Extracto
La inflamación es una característica importante de la carcinogénesis. macrófagos asociados a tumores (TAM) se pueden asociar con pobre o un mejor pronóstico, en función de sus propiedades y de polarización. El conocimiento actual sobre el significado pronóstico de TAM en el cáncer de vejiga es limitado y se ha investigado en este estudio. Se analizaron 184 pacientes con cáncer urotelial de vejiga sometidos a resección transuretral de un tumor de la vejiga o la cistectomía radical. CD68 (marcador pan-macrófago), MAC387 (polarizado hacia los macrófagos de tipo 1), y Clever-1 /Stabilin-1 (tipo 2 macrófagos y los vasos linfáticos /sangre) se detectaron mediante inmunohistoquímica. El tiempo medio de seguimiento fue de 6,0 años. Los conteos altos de los macrófagos asociados a una categoría superior pT y grado. Entre los pacientes sometidos a resección transuretral, todos los marcadores estudiados aparte de CLEVER-1 /Stabilin-1 se asocia con un mayor riesgo de progresión y peor-específica de la enfermedad y la supervivencia global en el análisis univariado. Los altos niveles de dos marcadores de macrófagos (CD68 /MAC387
+ /+ o CD68 /CLEVER-1
+ /+ grupos) tuvieron un papel pronóstico independiente después de la resección transuretral de próstata en el análisis multivariado. En la cohorte de cistectomía, MAC387, solo y en combinación con CD68, se asoció con una peor supervivencia en el análisis univariado, pero ninguno de los marcadores fueron predictores independientes de los resultados de los análisis multivariados. En conclusión, este estudio demuestra que los fenotipos de macrófagos proporcionan información de pronóstico independiente significativo, sobre todo en los cánceres de vejiga sometidos a resección transuretral
Visto:. Boström MM, Irjala H, T Mirtti, Taimen P, T Kauko, ALGARS A, et Alabama. (2015) Los macrófagos asociados a tumores proporcionan un importante información pronóstica en urotelial cáncer de vejiga. PLoS ONE 10 (7): e0133552. doi: 10.1371 /journal.pone.0133552
Editor: Hari K. Koul, centro de Louisiana State University Health Sciences, Estados Unidos |
Recibido: 14 Febrero, 2015; Aceptado: June 29, 2015; Publicado: 21 de julio 2015
Derechos de Autor © 2015 Boström et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
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Financiación:. J. Peter Boström recibió el apoyo de la Fundación Juselius (http://www.sigridjuselius.fi/foundation) y la Sociedad del cáncer de Finlandia (http: //www.cancer.fi/en/). Sirpa Jalkanen recibió el apoyo de la Fundación Finlandesa Médica (http://www.laaketieteensaatio.fi/fin/in_english/), Kirsti y Tor Johanssons Corazón y la Fundación del Cáncer. Minna M. Boström recibió el apoyo del Orion-Farmos (http://www.orion.fi/en/rd/) y Instrumentariumin tiedesäätiö (http://www.instrufoundation.fi). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
La asociación entre la carcinogénesis y la inflamación es generalmente aceptada, y la inflamación de promoción tumoral es una de las características del cáncer [1]. Las células inflamatorias, quimiocinas y citocinas están presentes en los tumores de las etapas más tempranas y son participantes indispensables en el proceso neoplásico [2, 3]. macrófagos asociados a tumores (TAMs) derivadas de monocitos de sangre periférica y reclutados por quimiocinas son un componente principal del infiltrado de leucocitos en los tumores. La plasticidad y la diversidad son características universales de los fagocitos mononucleares, que pueden tener o bien una un papel de promoción de tumor de protección o, en función de las señales microambientales [4]. TAM están generalmente orientadas al fomento del crecimiento del tumor y la angiogénesis, la supresión de la inmunidad adaptativa, y tienen un papel importante en la migración de células tumorales, invasión y metástasis. Sin embargo, los macrófagos también pueden eliminar las células tumorales y por lo tanto a veces se asocia con un mejor pronóstico de la enfermedad [2, 5]. A pesar de los avances en la comprensión de la interacción entre la inflamación y el cáncer, las preguntas importantes siguen sin respuesta. la inflamación relacionada con el cáncer difiere entre los tipos de tumores y es importante para definir los componentes que son específicos de tejidos y tumores particulares. Será importante encontrar los estímulos óptimos para cambiar un microambiente promotor de tumores a un
El cáncer de vejiga (BC) uno, y para comprender los mecanismos de señalización implicadas inhibidora de tumores. Es una enfermedad heterogénea. No invasiva, los tumores bien diferenciados tienen una historia natural relativamente indolente, pero los tumores pobremente diferenciados son propensos a invadir y metastatizar. En los países occidentales, BC es el cuarto cáncer más común en los hombres [6]. La resección transuretral de la vejiga tumoral (TUR-BT) se utiliza para diagnosticar la etapa todos los tumores. Mientras que los BC no músculo invasivo (CVNMI) pueden no requerir tratamiento adicional, la cistectomía radical (CR) con o sin quimioterapia perioperatoria se considera el estándar de oro en el tratamiento del CM invasiva y, en su defecto CVNMI terapia intravesical.
están disponibles en el valor pronóstico de TAM o de su fenotipo en BC de datos limitados, y la mayoría de los estudios se han concentrado en la investigación de TAM en respuesta a Bacillus Calmette-Guerin (BCG) inmunoterapia. El objetivo de este estudio fue investigar la relación entre TAM y variables clínico en todo el espectro de AC y para estudiar el papel pronóstico de TAM en BC después de la RTU-BT y RC usando métodos inmunohistoquímicos.
Materiales y Métodos
los pacientes
el protocolo de estudio fue aprobado por el Consejo de Ética de Investigación del hospital de Distrito del suroeste de Finlandia (1.8.2006 /301). Se obtuvo consentimiento escrito de los participantes. BC pacientes consecutivos sometidos a RTU-BT (en 2000-2004) o RC (en 1985-2005) en el Hospital de la Universidad de Turku se incluyeron en el estudio. Después de la exclusión, 184 pacientes se incluyeron en el estudio. Los criterios de exclusión fueron los siguientes: 1) antes de Cristo no urotelial, 2) las instilaciones intravesicales de BCG (o quimioterapia) o la quimioterapia sistémica antes de la inclusión de un estudio, y 3) material de tejido insuficiente disponible para histológico nueva revisión e inmunohistoquímica
.
TUR-BT se ha realizado mediante técnicas estándar, y la quimioterapia sola inmediata fue inculcado en el 22% (20/92) de los pacientes. BCG o instilaciones intravesicales se les administró quimioterapia a los tumores T1 y tumores con recidivas frecuentes. En concreto, la terapia intravesical se administró a 39% de los pacientes (36/92). RC se realizó para tumores T1 que no responden a BCG y todos los tumores ≥T2 si es apto para la cirugía. RC incluye extirpación de la vejiga, la próstata y las vesículas seminales en los hombres y el útero, los ovarios, y anterior de la pared vaginal en las mujeres. La linfadenectomía no se llevó a cabo de manera uniforme, pero macroscópicamente nódulos linfáticos sospechosos fueron retirados durante todo el período de estudio y limitado disección de los ganglios linfáticos pélvicos se llevó a cabo a partir de 1995. La terapia adyuvante no se administró después de RC y la quimioterapia sistémica se ofrece sólo en el momento de la progresión metastásica durante el seguimiento. Después de RC, los pacientes fueron seguidos cada 3 meses durante el primer año y cada seis meses a partir de entonces.
Una base de datos clínico-patológica detallada fue montado de forma retrospectiva, los datos relativos a las características del paciente y del tumor, así como los detalles del tratamiento y seguimiento arriba. Las muestras histológicas se vuelvan a revisar para histología, grado de diferenciación, y la etapa por un patólogo experto en uropatología. Los tumores fueron clasificados de acuerdo tanto con la Organización Mundial de la Salud (OMS) de 1973 y la Sociedad de la OMS /Internacional del patólogo urinaria (ISUP) 2004 clasificaciones y clasifican de acuerdo a la estadificación TNM 2010 [7, 8].
La inmunohistoquímica y la anotando
en cada caso, se seleccionó el, bloque de tejido incluido en parafina y fijado en formalina más representativo para el análisis. Secciones (5 m de espesor) se deparaffinized con xileno y rehidratada con una serie graduada de alcohol. Los anticuerpos primarios utilizados fueron ratón monoclonal IgG
1 anti-CD68 (KP1) (concentración de 1: 5; AB845, Abcam, UK) y el ratón monoclonal IgG
1 anti-MAC387 (concentración 1: 500; ab22506, Abcam , Reino Unido), que detecta la mielomonocítica calprotectina molécula L1. CLEVER-1 /Stabilin-1
+ (endotelial linfático y endotelial vascular común receptor-1, también conocida como STAB1 y TOQUE-1) de tipo 2 macrófagos y los vasos se detectaron con el IgG de rata 2-7 anticuerpo (concentración 1: 5) [9, 10]. Los anticuerpos 3G6 (IgG de ratón
1 de anticuerpos contra las células T de pollo) [11] y MEL-14 [IgG de rata
anticuerpo 2a contra ratón L-selectina (CD62L)] (Exbio, República Checa) se utilizaron como negativo controles. La inmunorreacción primaria se realizó con el uso del ratón /rata Vectastain Elite ABC kit (Vector Laboratories). Secciones para tinciones MAC387 anti-CD68-y fueron tratadas previamente de calor en ácido citrato (0,01 M, pH 6,0) en un baño de agua 97 ° C durante 20 minutos. la recuperación de antígeno para las secciones teñidas con Stabilin-1 Clever-1 /se realizó con proteinasa K (DAKO) (10 min a 37 ° C) y los portaobjetos se lavaron tres veces con PBS después de la pre-tratamiento. La peroxidasa endógena fue bloqueada con 0,1% H
2O
2 para 30 min. Los sitios no específicos se bloquearon con el caballo (CD68 y MAC387) o conejo (Clever-1 /Stabilin-1) suero normal a temperatura ambiente durante 20 min. Las secciones se incubaron con anticuerpos primarios durante la noche a 4 ° C y luego tratados con una solución de anticuerpo secundario biotinilado de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Después de lavar con PBS, se añadió Vectastain Elite ABC reactivo (30 min a temperatura ambiente), los portaobjetos se lavaron, y se detectaron usando inmunorreacciones 3,3'-diaminobencidina como sustrato. Las diapositivas se counterstained con hematoxilina, se deshidrataron, re-fija en xileno, montado con xileno distyrene plastificante (DPX).
Todo el tumor y el área circundante peritumoral se seleccionaron mediante microscopía de luz. El número de CD68
+ macrófagos, MAC387
+ macrófagos, y Clever-1 /Stabilin-1
+ macrófagos y los vasos fueron anotados a partir de tres puntos calientes (áreas con la mayor cantidad de macrófagos por ojo) por vía intratumoral y peritumoral con unos 0,0625 mm
2 rejilla usando 40 aumentos cuando se calificaron los macrófagos y 20 × cuando se calificaron los vasos linfáticos /sangre. CLEVER-1 /Stabilin-1
+ normalmente no está presente en las vénulas-planos de paredes, pero se induce de manera aberrante en la vasculatura del tumor [12]. La puntuación se realizó de forma independiente por dos observadores (MB) y HI cegados a la información clínica. Los casos con insuficiente calidad de la tinción inmunohistoquímica del tumor o la morfología fueron excluidos de los nuevos análisis estadísticos. Los números medios de los macrófagos y los vasos en tres puntos de acceso se calcularon dentro de un campo de alta potencia. En el caso de discordancia, las secciones fueron revisadas conjuntamente para llegar a un consenso. MAC387
+ células tumorales se calificaron semi-cuantitativamente en cuatro categorías, From- (negativo) a +++ (abundante). El número de macrófagos positivos para cada anticuerpo también se calificó semicuantitativamente en cuatro categorías, de-a +++. A medida que el marcador semi-cuantitativo y el análisis cuantitativo recuento total asociado significativamente en todos los inmunoanálisis (p & lt; 0,001), los análisis estadísticos detallados, incluidas las asociaciones entre immunosignals y supervivencia, se llevaron a cabo utilizando los valores obtenidos del sistema de puntuación cuantitativa. los subgrupos de pacientes fueron creados mediante la combinación de dos marcadores de macrófagos. Los marcadores de macrófagos probados fueron divididos en baja (-) (+) grupos o altas de acuerdo con el valor de la media de la población. Se generaron los siguientes subgrupos: 1) niveles bajos de ambos subtipos de macrófagos (
- /-), 2) alto nivel de subtipo ya sea macrófagos, bajo nivel de otro subtipo de macrófagos (
+/-), y 3 ) altos niveles de ambos subtipos de macrófagos (
+ /+).
Los análisis estadísticos
Las asociaciones entre CD68, MAC387, y Clever-1 /Stabilin-1 de expresión y clinicopathological variables eran evaluada con la prueba de Mann-Whitney y el test de Kruskal-Wallis. Características de los pacientes y los resultados de las pruebas de normalidad para las variables continuas en la cohorte total del estudio se muestran en la Tabla S1. El método de Kaplan-Meier, la prueba de log-rank y riesgos proporcionales de Cox modelos de regresión se utilizaron para analizar las asociaciones entre immunosignals y resultado. Para los análisis de Kaplan-Meier, el macrófago media y los recuentos de vasos se dicotomizaron de acuerdo con el número medio. En los modelos de riesgos proporcionales de regresión de Cox, los marcadores fueron evaluados como variables continuas. Las medidas de resultado incluyeron específica de la enfermedad y la supervivencia global (DSS y OS) en la población RC y DSS, OS, la recurrencia y la supervivencia libre de progresión (SLP) en la población TUR-BT. El tiempo de supervivencia se calculó a partir de la fecha de la cirugía a la fecha de la última visita de seguimiento o la muerte. Cualquier muerte debida a BC o metastásico con BC se definió como mortalidad específica por cáncer. La recurrencia se definió en la población TUR-BT como histológicamente confirmado nuevo tumor después de un período libre de tumor y la progresión se definió como cuando una recurrencia tenía un grado superior o de una categoría más avanzada pT que el tumor primario, o si la paciente fue sometida RC para la recurrencia. Todas las pruebas estadísticas fueron de dos caras y los valores de p ≤0.05 fueron considerados estadísticamente significativos. Los análisis estadísticos se realizaron con el programa SPSS 20 (IBM) y el Sistema SAS para Windows, versión 9.3 (SAS Institute Inc., Cary, NC, EE.UU.).
Resultados
características clinicopatológicas del estudio población
las características clinicopatológicas basales de la cohorte de pacientes se presentan en la Tabla 1. la mayoría de los pacientes tenían CVNMI (PTA, pTcis, o pT1) (88% de la población TUR-BT y el 36% de la RC población). Se registró el número de tumores en la población TUR-BT y de esos pacientes, el 63% tenía un tumor único. Al final del período de seguimiento, 36% de los pacientes en la población TUR-BT y 28% de los pacientes en la población RC estuviera vivo. El tiempo medio de seguimiento fue de 6,9 y 4,2 años en las poblaciones TUR-BT y RC, respectivamente.
tumores TUR-BT tienen una menor TAM cuenta que los tumores de RC
Mesa 2a muestra los pacientes TUR-BT y RC dicotomizadas de acuerdo con el número medio de los macrófagos y los vasos, y ejemplos representativos de los patrones de tinción con diferentes marcadores se muestran en la Fig 1.
especímenes TUR-BT teñidas con un control negativo anticuerpo (a); intratumoral CD68
+ macrófagos (b), MAC387
+ macrófagos (c), e inteligente-1 /Stabilin-1
+ macrófagos y los vasos (D). flechas llenas indican los macrófagos con tinción positiva, y las flechas indican sin llenar CLEVER-1 /Stabilin-1
+ vasos. Magnificación × 40, la barra de escala 100 micras.
Los datos representan la media del número de células positivas a partir de tres puntos (un campo de alta potencia por cada punto de acceso). Los recuentos se representan como grupos dicotomizaron de acuerdo con el número de macrófagos media. a, macrófagos y los recuentos de los vasos. b, célula cuenta de acuerdo con la expresión de dos marcadores. Aquí, CLEVER-1 tinción se refiere a la expresión en los macrófagos, no los vasos.
El número medio de intratumorales CD68
+ macrófagos era del 18 por campo en la población TUR-BT [desviación estándar (SD ) ± 16] y 30 en la población RC (SD ± 26). Para MAC387, los recuentos de macrófagos medias fueron de 19 (DE ± 24) y 34 (DE ± 38) en las poblaciones TUR-BT y RC, respectivamente. El más alto CLEVER-1 /Stabilin-1
+ recuento de macrófagos fue de 73 en el grupo-BT TUR y 41 en el grupo de RC, y el número promedio fueron 26 (DE ± 13) y 11 (DE ± 10), respectivamente . CLEVER-1 /Stabilin
+ linfático /sangre densidad de los vasos varió de 0 a 22 células positivas por campo con un valor medio de 8 en la población TUR-BT (SD ± 5) y 1 en la población RC (SD ± 1 ). Los recuentos de marcadores en las cohortes TUR-BT y RC se muestran en la Figura S1 recuentos de células de acuerdo con la expresión de dos marcadores de macrófagos se muestran en la Tabla 2b.
High CD68
+, alta MAC387
+, y baja CLEVER-1 /Stabilin-1
+ recuentos de macrófagos se asocian con las características convencionales de alto riesgo en BC
las asociaciones entre el grado del tumor y la categoría pT y la expresión de CD68, MAC387, e inteligente -1 /Stabilin-1 se muestran en la Fig 2 (todos los valores de p & lt; 0,05). Un número elevado de CD68
+ macrófagos y MAC387
+ macrófagos se asociaron con una categoría pT superior y el grado del tumor. Por el contrario, la disminución de CLEVER-1 cuenta /Stabilin-1
+ macrófagos /buque se asociaron con una categoría de mayor pT y grado. Las mujeres tenían un mayor número de CLEVER-1 /Stabilin-1
+ macrófagos (p = 0,003, Mann-Whitney U, no mostrado). No se encontraron asociaciones significativas entre los recuentos de células y el hábito de fumar o la edad.
Se utilizó la prueba de Mann-Whitney para las comparaciones por pares en los análisis sobre el grado del tumor y Kruskal-Wallis suma de rangos de prueba (KW) fue utilizado para la comparación entre las cuatro categorías pT. Los bordes inferiores y superiores de la caja indican el rango intra-cuartil (RIC), la línea dentro de la caja indica el valor de la mediana, los bigotes que se extienden desde cada caja indican el rango de valores que se encuentran fuera del rango intra-cuartil pero más cerca de o igual a 1,5 veces el IQR, y los puntos que se encuentran a una distancia de más de 1,5 veces el IQR de la caja se considera que los valores atípicos [círculos indican los valores atípicos leves (más de 1,5 veces el IQR), y asteriscos los valores extremos (más de 3 veces el RIC)].
TAM cuenta predecir el riesgo de progresión después de la RTU-BT
población TUR-BT.
Kaplan -Meier estimaciones que evalúan las relaciones entre las diversas poblaciones de macrófagos y la SSP en la población TUR-BT se muestran en la figura 3. los números altos de CD68
+ macrófagos y MAC387
+ macrófagos se asociaron significativamente con el riesgo de progresión (figura 3a y 3b) (p-valores de 0,007 y 0,008, respectivamente). El CLEVER-1 /Stabilin-1
+ recuento de macrófagos no afectó a la PFS (p = 0,69) (figura 3c). Se observó una tendencia (p = 0,056) hacia un mayor riesgo de progresión con un menor CLEVER-1 /Stabilin-1
+ recuento de vaso (figura 3d). Las asociaciones entre combinaciones de marcadores de macrófagos y PFS en la población TUR-BT se muestran en la Fig 3E y 3G. Todos los grupos de pacientes con un elevado número de macrófagos definidos por dos marcadores de macrófagos diferentes (es decir, el doble de alto; CD68 /MAC387
+ /+, CD68 /CLEVER-1
+ /+ y MAC387 /CLEVER-1
+ /+) presentaron una SSA más cortos en comparación con los otros grupos. Cuando CD68 y MAC387 se analizaron en conjunto, los pacientes con niveles bajos de macrófagos tenían los PFS más largos. Cuando CLEVER-1 /Stabilin-1 positividad se analizó junto con CD68 o MAC387, no hubo diferencia en el PFS entre los pacientes cuyos tumores eran bajos para ambos marcadores en comparación con los pacientes en los que o bien uno de los marcadores fue alta. Kaplan-Meier para el DSS y el sistema operativo en la población TUR-BT mostraron resultados similares a los de la SLP a excepción de CLEVER-1, donde un recuento recipiente superior se asoció con una peor supervivencia (S2 y S3 figuras). Por el contrario, no hubo asociaciones observadas entre el riesgo de recurrencia y los marcadores de la prueba por sí solos, o en combinación (Fig S4).
El efecto de CD68
+ macrófagos, MAC387
+ macrófagos, y CLEVER-1 /Stabilin-1
+ macrófagos /buques en la progresión en la población TUR-BT (ad). Los pacientes fueron divididos en grupos de acuerdo a la expresión de dos marcadores de macrófagos, y se determinaron las asociaciones con la progresión (ef).
uni y multivariante de regresión de riesgos proporcionales de Cox modelos de factores que afectan a la SG en la TUR-BT la población se presentan en la Tabla 3. en el análisis univariado, los factores de riesgo establecidos (tumor de alto grado, categoría pT avanzada, mayores de edad, y un alto número de tumores) asociaron significativamente con el sistema operativo más corto. El número de CD68
+ macrófagos [hazard ratio (HR) de 1,031 y el 95% intervalo de confianza (IC) 1,016 a 1,046; P & lt; 0,001] y MAC387
+ macrófagos (HR 1,016 y 1,006 a 1,027 IC del 95%; p = 0,002) asociados significativamente con el sistema operativo en un modelo de regresión de Cox univariante; Sin embargo, estas asociaciones no pudieron seguir siendo significativo en el análisis multivariado. CLEVER-1 /Stabilin-1
+ recuentos de macrófagos /buque no predecir la supervivencia. Cuando se combinaron los datos de dos marcadores de macrófagos, todos los pacientes que tenían una alta expresión de ambos marcadores presentaban una mayor mortalidad en el análisis univariado que otros grupos. El CD68 /MAC387
+ /+ y CD68 /CLEVER-1
+ /+ grupos permanecido tener una asociación significativa con la supervivencia en el análisis multivariado (CD68 /MAC387
+ /+: HR 3,5 y el 95% CI 1.1-11; p = 0,036, y CD68 /CLEVER-1
+ /+: HR 3,8 y 95% CI 1,4 a 10, p = 0,008) guía empresas
univariante y multivariante de Cox proporcional. modelos de regresión de riesgos de factores que afectan a DSS, SLP, y recurrencia en la población TUR-BT se presentan en las Tablas S2-S4. El número de CD68
+ y MAC387
+ macrófagos y de CLEVER-1 /Stabilin-1
+ vasos asociados con DSS en el análisis univariado, pero no pudo seguir siendo significativa en el análisis multivariante. El grupo de doble altura y el CD68 /MAC387
+/- grupo también se asoció significativamente con el DSS en el análisis univariado, pero no en los análisis multivariantes (S2 Tabla). marcadores individuales y grupos de dos marcadores asociados de manera similar con la SLP (S4 Tabla).
RC población.
Kaplan-Meier para el sistema operativo en la población RC se presentan en la Figura 4. Un alto MAC387
+ recuento de los macrófagos asociados con un mayor riesgo de muerte (p = 0,021). Otros marcadores no asociaban con el sistema operativo. Cuando se combinaron los datos de los marcadores, los tumores que tenían niveles más altos de CD68
+ macrófagos y MAC387
+ o CLEVER-1
+ macrófagos, tuvieron una SG más corta (CD68 /MAC387
+ /+ p = 0,032 y CD68 /CLEVER-1
+ /p = 0,049). Cuando se analizó el DSS, los grupos que combinan dos marcadores de macrófagos predijeron la supervivencia, al igual que con OS (S5 figura)
.
El efecto de CD68
+ macrófagos, MAC387
+ macrófagos, y Clever-1 /Stabilin-1
+ macrófagos /buques en el sistema operativo en la población cistectomía radical (ad). La asociación entre el sistema operativo y la expresión de dos marcadores de macrófagos (ef).
univariante y multivariante de riesgos proporcionales de Cox análisis de regresión de los factores que afectan a la SG en la población de RC y la expresión combinada de dos marcadores de macrófagos se muestran en la Tabla 4. El grado del tumor y la categoría pT asociado significativamente con el sistema operativo. Ninguno de los marcadores de macrófagos asociados significativamente con la SG en los análisis uni o multivariado. El CD68 /MAC387
+ /+ doble de alta grupo asociado significativamente con el sistema operativo en el análisis univariado (HR 2.9 y 1.2 hasta 7.2 IC del 95%; p = 0,020). Cox de riesgos proporcionales de los análisis de regresión de los factores que afectan a DSS se muestran en la Tabla S4. expresión MAC387 (HR 1,008 y 1,001 a 1,016 IC del 95%; p = 0,032) y CD68 /MAC387
+ /+ expresión dual (HR 3,5 y 95% IC 1.1-11; p = 0,029) se asoció significativamente con el DSS en univariado análisis, pero ninguno de los marcadores, solo o en combinación, resultado predicho de forma significativa en el análisis multivariado.
Discusión
en el presente estudio, hemos demostrado que la densidad de macrófagos intratumoral (CD68
+ y MAC387
+ macrófagos) se asocia significativamente con características de alto riesgo convencionales que incluyen alto grado y categoría T avanzado en BC. Por otra parte, un alto recuento de los macrófagos se asoció significativamente con el riesgo de progresión en la cohorte TUR-BT y la supervivencia en la cohorte cistectomía por análisis univariado. Aunque los marcadores de macrófagos individuales no fueron predictores significativos en el análisis multivariado, las combinaciones de dos marcadores (CD68 con MAC387 o inteligente-1) proporciona información pronóstica independiente en los modelos multivariados en la cohorte TUR-BT cuando se analizaron los factores que afectan a la supervivencia. CLEVER-1 /Stabilin-1
+ macrófagos no se asociaron con la mortalidad antes de Cristo, pero un alto CLEVER-1 /Stabilin-1
+ recuento buque, por el contrario, se asoció con una mejor supervivencia en modelos univariantes de la TUR cohorte BT.
se ha informado Una alta densidad TAM estar asociado con un mal pronóstico en diversos tumores malignos, tales como cáncer de mama, melanoma, cáncer colorrectal y cáncer de próstata [13]. Hanada y colaboradores demostraron en un estudio más pequeño (23 MIBC y 40 CVNMI casos) que los tumores invasivos que tenían mayores CD68
+ recuentos de macrófagos y un mayor número de TAM se asociaron con mayores tasas de cistectomía, metástasis a distancia, invasión vascular, y una peor supervivencia [14]. Recientemente, Sjödahl y colaboradores estudiaron TAM cuenta en MIBC utilizando microarrays de tejido secciones (TMA) teñidas con anti-CD3 para las células T, anti-CD8 para células T citotóxicas, anti-FOXP3 para las células T reguladoras (Tregs), y dos de los macrófagos marcadores específicos de CD68, CD163 y. Observaron que la etapa clínica combinada con la relación del tumor CD68 /CD3 podría ser una herramienta potencial para el pronóstico [15]. Sin embargo, nos hemos dado cuenta de que los macrófagos aparecen en racimos dentro de los tumores, y por lo tanto con secciones enteras en lugar de TMA es probable que sea más preciso, como núcleos de TMA representan sólo una pequeña parte de toda la muestra. Por otra parte, algunos de los pacientes en el estudio habían recibido instilaciones de BCG o la quimioterapia neoadyuvante, que puede haber afectado los resultados.
tumores CVNMI con recuentos altos de TAM también se han demostrado tener un peor resultado y para ser menos sensibles a tratamiento con BCG [16 a 18]. Los procesos inflamatorios en la vejiga en respuesta a las bacterias BCG están siendo utilizados para destruir el tejido tumoral. Las células de urotelio responden al tratamiento con una cascada inflamatoria y liberan citoquinas, por ejemplo, interleucina (IL) -8 y el factor de necrosis tumoral (TNF), y reclutan neutrófilos para destruir las células malignas [19]. En nuestro estudio, los pacientes que recibieron las instalaciones intravesical (BCG o quimioterapia) fueron excluidos debido al hecho de que estos tratamientos cambian el microambiente inflamatorio de los tumores y por lo tanto podrían alterar los resultados.
Hay varios retos en la atención BC . La tasa de recurrencia de CVNMI es alta, y los procedimientos más frecuentes e intensos resultados de seguimiento en BC siendo uno de los cánceres más caros para el tratamiento [20]. Las opciones de tratamiento para enfermedades avanzadas son limitadas y se necesitan nuevas terapias, incluyendo nuevos biomarcadores para diagnosticar los casos agresivos que requieren un tratamiento más intensivo. CD68, MAC387, y CLEVER-1 /Stabilin-1, especialmente cuando se usan en combinación, podrían ser utilizados para identificar los casos agresivos entre los pacientes antes de Cristo. Estos macrófagos también podrían ser el blanco de nuevos tratamientos para CM avanzado. Se necesita eficacia potencial Recientemente, los inhibidores de la PD-L1 han demostrado en BC metastásico, y más investigación en inmunología aC [21].
El anticuerpo utilizado con mayor frecuencia para la detección de TAM es el marcador CD68 pan-macrófagos y se ha demostrado asociarse con la supervivencia pobre en BC [14]. En este estudio, que también se utiliza MAC387 para detectar diferentes poblaciones de macrófagos. Una asociación entre un alto MAC387
+ macrófagos contar y un mal resultado ha sido reportado en varios tumores, como el cáncer de mama y colangiocarcinoma [22-24]. Para nuestro mejor conocimiento, MAC387 ha sido investigado sólo como un marcador de diferenciación escamosa en BC [25, 26], y nuestro trabajo es el primero en detectar una relación entre MAC387
+ densidad de macrófagos y un peor pronóstico en pacientes con CM. Tanto MAC387
+ macrófagos y las células tumorales se evaluaron, pero el número de células positivas MAC387-tumorales no se asoció con la supervivencia (datos no mostrados). MAC387 reconoce la proteína relacionada con mielo-(MRP) 14 y, en menor medida, la MRP8 /MRP14 heterocomplejo (calprotectina). MRP14 es una molécula proinflamatoria expresado durante la inflamación aguda en recientemente la infiltración de monocitos /macrófagos, mientras que MRP8 se expresa en los macrófagos durante la inflamación crónica. los macrófagos del tejido se ha demostrado para expresar un complejo MRP8 /MRP14 en algunas circunstancias: por ejemplo, en sitios de inflamación crónica en la artritis reumatoide, sarcoidosis y tuberculosis, pero no en el tejido normal sin ninguna inflamación [27, 28]. Soulas y compañeros de trabajo han considerado MAC387
+ células a ser pro-inflamatorias y anti-tumorales macrófagos polarizadas-M1 [27]. Sin embargo, esto no es cierto, y hay todavía una falta de un marcador de superficie definitivo para pro-inflamatorias tipo 1 macrófagos.
Además de CD68 y MAC387, se utilizó CLEVER-1 /Stabilin-1 para detectar tipo 2 macrófagos activados. CLEVER-1 /Stabilin-1 es un gran receptor scavenger en un subconjunto de inmunosupresor y protumoral tipo 2 macrófagos con múltiples funciones [29, 30]. CLEVER-1 /Stabilin-1 también se expresa en aferentes y eferentes linfático y las células endoteliales sinusoidales [10]. CLEVER-1 /Stabilin-1
+ el número de macrófagos no se asociaron con la supervivencia del paciente en BC, en contra de nuestros estudios anteriores en el cáncer colorrectal [12]. Curiosamente, no hubo una clara relación entre el bajo CLEVER-1 /Stabilin-1
+ recuento de buque y el aumento de la etapa del tumor y grado superior. Además, un alto CLEVER-1 /Stabilin-1
+ recuento buque se asoció con una mejor supervivencia después de la RC en pacientes con CM. La razón de CLEVER-1 /Stabilin-1
+ buques que actúan de una manera protectora no está clara y se justifica más estudios. Para nuestro mejor conocimiento, MAC387
+ macrófagos y Clever-1 /Stabilin-1 no se han estudiado en BC antes.
Además de la posible función pronóstico de los marcadores de macrófagos por sí sola, se estudiaron las poblaciones de macrófagos más mediante la combinación de dos marcadores. El CD68 /MAC387
+ /+, CD68 /CLEVER-1
+ /+ y MAC387 /CLEVER-1
+ /+ grupos tuvieron una mejor SG en la población TUR-BT, y el CD68 /MAC387
+ /+ y CD68 /CLEVER-1
+ /+ grupos fueron factores pronósticos independientes. Como los marcadores detectan diferentes poblaciones de TAM (CD68 detecta macrófagos en general, mientras que MAC387 detecta tipo 1 polarizadas macrófagos e inteligente-1 /Stabilin-1 detecta el tipo 2 macrófagos), el uso de estos marcadores en combinación pueden identificar mejor los tumores que presentaban un desequilibrio, ya sea hacia el fenotipo M1 (CD68
+ /MAC387
+ y MAC387
+ /CLEVER-1
-) o del tipo M2 (CD68
+ /CLEVER-1
+ y MAC387
- /CLEVER-1
+). Sin embargo, en nuestro estudio, el número de macrófagos en general tenía el papel más importante en el pronóstico de BC, y sorprendentemente, este fue el caso con independencia de que los macrófagos fueron predominantemente de tipo 1 o tipo 2.
El presente estudio tiene las limitaciones conocidas de los estudios de cohortes retrospectivos. Hubo un tiempo en seguimiento a largo plazo en la población RC, y algunas prácticas clínicas puede haber cambiado durante este tiempo. Durante este período, el sistema de clasificación de BC fue cambiado y se definió la clasificación /ISUP de la OMS de 2004 después de la clasificación de la OMS de 1973.