GAPDH (Kruskal-Wallis Test, p = 0,0107). Todos los datos se presentan como media ± desviación estándar. (D-F) Presencia de RGD-A-
TNF
se evaluó en el post-tratamiento (día 28) muestras de necropsia de tumor (D) y los tejidos normales (E, F). Los tejidos se tiñeron para RGD-A-
TNF
como se describió anteriormente. RGD-A-
TNF
vasculatura asociada a tumores dirigidos selectivamente en muestras de tumores después del tratamiento (flechas). En contraste, el vector no fue aparente en las muestras de tumor de pre-tratamiento o en las muestras de control de necropsia normales post-tratamiento (como el pulmón, el hígado, el bazo o el intestino) después de la administración en serie de RGD-A-
TNF
.
después de establecer que RGD-A-
TNF
localiza preferentemente en el endotelio vascular del tumor después de la administración sistémica, el próximo evaluó si el vector de la localización daría lugar a la expresión del gen TNF objetivo. Tres de los cuatro perros analizados para la expresión génica hTNF observó una elevación significativa de los niveles de hTNF en biopsias de tumores después del tratamiento (día 4) en comparación con las biopsias de tumores pre-tratamiento (prueba de Kruskal-Wallis p = 0,0107) después de una dosis única de RGD A-
TNF gratis (Fig. 2C). En contraste, las biopsias post-tratamiento de los tejidos normales no mostraron ningún aumento detectable en los niveles de hTNF comparación con el pre-tratamiento biopsias de tumores (Kruskal-Wallis test, p & gt; 0,05).
fase de dosis múltiples de estudio
En la fase de múltiples dosis del estudio, un grupo de perros (n = 18) fue inscrito y se trata con dosis fijas sistémicos en serie (5 × 10
12 TU por semana) de RGD-A-
TNF gratis (figura 3). biopsias de tumores se obtuvieron pre-tratamiento (se considera día cero) y en los días 7, 28 y 56 post-tratamiento (Fig 3). En la inscripción en la fase de dosis múltiples del estudio, los tipos de tumores patológicos (Tabla 2) incluyen sarcomas de tejidos blandos (n = 8), melanomas malignos (n = 5), osteosarcoma (n = 1), osteochondrosarcoma multilobular (n = 1 ), hemangiosarcoma (n = 1), linfoma (n = 1), y carcinoma de células escamosas (n = 1). Todos los tumores fueron localizados en sitios periféricos que eran accesibles para biopsia; Sin embargo, la enfermedad metastásica concurrente existía en dos perros. Edad (rango, 6-14.8 años; mediana de 10,2 años), peso (rango, 11-55 kg; mediana de 33,3 kg) y raza (7 de raza mixta y 11 de raza pura) de los perros que entraron en esta fase de prueba se registraron (Tabla 2).
Este estudio se diseñó como un ensayo abierto, de dosis fija múltiple (i) para establecer la viabilidad y (ii) para identificar crónica y /o toxicidad acumulada de los administrados de forma repetitiva RGD-A-
TNF
. Los perros recibieron dosis semanales (5 × 10
12 TU vía intravenosa) de RGD-A-
TNF
. la actividad anticancerígena de este agente se evaluó mediante los criterios RECIST. La población incluyó tratamiento recibido perros que recibieron al menos cuatro dosis semanales (es decir, un ciclo 1). Esta población consistió en 14 perros. Los perros se les permitió recibir terapia adicional en los ciclos posteriores si había pruebas de cualquiera enfermedad estable o respuesta del tumor. las medidas del tumor se registraron cada dos semanas con plena re-estadificación cada 28 días
, múltiples dosis fijas en serie (en total, 78,25; dosis. significan 4,34 dosis /perro; rango, 1-8 dosis /perro) se administraron. Catorce perros en esta cohorte (78%) completaron al menos un ciclo completo (definido como cuatro dosis semanales) de tratamiento y se incluyeron en la población recibido tratamiento para la evaluación de la respuesta tumoral. La muerte debido a progresión de la enfermedad (n = 2) o retiro de los estudios por la petición propietario (n = 2) fue la razón más común para que los perros no pueden completar su ciclo de tratamiento 1. Tres de 14 perros (21%) completaron un segundo ciclo completo ( es decir, ocho dosis semanales) de tratamiento.
al igual que en la fase de escalada de dosis del estudio, todos los datos se informó por vía electrónica dentro del formato de este diseño del ensayo multicéntrico COTC. Además, se obtuvieron los mismos de evaluación, de formación de imágenes, y los estudios de laboratorio clínico antes y después de la administración de cada dosis semanal de RGD-A-
TNF.
En los perros que recibieron dosis semanales repetitivos, la toxicidad más común (n = 9) era una reacción de hipersensibilidad de grado 3 durante la administración intravenosa; seis de cada 14 perros (42%) tenían más de un episodio clínico (es decir, vómitos, hipotensión y taquicardia) que no fue impedido por la premedicación (famotidina, difenhidramina y dexametasona). Sin embargo, todos estos eventos adversos fueron transitorios y se resolvieron siguiente pausa temporal (& lt; 30 min) de la administración y cuidado de apoyo mínima, después de lo cual se reanudó una velocidad de infusión lenta intravenosa (100 ml /hora) sin más complicaciones. Aparentemente no hubo secuelas clínicas a largo plazo para estos eventos. Grado 3 o fiebre no neutropénicos 4 se observó en cinco perros (36%) en el estudio (tres observó durante la infusión y dos en los días sin administración). Todos los episodios de fiebre resuelven con tratamiento sintomático. Uno de los casos (el perro#2.2) se presentaron con grado 3 de necrosis (herida abierta y drenaje en el sitio del tumor) en el día 19 de tratamiento; este mismo perro tuvo una reducción del 18% en el tamaño del tumor en ese momento (que se define por los criterios RECIST como enfermedad estable). Había otros tres eventos con atribución desconocida, incluyendo una reacción cutánea de grado 2 asociada a la sarna (Demodex
canis
), una arritmia ventricular de grado 1, y un primer evento de muerte de causa desconocida dos días después de la quinta dosis de RGD-A-
TNF
. En el caso del primer evento de la muerte, no hay eventos adversos se observaron (Perro#2.14) durante la semana antes de este evento. First-evento de muerte en perros con cáncer avanzado (no a diferencia de los ensayos en humanos de fase temprana) no es infrecuente y puede estar asociado con progresión de la enfermedad, particularmente cuando se observa como eventos aislados. No hay otros eventos adversos significativos, incluyendo los informes clínicos y de laboratorio elaborados neurológico, cardíaco, respiratorio, gastrointestinal, renal o toxicidad hematológica relacionados con el tratamiento en serie con RGD-A-
TNF
fueron vistos. Tres perros de los 14 (21%) fueron sometidos a eutanasia debido a la progresión de la enfermedad y se les realizó la necropsia rápida (caliente); evaluación patológica de los órganos viscerales (cerebro, corazón, pulmones, hígado, bazo, tracto gastrointestinal, los riñones y ganglios linfáticos) no detectó anormalidades histológicas relacionadas con el tratamiento en estos órganos; datos que apoyan la relativa seguridad y de RGD-A-
TNF-
la orientación del tumor. En algunos casos de necropsia tibia (n = 2), de dos colores SI se llevó a cabo y el tráfico específico de tumor de RGD-A-
TNF
se observó (Figura 2D.); sin RGD-A-
TNF
se detectó en los tejidos examinados normales (pulmón, hígado, bazo y tracto gastrointestinal) (Fig. 2E, F).
Tratamiento de respuesta objetiva asociada
en la población recibido un tratamiento de 14 perros, que utiliza las mediciones del tumor de serie para determinar la actividad de RGD-A-
TNF
acuerdo con los criterios de evaluación de respuesta en tumores sólidos (RECIST) (Tabla 2 ). Una vez más, los cuatro perros que no pudieron completar un ciclo (4 semanas) de la terapia se excluyeron de la evaluación de la respuesta. perros evaluables incluidos aquellos con tumores no susceptibles de escisión quirúrgica, tumores para los que había fracasado el tratamiento previo, y tumores en los que se ha rechazado la terapia estándar de atención. Dos animales (perros#2.11 y#2.16) tuvieron una respuesta RECIST definidos parcial (PR) (14%; 95% intervalo de confianza del 2-43%) de una en día 28 y el otro a día 56 (Tabla 2). Seis perros tenían enfermedad estable (SD) (43%; 95% intervalo de confianza 18-71%), incluyendo un perro con una reducción del 18% en el tamaño del tumor, y seis perros tuvieron progresión de la enfermedad (PD) (43%; 95% intervalo de confianza 18-71%) después de un ciclo de terapia. Después de dos ciclos de tratamiento, dos de los perros con enfermedad estable previamente definido en el Día 28 progresaron (Tabla 2). El caso de una PR clínica marcada se representa para ilustrar la magnitud del efecto terapéutico de serie de RGD-A-
TNF
en un perro que presenta con una gran sarcoma de tejidos blandos (Fig. 4). Este perro (# 2.11) había logrado una reducción ≥85% en lo que había sido previamente enfermedad no resecable. Tras esta respuesta a & lt; 2 cm lesión residual se resecó lo que resulta en una revisión patológica revela ningún tumor viable. Estos resultados apoyan los estudios previos que evaluaron la seguridad y la actividad de esta estrategia en modelos de roedores portadores de tumores [10], [19].
Una gran sarcoma de tejidos blandos primaria en el flanco del perro#2.11 se muestra a cuentan con la posible magnitud de la respuesta del tumor. Antes de la terapia (día 0), el tumor mide 12,3 cm de diámetro más largo. Al día 28, después de 4 infusiones semanales de RGD-A-
TNF
, el tumor mide 8,2 cm de diámetro más largo (una regresión 33%) y una respuesta parcial a base de RECIST (PR). Al día 56, después de un total de 8 infusiones sistémicas semanales de RGD-A-
TNF
, el tumor mide 1,85 cm de diámetro más largo antes de la resección. Por lo tanto, esta respuesta equipara a una regresión del 85% del valor inicial y continua PR clínica. Tras la resección quirúrgica de la lesión residual, no se encontró tumor viable y se determinó una respuesta patológica completa.
RGD-A-
TNF
dirigida respuesta inmune en perros tratados
Se analizaron pre-tratamiento y muestras de suero después del tratamiento con una dosis única y los perros del estudio de dosis múltiples de serie para medir los anticuerpos anti-AAVP. En conjunto, se observó 1,8 a 2,0 veces los aumentos de los títulos de anticuerpos anti-AAVP postratamiento en comparación con los niveles previos al tratamiento. Sin embargo, no se observaron nuevos aumentos de anticuerpos anti-AAVP con el tiempo en los perros tratados con dosis múltiples en serie (Día 7 Día vs. 28 vs. Día 56).
Discusión
La oportunidad de integrar los cánceres que se desarrollan de forma natural en los perros de compañía en el camino hacia el desarrollo de un nuevo fármaco contra el cáncer del hombre se desarrolla aún más a través del estudio inaugural de la COTC. En este informe, se describe una distribución selectiva de TNF con un sistema de suministro de genes Programa Africano a los vasos sanguíneos del tumor de perros con cáncer espontáneo. homing selectiva Programa Africano, la expresión vascular asociado a un tumor de TNFa, seguridad sistémica, y las respuestas objetivas basadas en los criterios RECIST se observaron (misma especie índice terapéutico). Estos modelos de cáncer espontáneas animales grandes son muy adecuadas para informar preclínica a las transiciones clínicas necesarias para el desarrollo de fármacos éxito y cumplido el uso de ambos modelos de roedores existentes y ensayos clínicos humanos.
El COTC es una red activa de académicos centros de oncología comparativos, gestionan de forma centralizada por el Programa de Oncología comparativa del NCI. Los diseños COTC e implementa los ensayos clínicos en perros con cáncer con el objetivo de proporcionar datos de traducción necesarias para terapias novedosas, técnicas o dispositivos para pacientes de cáncer en el futuro. Los ensayos se realizan en las instituciones miembros COTC, que actualmente incluyen dieciocho hospitales clínicos veterinarios en los Estados Unidos. Como se describió anteriormente, los ensayos realizados por el COTC pueden incluir varios puntos finales biológicos y clínicos que se pueden integrar directamente en el diseño de la Fase I humana y II de los ensayos clínicos. Aunque no se incluye en el estudio que aquí se presenta, estrategias de imagen correlativos, tales como PET /TC o RM dinámica, con la posibilidad de enlazar estos criterios de valoración de imagen para tumoral circulante o sustitutos biológicos son factibles a través de la infraestructura diseñada. Tales estudios correlativos complejos pueden ser examinados en un entorno clínicamente relevantes a través de estudios COTC, y en ello proporcionan un modelo para evaluar todas las partes de este proceso, incluidas las normas de recogida de tejidos y técnicas, el momento de formación de imágenes y biopsia, y metodologías de ensayo antes de los estudios humanos de fase temprana .
En el estudio actual, COTC001, se evaluó la fluidez y la estructura de esta novela infraestructura preclínica. En el proceso, se definió la seguridad y eficacia de RGD-A-
TNF
orientación al endotelio de tumores en perros con cáncer espontáneo. RGD dirigido entrega a integrinas alpha v tumorales se ha descrito anteriormente [20], [21] y esta orientación anticipado fue la base de la RGD-A-
TNF
desarrollo vector [11], [19], [22 ]. En un trabajo publicado previamente en modelos de xenoinjertos de ratón, que se describe centramos en el suministro sistémico de RGD-A
VVP
vectores que expresan bien HSVtk o TNF-α, a la vasculatura del tumor [12], [22], [23], [ ,,,0],24]. La actividad antitumoral se ha visto en el sarcoma de Kaposi, carcinoma de vejiga, carcinoma de próstata y melanoma [12], [22]. Aunque, la actividad de RGD-A-
TNF
se ha demostrado en modelos animales pequeños tradicionales, el enfoque de oncología comparada proporciona información única sobre la seguridad de RGD-A-
TNF Windows que no tendría sido posible en los estudios convencionales de seguridad en animales. Dado que ni el tumor ni la vasculatura del tumor están presentes en animales sanos (es decir, perros criados para esos fines de investigación), una evaluación de la seguridad en estos animales probablemente menores de informe de eventos adversos relacionados con RGD-A-
TNF.
Relacionada con las drogas hechos denunciados en nuestra población de perros portadores de tumores eran de hecho generalmente leves y autolimitados. De hecho, un MTD no se logró en las cohortes de dosis única evaluados en la dosis escalada como el aumento de la dosis de RGD-A-
TNF
estaba limitada por el proceso de fabricación. La mayoría de los eventos adversos que fueron documentados fueron vistos ya sea durante la administración o dentro de 2 horas de la administración en los perros que habían recibido dosis múltiples de RGD-A-
TNF. Eventos relacionados con la Administración
incluyeron reacciones de hipersensibilidad similar y fiebre. Dada la naturaleza per-aguda de estos eventos, es plausible que los mismos estaban relacionados ya sea a la endotoxina remanente indetectable en el producto de tratamiento o para una respuesta específica a la propio vector. Las pruebas de todos los lotes de producción de RGD-A-
TNF
no pudo revelar la endotoxina residual; Sin embargo, no se puede excluir por completo este u otros contaminantes como causa de algunos de los eventos adversos.
biopsias de tumores y tejidos de control en serie obtenidas antes y después de la administración de RGD-A-
TNF
proporcionado una oportunidad para correlacionar la exposición al fármaco con el tumor y el tejido normal del tráfico RGD-A-
TNF.
Estos experimentos validan la focalización específica del tumor de la RGD-A-
TNF
en el entorno de los perros con cánceres espontáneos. Hemos observado localización vector en el endotelio vascular del tumor en biopsias de tumores después del tratamiento tomadas 4-6 horas y 4 días después de la administración sistémica de RGD-A-
TNF.
Particular, hubo una ausencia completa del vector en la normalidad biopsias de tejido en todos los perros tratados. Por lo tanto, RGD-A-
TNF
explotación aberrante sistema vascular relacionada con la enfermedad para orientar la terapia de interés, específicamente al tumor. Lo que confirma la seguridad de este sistema de entrega observado por primera vez en nuestros pequeños modelos animales [22]. Consistente con esto, necropsias calientes de perros sacrificados debido a la progresión de la enfermedad mostraron que RGD-A-
TNF
dirigido la vasculatura del tumor, pero no los vasos sanguíneos dentro de los órganos viscerales normales. Es importante destacar que no observamos RGD-A-
TNF Hoteles en cualquiera de los tejidos de control analizados, incluyendo el hígado, mientras que la presencia de RGD-A-
TNF
se ha visto anteriormente en el hígado y bazo de roedores tratados con RGD-A-
TNF
[22]. Estos datos en animales grandes son particularmente valiosos como se consideran los riesgos y beneficios de las estrategias de ejecución Programa Africano en pacientes humanos con cáncer. la orientación eficaz de RGD-A-
TNF
se observó a dosis de 5 x 10
12 a 10
13 TU. Una dosis de 5 x 10
12 TU sido seleccionada como la dosis óptima para el estudio de dosis múltiples, debido al tráfico equivalente, la orientación y la seguridad, así como nuestra incapacidad para producir 1 × 10
13 TU en una oportuna manera. A esta dosis vector de orientación también dio lugar a la expresión mensurable de TNFa humano. Más apoyo a la importancia biológica del tráfico observado de RGD-A-
TNF
junto con la expresión específica del TNFa humano, fue proporcionado por la actividad anti-tumoral objetiva observada en perros que recibieron múltiples tratamientos semanales. respuestas basadas en los criterios RECIST se observaron en dos perros con sarcoma de tejidos blandos y el melanoma metastásico; este tipo de respuestas objetivas del tumor son particularmente relevante, ya que todos los perros en este estudio tenían tumores grandes y voluminosos no eran candidatos para tratamientos locorregionales convencionales como la cirugía o la radioterapia. Especulamos que las respuestas objetivas observadas fueron el resultado de la expresión transgénica TNFa, ya que no se observó actividad en nuestros modelos de ratón de cualquiera Programa Africano no específica o específica null-vector [22].