Extracto
Aplicaciones
La caspasa 8 (CASP8) juega un papel fundamental en la la vía de apoptosis y la regulación aberrante de esta vía hace que muchas enfermedades incluyendo el cáncer. rs3834129 variantes genéticas (CTTACT /-) y rs3769821 (T /C) en la región promotora del gen
CASP8
se documentaron estar asociado con cánceres múltiples sólidos y linfoma no Hodgkin (LNH), respectivamente, a pesar de de algunas controversias. El objetivo de discernir el potencial asociación de estas dos variantes y rs113686495 (CTGTCATT /-)., Así como los niveles
CASP8
ARNm y la expresión de proteínas con cáncer colorrectal (CCR) en los chinos Han
Métodos
Estamos genotipo
CASP8
variantes genéticas en 305 pacientes con CCR y 342 individuos sanos de Kunming, suroeste de china. Los niveles de expresión de
CASP8
ARNm y proteínas se cuantificaron en tejidos normales y cancerosos paracancerous emparejados mediante el uso de PCR en tiempo real cuantitativa y Western Blot, respectivamente. Se compararon las frecuencias de alelos, genotipos y haplotipos entre los casos y controles. La correlación de
también se evaluaron CASP8
niveles de mRNA y de expresión de proteínas en tejidos normales y cancerosos paracancerous apareados de pacientes con diferentes genotipos y expresión clínica.
Resultados
No hubo asociación de los
CASP8
variantes genéticas con CRC en nuestro estudio de casos y controles. El
CASP8
niveles de mRNA expresión génica en tejidos normales y cancerosos paracancerous fueron similares y no hubo diferencias significativas entre los sujetos con diferentes genotipos y características clínicas. Sin embargo, se encontró que el nivel de proteína CASP8 fue significativamente menor en los tejidos cancerosos que en los tejidos normales emparejados paracancerous.
Conclusiones
Nuestros resultados sugieren que los tres
CASP8
variantes genéticas pueden no estar asociada con el riesgo de CCR en los chinos Han del sudoeste de china. La expresión aberrante de proteínas CASP8 puede desempeñar un papel en la patogénesis de la CRC
Visto:. Xiao M-S, L, Li Chang W-L, Du Y-S, Pan Y, Zhang D-F, et al. (2013) Los polimorfismos genéticos de la
CASP8
promotor del gen pueden no ser asociados con el cáncer colorrectal en los chinos Han desde el sudoeste de China. PLoS ONE 8 (7): e67577. doi: 10.1371 /journal.pone.0067577
Editor: Jirong largo, Universidad de Vanderbilt, Estados Unidos de América
Recibido: 27 Marzo, 2013; Aceptado: 20-may de 2013; Publicado: 2 Julio 2013
Derechos de Autor © 2013 Xiao et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyado por el Programa mejores talentos de la provincia de Yunnan (2009CI119), la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de china (30925021) y la Academia china de Ciencias. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer colorrectal (CCR) es uno de los cánceres más comunes en todo el mundo, con una tasa de supervivencia a 5 años del 30-65% [1]. Aunque la mayoría de CRC (casi 80%) es esporádico [2], [3], aproximadamente el 35% de los pacientes con CRC se puede atribuir a los antecedentes genéticos de acuerdo con el estudio de gemelos monocigóticos [3], lo que implica que tanto los factores genéticos y ambientales tienen un papel fundamental en la patogénesis de la CRC. Muchas personas fueron expuestas a factores de riesgo ambientales, como el consumo de tabaco [4], beber [4], poco saludable de la dieta y el estilo de vida [5], [6], pero sólo algunos de ellos sufrieron de CRC, lo que sugiere que las variaciones genéticas determinan en parte la susceptibilidad al CRC.
La apoptosis, también llamada muerte celular programada, está involucrado en el mantenimiento de la homeostasis del tejido, el desarrollo y eliminar las células no deseadas en los organismos multicelulares [7]. La disfunción de este proceso daría como resultado en la tumorigénesis [8]. La muerte celular apoptótica está mediada por una familia de caspasas altamente conservadas (proteasas cisteína-dependiente de la aspartato específico), que se pueden dividir en "caspasas iniciadoras" y "caspasas efectoras" [9]. Existen principalmente dos vías de apoptosis en humanos:. La extrínseca o vía mediada por el receptor y la vía intrínseca o mitocondrial, tanto emplean caspasas en cascada [10], [11], [12]
caspasa 8, codificada por la
CASP8
gen (que está localizado en el cromosoma 2q33-q34 y tiene 14 exones), funciona como una caspasa iniciadora en la ruta apoptótica y una barrera defensiva contra la proliferación maligna fundamental y la tumorigénesis [7], [8] , [11], [13]. El polimorfismo indel, rs3834129 (CTTACT /-, escrito como 6 pb /del en el texto siguiente), en la región promotora de la
se informó CASP8
gen de estar asociado con la susceptibilidad a una amplia gama de tipos de cáncer incluyendo CCR en la población china [14]. Aunque esta variante se informó posteriormente que se asocia con el riesgo de que los trabajadores del carbón y los cánceres de vejiga en las poblaciones chinas [15], [16], la asociación positiva no fue replicado en estudios de casos y controles posteriores a gran escala en las poblaciones europeas y americanas [17 ], [18]. Genotipos CT y CC de otro polimorfismo de un solo nucleótido (SNP), rs3769821 (T /C), que también se encuentra en la región promotora del gen
CASP8
, se encontró para influir en la susceptibilidad genética para el linfoma no Hodgkin (LNH) en un análisis combinado de tres poblaciones de los Estados Unidos de América y Australia [19]. Sin embargo, este resultado positivo no se confirmó en nuestro reciente análisis genético de los chinos Han con LNH y ensayo de luciferasa [20].
Para discernir si rs3834129 y rs3769821 contribuyen a la susceptibilidad genética a la CRC en los chinos Han desde el suroeste de China, genotipo estas dos variantes, junto con rs113686495 (CTGTCATT /-, escrito como 8 pb /del en el siguiente texto, que se encuentra en 50 pb aguas abajo del rs3769821). Hemos cuantificado aún más el nivel de expresión del ARNm de la
CASP8
gen en ambos tejidos normales y cancerosos paracancerous de pacientes con CRC con diferentes genotipos para identificar los efectos potenciales de los diferentes alelos en la expresión génica. Además, se compararon los niveles de ARNm en los pacientes de CRC con diferentes características clínicas. El nivel de proteína CASP8 se midió en los tejidos normales y cancerosos paracancerous emparejados de un total de 39 pacientes, para comparar con el patrón de expresión mRNA. Nuestros resultados mostraron que
CASP8
variantes genéticas y el nivel de expresión de mRNA fueron improbable que se asocie con el CRC de los chinos Han. Sin embargo, hemos encontrado que los tejidos cancerosos tenían un nivel significativamente más bajo de proteína CASP8 que los tejidos normales paracancerous, lo que sugiere que el potencial de la regulación post-transcripcional de este gen juega un papel activo en el desarrollo de CCR.
Materiales y Métodos
Ética Declaración
Este estudio fue aprobado por la junta de revisión institucional del Instituto de Zoología de Kunming. consentimientos informados por escrito conforme a los principios de la Declaración de Helsinki se obtuvieron de cada participante antes del estudio.
Población de estudio y muestras de tejidos
tejidos cancerosos se obtuvieron de 305 chinos Han con el CRC. Estos pacientes fueron sometidos a cirugía en el Primer Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Kunming de 2010 a 2011. Todos los pacientes fueron confirmados histopathogically ser CRC y recibieron ningún tratamiento médico (con excepción de 12 pacientes) antes de la cirugía para extirpar el tumor. La etapa del cáncer se clasificó de acuerdo a la 7ª edición del AJCC Cancer Staging Manual [21]. Las muestras de sangre fueron obtenidas de 342 individuos sanos (incluyendo 133 reportados en nuestro estudio anterior [20]). La información demográfica y las características histopatológicas de pacientes con CRC y controles sanos se muestran en la Tabla 1. También se recogieron los tejidos normales paracancerous para algunos pacientes; este tejido normal se encuentra en una región de cinco centímetros de distancia de la frontera del tejido canceroso, y el examen patológico de este tejido no mostró ningún signo de las células malignas.
Genotipificación el Promotor variantes genéticas del gen CASP8
ADN genómico fue extraído de los tejidos cancerosos de pacientes con CRC y muestras de sangre de controles sanos usando un método de fenol /cloroformo estándar. Hemos seguido el mismo enfoque y la condición descrita en nuestro estudio anterior para determinar el genotipo de las tres variantes genéticas en el
promotor CASP8
región [20]. En resumen, el 6 pb /DEL y 8 pb /Del polimorfismos se determinaron mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE). rs3769821 SNP se genotipo por PCR-RFLP.
RT-PCR cuantitativa para CASP8 mRNA expresión
El ARN total se aisló de los tejidos normales y cancerosos paracancerous pareadas de 99 pacientes con CRC que no recibieron radioterapia y /o tratamiento de quimioterapia antes de la cirugía usando TRIZOL (Invitrogen, Carlsbad, CA) según las instrucciones del fabricante. Un microgramo de ARN total se utiliza para sintetizar cDNA de cadena simple usando un oligo (dT) 18-mer como cebador y transcriptasa inversa de MMLV (Promega, Madison, WI) en un volumen final de reacción de 25 l. Cebadores CASP8-F (5'-GCAGAGGGAACCTGGTACAT-3 ') y CASP8-R (5'-TCATCCTTGTTGCTTACTTCATAG-3') se utilizaron para detectar
CASP8
ARNm transcripciones A (número de acceso GenBank NM_001228.4), B (NM_033355.3), C (NM_033356.3), F (NM_001080124.1) y G (NM_001080125.1). PCR en tiempo real se realizó en el Real-Time PCR IQ2 sistema (Bio-Rad, Hercules, CA) con el SYBR
Premezcla Ex Taq
II (Tli RNasa H Plus; Takara, Otsu, Shiga) y el siguiente condición de amplificación: una desnaturalización inicial a 94 ° C durante 3 min, seguido de 35 ciclos de 94 ° C durante 15 s, 50 ° C durante 15 s, y 72 ° C durante 20 s, y un ciclo de extensión final a 72 ° C durante 5 min. El gen
GAPDH
(gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa) se amplificó para la normalización. Se utilizó el par de cebadores 5 'CAACTACATGGTTTACATGTTC -3' /5 'GCCAGTGGACTCCACGAC-3' y los mismos parámetros de ciclo térmico (a excepción de un cambio de temperatura de recocido a 55 ° C) que la de la
CASP8
gen de amplificar el
GAPDH
gen. Cada muestra se realizó en dos duplicados.
análisis de transferencia Western para proteína CASP8
tejidos se lavaron con tampón ACK frío para eliminar las células rojas de la sangre y fueron trituradas en tampón de lisis suministrado con inhibidores de la proteasa mediante el uso de la maja Pellet (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Las concentraciones de proteína se determinaron mediante el ensayo BCA de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Beyotime, Haimen, Jiangsu) usando albúmina sérica bovina como estándar. Veinte y cinco microgramos de proteína total fueron separados en un 15% SDS-PAGE y transferidos a una membrana de PVDF (Roche Diagnóstico, Indianapolis, IN). Después de bloquear con leche desnatada al 5% durante 2 h a temperatura ambiente, la membrana se transfirió con el ratón anti-caspasa-8 anticuerpo (1:4000, Cell Signaling Technology, Danvers, MA) a 4 ° C durante la noche. Membrana se lavó con TBST tres veces durante 10 minutos cada uno, seguido de incubación con anticuerpo de cabra anti-IgG de ratón anticuerpo secundario (1:10000, KPL, Gaithersburg, MD) durante 1 h a temperatura ambiente. Membrana se lavó con TBST como se ha descrito anteriormente y desarrollado utilizando el sustrato quimioluminiscente Western Immobilon HRP (Millipore, Billerica, MA). El β-actina se cuantificó en cada muestra tras mismo procedimiento utilizando el ratón anti-β-actina de anticuerpos (1:100000, Zhongshan Goden puente de Biotecnología Co, Ltd, Beijing) para la normalización. La densidad de cada banda de proteína se calculó utilizando el software Image J (NIH, Bethesda, MD).
Análisis estadístico
El análisis estadístico se realizó utilizando el programa de I (versión 2.11.1, Viena , Austria) y un
P
valor inferior a 0,05 fue considerado estadísticamente significativo. Potencia cálculos se realizaron utilizando el software Quanto [22]. Desviación del equilibrio de Hardy-Weinberg (HWE) se evaluó para cada variante mediante el uso de la etiqueta
χ
2-test (df = 1). Las frecuencias alélicas de las tres variantes entre los casos y controles también se compararon mediante el uso de la etiqueta
χ
2-prueba. El valor por parejas D 'variantes rs3834129, rs3769821 través rs113686495 y en los casos y los controles fueron determinados por Haploview v4.2 [23]. Los haplotipos se estimaron y sus frecuencias basado en el método Bayesiano utilizando Fase 2,1 [24]. Se empleó el análisis de regresión logística no condicional para calcular la odds ratio (OR) y los intervalos de confianza del 95% (IC), para estimar el potencial asociación de diferentes genotipos de rs3834129, rs3769821, y rs113686495 con el CRC. Genotipos 6 pb /6 pb de rs3834129, rs3769821 de TT, y del /del de rs113686495 y el haplotipo principal se utiliza como referencia ajustado por edad (≤50 y & gt; 50 años) y el género. Emparejado
t-test
se utilizó para determinar la diferencia de los
CASP8
los niveles de expresión de genes entre los dos grupos. ANOVA se utilizó para comparar el nivel medio de la
CASP8
la expresión génica entre los grupos de más de dos.
Resultados
La falta de asociación entre tres variantes genéticas del Promotor y CASP8 CRC
Nuestro tamaño de la muestra (305 pacientes versus 342 controles) en fase de diseño de casos y controles con un modo de herencia-registro aditivo tenía suficiente poder estadístico para el estudio de asociación. Entre las tres variantes analizadas en la población de control, la frecuencia del alelo menor (MAF) varió de 21,1% a 26,7%. Teniendo en cuenta MAF de 0.211, el poder estadístico para detectar una odds ratio (OR) valor de 1.5 para que se esperaba alelo de riesgo es de 85%, mientras que la potencia de MAF de 0.267 se espera que sea el 90%.
La las frecuencias alélicas de rs3834129, rs3769821, y rs113686495 de la
CASP8
promotor del gen en grupos de casos y controles fueron listadas en la Tabla 2. distribución de genotipos de todas estas variantes no se desvió de HWE. No se observaron diferencias estadísticamente significativas entre los casos y los controles para cada alelo de rs3834129, rs3769821, y rs113686495. Tenga en cuenta que había algunas pequeñas diferencias entre las frecuencias de los alelos de rs3834129 en nuestras muestras y las muestras de CRC de Sun et al. [14] (Tabla 2), lo que podría reflejar la diferencia regional. No hubo asociación del genotipo determinado de las tres variantes con CRC (Tabla 3).
Desde rs3769821 variantes y rs113686495 estaban en fuerte desequilibrio de ligamiento en ambas poblaciones de casos y controles (Figura 1) , inferimos haplotipos basados en variantes rs3834129 y rs3769821 solamente y se evaluó el potencial asociación entre haplotipos y el riesgo de CCR. Del mismo modo, se observó ninguna asociación de haplotipos con el CRC (Tabla 4). Tomados en conjunto, nuestros resultados sugieren que las variantes genéticas en el
CASP8
región promotora del gen no lo hicieron probable que confieren mayor riesgo de CCR en los chinos Han desde el suroeste de China.
Los números dentro de los cuadrados muestran para D 'y r
2 puntuaciones (x100) para el desequilibrio de ligamiento por pares (LD) con un degradado de rojo a blanco que refleja mayor a menor puntuación de LD.
CASP8 mRNA Expresión los niveles en el CRC los tejidos y los tejidos normales correspondientes son similares
para examinar si
CASP8
niveles de expresión difieren entre pacientes y dentro emparejado normal y muestras tumorales y luego a analizar si existe alguna correlación con el genotipo , analizamos la
CASP8
nivel de expresión de ARNm en tejidos normales y cancerosos paracancerous pareadas de 99 pacientes que no recibieron tratamiento antes de la cirugía. Similar al resultado genotipo, no hubo diferencia estadísticamente significativa de la
CASP8
nivel de ARNm en cualquiera de los tejidos normales o cancerosos paracancerous en pacientes con diferentes genotipos (Figura 2). Tenga en cuenta que la expresión de ARNm en los tejidos con los genotipos del /del de rs3834129, CC de rs3769821, y 8 pb /8 pb de rs113686495 mostró un valor relativamente más bajo que los de los otros genotipos (Figura 2), y esto puede atribuirse a número menor de los pacientes con estos genotipos si no fueron causados por el cis-regulación, ya que estos SNPs están en la región promotora de la
CASP8
gen.
Entre los 99 pacientes no tratados medidos para el
CASP8
la expresión del ARNm, un paciente no pudo ser determinado el genotipo y fue excluido.
para detectar el efecto potencial de la
CASP8
gen en la patogénesis y las características clínicas de la CRC, se compararon
CASP8
los niveles de expresión de ARNm en tejidos cancerosos y tejidos normales paracancerous en todos los pacientes, pero no se observó diferencia significativa (
P = 0,102
; Figura 3a). Del mismo modo, la
CASP8
la expresión de ARNm en tejidos cancerosos de pacientes con diferentes características clínicas no mostró diferencias significativas (figuras 3b, c, d, e, f). tejidos normales y cancerosos paracancerous de pacientes en diferentes etapas de desarrollo y progresión del cáncer tenían un nivel similar de
CASP8
expresión de ARNm (Figura 4), aunque los tejidos cancerosos de pacientes en estadio T4 tenían una expresión del ARNm marginalmente significativa más alta que tejidos normales emparejados paracancerous (
P = 0,045
; Figura 4c). Al parecer, el
CASP8
nivel de expresión de ARNm del gen no estaba fuertemente asociada con CRC en nuestros pacientes.
La estadificación TNM se clasificó de acuerdo a la 7ª edición del AJCC Cancer Staging Manual [21], y la ubicación y la diferenciación de los tejidos cancerosos se determinaron por examen histopatológico quirúrgico y, respectivamente. No hubo diferencia significativa de la
CASP8
la expresión de ARNm en tejidos normales y cancerosos paracancerous de los 99 pacientes (a). El
CASP8
expresión de mRNA en tejidos cancerosos de pacientes con diferentes características clínicas no mostró diferencias significativas (b-f). A-colon, colon, D-colon y el recto se destacan por el colon ascendente, colon transverso, el colon descendente y el recto, respectivamente.
La estadificación TNM se clasificó de acuerdo a la 7ª edición del AJCC Cancer Staging Manual [21].
CASP8 concentraciones de proteína se redujo significativamente en los tejidos cancerosos en comparación con emparejados Paracancerous tejidos normales
Muchos genes fueron regulados a través de un mecanismo post-transcripcional, por ejemplo, regulación por incremento de factor de crecimiento placentario por el factor de crecimiento endotelial vascular en las células endoteliales [25]. Para investigar si el
CASP8
gen tiene un papel en el desarrollo de CRC a través de una regulación post-transcripcional, se seleccionaron emparejaron los tejidos normales y cancerosos paracancerous de 39 pacientes con diferentes
CASP8
promotor genotipos, la expresión del ARNm y se cuantifica el nivel de expresión de proteínas (Tabla S1). Se observó un menor nivel importante de proteínas en los tejidos cancerosos CASP8 que los tejidos paracancerous (
P
= 0,005), aunque el
CASP8
niveles de mRNA en estas muestras eran similares (
P
= 0,464, Figura 5).
El genotipo y la información clínica de estos pacientes se enumeran en la Tabla S1.
Discusión
La caspasa 8 (
CASP8
) es un procurer bien conocido de la señal de muerte en la vía apoptótica que estuvo involucrado en la estimulación del receptor de muerte, permeabilización de la membrana mitocondrial externa y la liberación de las proteínas pro-apoptóticas en el citosol de la mitocondria [26]. Actúa como una barrera fundamental defensiva contra la proliferación maligna y la tumorigénesis [7], [10], [27]. Estudios previos han presentado resultados contradictorios con respecto a la posible función de las variantes genéticas en el
CASP8
región promotora del gen en la tumorigénesis [14], [15], [16], [17], [18], [20] , [28], [29], [30]. En un estudio pionero, variante genética (rs3834129) en el
CASP8
región promotora se asoció con una amplia gama de cánceres sólidos, incluyendo pulmón, de esófago, gástrico, colorrectal, de mama, de cuello uterino y cáncer en las poblaciones chinas al afectar la el sitio de unión al factor de transcripción Sp1 y la
CASP8
la expresión de genes [14]. Este hallazgo inicial fue verificado en estudios de asociación de casos y controles posteriores en muestras independientes chinos con cáncer de vejiga [16] y la neumoconiosis de los mineros del carbón [15]. Sin embargo, otros informes no pudieron replicar la asociación entre este 6 pb /del polimorfismo y varios tipos de cáncer en diferentes poblaciones [18], [30], [31], [32]. Estos resultados contradictorios pueden explicarse por los diferentes orígenes genéticos de poblaciones en diferentes estudios [33], como la frecuencia de 6 pb del alelo fue significativamente diferente entre las poblaciones asiáticas y caucásicas (22,4% vs. 49,1%) [32], [34 ]. En un estudio reciente, Lan y compañeros de trabajo [19] presentó pruebas de que otros rs3769821 SNP en el
CASP8
región promotora se asoció significativamente con el riesgo genético de la NHL. Sin embargo, no hemos podido replicar este resultado en los chinos Han con LNH y ensayo de luciferasa celular no mostró diferencias de la región promotora que contiene diferentes alelos [20]. Hasta ahora, si el
CASP8
la expresión génica podría afectar a la patogénesis de la CRC sigue siendo controvertida [35], [36], [37]. Hay una necesidad de reevaluar el efecto potencial de variantes promotoras y expresión de la
CASP8
gen en el CRC.
En este estudio, mediante el análisis de pacientes con CRC de Kunming, provincia de Yunnan, la intención de responder si el
CASP8
gen participó activamente en el desarrollo de CCR. En primer lugar, exhibió tres variantes genéticas en el
CASP8
región promotora del gen, en los que dos han sido informado de que se asocia con tumores sólidos (rs3834129; [14]) y la NHL (rs3769821; [19]). Posteriormente cuantificamos el
CASP8
nivel de ARNm en tejidos normales y cancerosos paracancerous pareadas de discernir aún más el potencial de correlación entre el
CASP8
genotipos y la expresión del ARNm. No se encontró asociación de la
CASP8
promotor variantes con CRC en las muestras de casos y controles (Tablas 2 y 3). Por otra parte, no se encontró ninguna diferencia estadísticamente significativa de la
CASP8
nivel de mRNA en pacientes con diferentes genotipos (Figura 2). Estos resultados negativos fueron consistentes con nuestro ensayo de luciferasa anterior [20], en el que se observó ninguna diferencia para los vectores con diferentes alelos en el
CASP8
promotor.
Los datos clínicos disponibles para los pacientes nos ofrecieron una oportunidad para evaluar la correlación entre la
CASP8
la expresión génica y el desarrollo de CCR. Al agrupar a los pacientes según el estadio tumoral, el estado de la metástasis, y la diferenciación, no se encontraron diferencias significativas de la
CASP8
niveles de mRNA expresión entre los tejidos normales y cancerosos paracancerous y entre pacientes con diferentes características clínicas (Figuras 3 y 4), lo que sugiere que el
CASP8
la expresión de ARNm no podría desempeñar un papel crucial en el CCR. Al igual que en nuestro hallazgo, Pan et al. [36] Tampoco se ha identificado ninguna diferencia significativa de la
CASP8
niveles de mRNA en la mucosa normal, pólipos, y el CRC. Sin embargo, al contrario que dos estudios se informó anteriormente de que el
CASP8
expresión se reguló durante la carcinogénesis colorrectal [35], [37], que puso de manifiesto que el nivel de proteína en los tejidos cancerosos CASP8 fue significativamente menor que la de paracancerous emparejado tejidos normales (Figura 5). El patrón incoherente de los niveles
CASP8
ARNm y la expresión de proteínas en este estudio sugiere que una regulación post-transcripcional, tales como la ubiquitina excesivo de proteínas CASP8 en el tejido tumoral y /o la regulación de los genes miARN, puede jugar un papel crucial en la el desarrollo de CCR. Además de la caracterización se debe realizar en el futuro para solidificar esta especulación.
Nuestro estudio tiene varias limitaciones. En primer lugar, el tamaño de la muestra (305 casos y 342 controles) para el análisis de asociación era relativamente pequeña y sólo tres variantes en la región promotora de la
CASP8
gen se genotipo, que podría no tener suficiente poder para detectar los efectos suponiendo una razón de probabilidad relativamente baja. Otros estudios con mayor número de muestras y variantes genéticas más serán esenciales para verificar nuestra conclusión. En segundo lugar, sólo se analizaron
CASP8
la expresión de ARNm y proteína en un subconjunto de pacientes con CRC. Como se mencionó anteriormente, se observó una expresión reducida dentro de ciertos genotipos (Figura 2). Más pacientes deberían ser analizados a fin de descartar el sesgo potencial causado por un pequeño número de pacientes en estos grupos. En tercer lugar, no recogemos todos los
CASP8
transcripciones /precursores en este estudio. Nuestra medición para
CASP8
ARNm transcripciones A, B, C, G y G en un ensayo no pudo distinguir qué transcripción juega un papel importante en el tejido de interés. Por último, no lo hicimos mutación pantalla en la región codificante del gen
CASP8
. Se desconoce si mutante CASP8 específica afectaría el desarrollo de CCR. Kim et al [38] informaron de que la presencia de mutaciones en el
CASP8
gen de la región de codificación podría causar disfunción de la vía apoptótica, que puede, finalmente, contribuir al desarrollo de CRC.
Colectivamente, se especuló que el
CASP8
gen podría iniciar el desarrollo y la progresión del CRC, en su caso, a través de la regulación del nivel de proteína y /o codificación de mutación funcional región (s), en lugar de la expresión del ARNm.
Conclusiones
Hemos encontrado que rs3834129, rs3769821 variantes genéticas, y rs113686495 en el
CASP8
región promotora no se asociaron con la susceptibilidad genética a la CRC en los chinos Han de suroeste de china. Más análisis de la
CASP8
la expresión génica en tejidos cancerosos y paracancerous no mostró correlación del nivel de expresión de ARNm con diferentes genotipos y el progreso de la CRC. Sin embargo, encontramos que la proteína CASP8 fue significativamente menor en los tejidos cancerosos que en los tejidos normales emparejados paracancerous, aunque ambas muestras tenían el mismo nivel de expresión de ARNm. Estos resultados sugieren que la expresión aberrante y /o mal funcionamiento de la proteína CASP8 jugarían un papel activo en el desarrollo y la progresión de CRC. población independiente con mayor tamaño de la muestra y ensayos funcionales son necesarios para confirmar aún más nuestros resultados.
Apoyo a la Información sobre Table S1.
Genotipo y la información patológica de 39 pacientes que se analizaron para la expresión de proteínas CASP8
doi:. 10.1371 /journal.pone.0067577.s001 gratis (DOC)
Reconocimientos
agradecemos a los pacientes por la donación de tejidos. También se agradece a los dos árbitros anónimos por sus comentarios constructivos.