Extracto
Uno de los principales objetivos del seguimiento después de la resección curativa del cáncer colorrectal es la detección y tratamiento de la recurrencia precoz. Hemos demostrado previamente disminución de los niveles preoperatorios solubles CD26 (sCD26) en el suero de pacientes con cáncer colorrectal. Ahora hemos ampliado el estudio para investigar si los niveles de sCD26 en suero postoperatoria sirven como marcador de recidiva de la enfermedad durante la vigilancia. Soluble sCD26 se midió en muestras de suero pre y postoperatorio de 43 pacientes con cáncer colorrectal primario. El antígeno carcinoembrionario, antígeno carbohidrato 19.9 y 72.4 también se midieron los niveles durante la vigilancia. El período de seguimiento medio fue de 41,8 ± 20,8 meses. los niveles de sCD26 durante el seguimiento mostraron patrones bien definidos en los pacientes sin la enfermedad (n = 28), y en pacientes con persistencia del tumor (n = 2), la recidiva local (n = 3) o metástasis a distancia (n = 10). pacientes libres de enfermedad mostraron niveles estables entre 460 a 850 ng /ml durante el seguimiento, mientras que se encontró alta (más de 850 ng /ml) y los niveles de sCD26 inestables antes de que se le diagnosticó recurrencia. Las proporciones mínimas /máximas medias sCD26 durante la vigilancia fueron 1,52, 2,12 y 2,63 para los pacientes sin recurrencia, la recurrencia local y metástasis, respectivamente (
p
= 0,005). Desde el punto de corte obtenido a partir de una curva de características del operador receptor (ROC) construida con la máxima coeficientes mínimos de sCD26 /y los puntos de corte superior e inferior de sCD26, hemos sido capaces de discriminar a los pacientes con y sin enfermedad recurrente. Proponemos que la medición de sCD26 en suero durante el seguimiento de los pacientes diagnosticados de cáncer colorrectal podría ser valiosa para la detección precoz de la recidiva local ya distancia. Un gran ensayo aleatorizado, prospectivo se debe realizar para confirmar nuestros hallazgos
Visto:. De Chiara L, Rodríguez-Piñeiro AM, Cordero DO, Vázquez-Tuñas L, D AYUDE, Rodríguez-Berrocal FJ, et al . (2014) Niveles séricos de sCD26 postoperatorio para la vigilancia en Pacientes con Cáncer Colorrectal. PLoS ONE 9 (9): e107470. doi: 10.1371 /journal.pone.0107470
Editor: Hiromu Suzuki, de la Universidad Médica de Sapporo, Japón
Recibido: 16 de mayo de 2014; Aceptado: August 13, 2014; Publicado: 11 Septiembre 2014
Derechos de Autor © 2014 De Chiara et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos relevantes se encuentran dentro del apoyo de sus archivos de información en papel y
Financiación:. Este trabajo fue apoyado en parte por la Agrupación Estratégica INBIOMED (Investigación en Biomedicina) (2012/273 y 2011/024 CN), a partir de DXPCTSUG (Dirección Xeral de Promoción Científica e Tecnolóxica do Sistema Universitario de Galicia) y FEDER financiación (Fondo Europeo de Desarrollo regional). LD es apoyado por "Fundación Científica de la Asociación Española Contra el Cáncer" (GCB13131592CAST). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
en el momento del diagnóstico, aproximadamente el 75% del cáncer colorrectal (CCR) de los pacientes tienen el tumor confinado a una porción del intestino oa los ganglios linfáticos regionales, y puede ser referido para la resección curativa. Por desgracia, el 30-50% de los pacientes desarrollan recurrencia, el 90% durante los primeros 5 años después del tratamiento [1], [2].
Uno de los objetivos del seguimiento después de la resección curativa en pacientes con CRC es mejorar el resultado de la detección y tratamiento de la recurrencia temprana. Por lo tanto la vigilancia postoperatoria debe identificar las recurrencias asintomáticas para la detección temprana de los tumores localmente persistentes o metástasis, por lo que un mayor tratamiento curativo puede ser iniciado y las tasas de supervivencia mejoró. En consecuencia, las estrategias de vigilancia requieren medios eficaces para identificar la enfermedad residual o recurrente. En general, los meta-análisis y revisiones de acuerdo en que un mayor seguimiento intensivo contribuye a un beneficio de supervivencia global [1] - [8]
Se han propuesto muchos métodos diferentes para el seguimiento de pacientes con CRC. , que se puede subdividir en tres categorías: pruebas de laboratorio, como la determinación del antígeno carcinoembrionario (CEA), los niveles séricos de otros marcadores como los antígenos de carbohidrato (CA), o enzimas hepáticas; pruebas de imagen, como la ecografía, rayos X o tomografía computarizada; y endoscopias. En comparación con otras modalidades de diagnóstico disponibles, las determinaciones de CEA de serie parecen ser los más sensibles para la detección de enfermedad recurrente temprana [6] - [8]. Sin embargo, los marcadores séricos actuales utilizan para detectar la recurrencia del cáncer (CEA, TPS, CA-19.9 y CA-72.4) no son muy exactos y, en general, dan lugar a un considerable número de falsos negativos y positivos [9] - [10 ]. Por lo tanto la prueba adicional es generalmente necesario para confirmar la recurrencia, generando inconvenientes para los pacientes y la elevación de los costos de salud, porque algunas de las técnicas son costosas y no han demostrado ser rentable [11].
La proteasa CD26, o inhibidores de la dipeptidil peptidasa IV (DPP-IV), EC 3.4.14.5, es una glicoproteína asociada a la superficie celular, expresadas en una variedad de tipos de células incluyendo melanocitos, células epiteliales y linfocitos [12]. existen niveles significativos de su forma soluble (sCD26) en el plasma /suero y otros fluidos biológicos [13], [14]. En estudios previos hemos detectado que los pacientes con CCR primaria habían disminuido los niveles de sCD26 en
preoperatoria
suero, y demostramos su valor como marcador diagnóstico y pronóstico de la CRC [15] y adenomas avanzados [16]. Dos estudios independientes han confirmado que sCD26 es uno de los mejores candidatos para las pruebas basadas en sangre en el futuro para el diagnóstico precoz, solo o en combinación con la prueba inmunoquímica fecal (FIT) [17], [18].
Nos habían señalado en nuestro trabajo previo que el valor diagnóstico de sCD26 era peor para los pacientes en estadio D de Dukes, mostrando niveles muy altos en algunos individuos [15]. Aquí se diseñó un estudio piloto para investigar si el nivel de sCD26 medido durante el seguimiento de pacientes con CRC (
postoperatoria
sueros) es útil como marcador de recurrencia o la regresión de la enfermedad durante la vigilancia del cáncer.
Materiales y Métodos
Población
se estudiaron Cuarenta y tres pacientes con CCR primaria, incluyendo 28 hombres (65,1%) y 15 mujeres (34,9%), con una edad media de 66,4 ± 10,4 años (mediana = 66) (Tabla S1). Cuarenta y un pacientes (95,3%) fueron tratados mediante resección curativa (extirpación completa del tumor
en bloque
con una porción del intestino normal, mesentérica y ganglios linfáticos regionales), y 2 (4,7%) a través de la cirugía paliativa. Según estadio de Dukes, el 16,3% de los tumores fueron clasificados como A, 46,5% como B, 25,6% como C, y el 11,6% como D. En cuanto al grado de diferenciación, el 83,3% era moderadamente diferenciado y el 14,3% eran pobremente diferenciado, mientras que 2,4% eran bien diferenciados. La localización de los tumores primarios era: 4 en el ciego (9,3%), 1 en el colon ascendente (2,3%), 7 en ángulo hepático (16,2%), 2 en ángulo esplénico (4,7%), 2 en el colon descendente (4,7% ), 10 en sigma (23,3%), 5 en la unión recto-sigma (11,6%), 10 en el recto (23,3%) y los tumores sincrónicos en el colon ascendente y el ciego (2,3%), y en el colon transverso y el ciego ( 2.3%).
Todos los pacientes fueron controlados en el Complejo Hospitalario Universitario de Vigo (España). El estudio siguió a las prácticas clínicas-ético del Gobierno español y de la Declaración de Helsinki y fue aprobado por el Comité Ético de Investigación Clínica de Galicia para. Se obtuvo el consentimiento informado por escrito y el anonimato garantizado. La información clínica recogida incluyó estadio de Dukes, localización del tumor primario, tipo de resección, la progresión del cáncer y el tratamiento de quimioterapia
El procedimiento de seguimiento estándar consistió en un examen médico cada 4 meses durante el primer año, y cada. 6 meses después de eso. De acuerdo con los criterios del oncólogo, los pacientes recibieron quimioterapia que consiste en 5-fluorouracilo, y en algunos casos irinotecán.
Recogida de muestras y preparación
muestras de sangre preoperatorios fueron recogidos de cerca, pero no todos los pacientes. muestras de sangre postoperatorias fueron recogidos en varios puntos de tiempo, que no eran los mismos para cada paciente. La sangre se dejó coagular a temperatura ambiente y se centrifugó a 2000
g
durante 15 minutos. Los sueros fueron almacenados a -85 ° C hasta su utilización
Determinación de los niveles de sCD26
La concentración de sCD26 se analizó con el CD26 soluble humana Kit ELISA. (EBioscience; Viena, Austria) por duplicado . En base a los resultados anteriores con este kit [15], [16], [19] los valores sCD26 entre 460 a 850 ng /ml se consideraron como los niveles normales. El límite inferior se estableció de acuerdo con el 460 ng /ml de corte sugerido para nuestra cohorte de pacientes en riesgo de CCR o con patologías colorrectales relacionados [16], mientras que para el límite superior que la hipótesis de un 850 ng /ml de corte para los individuos patológicos (con niveles más altos) de nuestros resultados preliminares con pacientes metastásicos y pacientes de CRC resecado el tumor (revisado en [20]).
Determinación de la CEA, CA-19.9 y los niveles de CA-72.4
CEA y CA-72.4 se analizaron en el suero usando el inmunoensayo electrochemoluminescent Roche Sistema Elecsys, y se miden con un analizador de modular Analytics E170 (Roche Diagnostics). CA-19.9 se determinó utilizando el TRACE BRAHMS CA 19-9 KYPTOR inmunoensayo (Thermo Scientific) y se mide en un analizador de Kryptor (CIS bio international). Los valores normales se & lt; 5 ng /ml para CEA, & lt; 7 U /ml de CA-72.4, y & lt; 40 U /ml para-19.9 CA [7] - [10]
análisis de los datos.
Todas las mediciones fueron incluidos posterior a 2 meses después de la cirugía para permitir la normalización del marcador. Los análisis estadísticos se realizaron con el paquete SPSS (v.19.0); las pruebas fueron de dos caras;
p-valores
& lt; 0,05 se consideró significativo. Chi-cuadrado o la prueba exacta de Fischer se realizaron con tablas de contingencia. El análisis de más de dos muestras independientes se realizó con la prueba de Kruskal-Wallis. La relación de concentración de sCD26 máximo /mínimo se calculó para cada paciente para medir la estabilidad título sCD26. Las curvas ROC y las áreas bajo la curva (AUC) se calcularon con esta relación utilizando MedCalc (v.12.7.0). Los datos de sCD26, CEA, CA-19.9 y CA-72.4 para todas las mediciones durante la vigilancia se presentan en la Tabla S2.
Resultados
Evolución de la cohorte durante el período de seguimiento
El período de seguimiento promedio de los 43 pacientes fue de 41,8 ± 20,8 meses, con una mediana de 34,1 meses y un rango de 9.7-79.6 meses (Tabla S1). Los 2 pacientes tratados con resección paliativa murieron durante el estudio (media 7,3 ± 3,4 meses). Con respecto a los pacientes tratados con resección curativa, después de que el período de seguimiento de 28 pacientes (1-28) estaban libres de la enfermedad (68,3%, con una media de seguimiento: 44,9 ± 19,5 meses; rango: 17.3-81.4 meses), mientras que las recurrencias locales ( pacientes 29-31) se documentaron en 3 casos (7,3%, con una media de seguimiento: 25,7 ± 3,1 meses; rango: 22.4-28.6 meses). Por otra parte, se encontraron metástasis en 10 pacientes (24,4%, con una media de seguimiento: 44,7 ± 22,2 meses; rango: 15.4-79.6 meses), clasificado como 5 pacientes hepáticos (32-36), 3 pacientes pulmonares (37- 39), 1 peritoneal (paciente 40) y 1 en el yeyuno y el bazo (paciente 41). Todas estas metástasis fueron diagnosticados dentro de los 3 años después de la cirugía, a excepción de una metástasis hepática diagnosticada 4,3 años después de la cirugía
La quimioterapia se administró a 29 pacientes:. 17 libres de la enfermedad, 2 con recidiva local y 10 con metástasis
índices de marcadores tumorales en muestras de sangre preoperatorios
muestras de suero preoperatorios estaban disponibles para 41 pacientes (Tabla S1), el 51,2% de los cuales mostraron niveles sCD26 por debajo del punto de corte de 460 ng /ml (21 casos). Las características clínicas y epidemiológicas de estos pacientes se analizaron de acuerdo con dos grupos en función de los niveles normales descritas en la sección anterior: Los pacientes con positivo (≤460 ng /ml o & gt; 850 ng /ml) y negativo (460-850 ng /ml) sCD26 preoperatorios. No hubo diferencias significativas en cuanto al sexo, la edad al momento del diagnóstico, estadio de Dukes, el grado histológico, localización del tumor, estado de la enfermedad o
exitus
entre estos grupos (Tabla 1).
En lo que respecta otros marcadores preoperatorios, el CEA se determinó en 33 pacientes, con 10 casos (30,3%) se registran niveles por encima de la línea de corte; CA-19.9 se analizó en 21 casos, lo que resulta más de la línea de corte en 3 casos (14,3%); y CA-72.4 apareció alterada en 3 de 18 casos (16,7%). Las características clínicas y epidemiológicas también fueron estudiados de acuerdo con la positividad para cada uno de estos marcadores clínicos (datos no mostrados), y sólo el CA-72.4 y el grado histológico del tumor mostraron diferencias significativas (
p = 0,022
).
índices de marcadores tumorales en muestras de sangre postoperatorias
los niveles de sCD26 y los marcadores de CRC clínicos fueron evaluados en los exámenes médicos atendidos por cada paciente durante su vigilancia. La relación máxima /mínima concentración de sCD26 se incluye en la Tabla S1. El análisis de estas mediciones revelaron tendencias, lo que nos permitió diferenciar los cuatro grupos de pacientes: Read
pacientes libres de enfermedad al final de la vigilancia
La tendencia general seguida por los pacientes sin enfermedad. la recuperación de los niveles normales cuando preoperatoria sCD26 era títulos bajos y estables por encima de 460 ng /ml pero por debajo de 850 ng /mL. La Figura 1 muestra los niveles de sCD26 durante el seguimiento de un paciente representativo (paciente 25). Esta tendencia se observó en 22 de los 28 pacientes libres de enfermedad (78,6%). Por otra parte, el grupo mostró títulos estables sin variaciones importantes, lo que resulta en una relación y /o máxima media mínima sCD26 de 1,52. La figura 1 también muestra los valores de CEA, CA-19.9 y CA-72.4 durante el seguimiento de la persona representante. Todos los pacientes libres de enfermedad mostraron niveles normales de CEA en suero preoperatorio y durante todo el tiempo de vigilancia. CA-19.9 y CA-72.4 no se midieron en 11 de estos pacientes, pero los datos disponibles muestran que los niveles también tendían a ser estable y por debajo de los respectivos puntos de corte, con un solo individuo (paciente 25) demuestra un aumento CA-72.4
niveles.
las flechas negras indican el comienzo y final de los ciclos de quimioterapia.
los pacientes con persistencia tumoral tratados con cirugía paliativa.
el período de seguimiento para los dos los pacientes no exceda de 10 meses debido a su
exitus
. Los bajos niveles de sCD26 fueron característicos de este grupo, que queda bastante constante. En la Figura 2 (paciente 42), los niveles de sCD26 aumentaron ligeramente por encima del umbral de 460 ng /ml, pero disminuyó de nuevo a valores bajos de la siguiente medición. La relación de sCD26 máximo /mínimo dio lugar a 1,17 para este paciente. Aunque el otro paciente también mostró disminución de los niveles de sCD26, sólo una medición se realizó posterior a 2 meses después de la cirugía; Por lo tanto, la relación máxima /mínima no puede ser calculado.
La flecha muestra de trazos
exitus
.
Por otra parte, CEA, CA-19.9 y CA-72.4 mediciones estaban disponibles para un paciente (Figura 2). Durante el seguimiento a este individuo indicaron un aumento en el CEA, mientras que CA-19.9 y CA-72.4 muestran los valores normales.
Los pacientes con tumores recurrentes.
Los 3 pacientes con tumores recurrentes tenían un tiempo de recaída 10,7, 25,4 y 26,6 meses, respectivamente (pacientes 29-31). La evolución de los niveles de sCD26 se presenta en la Figura 3 para un individuo representativo (paciente 31). En este caso, durante el seguimiento y antes de recurrencia fue diagnosticado, los pacientes se recuperaron los niveles normales (cuando baja al inicio). Sin embargo, justo antes de recurrencia se confirmó, los tres pacientes tenían un aumento considerable (más de 850 ng /ml en 2 de 3 casos), seguido de una o dos cifras negativas y agudas (no necesariamente por debajo de 460 ng /ml). Por lo tanto, la inestabilidad en los niveles de sCD26 precedió a la aparición de recurrencia. En relación a la relación máxima /mínima sCD26, aumentó a 2,12.
La flecha hacia arriba representa el diagnóstico de la recidiva y la flecha de trazos el momento de
exitus
.
en cuanto a los marcadores clínicos, CEA se encontró elevada en 1 de los 3 casos, CA-19.9 también en 1 de los casos (Figura 3) y CA-72.4 en ninguno de los pacientes.
los pacientes con enfermedad metastásica.
El grupo de pacientes con metástasis mostró otra tendencia diferente. En el caso de metástasis hepáticas (Figura 4A; paciente 34), independientemente de la concentración de sCD26 preoperatorio, durante los niveles de seguimiento alcanzado o superado ampliamente 850 ng /mL límite superior normal (en 4 de los 5 pacientes; 80,0%). En el otro paciente, nos ha faltado muestras de dos años antes del diagnóstico de metástasis, pero la última muestra mostró un valor de cerca de ese límite y la misma tendencia a valores más altos. Por lo tanto, la relación de sCD26 máximo /mínimo para este subgrupo correspondió a 2,17, similar al de los pacientes con recurrencia local del tumor.
Las flechas negras indican el comienzo y final de los ciclos de quimioterapia y la flecha hacia arriba indica el diagnóstico de metástasis .
En relación a los pacientes con metástasis pulmonares (Figura 4B; paciente 39) un aumento importante por encima de la /límite superior ml 850 ng fue detectada antes de que se diagnostican las metástasis, seguido por una disminución, lo que sugiere los niveles de sCD26 inestables. En este subgrupo de la relación de sCD26 máximo /mínimo correspondió a 2,86, por encima de las relaciones anteriores. Esta tendencia también se encontró en los pacientes con peritoneal o yeyuno y la metástasis del bazo, con niveles elevados de sCD26 durante el seguimiento, y una relación máximo /mínimo sCD26 de 1,48 (paciente 40) y 5,34 (paciente 41), respectivamente.
en resumen, la tendencia general observada en los pacientes con metástasis era una concentración sCD26 sobre la parte superior de 850 ng /ml de corte, y una relación media global máximo /mínimo sCD26 de 2,63 para el grupo. Tomar nota, todos estos pacientes tenían ciclos de quimioterapia, que parecían bajos niveles de sCD26 transitoriamente.
El comportamiento de los marcadores clínicos en pacientes con metástasis también se muestra en las figuras 4A y 4B para los pacientes representativos. A pesar del diagnóstico de metástasis, CEA, CA-19.9 y CA-72.4 niveles permanecieron normales y estable durante el seguimiento en 5/10, 4/10 y 7/10 pacientes, respectivamente.
análisis de la curva ROC para sCD26 suero postoperatorias
se observaron diferencias estadísticamente significativas en la proporción sCD26 máxima /mínima entre los pacientes libres de enfermedad, los pacientes con recidiva local y aquellos con metástasis (
p
= 0,005). Estas diferencias se estudiaron adicionalmente usando análisis de la curva ROC (generado con los ratios de sCD26 máximo /mínimo). Sólo los pacientes tratados con cirugía curativa fueron incluidos, clasificado como libre de enfermedad (n = 28) o con recurrencia local o distante (n = 13). Una AUC de 0,835 (IC del 95% ,702-,968;
p Hotel & lt; 0,0001) (Figura 5) se obtuvo, mostrando una precisión óptima para la separación de los pacientes con enfermedad recurrente. 100% de sensibilidad se obtuvo con una relación de sCD26 de corte máxima /mínima de 1,43 (46,4% de especificidad). La especificidad se puede mejorar aún más teniendo en cuenta que los pacientes libres de enfermedad falsos positivos más no superar los 850 ng /ml de corte. Sin embargo, se observó una mayor especificidad (92,9%) 1,98 para el corte (sensibilidad 61,5%).
Las AUC correspondiente figura en el texto.
Discusión
Numerosos estudios, revisiones sistemáticas y meta-análisis, así como las sociedades de cáncer de América y Europa, llegan a la conclusión de que la mejor manera de lograr el diagnóstico precoz de la recurrencia y mejorar la supervivencia es a través de una vigilancia intensiva. Sin embargo, el consenso no se ha logrado con respecto al protocolo de seguimiento intensivo (combinación de pruebas y frecuencia) [1] - [8].
De hecho, los marcadores clínicos utilizados en la actualidad [9], [10 ], incluyendo CA-19.9 y CA-72.4, no son ni recomendado para la vigilancia después de la resección curativa ni para el pronóstico [5] - [8]. En sus directrices, tanto el EGMT y grupos ASCO recomiendan la medición de CEA en pacientes con CCR en estadio II o III, cada 2-3 meses [6] o cada 3 meses [8] durante al menos 3 años después del diagnóstico. Sin embargo, hay un debate continuo alrededor de CEA, debido principalmente a su falta de especificidad. Algunos autores llegaron a la conclusión de que un aumento en la concentración de antígeno es un pobre predictor de recidiva local, e incluso en los pacientes con metástasis hepáticas de una creciente concentración es un fenómeno tardío en relación [21], [22]; en consecuencia, el CEA en suero debe ser abandonada en la rutina de seguimiento [6]. Nuestros resultados de este estudio están de acuerdo con esta recomendación
En nuestros estudios anteriores, se observaron niveles séricos bajos de sCD26 en pacientes con CCR de diferentes cohortes:. Una cohorte de casos y controles [15] y una cohorte principalmente sintomático que se sometió a una colonoscopia [dieciséis]. En el primer estudio, los diferentes niveles de sCD26 preoperatoria puede estar asociada a un mayor riesgo de desarrollar una enfermedad recurrente [15]. Adicionalmente, al igual que otros observaron que algunos pacientes con CCR metastásico mostraron altas concentraciones de sCD26 [16], [20]. En este estudio piloto que mide tanto el preoperatorio y los niveles de sCD26 postoperatorias para evaluar su capacidad para predecir y anticipar el diagnóstico de una enfermedad recurrente ya sea localmente o en un órgano distante. Puesto que el 80% de todas las recidivas son diagnosticados dentro de los dos primeros años después de la cirugía [8], [22], se realizó un seguimiento durante al menos este período.
Las características clínicas y epidemiológicas de los pacientes ( el género, la edad, el estadio de Dukes, diferenciación o la localización del tumor) analizaron de acuerdo con los niveles preoperatorios sCD26 prestados ninguna asociación, corroborando nuestros resultados anteriores [15]. Aunque los pacientes etapa D mostraron niveles más altos en comparación con las fases del tumor menos invasivas, como se ha observado anteriormente [15], no se encontraron diferencias estadísticamente significativas para el estado de la enfermedad o la presencia /ausencia de recurrencia en relación con sCD26 positividad basado en el 460/850 ng /ml de corte.
en relación con el rendimiento sCD26 considerar que las muestras preoperatorias, encontramos una sensibilidad reducida para el diagnóstico de CCR en esta cohorte (51,2%), en comparación con el 81,8% observado anteriormente [16] o por otros [17], [18]. Las diferencias pueden ser atribuidas a estudiar ajustes ya que en esta cohorte sólo los pacientes ya diagnosticados de CCR fueron incluidos, mientras que se incluyeron en el otro estudio, principalmente individuos sintomáticos con diagnóstico de diversas patologías colorrectales. Por otra parte, razones técnicas relacionadas con la especificidad de los anticuerpos utilizados en el ELISA para la detección de sCD26 también pueden explicar las diferencias [14]. En relación con esto, y como se discutió en otra parte [20], el sCD26 de corte se cambió de 410 en nuestra primera estudio [15] para el 460 ng /ml [16] se utiliza aquí. Por lo tanto, en base a nuestros resultados anteriores con este kit [15], [16], [19] los valores sCD26 entre 460 a 850 ng /ml se consideran normales. Nos preliminarmente elegimos el límite superior 850 ng /ml para este estudio debido a que en nuestras anteriores funciona niveles de sCD26 se encontraron dentro de esta gama en individuos no patológicos (revisado en [20]). Además, la cantidad de antígeno de la DPP-IV /CD26 se encuentra en el suero normal es consistente con los valores esperados en base a la actividad específica de suero purificada DPP-IV [23] y por lo general hay correlación entre la actividad DPP-IV y los niveles de sCD26 en patológico condiciones [21].
con base en el rango normal sCD26 se propone en las mediciones postoperatorias, hemos sido capaces de definir diferentes tendencias característicos para el estado de la enfermedad. Estos se confirmaron adicionalmente con una curva ROC basado en la relación sCD26 máximo /mínimo que mide la estabilidad sCD26 título durante la vigilancia. Este análisis mostró una precisión óptima para distinguir los pacientes libres de enfermedad de los pacientes con enfermedad recurrente local o distante. De acuerdo con lo anterior, en la mayoría de los pacientes libres de enfermedad estable los niveles de sCD26 (460-850 ng /ml; máxima /mínima relación 1.52) se encontraron. Los aumentos más de 850 ng /ml se detectaron en 6 pacientes libres de enfermedad (2 casos los aumentos registrados al final del período de vigilancia y no hay más información sobre los cambios de estado de la enfermedad podría ser obtenido; 2 casos fueron diagnosticados de lesiones que ocupan espacio en el hepática y sin evidencia de metástasis hepática, mientras que hay una explicación para los niveles altos se encontraron en los otros 2 casos)
en relación a los pacientes con recurrencia local o distante, en la mayoría de los casos (10/13. ; 76,92%) superaron los niveles de sCD26 los 850 ng /ml y eran inestables (máxima /mínima relación 2.49). En concreto, los aumentos repentinos por encima de 850 ng /ml seguido por disminuciones consecutivas y agudas podría predecir la recurrencia al menos 2-3 meses antes del diagnóstico clínico en los 3 pacientes con recidiva local. Esto se traduciría en un tratamiento oncológico anterior y la resección quirúrgica, con una mayor tasa de supervivencia [3] - [5].
En el caso de recurrencias distantes, hígado y pulmón fueron los órganos más afectados frecuentes en nuestra cohorte , en consonancia con 35-55% de la metástasis hepática y 10% de la metástasis de pulmón reportado para los pacientes de CRC [24] - [25]. Se detectaron metástasis hepática en el diagnóstico inicial en 3 pacientes y durante el seguimiento en 2 pacientes. En una de las últimas concentraciones, altos sCD26 (llegando a 3.200 ng /ml) se observaron a partir de 2 meses después de la cirugía y durante todo el seguimiento, lo que indica en una etapa muy temprana (más de 49 meses antes) la sospecha de metástasis. Por el contrario, en el otro paciente, niveles por debajo del 460 ng /mL de corte se encontraron 11 meses antes de la confirmación de la metástasis, también indica la presencia de recurrencia. En dos de los pacientes con metástasis de pulmón, los aumentos de sCD26 más de 850 ng /ml se registraron 3,8 y 29,1 meses, respectivamente, antes del diagnóstico de la metástasis; en el otro caso, los niveles elevados (2,900 ng /ml) coincidió con el diagnóstico. Una vez más, nuestra prueba habría anticipado el diagnóstico de metástasis
.
Nuestros hallazgos sugieren que la medición periódica de los niveles séricos de sCD26 cada 3 meses podría servir de guía para la toma de decisiones oncológica, alertando sobre la aparición de recurrencia basan en la relación de sCD26 máximo /mínimo y los niveles de sCD26 durante la vigilancia. El comportamiento de sCD26 de acuerdo con el estado de la enfermedad se resume en la figura S1. No obstante, estos resultados deben ser considerados como preliminares y deben extenderse a un mayor conjunto de datos en estudios prospectivos y retrospectivos. Sin embargo, la aplicación de esta prueba a la práctica clínica podría ser factible ya que una extracción de sangre se realiza regularmente durante el seguimiento de pacientes con CRC y la prueba consiste en un ensayo típico Elisa.
Con respecto a la importancia biológica de nuestros resultados, hemos revisado que, niveles fisiopatológicos bajas sCD26 se producen simultáneamente con un estado inmunitario deteriorado, incluyendo algunas neoplasias hematológicas y sólidas, mientras que el aumento de los niveles se producen en las enfermedades inflamatorias e infecciosas, otros tumores hematológicos y enfermedades del hígado tales como el carcinoma hepatocelular [14]. La sCD26 soluble que se encuentra en el suero es de suponer que derramada por escisión proteolítica de la transmembrana CD26 [14], [26]. Además del endotelio capilar clásica, tejidos hepáticos e inmunológico de la que sCD26 podrían originarse [13], [14], [26], recientemente el tejido adiposo [27] y el músculo [28] también pueden ser incluidos.
ahora está claro que los mecanismos relacionados con el sistema inmune son habilidades que las células cancerosas deben adquirir en su camino de dar lugar a un tumor, incluyendo la capacidad de desarrollarse en un microambiente inflamación crónica, la capacidad para evadir el reconocimiento inmune y la capacidad de suprimir la reactividad inmune . Estas tres capacidades han sido reconocidos recientemente como las características inmunológicas de cáncer [29]. Por lo tanto, para CRC hemos planteado la hipótesis de [14] el sistema inmune como la fuente de los niveles con deficiencias principalmente debido a CD26 no se expresa diferencialmente en tumores primarios y tejidos normales de colon [30], [31]. Además, muchos
in vivo
estudios encontraron una correlación entre los cambios en la actividad de DPP-IV en suero y el número de PBL, linfocitos T, células T CD26 + y la cantidad de CD26 en las membranas plasmáticas de linfocitos T (revisado en [ ,,,0],14]). Por lo tanto, puede ser posible que el tumor en desarrollo puede ser inmunosupresor una población de generación de sCD26 o hacia abajo la regulación de la producción de sCD26 circulante a través de TGF-β [32].
Curiosamente, las concentraciones de sCD26 elevadas encuentran en Dukes D CRC pacientes con metástasis [15] y en este trabajo pueden estar relacionados con los recientes hallazgos de Pang y colegas [31]. Se informó de la expresión diferencial de CD26 entre tumores primarios y metástasis. Estos autores identificaron las células CD26 que expresan como las células madre de cáncer (CSC), asociados con una mayor capacidad de invasión y la quimiorresistencia. Cuando aislado y se inyecta en ratones estas células CD26 + llevado al desarrollo de metástasis a distancia [31]. Si estas células están produciendo aumento de los niveles de sCD26 que puede estar relacionado con la expansión rápida de la población o quizás debido a un aumento del metabolismo de la expresión de CD26 y derramamiento. Esta idea está de acuerdo y complementa nuestros hallazgos de niveles elevados de sCD26 en pacientes metastásicos. De acuerdo con el informe anterior, un trabajo publicado recientemente por Lam y sus colegas [33] informó significativamente mayor CD26 tumoral niveles de expresión en pacientes con CCR con metástasis a distancia en comparación con los pacientes no metastásicos. Adicionalmente,
in vitro
experimentos con estos CSC están llevando a cabo en nuestro laboratorio para analizar su capacidad de producir sCD26, lo que probablemente podría explicar las concentraciones sCD26 elevados se encuentran en pacientes metastásicos.
Sin duda estos cambios tener consecuencias importantes en procesos oncogénicos. Los datos actuales es compatible con tres posibles funciones de sCD26 en: (i) la activación-desactivación de quimiocinas en los procesos inflamatorios; (Ii) la activación-inactivación de otros sustratos de sangre biológicamente activos, factores de crecimiento u hormonas; y (iii) la capacidad de adhesión celular, la migración y la invasión [12] -. [14], [31], [34], [35]
Conclusión
Los niveles séricos de sCD26 mostraron también patrones -definido en el seguimiento de pacientes con CRC. concentraciones estables sCD26 fueron característicos en pacientes libres de enfermedad; mientras que los pacientes con enfermedad recurrente local o distante mostraron niveles elevados de sCD26 con descensos bruscos, lo que resulta en la inestabilidad. La medición de sCD26 puede ayudar a lograr una detección temprana de la enfermedad CRC recurrente después de la cirugía, incluso en pacientes que recibieron quimioterapia. Una vez confirmada en un ensayo prospectivo más amplio, sCD26 podría ser un marcador útil para la vigilancia postoperatoria.
Apoyo a la Información
Figura S1.
Representación esquemática del comportamiento de sCD26 en el seguimiento de pacientes con CRC de acuerdo con el estado de la enfermedad
doi:. 10.1371 /journal.pone.0107470.s001 gratis (TIF)
Tabla S1.
Características clínicas de la cohorte objeto de seguimiento en el estudio
doi:. 10.1371 /journal.pone.0107470.s002 gratis (DOCX)
Tabla S2.
niveles séricos de sCD26, CEA, CA-19.9 y CA-72.4 para las mediciones preoperatorias y postoperatorias
doi: 10.1371 /journal.pone.0107470.s003.
(XLS) guía
Reconocimientos