Extracto
Introducción
aberraciones genéticas dentro del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR ) y la vía se asocia con resultados terapéuticos de los inhibidores de la tirosina quinasa de EGFR (TKIs) en el cáncer avanzado de pulmón no microcítico (CPNM). Sin embargo, el impacto de la quimioterapia en los genes relacionados con el EGFR alteraciones no se ha definido en el CPNM. Nuestro estudio tiene como objetivo investigar el efecto de la quimioterapia neoadyuvante (Neoadj-Chemo) en la activación de mutaciones de EGFR y los genes relacionados con la resistencia a EGFR-TKIs asociados.
Pacientes y métodos
Conjunto combinado de muestras de tumores se obtuvieron de forma retrospectiva de 66 pacientes con CPNM (fases IIb-IIIb) correspondiente al pre- y post-quimioterapia Neoadj. mutaciones de EGFR se detectaron mediante la desnaturalización de cromatografía líquida de alto rendimiento (DHPLC) y confirmados por la tecnología Sistema de amplificación refractario a las mutaciones (ARMS), las mutaciones del gen KRAS, la mutación T790M y la amplificación de c-MET se identificaron utilizando cadena de la polimerasa Reacción de fragmentos de restricción de longitud polimórfica (RFLP-PCR ), los brazos y PCR en tiempo real, respectivamente.
resultados
Antes de Neoadj-Chemo, las mutaciones de EGFR se identificaron en el 33,3% (22/66) de los pacientes con CPNM. Sólo el 18,2% (12/66) de los pacientes lleva a mutaciones de EGFR después Neoadj-quimioterapia (p = 0,013). El valor de pico media de 19 mutaciones de EGFR exón no disminuyó significativamente después Neoadj-Chemo. tasa de mutación KRAS se redujo de 4,6% (3/66) a 3,0% (2/66) con Neoadj-Chemo. A pesar de que el porcentaje total de pacientes que presentan amplificaciones c-MET (6,1% [4/66]) no cambió con Neoadj-Chemo, dos pacientes la transición de negativo a positivo de amplificación de c-MET, y dos pacientes revirtió estos cambios post-Neoadj- Chemo. mutaciones T790M estaban ausentes de todas las muestras.
Conclusión
La quimioterapia neoadyuvante tiende a disminuir la frecuencia de mutación de EGFR mutaciones y genes abajo, lo que sugiere que el análisis de muestras en tiempo real de aberraciones genéticas dentro de las vías de EGFR tener un valor importante para delinear las poblaciones específicas de pacientes y facilitar el tratamiento individualizado
Visto:. Wang S, An T, J Duan, Zhang L, M Wu, Zhou Q, et al. (2013) Las alteraciones en los genes relacionados con el EGFR y el siguiente neo-quimioterapia adyuvante en pacientes chinos con células no pequeñas de cáncer de pulmón. PLoS ONE 8 (3): e51021. doi: 10.1371 /journal.pone.0051021
Editor: John D. Minna, Univesity de Texas Southwestern Medical Center en Dallas, Estados Unidos de América
Recibido: 11 Agosto, 2012; Aceptado: 29 de octubre de 2012; Publicado: 8 Marzo 2013
Derechos de Autor © 2013 Wang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Con el apoyo de subvenciones de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales Distinguidos jóvenes estudiosos (81025012), Programa de Ciencias Naturales de la Fundación general de la Nación (81172235), la Fundación de Desarrollo de la Capitalización (2007-1023), Sistemas de Salud Líder Académico Pekín (22/02/2011) y el Proyecto de Ciencia y Tecnología de Pekín (Z090507017709015), la Fundación Nacional de Ciencia de la Fundación de Ciencias Naturales de china Juvenil (81101726). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
factor de crecimiento epidérmico inhibidores del receptor tirosina-quinasa (EGFR-TKIs) representan terapias personalizadas revolucionarias para pacientes con CPNM, un subconjunto de que llevar a mutaciones de EGFR específicos que son predictivos de la respuesta clínica favorable a EGFR-TKI [1] - [3]. Las mutaciones somáticas en los exones 19 o 21 constituyen aproximadamente el 90% de todas las mutaciones de EGFR de activación, y la identificación de estas mutaciones se pueden aplicar a la elección de la terapia del cáncer de pulmón. Varios de fase III de ensayos clínicos han confirmado que la presencia de mutaciones de EGFR-activación es predictivo de un resultado favorable con EGFR-TKI (es decir, gefitinib y erlotinib), en comparación con la quimioterapia doblete, como terapia de primera línea para CPNM, y tanto en Asia y caucásicos pacientes con CPNM avanzado [4] - [7]. Todo lo anterior sugiere que el estado de mutación del EGFR gobierna el resultado de EGFR-TKI, independientemente de su origen étnico [8].
Se determina el resultado de la terapia EGFR-TKI no sólo por la presencia de EGFR sensibilizar a las mutaciones, sino también por resistente al EGFR o su derivación o genes relacionados aguas abajo aberraciones. mecanismo concreto, EGFR T790M mutación, se identificó de ambas adquiridas y resistencia primaria EGFR-TKI [9], y la amplificación del oncogén c-MET [10] se describen como la resistencia adquirida, mientras que KRAS mutación se asocia con la resistencia primaria [11] . Estos hallazgos han llevado a los ensayos clínicos que aplican nuevas terapias dirigidas a los mecanismos de resistencia, así como los resultados preliminares prometedores en estudios de laboratorio y clínicos.
La detección de mutaciones de EGFR se recomienda actualmente para la selección de pacientes que podrían beneficiarse de tratamiento de primera línea de EGFR-TKI. Sin embargo, se desconoce si el estado de mutación del EGFR y los genes relacionados con aberraciones de resistencia alta-baja (
es decir.
, Las mutaciones KRAS, T790M, o amplificación de c-MET) son consistentes en muestras pre y post-quimioterapia. Por lo tanto, es necesario evaluar el impacto de la quimioterapia en los perfiles moleculares de tumores. Chin et al informaron de que la exposición previa a agentes de platino puede reducir el beneficio del tratamiento posterior con EGFR-TKI para una célula de NSCLC de EGFR mutante erlotinib-sensible a través de la vía de supervivencia fosfatidilinositol 3-quinasa /AKT [12]. Nuestro estudio reciente investigó la influencia de la quimioterapia en EGFR mutado frecuencias utilizando dos cohortes incluyendo el ADN de plasma en NSCLC avanzado y las muestras pre y post-operatorias de tejidos en pacientes con CPNM localmente avanzado, y exploró el posible mecanismo de la quimioterapia relacionados con la alteración de mutación del EGFR. Los resultados sugieren que la quimioterapia puede reducir E
frecuencias TFG
de mutación en pacientes con NSCLC, un resultado probable de una respuesta preferencial de sub-clones con mutaciones de EGFR en tumores con poblaciones de células tumorales heterogéneos [13]. Por lo que sabemos, pocos estudios han evaluado muestras clínicas de la influencia de la quimioterapia en los genes de resistencia a EGFR-TKI relacionados.
Por lo tanto, la hipótesis de que la quimioterapia podría influir en la frecuencia de mutación de EGFR mutación y aguas abajo genes, por lo tanto, también podría causar impacto en el papel de estos genes que funcionan como marcadores selectivos en el tratamiento individualizado de EGFR-TKI. Como continuidad de nuestro estudio profase, el estudio actual exploró el impacto de la quimioterapia en tanto EGFR activación de mutaciones, en especial, las variaciones evaluados en cantidad mutación en el exón EGFR 19 y la importancia clínica, y aún más investigaron posibles alteraciones de los genes relacionados con la resistencia a EGFR-TKI , como T790M, KRAS y c-MET aberraciones usando la misma cohorte de muestras de tejido tumoral emparejados de pre y post-quimioterapia Neoadj de pacientes en estadio IIb-IIIB.
pacientes y métodos
paciente
Los pacientes que participaron en este estudio retrospectivo eran mayores de 18 años y exhibió el estadio IIB-IIIB con enfermedad medible dimensionalmente antes de la cirugía. Los pacientes elegibles también tenían un estatus ECOG (Eastern Cooperative Oncology Group) el rendimiento de 0-2 y habían recibido 2-4 ciclos de quimioterapia-Neoadj sin ningún tratamiento previo con quimioterapia y /o el tratamiento biológico inmunológica. Todos los pacientes dieron su acertaron muestras de tejido de biopsias realizadas pre-Neoadj Chemo y desde resecciones post-quimioterapia Neoadj.
Sesenta y seis pacientes que fueron seleccionados de la base de datos establecida en 1999, incluyendo más de 1.900 pacientes con datos clínicos cumplieron los criterios anteriores y fueron tratados en el hospital de cáncer de Beijing entre septiembre de 2001 junio de 2010 (de acuerdo con el requisito de la inscripción se trata de un período de 9 años, pero la mayoría de las muestras se recogieron 2005-2010). Los regímenes de quimioterapia disponibles implicados fármacos basados en platino (
por ejemplo.
, Cisplatino o carboplatino en combinación con gemcitabina o taxanos). La respuesta radiográfica a Neoadj-Chemo se determinó utilizando el RECIST (Criterios de evaluación de respuesta en tumores sólidos) directrices [14]. Todos los pacientes dieron su consentimiento informado para el análisis de biomarcadores escritos en su hospitalización por primera vez. El protocolo de estudio fue aprobado por el Comité Institucional de Ética del Hospital de Cáncer de Beijing.
Declaración de Ética
Todos los pacientes dieron su consentimiento informado para el análisis de biomarcadores escritos. El protocolo de estudio fue aprobado por el Comité Institucional de Ética del Hospital de Cáncer de Beijing. No se realizó la investigación fuera de nuestro país de residencia. Todos los participantes prestan su consentimiento informado por escrito para participar en este estudio. Nuestros comités de ética aprobado este procedimiento de consentimiento. El individuo en este manuscrito ha dado su consentimiento informado por escrito para publicar estos detalles del caso.
recogida y extracción de muestras de ADN
Los tejidos tumorales obtenidos antes y después de los tratamientos de quimioterapia-Neoadj fueron procesadas para el aislamiento de ADN genómico utilizando kits de ADN FFPE EZNA (Omega Biotek, EE.UU.). Para evitar la influencia de la necrosis de los tejidos en el EGFR Neoadj-inducida por la quimioterapia y los genes relacionados con la aberración detecciones, muestras postoperatorias fueron disecados de macro-secciones de tejido incluidas en parafina quirúrgicos para asegurar que sólo se obtuvieron tejidos tumorales. contenidos tumorales se registraron para cada muestra utilizando secciones de tejido adyacentes.
EGFR detección de mutaciones mediante la desnaturalización de cromatografía líquida de alto rendimiento (DHPLC) y el Sistema de amplificación refractario a las mutaciones (ARMS)
Se analizaron todas las muestras pareadas en la misma condición con el fin de igualar las condiciones de detección. El exón 19 de EGFR o deleción del exón 21 mutaciones se detectaron sustituidos de acuerdo con el método descrito previamente por nosotros [15].
ARMAS, un método más sensible, se utilizó para volver a evaluar los casos con discrepancias de mutación de EGFR pre -. y post-quimioterapia neoadyuvante [13]
Un análisis semi-cuantitativo de exón 19 abundancia mutación se realizó mediante el cálculo de la proporción entre las alturas de los picos de mutante (M) y de tipo salvaje /normal (W) productos (es decir, M /W). Este análisis no se extendió al exón 21 porque el M y W picos solapan en este exón.
PCR-RFLP para las mutaciones KRAS
PCR-RFLP se realizó para analizar el estado de mutación KRAS según la norma protocolos [16]. Los cebadores de PCR fueron diseñados para amplificar secuencias que rodean los codones 12 y 13 en el exón 1 de KRAS; estos codones están involucrados en aproximadamente el 85% de la activación de mutaciones de KRAS.
Cuantitativo en tiempo real PCR para c-MET
pares de muestras tumorales fueron analizados para c-MET número de copias de genes utilizando en tiempo real la detección por PCR de acuerdo con protocolos estándar. Una muestra de tumor se definió como la amplificación positiva si su valor de la relación excede los siguientes: media (M) + 2 x desviación estándar (SD) [17]. HCC827 (Homo sapiens (humanos) adenocarcinoma de pulmón, el número ATCC CRL-2868) se utilizó como control negativo.
La amplificación refractaria mutación Sistema de detección de EGFR T790M
La amplificación refractaria Sistema de Mutación (ARMS) la tecnología se utilizó para detectar la mutación T790M. Los criterios del método de detección y discriminación eran según la manufactura (Amoy Diagnóstico Co., LTD).
Se proporcionaron estadísticas
El análisis estadístico
tabulación de frecuencia y de resumen para caracterizar la distribución de los datos. Se aplicó la prueba de McNemar para comparar el cambio de estado de la mutación (
es decir.
, EGFR [incluyendo] Las mutaciones T790M, la mutación KRAS y la amplificación de c-MET) antes y después del tratamiento. Se utilizó la prueba de Cochran-Armitage tendencia para comprobar si el cambio en el estado de la mutación se asocia con el resultado clínico en términos de respuesta parcial, enfermedad estable. Las asociaciones de variables categóricas no apareados se analizaron mediante la prueba de chi-cuadrado, excepto que se utilizó la prueba exacta de Fisher para que los pequeños tamaños de muestra (n & lt; 5 en cualquier celda de la tabla de contingencia). Se aplicó la prueba de suma de rangos de Wilcoxon para comparar la abundancia mutante de EGFR 19 exón entre pre y post-Neoadj Chem. La significación estadística se fijó en un nivel de 0,05. Dos caras pruebas se realizaron en todos los entornos. Todos los cálculos se realizaron con SAS versión 10.0 (SAS Institute, Inc., Cary, NC).
Resultados
Características de los pacientes y el estado de mutación del EGFR
Las características basales de la población de estudio se presentan en la Tabla 1. Los 66 pacientes incluidos 50 varones y 16 mujeres, con un rango de edad de 35-78 años (media de 60 años). Los pacientes incluidos 35 (53,0%) casos de carcinoma de células escamosas, 27 (40,9%) casos de adenocarcinoma, y 4 casos de carcinoma adenoescamosa. Todos los pacientes recibieron quimioterapia Neoadj-; 63 (95,5%) fueron tratados con platino más paclitaxel (mediana de 2 ciclos; rango 2-4 ciclos). Basado en el Comité Común 2009 Americana sobre sistema de cáncer de pulmón tumor-nódulo-metástasis estadificación del cáncer, 9 pacientes fueron diagnosticados como fase IIb, 35 como el estadio IIIA, y 22 en etapa IIIB, antes de la cirugía; y después de la cirugía, 11 como
pstage IIa, 27 como
pstageIIb, 23 como
pstage IIIa, 5 como
pstage IIIb. Con el tratamiento Neoadj-Chemo, 39 de 66 pacientes alcanzaron una respuesta parcial (RP), 27 pacientes fueron clasificados como enfermedad estable (SD), y ninguno mostraron enfermedad progresiva (PD).
variación mutación de EGFR pre y post-quimioterapia Neoadj
Entre los 66 pacientes con CPNM, la tasa de mutación pre-Neoadj-Chemo EGFR fue del 33,3% (22/66), incluyendo 12 pacientes portadores de mutaciones en el exón 19, 9 pacientes con mutaciones en el exón 21, y 1 paciente con mutaciones en ambos exones. Post-Neoadj-Chemo, la tasa de mutación de EGFR se redujo hasta el 18,2% (12/66), incluyendo 7 pacientes con mutaciones en el exón 19 y 5 con mutaciones en el exón 21 (la prueba de McNemar p = 0,013; Figura 1). La consistencia de las mutaciones de EGFR en muestras pre y post-quimioterapia fue de 78,8% (52/66). Con el tratamiento Neoadj-Chemo, el estado de transición de EGFR mutante de tipo salvaje en 12 pacientes; lo contrario ocurrió en 2 pacientes
Neoadj-Chemo:. La quimioterapia neoadyuvante; EGFR: mutación de EGFR; KRAS: mutación KRAS; C-MET: C-MET amplificación
En las muestras pre-Neoadj-Chemo, la tasa de mutación de EGFR fue del 55,6% (15/27) en el adenocarcinoma, que es más alto que mide en pacientes con células escamosas El carcinoma (17,1% [6/35]). Sin embargo, las tasas de mutación de EGFR en los pacientes que se sometieron a Neoadj-Chemo se redujo a 33,3% (9/27) en el adenocarcinoma y el 8,57% (3/35) en el carcinoma de células escamosas, con una diferencia no significativa (P & gt; 0,05). Los cuatro pacientes con carcinoma adenoescamosa compuestas demasiado pequeño de un grupo para el análisis estadístico (Tabla 1).
Relación entre la altura de los picos DHPLC asociados con mutación de EGFR en el exón 19
Para evaluar las variaciones en la cantidad de mutación , las mutaciones en el exón 19 de EGFR eran semi-cuantitativamente detecta a partir de 13 pacientes portadores de mutaciones en este exón (Figura 2). La relación de alturas de los picos entre pre y post-quimioterapia Neoadj cambió en todos los pacientes. Tras Neoadj-Chemo, el exón 19 mutaciones hecho la transición de positivo a negativo en 7 pacientes. Las alturas de los picos mostraron una marcada disminución en tres pacientes, mientras que se levantaron en otros tres pacientes. La mediana de la relación M /W pre-Neoadj-Chemo fue de 0,50; la proporción se redujo a 0,24 después de la Neoadj-Chemo, una diferencia no significativa (p = 0,078).
variación mutación de EGFR y la eficacia de Neoadj-Chemo
Se evaluaron todos los pacientes por su respuesta después de Neoadj-Chemo. 39 pacientes (59,1%) alcanzaron PR, 27 pacientes (40,9%) alcanzaron SD, y ninguno exhibido PD (Tabla 1). Entre los 66 pacientes, 12 pacientes EGFR 'cambiado de mutación de tipo salvaje después del tratamiento, 2 casos tenían cambio reverso, 52 permanecieron tipo salvaje (n = 42) o mutación (n = 10) pre y post estado neoadj- Chemo. Las tarifas de PR en estos subgrupos eran 58,33% (7/12), 50% (1/2), y 59,6% (31/52), respectivamente. La respuesta clínica no se asoció significativamente con el cambio de estado de la mutación de EGFR (p = 0,13, prueba de Cochran-Armitage tendencia).
KRAS mutación variación pre y post-quimioterapia Neoadj
La KRAS tasa de mutación varió de 4,5% (3/66) pre-Neoadj-Chemo a 3,0% (2/66) después del tratamiento (Tabla 2). La consistencia de las mutaciones KRAS pre- y post-quimioterapia fue del 95,5% (63/66). Dos pacientes conservaron sus estados de mutación KRAS después del tratamiento, mientras que un paciente con mutación KRAS la transición al estado salvaje después del post-Neoadj-Chemo.
c-MET amplificación pre y post-quimioterapia Neoadj
La relación total de la amplificación de c-MET no cambió con el tratamiento Neoadj-Chemo (6,0% [4/66]) (Tabla 2). Sin embargo, 4 de 66 pacientes mostraron un cambio en el estado de amplificación de c-MET. En concreto, dos casos la transición de la amplificación negativo a -positivo, y dos exhiben la transición inversa. Dos pacientes que muestran la amplificación de c-MET pretratamiento conservaron su estado de amplificación después del tratamiento. La consistencia de c-MET pre y post-amplificación Neoadj-Chemo fue del 93,9% (62/66). Curiosamente, dos pacientes cuya c-MET estado de amplificación cambian de positivo a negativo PR obtenido con Neoadj-Chemo. Los dos pacientes con c-MET cambia de negativo a positivo exhibieron SD con Neoadj-Chemo.
pre-estado de la mutación T790M y post-quimioterapia Neoadj
mutaciones T790M estaban ausentes de todas las muestras, como se determina utilizando la tecnología ARMS.
Discusión
los estudios anteriores no han evaluado si los perfiles moleculares de los tejidos tumorales cambian entre el diagnóstico inicial y después de la quimioterapia. En base a los resultados del estudio profase [13], hemos demostrado, además, que Neoadj-Chemo afecta no sólo al estado de la mutación EGFR, sino también el estado de la mutación aberrante de genes abajo o derivación relacionados EGFR en pacientes con CPNM. Estos resultados apoyan la heterogeneidad molecular relacionada con la quimioterapia predictores
están bien establecidos mutaciones de EGFR de los resultados de la terapia de primera línea EGFR-TKI [4] -. [7]. Sin embargo, no estaba claro si el estado de mutación del EGFR detectó utilizando muestras inicialmente de diagnóstico también predice con precisión de segunda o tercera línea de terapias EGFR-TKI. En la actualidad, la mayoría de los pacientes chinos con CPNM avanzado se someten a EGFR-TKI sólo como terapias de segunda o tercera línea, posiblemente a causa de las pólizas de seguros médicos. Por lo tanto, es importante conocer el impacto de la quimioterapia de primera línea en el estado de mutación de EGFR para guiar la selección de la terapia de segunda línea EGFR-TKI. Una alta incidencia de alteraciones en el estado de mutación del EGFR con quimioterapia podría justificar una segunda biopsia antes de iniciar-segunda o tercera línea EGFR-TKI
.
En nuestro estudio, la tasa global de mutación del EGFR disminuyó significativamente en post muestras de tejido Neoadj-quimio en comparación con los pre-Neoadj-quimioterapia en pacientes con NSCLC en estadio temprano. Detectamos una tasa discordante de 18,2% (12/66), que incluyó a pacientes que la transición de mutación positiva del EGFR-negativos a (n = 10) y de marcha atrás (n = 2). No hubo diferencias significativas se han identificado en relación con la incidencia de mutaciones de EGFR con el estadio temprano-a-avanzado de NSCLC [18]. por lo tanto, que presume que las alteraciones relacionadas con el Neoadj-Chemo de mutación de EGFR observado en las primeras etapas de NSCLC podrían ser análogos a los cambios inducidos por la quimioterapia de primera línea en casos de NSCLC avanzado. Nuestros resultados sugieren que el estado de la mutación EGFR evaluó antes de la quimioterapia puede no reflejar con precisión el estado de la mutación posterior a la quimioterapia, que es compatible con un tumor de perfiles "en tiempo real" en la terapia personalizada del NSCLC.
Los mecanismos que contribuyen a los cambios relacionados con la quimioterapia en el estado de mutación de EGFR siguen sin estar claros. mutaciones de EGFR intra-tumoral heterogéneos y diferentes sensibilidades de mutante EGFR y células tumorales de tipo salvaje a la quimioterapia pueden estar asociados con alteraciones en el estado general de la mutación EGFR después de la quimioterapia [4], [19]. Yatabe et al [20] sugiere que, en adenocarcinomas de pulmón, distribuciones heterogéneas de mutaciones de EGFR a través de las células son extremadamente raros. heterogeneidad Sin embargo, otros estudios han observado en la expresión de genes EGFR, mutación o amplificación entre los tumores primarios y metastásicos o entre focos intra-tumoral, con diferente tasa de discordancia [21] - [23]. Okami et al [24] informó de que los pacientes cuyos tumores se incluye tanto las células EGFR mutado y -wild tenían significativamente más corto de supervivencia libre de progresión después del tratamiento con longitudes de gefitinib en comparación con los pacientes cuyos tumores consistía en sólo las células EGFR mutado. Zhou et al [25] mostró que los pacientes con una alta abundancia introtumoral de mutaciones de EGFR pueden beneficiarse más que aquellos con baja abundancia de mutación del EGFR. Todos estos hallazgos sugieren que la heterogeneidad intratumoral del estado mutacional del EGFR puede afectar el resultado de la terapia EGFR-TKI.
Nuestro estudio previo detectado variaciones en el estado de mutación de EGFR mediante microdisección de diferentes focos de 85 pacientes con CPNM avanzado después de la cirugía paliativa resección. Los resultados mostraron que aproximadamente el 30% de las muestras contenidas tanto las células EGFR mutante y de tipo salvaje con la proporción de células mutantes de EGFR que van desde 1% a 90% [13]. ensayos preclínicos y clínicos múltiples indican que los mutantes de EGFR fueron más sensibles no sólo a EGFR-TKI sino también a la quimioterapia, en comparación con aquellos que llevan EGFR de tipo salvaje [4], [21], [26]. Especulamos que la quimioterapia puede matar selectivamente e inhiben clones mutantes dentro del tumor, mientras que los clones que exhiben de tipo salvaje EGFR pueden proliferar en abundancia después de la quimioterapia. Dicho fenómeno podría explicar por qué el estado de mutación de EGFR se desplazó de EGFR mutante de tipo salvaje después de la quimioterapia. Mientras que las células de mutación frecuentes muy bajas (1% ~ 5%) se encuentra sólo en las muestras microdissected [13], que pueden estar asociados con la variación de EGFR de tipo salvaje a la mutación después de la quimioterapia. Estos pequeños clones de mutación de EGFR pueden ser seleccionados y proliferaron después de la exposición a la quimioterapia.
La discordancia de estado de mutación de EGFR entre la biopsia y muestras resecado quirúrgicamente pre y post-quimioterapia Neoadj, respectivamente, también se puede atribuir a diferencias de muestreo resultantes de heterogeneidad intra-tumoral. En concreto, las pequeñas muestras de biopsia con materiales limitados podrían no representar las características biológicas completa del tumor, y las proporciones minúsculas de células mutantes pueden ser pasados por alto. Sin embargo, el presente estudio observó una mayor incidencia de aberraciones de genes relacionados con EGFR en muestras de biopsia de pre-Neoadj-quimio en comparación con las muestras de cirugía de resección posterior a Neoadj-Chemo. Esto sugiere que la discordancia de estado de la mutación EGFR observó en las muestras de pre y post-quimioterapia Neoadj no derivó de sesgo de muestreo.
Hemos demostrado que el tratamiento Neoadj-quimioterapia de los pacientes con CPNM afectado no sólo EGFR estado de la mutación, sino también aberraciones en los genes aguas abajo relacionadas, incluyendo KRAS y c-MET. La tasa de mutación KRAS fue del 4,6% (3/66) de pre-Neoadj-Chemo y disminuyó a 3,0% (2/66) después de la terapia. Aunque la proporción de amplificación de c-MET pre y post-quimioterapia Neoadj no cambió (6,1% [4/66]), 4 pacientes mostraron cambios. En concreto, dos casos la transición de la amplificación negativa a -positivo con Neoadj-Chemo, y dos pacientes mostraron el cambio inverso. Nuestros resultados sugieren que existen c-MET y KRAS aberraciones de genes en muestras de tejido sin tratar en las frecuencias bajas; esto es consistente con los estudios realizados por Turke et al [27] y Maheswaran et al [28]. Junto con las alteraciones observadas mutación de EGFR, estos resultados sugieren que la repetición de biopsias de tumores durante el curso de la enfermedad de un paciente puede guiar mejor la elección del régimen terapéutico.
No podemos explicar completamente los mecanismos potenciales que contribuyen a las alteraciones en estos resistencia- genes relacionados durante el curso de la quimioterapia. Varios estudios han informado recientemente de alteraciones similares en EGFR genes de resistencia [27] - [30]. Sequist et al [29] realizaron un análisis longitudinal de los cambios genéticos y fenotípicos en 37 pacientes con NSCLC erlotinib resistentes portadores de mutaciones de EGFR. El uso de biopsias seriadas, los autores informaron que T790M y PIK3CA (, polipéptido alfa catalítica fosfoinositida-3-quinasa) mutación se perdieron en ausencia de presión selectiva continua de los inhibidores de EGFR. Dichos cánceres pueden llegar a ser sensible a una segunda ronda de tratamiento con inhibidores de EGFR. A nuestro entender, este estudio utilizó por primera vez para examinar biopsias repetidas de forma dinámica el cambio en el genotipo y el fenotipo con EGFR-TKI y quimioterapia. Chin et al informaron de que la exposición previa a agentes de platino podría afectar a la respuesta posterior a erlotinib en un modelo de cultivo celular de una línea celular de NSCLC de EGFR mutante erlotinib sensible a [12]. Esto ocurre a través de una vía PI3K /AKT persistentemente activado y se ve facilitada por una reducción inducida por cisplatino en PTEN (fosfatasa y tensina homólogo) función. Los mecanismos implicados en este cambio relacionada con la quimioterapia pueden ser profundas, y la epigenética pueden desempeñar un papel importante. Este objeto de nuevas investigaciones.
Hemos encontrado que la mutación de EGFR T790M estaba ausente en las dos muestras pre y post-quimioterapia Neoadj. Es incompatible con las conclusiones de Maheswaran et al [28] y Rosell et al [31] que informó de que la mutación T790M se pudo detectar en muestras pretratadas con el tumor biopsia. Actualmente existen dos hipótesis para explicar el mecanismo de la mutación T790M. La hipótesis de la resistencia adquirida pretende que la exposición a EGFR-TKI induce una segunda mutación puntual, lo que resulta en un cambio de treonina a metionina en la posición 790 de EGFR. Alternativamente, la hipótesis de resistencia selectiva sugiere que la mutación T790M podría existir en pacientes como pequeños clones antes del tratamiento; estos clones resistentes pueden proliferar después se expone a gefitinib o erlotinib. Sin embargo, en nuestro estudio, la ausencia de la mutación T790M en muestras tanto de pre y post-quimioterapia Neoadj se ha confirmado de forma independiente por Amoy Diagnóstico Co., LTD. Posible razón de la inconsistencia de estatus T790M informado por nosotros y Maheswaran et al [28] puede estar relacionada con las diferencias étnicas en determinados perfiles moleculares, que tienen que ser validados en estudios adicionales
Las limitaciones fueron que:. Este estudio es una pequeña muestras y estudio retrospectivo y los pacientes con carcinoma de células escamosas (CCE) en este estudio representan el 53%. Ex estudio mostró la tasa de mutación de SQC en los caucásicos no es más que 3,6% [32]. Sin embargo, en la población NSCLC avanzado chino, tasa de mutación de los pacientes SQC fue mucho mayor que la de los pacientes caucásicos (12-20%) [33] - [34], que fue consistente con los resultados de nuestro centro (17,8%) [35]. En el estudio actual, la tasa de mutación de carcinoma de células escamosas del 23,5%, esto es justo alrededor del nivel de la población china.
Conclusión
Se evaluaron las variaciones en las mutaciones de EGFR T790M (incluida), mutaciones de KRAS amplificación, y c-MET tratamiento pre y post-quimioterapia Neoadj. Nuestros resultados confirman que la quimioterapia podría afectar perfiles de biomarcadores moleculares e indirectamente indicar la presencia de la heterogeneidad del tumor. Por lo tanto, los efectos de los tratamientos sobre el perfil del tumor deben ser evaluados antes de tomar decisiones relacionadas con información de segunda o tercera línea terapias EGFR-TKI para pacientes con CPNM. La preparación de perfiles de biomarcadores moleculares en tiempo real para EGFR-TKI se sugiere para delinear las poblaciones específicas de pacientes y facilitar un tratamiento individualizado.
Reconocimientos
Agradecemos al Dr. Keneng Chen y su equipo, de los cirujanos Departamento de cirugía Torácica hospital Cancer & amp Beijing; Instituto, para proporcionar parte de los especímenes para nuestra investigación; El Dr. Wang Ning, radiólogo del Departamento de Cáncer del Hospital & amp Beijing Radiología; Instituto, por su contribución a la evaluación de la respuesta; y el Sr. Guoshuang Feng, estadístico del Centro Chino para el Control y la Prevención de Enfermedades, por su contribución al análisis de estadísticas.