Se han reportado
Extracto
Los microARN (miRNA) a desempeñar un papel clave en la oncogénesis. Las variaciones genéticas en los genes miARN procesamiento de los genes miARN y sitios de unión pueden afectar a la biogénesis de miARN y las interacciones de los genes miARN-mRNA, por lo tanto, la promoción de la tumorigénesis. En el presente estudio, la hipótesis de que los polimorfismos potencialmente funcionales en genes miARN procesamiento pueden contribuir al cáncer de cabeza y cuello susceptibilidad (HNC). Para probar esta hipótesis, genotipo tres SNPs en los genes miARN sitios de procesamiento de miARN genes (rs1057035 unión en 3'UTR de
Dicer
, rs3803012 en el 3'UTR de
RAN Opiniones y rs10773771 en 3 ' UTR de
hiwi
) con un estudio de casos y controles incluyendo 397 casos HNC y 900 controles emparejados por edad y sexo en chino. Aunque ninguno de los tres SNP se asoció significativamente con el riesgo general de HNC, rs1057035 en el 3'UTR de
Dicer
se asoció con una disminución significativa del riesgo de cáncer oral (TC /CC vs TT: OR ajustada = 0,65; IC del 95% = 0,46 hasta 0,92). Además, el ensayo de actividad luciferasa mostró que rs1057035 alelo variante C dio lugar a significativamente más bajos niveles de expresión en comparación con el alelo T, lo que puede ser debido a la relativamente alta inhibición de hsa-miR-574-3p en
DICER
mRNA . Estos resultados indicaron que rs1057035 situado en 3'UTR de
Dicer
puede contribuir al riesgo de cáncer oral al afectar a la unión de miRNAs a
Dicer
. A gran escala y estudios bien diseñados están garantizados para validar nuestros resultados
Visto: Ma. H, H Yuan, Yuan Z, C Yu, Wang R, Jiang Y, et al. (2012) Las variaciones genéticas en clave de microARN de Procesamiento Los genes y el riesgo de cáncer de cabeza y cuello: un estudio de casos y controles en la población china. PLoS ONE 7 (10): e47544. doi: 10.1371 /journal.pone.0047544
Editor: Brock C. Christensen, Escuela Geisel de Medicina de Dartmouth, Estados Unidos de América
Recibido: 23 de mayo de 2012; Aceptado: 12 de septiembre de 2012; Publicado: 11 Octubre 2012
Copyright: © Ma et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado en parte por la prioridad del Programa Académico de Desarrollo de instituciones de educación superior de Jiangsu (TPPA) y la Fundación de Ciencias Naturales de Jiangsu (BK2011764). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
cáncer de cabeza y cuello (CCC), especialmente el carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (CECC), es el sexto cáncer más común en todo el mundo, lo que representa un estimado de 650 000 nuevos casos de cáncer y 350 000 muertes por cáncer cada año [1], [2]. HNC incluye cánceres que se producen en los senos paranasales, cavidad nasal, cavidad oral, faringe y la laringe. El tabaco y el consumo de alcohol se han identificado como asambleas importantes de HNC [1], [2]. Por otra parte, los estudios también informaron que los factores genéticos como los antecedentes familiares y las variantes genéticas en múltiples vías biológicas estuvieron involucrados en el desarrollo de HNC [3]. Sin embargo, el mecanismo exacto de desarrollar HNC no se ha explorado completamente.
Los microARN (miRNA) son una clase de no codificante, los ARN de cadena simple de $ ~ $ 22 nucleótidos y actúan como reguladores de genes a través de la unión al 3 'región no traducida (UTR) de las transcripciones que codifican proteínas, a su vez desencadenar la degradación del ARN mensajero o la represión de traducción [4], [5]. Los estudios han demostrado que miRNAs están involucrados en una variedad de procesos biológicos, incluyendo la regulación del ciclo celular, la diferenciación, el desarrollo, el metabolismo y el envejecimiento. Además, miRNAs han sido también relacionado con la etiología, la progresión y pronóstico del cáncer, y los perfiles de expresión de genes miARN pueden identificar de forma exclusiva los tipos de cáncer [6], [7]. La biogénesis de miRNAs es un proceso complejo que implica múltiples proteínas y ARN [8]. En primer lugar, los grandes precursores primarios de miRNAs (pri-miARN) se transcriben principalmente por la RNA polimerasa II y troceados para miARN precursores (pre-miRNAs) por el microprocesador complejo nuclear que contiene el Drosha RNasa y la proteína de unión de ARN de doble cadena DGCR8 [9] . A continuación, el pre-miARN se transloca al citoplasma a través de la ayuda de Ran-GTPasa y Exportin-5 (XPO5), donde se procesa adicionalmente por un complejo de proteínas incluyendo DICER, lo que lleva a la producción de dúplex de doble hebra de miARN. [ ,,,0],10]. Posteriormente, una hebra de miARN se incorpora en complejo de silenciamiento inducido por ARN (RISC), incluyendo hiwi, GEMIN3 y GEMIN4, que media la expresión de los genes diana. La creciente evidencia muestra que los componentes clave en la ruta biosintética de miARN juegan un papel importante en el desarrollo o el pronóstico de los cánceres humanos incluyendo HNC [11], [12], [13].
Más recientemente, se ha informado que la presencia de polimorfismos de nucleótido único (SNPs) en genes de microARN, su maquinaria de procesamiento y los sitios de unión a la diana afecta a la susceptibilidad al cáncer mediante la modulación de los niveles de expresión de miRNAs y las interacciones de los genes miARN-mRNA [14]. Entre ellos, algunos estudios se han centrado en el efecto de SNPs en los sitios de unión miARN-SNPs (miARN vinculante) de miARN procesamiento de los genes y el riesgo de cáncer. Por ejemplo, un estudio con 130 lesiones orales premalignas (OPL) casos y 136 controles encontró que la variante alelo de rs3742330 en el 3'UTR de
Dicer
aumentó significativamente el riesgo de OPL en los estadounidenses [15]. Otros dos estudios informaron que rs11077 en 3'UTR de
XPO5 Opiniones y rs14035 en 3'UTR de
RAN
se asoció con el riesgo de cáncer de esófago [16] o carcinoma de células renales [17]. Sin embargo, hasta la fecha, no existe un informe sobre la relación entre las variaciones genéticas en los genes miARN la biogénesis y el riesgo HNC. En este estudio, la hipótesis de que los SNP potencialmente funcionales en 3'UTR de miARN biogénesis de los genes podrían modificar el riesgo HNC en la población china. Para probar esta hipótesis, se realizó un análisis de genotipado de tres SNP (rs1057035 en
Dicer
, rs3803012 en
RAN y rs10773771 en
hiwi
) con un estudio de casos y controles de 397 casos de cáncer de HNC y 900 controles sanos en los chinos Han y evaluaron su efecto individual y conjunta sobre el riesgo de HNC. Para aclarar la relevancia funcional de los SNPs seleccionados con cáncer de HNC, que también examinó la actividad luciferasa de
Dicer
rs1057035 (T y C alelos) mediante el ensayo de clonación y el gen reportero, la evaluación de los efectos del SNP en el unión de miRNAs especiales para el 3'UTR de
Dicer
.
Materiales y Métodos
Ética Declaración
Este estudio fue aprobado por el junta de revisión institucional de la Universidad de Medicina de Nanjing. El diseño y el rendimiento de estudio en seres humanos fueron descritos claramente en un protocolo de investigación. Todos los participantes eran voluntarios y completarían el consentimiento informado por escrito antes de participar en esta investigación.
Estudio de la población
A todos los pacientes con CCC confirmado histológicamente y recién fueron reclutados consecutivamente desde el Hospital de Jiangsu odontológico y el primer hospital Afiliado de la Universidad médica de Nanjing, Nanjing, china, desde enero de 2009 hasta abril de 2011. los criterios de exclusión incluyeron segundos tumores primarios o metástasis de cáncer de HNC de otros órganos. 420 casos fueron contactados inicialmente para la participación y aproximadamente el 95% de los casos elegibles (397 casos) aceptaron participar en el estudio. controles sin cáncer de frecuencia adaptada a los casos de la edad (± 5 años) y sexo fueron seleccionados al azar de una cohorte de más de 30.000 participantes en un programa de cribado basado en la comunidad para las enfermedades no infecciosas en la provincia de Jiangsu, China. Todos los participantes eran étnica sin relación genética de la población, los chinos Han. Cuando se obtuvo el consentimiento informado por escrito, un cuestionario estructurado se utilizó por entrevistadores entrenados para recoger información sobre los datos demográficos y la historia de la exposición del medio ambiente, tales como la edad, el sexo, el tabaquismo y el consumo de la bebida. Después de la entrevista, de aproximadamente 5 ml de muestra de sangre venosa se obtuvo de cada participante. Por último, un total de 397 casos y 900 controles completó la entrevista y donó la muestra de sangre.
selección SNP y genotipado
Ocho biogénesis de los genes miARN clave (
Drosha
,
DGCR8
,
XPO5
,
Dicer
,
hiwi
,
GEMIN3
,
GEMIN4 Opiniones y
RAN
) fueron seleccionados a través de una extensa búsqueda en la literatura. Para cada gen, se utilizó primero la base de datos NCBI dbSNP (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/construir 131) para buscar SNPs que localiza en 3 'UTR de los genes y se encontró 17 SNPs con menor frecuencia alelo (MAF ) & gt; 0,05 en la población china. Entonces, dos herramientas de análisis basadas en la Web se utilizaron para predecir el efecto de 17 SNPs en los genes miARN unión (http://snpinfo.niehs.nih.gov/snpfunc.htm; http://miracle.igib.res.in/dbSMR se mantuvieron) [18], [19] y sólo 4 SNPs con hallazgos consistentes en ambas herramientas. Entre estos SNPs (rs11077, rs1057035, rs10773771 y rs3803012), rs11077 fue excluido debido a que la búsqueda aún más por la base de datos miRBase (http://www.mirbase.org/search.shtml) mostró que este SNP no se encuentra en la región de unión para cualquier miRNA. Como resultado, hemos identificado 3 SNPs vinculante miARN-en tres genes (rs1057035 en
Dicer
, rs3803012 en
RAN y rs10773771 en
hiwi
). Entre ellos, rs1057035 se predijo que la influencia tiene-miR-574-3p vinculante, influencia rs3803012 ha-miR-199a-3p vinculante y tiene influencia 10773771-MIR-1264 unión
(*, P & lt;. 0,05; **, P & lt;. 0.001)
ADN genómico se aisló de los leucocitos de sangre venosa por digestión con proteinasa K y extracción con fenol /cloroformo. El genotipado de SNP se realizó mediante el uso de ensayo de discriminación alélica TaqMan en un sistema ABI 7900 (Applied Biosystems, Foster City, CA). La genotipificación se realizó sin conocer de casos o de control de estado de los sujetos, y dos controles negativos en cada formato de 384 pocillos se utilizaron para el control de calidad. Los resultados de genotipado se determinaron mediante el uso de SDS 2,3 de discriminación alélica Software (Applied Biosystems). La concordancia alcanzó el 100% de los duplicados de 5% de las muestras para cada SNP.
Ensayo
reportero de luciferasa para determinar el efecto de los genes miARN vinculante sobre la expresión de Dicer
La región 3'UTR del
DICER
que contiene los rs1057035 sitio de reconocimiento putativo se amplificó a partir del ADN de la muestra, a continuación, se clonó en el PMIR-INFORME
TM (Applied Biosystems) vector con digestiones Mlu I y Hind III. Los cebadores fueron: GTAGACGCGTTCAACAGCAAACTTCAGCC (sentido) y TCCAAAGCTTGGCAGGGTATCAGAATCTTT (antisentido). Los plásmidos que contienen los diferentes alelos de rs1057035 se generaron utilizando mutagénesis específica de sitio. Todas las construcciones utilizadas en este estudio fueron asignadas de restricción y se secuenció para confirmar su autenticidad.
TCA-8113 (una línea celular de carcinoma de células escamosas oral humana) [20], 293T (una línea celular de riñón embrionario humano) y Hela células (una línea celular de carcinoma de cuello uterino humano) se cultivaron en medio de Eagle modificado por Dulbecco con alto contenido de glucosa (Gibco) suplementado con suero bovino fetal inactivado por calor al 10% (Gibco) y 50 ug /ml de estreptomicina (Gibco) en un incubador a 37 ° suplementado con 5% de CO2. Las células se sembraron a 1 x 10
5 células por pocillo en placas de 24 pocillos (BD Biosciences, Bedford, MA). Veinticuatro horas después de la galvanoplastia, las células fueron transfectadas por Lipofectamine 2000, de acuerdo con la sugerencia del fabricante (Invitrogen). El
Dicer
plásmidos luciferasa 3'UTR (diferentes alelos) y sintetizados químicamente hsa-miR-574-3p madura se cotransfectaron respectivamente. El plásmido pRL-SV40 (Promega) se cotransfectó como un control de normalización. Seis repeticiones para cada grupo y el experimento repitieron al menos tres veces. Después de 24 horas de incubación, se recogieron las células y se analizó la actividad de la luciferasa con el sistema de ensayo Dual-Luciferase Reporter (Promega).
El análisis estadístico
El equilibrio de Hardy-Weinberg fue probado por una bondad -de-ajuste χ
2 de prueba para comparar las frecuencias genotípicas observadas con las esperadas entre los sujetos de control. Las distribuciones de las variables seleccionadas demográficos, factores de riesgo y las frecuencias de los genotipos variantes entre los casos y los controles fueron evaluados utilizando la χ
2 test. Las asociaciones de los genotipos variantes con riesgo HNC se estimaron mediante el cálculo de la odds ratio (OR) y los intervalos de confianza del 95% (IC) de ambos análisis de regresión logística univariante y multivariante. La heterogeneidad entre los subgrupos se evaluó con la prueba Q basados en Chi-cuadrado y la heterogeneidad se consideró significativa cuando
P Hotel & lt; 0,05. Las posibles interacciones gen-gen y gen-medio ambiente (es decir, el tabaquismo y el estado de la bebida) fueron evaluadas por los modelos de regresión logística. Todos los análisis estadísticos se realizaron con el software Statistical Analysis System (SAS V.9.1 Instituto, Cary, NC). Dos lados pruebas se utilizan generalmente para el análisis estadístico y
P
. & Lt; 0,05 fue considerado como el nivel de significación estadística
Resultados
Las características seleccionadas de los casos y los controles se muestran en la Tabla 1. No hubo diferencias significativas en la distribución de la edad, el sexo y el tabaquismo entre los casos y los controles (
P = 0,637
, 0,263 y 0,580, respectivamente), y la edad media fue similar (59,98 ± 11,94 años para los casos y 60.65 ± 7,99 años para los controles). Como era de esperar, no se observaron más bebedores en el grupo de casos en comparación con el que en el grupo control (45,1% vs. 32,2%,
P
& lt; 0,001). De los 397 casos, 293 (73,8%) fueron con el tumor de la cavidad oral, 6 (1,5%) con orofaringe, 86 (22,2%) con laringe y 10 (2,5%) con otros. Además, 335 casos (84,4%) presentaron carcinoma de células escamosas.
SNPs se encuentran en equilibrio de Hardy-Weinberg (
P
= 0,14 para rs1057035 y
P = 0,73 para
rs3803012, respectivamente), excepto rs10773771 (
P
= 0,01). Las distribuciones de genotipo y el alelo de
Dicer
rs1057035,
hiwi
rs10773771 y
RAN
rs3803012 en los casos y los controles se muestran en la Tabla 2. El único locus análisis revelaron que las distribuciones genotípicas de estos tres polimorfismos no fueron significativamente diferentes entre los casos y los controles en general (
P = 0,080
para rs1057035,
P = 0,397
para rs3803012 y
P = 0,539 para
rs10773771, respectivamente). Para investigar más a fondo los efectos modificadores de tres variantes de riesgo de HNC con diferentes sitios de tumor, se realizó el análisis de la estratificación por cavidad oral y cáncer de la cavidad no orales. Como se muestra en la Tabla 2, la variante rs1057035 genotipos se asociaron con un riesgo significativamente menor de cáncer oral (TC vs TT: OR ajustada = 0,65, 95% CI = 0,46 hasta 0,93, ajustado
P = 0,019
; TC /CC vs TT: OR ajustada = 0,65, 95% CI = ,46-,92, ajustado
P = 0,016
; modelo aditivo: OR ajustada = 0,67; IC del 95% = 0,48-0,93; ajustado
P = 0,018
). No se observó ninguna de las asociaciones significativas entre los genotipos de otros dos SNPs (rs3803012 A & gt; G, rs10773771 G & gt; A). y el riesgo de HNC con diferentes sitios (Tabla 2) guía
Hemos llevado a cabo aún más el análisis de la estratificación en el asociaciones entre rs1057035 y el riesgo de cáncer oral por edad, sexo, fumar, beber y la histología. Como se muestra en la Figura 1, la disminución del riesgo de cáncer oral asociada a la variante genotipos CT /CC fue significativa entre los más jóvenes (OR ajustada = 0,61; IC del 95% = 0,38 a 0,97), las mujeres (OR ajustada = 0,53; IC del 95% = desde 0,30 hasta 0,95), los no fumadores (OR ajustada = 0,50; IC del 95% = 0.30-0.83) y los no bebedores (OR ajustada = 0,54; IC del 95% = 0,33 a 0,89), en comparación con el genotipo TT. Sin embargo, la heterogeneidad de ensayo mostró que no hubo heterogeneidad significativa (
P Hotel & gt; 0,05) en cada dos estratos. También se evaluó el efecto de la adición de alcohol, el tabaquismo y el sexo sobre RUP y se encontró que éstos hubo diferencias si estas variables se incluyeron en los modelos o no incluido (Tabla S1). Además, no se observaron resultados significativos para el gen-gen o genes y medio ambiente (es decir, de tabaco y estado de alcohol) interacciones (datos no mostrados).
Debido a rs1057035 mostró asociación significativa con el riesgo de cáncer oral y se predijo que localice en el supuesto sitio de unión miARN (HSA-mir-574-3p), es interesante comprobar si rs1057035 influye en la orientación de hsa-miR-574-3p a
Dicer
ARNm in vitro. Por lo tanto, hemos generado genes informadores para
Dicer
3'UTR (C o T alelo) que se cotransfectaron con sintetizada químicamente hsa-miR-574-3p madura en líneas celulares Tca8113 orales de carcinoma de células escamosas. Como se muestra en la Figura 2, la cotransfección de hsa-miR-574-3p inhibió significativamente la expresión del reportero llevar rs1057035 C alelo pero no el alelo T (línea celular 293T: 0.057 ± 0.002 para C alelo frente a 0,333 ± 0,089 para el alelo T ,
P = 0,032
; línea celular Hela: 0,041 ± 0,007 para el alelo C frente a 0,357 ± 0,257 para el alelo T,
P = 0,030
; línea celular Tca8113: 0,072 ± 0,067 para el alelo C frente a 0,833 ± 0,120 para el alelo T,
P Hotel & lt; 0,001). Los resultados sugieren que el alelo variante rs1057035 podría afectar diferencialmente la focalización de hsa-miR-574-3p a 3'UTR de
Dicer Hoteles en células de cáncer oral.
Discusión
en este estudio de casos y controles de 397 pacientes con CCC y 900 controles sin cáncer en una población china, que investigó las asociaciones entre los tres SNPs en 3'UTR de miARN genes de la biosíntesis y el riesgo de HNC. Aunque no hemos encontrado evidencia de un efecto principal de cada SNP en el riesgo global HNC, el análisis de subgrupos de HNC mostró que los genotipos variantes de rs1057035 estaban asociados con el riesgo de que surja HNC en la cavidad oral. análisis funcionales adicionales mostraron que rs1057035 alelo C dio lugar a la actividad de luciferasa significativamente menor, en comparación con el alelo T. Estos resultados sugirieron, por primera vez, que los polimorfismos potencialmente funcionales de
DICER
pueden jugar un papel en el desarrollo de HNC, especialmente de aquellos tumores que surgen en la cavidad oral.
DICER es una enzima responsable de la escisión de precursores miARN y previamente ha sido implicado en el proceso oncogénico de varios tipos de cáncer [21], [22], [23]. La evidencia indica que
Dicer
pueden tener diferentes roles en el proceso tumoral en diferentes tipos de cáncer. Por ejemplo, algunos estudios mostraron que los niveles más bajos de
Dicer
expresión de ARNm se asociaron con el desarrollo de cáncer de pulmón [24] y el pronóstico del cáncer de ovario [11]. Sin embargo, los estudios también demostraron que los niveles elevados de expresión de
DICER
se correlaciona con un aumento de la proliferación celular de células de cáncer oral [12]. En nuestro estudio, encontramos que la variante rs1057035 alelo C llevado a niveles significativamente más bajos de expresión de
Dicer
y exhibió un efecto protector sobre la susceptibilidad del cáncer oral, que fueron consistentes con los hallazgos en las células de cáncer oral [12]. Además, hemos encontrado que el efecto protector de los genotipos de la variante rs1057035 fue estadísticamente significativa en algunos subgrupos, como las mujeres, los no fumadores y los no bebedores. Sin embargo, prueba de heterogeneidad no mostró una heterogeneidad significativa (P
Restaurant & gt; 0,05). Entre cada dos estratos, lo que implica que no hubo modificación del efecto de riesgo por estas variables investigadas
El SNP (rs1057035 significativa ) identificados en nuestro estudio está situado en el 3 'UTR de
Dicer Opiniones y se predice que afectan la unión de hsa-miR-574-3p. Hsa-miR-574-3p se conserva evolutivamente a nivel de nucleótidos de las moscas a los seres humanos. Aunque la función de hsa-miR-574-3p no está claro, se predice para apuntar varios cientos de genes humanos [25]. Nuestros resultados indican que el
Dicer
alelo rs1057035 C podría afectar a la focalización de hsa-miR-574-3p y dar lugar a la disminución de expresión de
Dicer
mRNA en células de cáncer oral, que puede ser un posible mecanismo subyacente de la asociación observada entre rs1057035 y la disminución del riesgo de cáncer oral. Sin embargo, no se encontró ninguna asociación entre rs1057035 y el riesgo total de cáncer de HNC o el riesgo de cáncer no oral en nuestro estudio. La patogénesis del cáncer oral puede ser ligeramente diferente de otros cánceres que se originan en la cabeza y el cuello. Por ejemplo, recientes estudios epidemiológicos y moleculares han identificado los tipos de alto riesgo del virus del papiloma humano (VPH) como posible factor etiológico de HNC, pero es más prominente en el cáncer de orofaringe que en el cáncer de cavidad oral [3], [26 ].
además, también se encontraron asociaciones significativas entre los SNPs en 3'UTR de
RAN
y
hiwi
y el riesgo HNC. RAN es un único miembro de la superfamilia Ras de GTPasas, que es esencial para el transporte de pre-miRNAs de núcleo al citoplasma a través del complejo de poro nuclear de una manera dependiente de GTP [27]. Hiwi es una parte de la ARN complejo de silenciamiento inducido (RISC) y un regulador clave de la pluripotencia de células madre mediante el control de las células auto-renovación y diferenciación [28]. Algunos estudios han investigado las asociaciones entre los polimorfismos de estos dos genes y el riesgo de varios tipos de cáncer, como el cáncer de esófago, cáncer de vejiga y carcinoma de células renales, pero los resultados fueron inconsistentes [15], [16], [17], [29] . En nuestro estudio, lo primero que encontramos que
RAN
rs3803012 y
hiwi
variante genotipos rs10773771 no se asociaron con riesgo de HNC, lo que sugiere estos SNP podrían no modular la susceptibilidad de HNC en la población china.
Varias limitaciones potenciales de las presentes consideraciones merece la pena examinar. En primer lugar, una muestra relativamente pequeña puede limitar el poder estadístico de nuestro estudio, especialmente en el análisis de la estratificación por zonas tumorales. Se evaluó la potencia estadística para el efecto de rs1057035 por el software de PS (Poder y el Tamaño de la muestra cálculos versión 1.0.17) y se encontró que en el caso de OR = 0,65 (modelo dominante), la muestra podría alcanzar el 78,8% de la estadística eficacia. En segundo lugar, se trata de un estudio de casos y controles de base hospitalaria y el sesgo de selección inherente no puede ser completamente excluida. Sin embargo, se aplicó un diseño epidemiológico riguroso en la selección de los sujetos de estudio y utilizamos más el ajuste estadístico de los factores de riesgo conocidos para reducir al mínimo los posibles sesgos. En tercer lugar, ya que la intensidad y la duración del hábito de fumar y beber estuvieron ausentes en este estudio, era difícil hacer un análisis futuro de este tipo de variables de exposición. Por último, sólo se seleccionaron los SNPs vinculante miARN-genotipo y no pudimos evaluar la relación entre otros SNP potencialmente funcionales en miARN procesamiento de los genes y el riesgo HNC. Por lo tanto los estudios epidemiológicos, más grandes, bien diseñados con poblaciones étnicamente diversas están garantizados para confirmar y ampliar nuestros hallazgos.
Apoyo a la Información sobre Table S1. Francia El análisis para el efecto de las variables de RUP en modelos. NOTA:
se utilizó una prueba de razón de verosimilitud para comprobar la diferencia entre -2 * Probabilidad de que los dos modelos de registro.
b En comparación con el primer modelo, incluyendo edad, sexo, fumar y beber
doi:. 10.1371 /journal.pone.0047544.s001 gratis (DOCX)