Extracto
Objetivo
Este estudio es investigar el papel de los genes relacionados con Mas (GRM) C en la patogénesis y el tratamiento del dolor del cáncer óseo (BCP).
Métodos
BCP modelo de ratón se estableció mediante la inoculación de células de osteosarcoma. comportamientos relacionados con el dolor se evaluaron mediante la prueba de la conducta espontánea de elevación y la prueba de la alodinia mecánica. Los niveles de expresión de MrgC, Gi, y NR2B en la médula espinal se detectaron con análisis de transferencia de Western e inmunohistoquímica.
Resultados
pruebas de comportamiento relacionadas con el dolor mostró un aumento significativo de estremecimientos espontáneas (NSF) y la disminución de retirada de la pata umbral mecánico (PWMT) en modelos de ratón de BCP. Western blot mostró que, en comparación con el grupo control y antes de modelado, todos los niveles de expresión de MrgC, Gi, y NR2B en la médula espinal de ratones BCP se elevaron dramáticamente, que fueron especialmente aumentaron en el día 7 después de la operación y después de ello, en de una manera dependiente del tiempo. Por otra parte, el tratamiento de MrgC agonista BAM8-22 significativamente hasta reguladas Gi y el regulado los niveles de expresión de NR2B, en la médula espinal de los ratones BCP, de una manera dependiente del tiempo. Por otra parte, anti-MrgC significativamente reducido regulado expresión Gi, mientras que dramáticamente hasta regulada la expresión de NR2B, en los ratones BCP. Resultados similares se obtuvieron a partir de la detección inmunohistoquímica. Es importante destacar que, BAM8-22 atenuó significativamente los comportamientos nociceptivos en los ratones BCP.
Conclusión
Nuestros resultados indican las alteraciones Gi y de expresión NR2B mediadas por MrgC en los ratones BCP, lo que podría contribuir a la hipersensibilidad dolor. Estos hallazgos pueden proporcionar una nueva estrategia para el tratamiento de BCP en la clínica
Visto:. Sun Y, Jiang M, Hou B, C Lu, Lei Y, Ma Z, et al. (2016) relacionados con el gen Mas (GRM) C Activación Para atenuar el dolor del cáncer de hueso a través de modulación Gi y NR2B. PLoS ONE 11 (5): e0154851. doi: 10.1371 /journal.pone.0154851
Editor: Shao-Jun Tang, Universidad de Texas Medical Branch, Estados Unidos |
Recibido: 27 Diciembre, 2015; Aceptado: 20 Abril de 2016; Publicado: 6 Mayo 2016
Derechos de Autor © 2016 Sun et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. Todo relevante los datos están dentro del papel
Financiación:. Este estudio fue apoyado por la Fundación Nacional Naturales de China (81400914, 81500954, 81371207, 81300950, 81500955 y), la Fundación Nacional Natural de la provincia de Jiangsu, China (RC2011006 y XK201140), y el Proyecto de Desarrollo de Tecnología médica de Nanjing (YKK13068). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
dolor del cáncer de hueso (BCP) es uno de los factores más difíciles de resolver en los pacientes que sufren de tumores óseos primarios o metástasis óseas, que influye fuertemente en la calidad de vida [1] de los pacientes. Hasta ahora, el mecanismo para BCP todavía no se ha aclarado por completo, y los tratamientos actuales están siempre inevitablemente acompañada de efectos adversos significativos [2, 3]. Por lo tanto, es muy importante y urgente de desarrollar nuevas estrategias terapéuticas eficientes para BCP en la clínica.
Numerosos estudios indican que, en roedores, gen mas-relacionados (GRM) C, un GPCR específico de neuronas sensoriales, las acciones homogeneidad sustancial con su homólogo humano, MrgX1, con alrededor de 45 a 65% de identidad de secuencia de aminoácidos [4]. MrgC se encuentra específicamente en las neuronas de pequeño diámetro de la raíz dorsal ganglio (DRG), que son presumiblemente nociceptivo. Se ha demostrado que, la inyección intratecal de agonista MrgC, es decir, BAM8-22 y γ2-MSH, podría producir efectos antinociceptivos y atenuar la hiperalgesia térmica en los modelos de dolor agudo [5-7]. Además, los datos no publicados de nuestro laboratorio también ha demostrado que, la administración intratecal de MrgC agonista BAM8-22 atenuaría BCP en un modelo de ratón, de una manera dependiente de la dosis.
NR2B es una de las subunidades de receptor de NMDA , que se ha demostrado estar involucrados en la regulación del dolor en diversas lesiones [8, 9]. Fosforilación de la tirosina de NR2B en la médula espinal está asociada con la sensibilización central, el aumento de la excitabilidad dorsal horn y facilitar la entrada sensorial, que puede ser responsable de BCP [10, 11]. Estudios previos han demostrado que los antagonistas de los receptores de NMDA (tales como la ketamina) y antagonistas de NR2B selectivos (tales como ifenprodil y Ro25-6981) podrían ejercer efectos analgésicos potentes en modelos animales de BCP [12, 13]. Sin embargo, estos antagonistas también se han demostrado estar asociados con efectos secundarios intolerables, incluyendo deterioro de la memoria y los efectos psicotomiméticos. Por lo tanto, es de gran importancia para explorar nuevas formas de modular los receptores de NMDA, sin afectar a la actividad del receptor basal, para lograr un mejor efecto analgésico.
En este estudio, el modelo de ratón de BCP fue establecido por la inoculación de células de osteosarcoma, y el papel de MrgC en la patogénesis y el tratamiento de BCP se investigó. comportamientos relacionados con el dolor se evaluaron en estos modelos de ratón, y también se detectaron los niveles de expresión de NR2B Gi y en la médula espinal, antes y después de la manipulación de MrgC.
Materiales y Métodos
los animales y el cultivo de células
el macho adulto C3H /HeJ, 4-6 semanas de edad, con un peso 18-22 g, se adquirieron de la Vital río Experimental Animal Center, Beijing, china. Estos animales se habituaron individualmente bajo un ciclo de 12/12-h luz /oscuridad, a una temperatura ambiente constante de 24 ° C, con acceso libre a comida y agua. Todos los procedimientos experimentales con animales fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales del Hospital Afiliado Tambor-torre de la Facultad de Medicina de la Universidad de Nanjing. Las condiciones físicas de los ratones fueron controlados antes de cada ensayo de comportamiento, y ninguno de estos ratones murieron inesperadamente antes de la variable experimental
El fibrosarcoma NCTC 2472 células (2087787;. la American Type Culture Collection, ATCC, Manassas, VA, USA ) se cultivaron con el medio NCTC 135 (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE.UU.) con 10% de suero de caballo (Gibco, Grand Island, NY, EE.UU.) en un 5% de CO
2, 37 ° C incubadora .
agrupamiento animal y modelado
modelo de BCP se estableció de acuerdo con un procedimiento previo de Schwei
et al
. [14]. Brevemente, los ratones fueron anestesiados con la inyección intraperitoneal de 50 mg /kg pentobarbital sódico (1% en solución salina), y una incisión superficial se hace en la piel que recubre el genu articulatio derecha. Gonarthrotomy se realizó para exponer los cóndilos del fémur, que luego fueron sometidas a la depresión causada por la luz fresa dental. La corteza se perfora con una aguja de calibre 30. Para los ratones en el grupo de modelo (n = 60), 20 l α-MEM que contiene 2 × 10
se inyectaron 5 NCTC 2472 células en el espacio intramedular del fémur derecho usando una microjeringa de 25-mL. Los ratones en el grupo de tratamiento simulado (n = 20) se inyectaron con α-MEM solo. El orificio de inyección fue sellado con la amalgama dental, y una abundante irrigación con solución salina se llevó a cabo antes que la herida se cerró definitivamente. Se llevaron a cabo todas las medidas necesarias para minimizar el posible dolor y angustia. Por ejemplo, los ratones estaban bajo anestesia general cuando se llevaron a cabo los procedimientos. Tourniquet se utilizó para reducir el sangrado tanto como sea posible. La infección fue impedido por operar en condiciones estériles y con equipos estériles.
pruebas de comportamiento relacionados con el dolor
Después de modelado, el ensayo de comportamiento de elevación espontánea y la prueba de la alodinia mecánica se realizaron para medir el número de espontánea estremecimientos (NSF) y retirada de la pata umbral mecánico (PWMT), respectivamente. Todas las pruebas se llevaron a cabo durante la fase de luz, y los ratones se les permitió aclimatarse durante al menos 30 minutos antes de cada prueba. NSF y PWMT se examinaron antes del modelado de animales (día 0), en los días 3, 5, 7, 10 y 14 después de la modelización, y en los días 1, 3 y 7 después de la administración del fármaco.
Por lo espontáneo levantamiento de prueba de comportamiento, un ratón se mantuvo en un compartimento individuales de plexiglás (10 cm x 10 cm x 15 cm) durante 30 min, y el derecho NSF miembro posterior se registró durante 2 minutos. . Ascensor de extremidad posterior derecha no relacionado con caminar o el aseo era considerado como uno estremecerse
Por otro lado, se realizó la prueba de la alodinia mecánica con los filamentos de Von Frey (0,16 a 2,0 g flexión fuerza; Stoelting, Madera Dale, IL, EE.UU.), según lo descrito por Chaplan
et al
. [15]. Un ratón se colocó en un compartimento de plexiglás transparente individuo (10 cm x 10 cm x 15 cm) sobre un piso de malla de metal con 0,5 cm x 0,5 cm cuadrados. Los filamentos fueron orientados verticalmente contra la superficie plantar con una fuerza suficiente causando ligera flexión contra la pata del animal, que se mantuvo durante 6-8 s cada vez, con un intervalo de 10 min. Respuesta positiva se definió como la retirada o la pata a paso ligero que retroceden, y la PWMT se determinó utilizando el aumento de forma secuencial y la disminución de fuerza del estímulo (es decir, el método de arriba a abajo). Cada pata se puso a prueba cinco veces para cada estímulo fuerza, hasta que la fuerza de corte de 2,0 g. La fuerza de filamentos más bajo con al menos tres respuestas positivas fue considerado como PWMT.
preparación de drogas y fueron preparados y administrados administración
Las drogas de acuerdo con los protocolos publicados anteriormente [5]. BAM8-22 (SML0729; Sigma-Aldrich, St. Louis, EE.UU.) y anti-anticuerpo MrgC (orb101320; Biorbyt, San Francisco, CA, EE.UU.) fueron ambos disueltos en solución salina. A los 14 días después de modelado, modelos de ratones se dividieron aleatoriamente en los siguientes tres grupos: (1) el grupo de control modelo BCP (n = 20), en el que los ratones portadores de tumores se trataron con vehículo (solución salina) por sí sola; (2) el grupo BAM8-22 (n = 20), en el que los ratones BCP se trataron con BAM8-22; y (3) el anti-MrgC grupo (n = 20), en el que los ratones BCP fueron tratados con anti-MrgC. Para los grupos BCP + B y BCP + A, 5 l BAM8-22 (8,0 nmol) o anti-MrgC (1/20 v /v) se administró por vía intratecal, una vez al día, durante 7 días consecutivos [16].
análisis de transferencia Western
Los ratones se sacrificaron por decapitación tras profundamente anestesiados con 100 mg /kg de pentobarbital sódico. Médula espinal lumbar L
3-L fueron retirados y almacenados en nitrógeno líquido
5 segmentos. Las muestras de tejido se homogeneizaron con tampón de lisis, seguido por centrifugación (4 ° C) a 13.000 rpm durante 10 min. La concentración de proteína se determinó con el kit BCA (Thermo Fisher Scientific Life Science Research, Shanghai, China). muestra de proteína se separó en SDS-PAGE, y luego se transfiere a una membrana de difluoruro de polivinilideno (Millipore, Billerica, MA, EE.UU.). Después de bloquear con leche 5% no grasa a temperatura ambiente durante 1 h, la membrana se incubó con anticuerpo policlonal de conejo anti-ratón anti-MrgC (dilución 1: 500; orb101320; Biorbyt), anticuerpo monoclonal anti-NR2B ratón anti-ratón (1: 1000 dilución; Abcam, Cambridge, MA, EE.UU.; ab93610), y de conejo anti-ratón de anticuerpo policlonal anti-Gi (dilución 1: 500; ab140333; Abcam), respectivamente. Después del lavado, la membrana se incubó con IgG de cabra anti-conejo (dilución 1: 5000; ab6721; Abcam) o de cabra anti-IgG de ratón (dilución 1: 5000; ab6789; Abcam). visualización de las bandas de proteínas se consigue con el método ECL (Santa Cruz, Santa Cruz, CA, EE.UU.), y la cuantificación de proteínas se realizó con el software IPLab (Scanalytics, Fairfax, VA, EE.UU.). β-actina se utilizó como control de referencia.
Inmunohistoquímica
Para la inmunohistoquímica, la médula espinal lumbar L
3-L
5 segmentos fueron perfundidos con paraformaldehído al 4% en 0,1 M tampón de fosfato (pH 7,4) en el día 3 después de la administración del fármaco. Los tejidos se cortaron en secciones de 25 micras en un microtomo de deslizamiento. Después de lavar con PBS, las secciones se bloquearon con 10% de suero (v /v) normales fetal bovino a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, las secciones se incubaron con anticuerpo policlonal de conejo anti-ratón anti-MrgC (dilución 1: 250; orb101320; Biorbyt) o el ratón anti-ratón anti-NR2B anticuerpo monoclonal (1: 500 dilución; ab93610; Abcam) a 4 ° C durante 48 h. Después del lavado, las secciones fueron incubadas con Alexa Fluor 594 de cabra anti-IgG de conejo (dilución 1: 500; ab150084; Abcam) y Alexa Fluor 488 de cabra anti-IgG de ratón (1: 500 dilución; ab150117; Abcam) a 4 ° C durante la noche . Después del sellado, las secciones fueron imágenes a 200 × magnificación con el microscopio multifotónica confocal Leica TCS SP2 (Leica Microsystems, Wetzlar, Alemania), y las imágenes se analizaron con la Imagen-Pro Plus software (Media Cybernetics, Rockville, MD, EE.UU.) .
El análisis estadístico
Los datos se expresaron como media ± desviación estándar. Utilizó un modelo lineal se realizó para comparar los grupos, con la prueba post hoc LSD, cuando se observaron diferencias significativas.
P Hotel & lt; 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.
Resultados
comportamientos relacionados con el dolor en ratones BCP
Para evaluar los comportamientos relacionados con el dolor en la extremidad posterior derecha de ratones BCP, la número de estremecimientos espontáneo (NSF) y retirada de la pata umbral mecánico (PWMT) se midieron antes de modelar (día 0), y en los días 3, 5, 7, 10, y 14 después del establecimiento del modelo. Nuestros resultados mostraron que no hubo diferencia significativa en la NSF y PWMT entre los grupos sham y modelo antes de modelado (fig 1). Para NSF, en el grupo de tratamiento simulado, la NSF fue significativamente elevado en el día 3 después de la operación (
P Hotel & lt; 0,05), que luego volvió al nivel comparable al de antes de la modelización en el día 5 después de la operación y después de ello (Fig 1A). Por otro lado, en el grupo de modelo, en comparación con antes de modelado, la NSF también fue significativamente elevado en el día 3 después de modelado (
P Hotel & lt; 0,05), y luego se redujo ligeramente en el día 5 después del modelado. Sin embargo, la NSF en el modelo de grupo continuó aumentando en los días 7, 10 y 14 después de modelado, que fue significativamente mayor que antes de modelar (todo el
P Hotel & lt; 0,05) (Figura 1A). Para PWMT, en el grupo de tratamiento simulado, PWMT se redujo significativamente en el día 3 después de la operación (
P Hotel & lt; 0,05), que luego volvió al nivel comparable al de antes de modelar 2 días más tarde y después (Figura 1B). En el modelo de grupo, en comparación con antes de modelado, la PWMT se redujo significativamente en el día 3 después de modelado (
P Hotel & lt; 0,05), y luego ligeramente elevada 2 días más tarde. Sin embargo, el PWMT del modelo de grupo continuaron disminuyendo en los días 7, 10 y 14 después de modelado, que fue significativamente más bajo que antes modelado (todo el
P Hotel & lt; 0,05) (Figura 1B). Tomados en conjunto, estos resultados demuestran el éxito del establecimiento del modelo de ratón de BCP, que son adecuados para la siguiente investigación.
NSF (A) y PWMT (B) se evaluó en los grupos de modelos simulados y BCP (n = 8) antes de modelado de animales (día 0), y en los días 3, 5, 7, 10, y 14 después del establecimiento del modelo. En comparación con antes de la modelización, *
P Hotel & lt; 0,05; en comparación con el grupo de tratamiento simulado en el correspondiente punto de tiempo,
#
P Hotel & lt; 0.05.
expresión de MrgC, Gi, y NR2B hasta reguladas en la médula espinal de los ratones BCP
Para investigar los niveles de expresión de MrgC, Gi, y NR2B en la médula espinal de los ratones BCP, se realizó análisis de transferencia de Western. Nuestros resultados muestran que, en comparación con el grupo de tratamiento simulado y antes de modelado, todos los niveles de expresión de MrgC, Gi, y NR2B en los ratones BCP fueron elevados dramáticamente después de modelado, que fueron especialmente aumentando a día 7 después de la operación y después, en un momento -dependiente (todo el
P Hotel & lt; 0,05) (figura 2). Estos resultados sugieren que los niveles de expresión de MrgC, Gi, y NR2B en la médula espinal están regulados en los ratones BCP, lo que podría contribuir a la patogénesis y el desarrollo de BCP.
Los niveles de expresión (A) de MrgC, Gi, y NR2B en la médula espinal de los ratones sham y ratones BCP se detectaron con análisis de transferencia de Western antes de modelado de animales (día 0; D0), y en los días 3, 5, 7, 10 y 14 (D3 D14) después del establecimiento del modelo. (B-D) Los análisis estadísticos de MrgC (B), Gi (C), y NR2B (D) en la médula espinal de ratones sham y BCP (n = 6). En comparación con antes de la modelización, *
P Hotel & lt; 0,05; en comparación con el grupo de tratamiento simulado,
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P Hotel & lt; 0.05.
Efectos de MrgC agonista y anti-MrgC en Gi y expresión de NR2B en la médula espinal de los ratones BCP
Para evaluar los efectos del agonista MrgC y anti-MrgC en la expresión niveles de MrgC, Gi, y NR2B en la médula espinal de ratones BCP, estos modelos animales se les administró primero con BAM8-22 o anti-MrgC, y luego se detectaron los niveles de expresión de MrgC, Gi, y NR2B en la médula espinal con El análisis de transferencia Western e inmunohistoquímica. Nuestros resultados del análisis de Western blot mostraron que, en comparación con el grupo control (modelos de ratón que recibía el vehículo), el agonista MrgC BAM8-22 significativamente hasta regulados los niveles de expresión de MrgC y Gi, mientras que significativamente baja regulado el nivel de expresión de NR2B, en la médula espinal de ratones BCP, de una manera dependiente del tiempo (
P
& lt; 0,05) (Fig 3A-3D). Por otra parte, en comparación con el grupo control (vehículo), el anti-MrgC significativamente las reguladas los niveles de expresión de MrgC y Gi, mientras que dramáticamente hasta reguladas el nivel de expresión NR2B, en la médula espinal de ratones BCP, en una manera dependiente del tiempo (
P Hotel & lt; 0,05) (figura 3A-3D). Se obtuvieron resultados similares para la detección inmunohistoquímica de MrgC y NR2B en la médula espinal de ratones BCP. En comparación con el grupo control (vehículo), los niveles de expresión de NR2B en la médula espinal se disminuyeron significativamente por BAM8-22 y significativamente elevados por anti-MrgC, en los ratones BCP (tanto
P
& lt; 0,05) (figura 3E-3G). Tomados en conjunto, estos resultados sugieren que, la manipulación de MrgC podría afectar significativamente a los niveles de expresión de Gi y NR2B en la médula espinal de ratones BCP.
(A) Los niveles de expresión de MrgC, Gi, y NR2B en la médula espinal se detectaron con el análisis de transferencia Western, en ratones sham, los ratones de control de modelo (Veh), y ratones modelo administrarse con BAM8-22 o anti-MrgC, en los días 1, 3 y 7 después de la administración del fármaco. (B-D) Los análisis estadísticos de MrgC (B), Gi (C), y los niveles de expresión NR2B (D) después de la administración del fármaco, como se indica por análisis de transferencia Western (n = 6). (E) Expresión de MrgC (rojo) y NR2B (verde) en la médula espinal se detectaron con inmunohistoquímica en los ratones sham, control modelo (vehículo) los ratones, y los ratones tratados con modelo BAM8-22 o anti-MrgC (× 200) . análisis (F-G) Estadística de MrgC (F) y los niveles de expresión NR2B (G) después de la administración del fármaco, como se indica por inmunohistoquímica (n = 6). En comparación con el grupo de vehículo,
& amp;
P Hotel & lt; 0,05; en comparación con el anterior punto de tiempo,
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P Hotel & lt; 0.05.
MrgC agonista atenúa comportamientos nociceptivos en ratones BCP
Para evaluar si la activación MrgC podría ejercer efectos analgésicos en los ratones BCP, estos modelos animales se les administró BAM8-22 de 7 días consecutivos (a partir de 14 días después de la operación), y luego se evaluaron los comportamientos nociceptivos en los días 1, 3 y 7 después de la administración del fármaco. Anti-MrgC se utilizó como control negativo. Nuestros resultados muestran que, en comparación con el grupo control (modelos de ratones tratados con vehículo), BAM8-22 redujo significativamente NSF y aumentó PWMT en la pata trasera ipsilateral de los ratones BCP (
P
& lt; 0,05), en una dependiente del tiempo de manera (Fig 4). Por otro lado, el tratamiento de anti-MrgC aumentó aún más dramáticamente NSF y la disminución de PWMT en estos ratones BCP (
P
& lt; 0,05), de una manera dependiente del tiempo (Fig 4). Estos resultados sugieren que, el tratamiento de MrgC agonista podría atenuar significativamente los comportamientos nociceptivos en estos ratones BCP.
ratones BCP se administraron con BAM8-22 o anti-MrgC durante 7 días consecutivos (a partir de 14 días después de la operación ), y luego los comportamientos nociceptivos fueron evaluados en los días 0, 1, 3, y 7 (Día 0 Día-7) después de la administración del fármaco. Los análisis estadísticos de la NSF (A) y PWMT (B) en los ratones tratados con BCP BAM8-22 o anti-MrgC. En comparación con los controles correspondientes al modelo BCP punto de tiempo,
& amp;
P Hotel & lt; 0.05.
Discusión
En el presente estudio, los resultados mostraron que el BCP patogénesis se asoció con la expresión regulada de arriba MrgC, Gi, y NR2B en la médula espinal. Por otra parte, el agonista BAM8-22 MrgC, pero no el anti-MrgC, podrían aliviar significativamente los comportamientos anormales relacionados con el dolor, a través de regular los niveles de expresión Gi y NR2B. Estos resultados podrían proporcionar una estrategia potencial analgésico para BCP en la clínica.
BCP se caracteriza clínicamente por la inflamación, los efectos neuropáticos, y de potencial tumorigénico [17, 18]. Ha sido bien aceptado que los receptores de NMDA (especialmente la subunidad NR2B) dependiente de la sensibilización central desempeña un papel importante en la hipersensibilidad del dolor [19]. En las densidades postsinápticas, los receptores de NMDA están obligados a andamios y proteínas de señalización, la regulación de la transmisión sináptica [20]. Por otra parte, el receptor de NMDA podría unirse a Ca
2 + /calmodulina dependiente de la proteína quinasa II (CaMKII) y miembros de la familia MAGUK (como PSD-95). parejas esta interacción el Ca mediada por el receptor NMDA
2 + afluencia de influir en los efectores intracelulares y enzimas de señalización, que contribuyen a la dependiente del receptor NMDA sensibilización central [21]. Nuestro estudio anterior ha demostrado que la fosforilación de NR2B en el asta dorsal de la médula en los modelos BCP fue significativamente hasta reguladas después de la infusión de células de fibrosarcoma, que se acompaña de conductas relacionadas con el dolor evidentes [11]. Por otra parte, la sobre regulación de la fosforilación de NR2B se podría reducir de manera significativa por la inyección intratecal de MrgC BAM8-22 agonista. Nuestros resultados en el presente estudio mostraron que BAM8-22 suprimió la hiperalgesia inducida por el BCP, hasta reguladas Gi y las reguladas expresión de NR2B en la médula espinal, lo que indica que MrgC podría estar acoplado con Gi, la inducción de la analgesia.
importancia funcional de la activación Gi en las neuronas DRG se ha informado anteriormente [22, 23]. Sobre la base de estos hallazgos y la nuestra, existe la posibilidad de que MrgC podría regular la sensibilidad al dolor a través de la activación de la vía de señalización Gi. Por supuesto, todavía se necesitan más estudios para confirmar esta hipótesis. Por otra parte, otros estudios han demostrado que BAM8-22 podría inhibir el dolor inflamatorio y química persistente, y regular a la baja el nivel de expresión de c-fos en la médula espinal [5, 6, 24]. Estos hallazgos sugieren que los ligandos MrgC podrían funcionar como agentes anti-hiperalgésicos. proteína Gi está implicado en el estrés y /o la inflamación inducida por cebado [25], así como inducida por opioides cebado hiperalgésico [26]. Gi activación podría contribuir a la antinocicepción de BAM8-22. BAM8-22 podría dependiente de la dosis disminuir los comportamientos de dolor de NMDA-evocó en ratas [27], lo que sugiere que puede inducir la analgesia espinal mediante la supresión de NMDA excitación relacionada con el receptor. Se ha informado recientemente que activa MrgC pudo reprimir la sobre regulación de mediadores pro-nociceptivos (por ejemplo, nNOS y CGRP) e inhiben la expresión de c-fos en condiciones de dolor inflamatorio [5, 7].
el presente estudio, los resultados indicaron que la activación MrgC alivió las conductas relacionadas con el BCP-, que estaba en consonancia con los resultados anteriores [11, 12, 28, 29]. La implantación de células tumorales en el fémur derecho indujo cambios progresivos en la NSF y PWMT, lo que indica el éxito del establecimiento del modelo de BCP. Mientras tanto, estos ratones BCP fueron acompañados por notables aumento de los niveles de expresión de Gi y NR2B en la médula espinal, que podrían estar involucradas en el desarrollo y mantenimiento de BCP. Por otra parte, nuestros resultados revelaron además que la administración intratecal de MrgC agonista BAM8-22 atenuó la hipersensibilidad táctil y comportamientos relacionados con el dolor en la pata lesionada de estos modelos de ratón, y se modula los niveles de expresión de NR2B Gi y en la médula espinal. Sin embargo, se observaron efectos opuestos para la anti-MrgC. Estos resultados demuestran que MrgC, Gi, y NR2B pueden participar en la regulación de los comportamientos relacionados con el dolor en estos ratones BCP. Más a fondo aún se necesitan estudios para explorar los mecanismos detallados.
Nuestros resultados mostraron que, la NSF se incrementa y la PWMT se redujeron en la extremidad posterior ipsilateral de estos ratones BCP, en el día 7 después de la operación. Sin embargo, la disminución en PWMT día 3 y el comportamiento recuperado al día 5 después de modelado pueden atribuirse a las influencias operativas. En el día 14 después de la operación, las conductas relacionadas con el BCP eran obvias y tendían a ser estable. En consecuencia, el día 14 después de la operación fue seleccionado como el punto de tiempo para la intervención farmacológica en estos ratones BCP. Considerando la complejidad y la continuidad de BCP, la administración del fármaco repetitivo se aplicó a aproximadamente ejercer los efectos terapéuticos e investigar la duración óptima de dosificación.
En conclusión, nuestros resultados mostraron que, los niveles de expresión de MrgC, Gi, y NR2B fueron elevados de manera espectacular en la médula espinal de ratones BCP. Por otra parte, el agonista MrgC BAM8-22 significativamente hasta reguladas y Gi-regulado por los niveles de expresión de NR2B. Es importante destacar que, BAM8-22 podría atenuar las conductas nociceptivas en estos ratones BCP. Nuestros resultados indican mediadas por MrgC expresión Gi /NR2B cambios en los ratones BCP, que podrían contribuir a la modulación del dolor de hipersensibilidad. Estos hallazgos pueden proporcionar una nueva estrategia para el tratamiento de BCP en la clínica.
Reconocimientos
Este estudio fue apoyado por la Fundación Nacional Naturales de China (81400914, 81500954, 81371207, 81300950, 81500955 y ), la Fundación Nacional Natural de la provincia de Jiangsu, china (RC2011006 y XK201140), y el Proyecto de Desarrollo de Tecnología médica de Nanjing (YKK13068).